6-取代的吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮 及其组合物和使用方法 发明背景
(a)发明领域
本发明涉及6-取代的吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，涉及含有它们的药物组合物以及使用它们a)抑制c-GMP-磷酸二酯酶，b)治疗心力衰竭和/或高血压，c)逆转或减轻硝酸酯诱导的耐药性以及d)治疗心绞痛，充血性心脏病和心肌梗塞的方法。
(b)参考文献公开状况
Schmidt(施密特)等的1965年1月12日公布的U.S.专利，No.3,165,520公开了作为冠脉扩张剂的通式如下的吡唑并[3，4-d]嘧啶：其中：
R1表示氢原子或烷基，羟烷基，卤代烷基或氧杂烷基或环烷基，环烷基烷基，芳烷基或杂环基烷基或者在大多数情况下为双核芳基或杂环基；
R3表示氢原子或低级烷基；
R9表示脂族基团，环状脂族基团，环状脂族基团-脂族基基，芳基脂族基团或杂环基脂族基团；以及
R6表示脂族基团或芳烷基或可被取代的杂环基烷基。
该专利更具体地公开了其中R1表示氢原子或低级烷基或环烷基。羟基低级烷基或卤代低级烷基，氧杂低级烷基，或者可被卤素，烷氧基，烷基，亚甲二氧基，三氟甲基，硝基，氨基或吡啶基单-，二-，或三-取代的芳基；R3表示氢原子或低级烷基；R5表示低级烷基或低级烷氨基；且R6表示低级烷基或芳烷基的化合物的特殊的价值。
它进一步公开了用于合成最终产物的中间体的一系列1-R1-3-R3-4-羟基-6-R6-吡唑并[3，4-d]嘧啶。在这些中间体中具体公开了1-环戊基-4-羟基-6-苄基-吡唑并[3，4-d]嘧啶和1-异丙基-4-羟基-6-m-甲氧基苄基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Schmidt(施密特)等的1965年10月12日公布的U.S.专利，No.3,211,731公开了通式如下的作为冠脉扩张剂的吡唑并[3，4-d]嘧啶：其中；
R1表示氢，烷基，羟烷基，卤代烷基或氧杂烷基，环烷基，环烷基烷基，芳烷基，杂环基烷基或者大多数情况下为双核芳基或杂环基；
R3表示氢，或其次，为低级烷基；以及
R6表示可能被取代的芳烷基或杂环基烷基。
该专利更具体地公开了其中R1表示氢原子或低级烷基，环烷基，羟基低级烷基，卤代低级烷基，氧杂低级烷基，或芳基；R3表示氢原子或低级烷基而R6为取代或未取代地芳烷基的化合物的特殊价值。在这些化合物中，特别公开了1-异丙基-4-羟基-6-(3′-甲氧苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-环戊基-4-羟基-6-苄基吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-异丙基-4-羟基-6(β-苯乙基)吡唑并[3，4-d]嘧啶和1-异丙基-4-羟基-6-(4-氨基苄基)吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Schmidt(施密特)等的1965年10月12日公布的U.S.专利3,211,732公开了作为中间体1-R1-3-R3-6-R6-4-羟基-吡唑并[3，4-d]嘧啶，其中：
R1表示氢原子，未取代或被羟基或低级烷基氧基取代的低级烷基，或环戊基或环己基或苯基或苯基低级烷基；
R3表示氢原子或低级烷基；以及
R6表示取代或未取代的苯基低级烷基。
特别公开了1-异丙基-4-羟基-6-苄基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
也公开了作为中间体的1-R1-3-R3-6-R6-4-羟基吡唑并[3，4-d]嘧啶，其中：
R1表示氢原子，低级烷氧基低级烷基或羟基低级烷基，环戊基或环己基或可被取代的苯基或苯基低级烷基；
R3定义如上；以及
R6表示可被取代的苯基。特别公开了1-异丙基-4-羟基-6-苯基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Breuer(布劳尔)等的1973年5月8日公布的U.S.专利，No.3,732,225公开了作为低血糖剂和抗炎剂的通式如下的吡唑并[3，4-d]嘧啶：其中：
R为氢或低级烷基；R1为低级烷基，环烷基，苯基或取代苯基；R2为苯基，取代苯基或环烷基；以及R3为氢，低级烷基，环烷基，苯基或取代苯基。特别公开了1-甲基-6-苯基和1-甲基-6-(4-氯苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
Burch(布奇)的1967年10月31日公布的U.S.专利，No.3,350,397公开了作为抗菌剂的通式如下的吡唑并[3,4-d]嘧啶：其中：
R表示羟基，氯或-N(X)(Y)，其中X表示氢，(低级)烷基，羟基(低级)烷基，(低级)烷氧基(低级)烷基或氨基；Y表示氢，羟基(低级)烷基，(低级)烷氧基(低级)烷基或吗啉基丙基；X和Y与N一起表示吡咯烷基；以及R1表示(低级)烷基或甲氧乙基。
该专利进一步公开了作为中间体的4-氨基和4-羟基-1-R1-6-(2-呋喃基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶。Burch于J.Med.Chem.1968，11，79进一步例举了中间体的制备和最终产物的制备和生物试验。
公开于1963年9月25日的英国专利937,722专利权属于CIBALIMITED，公开了作为冠脉扩张剂的1-异丙基-4-羟基-6-苄基-吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Hamilton(汉米尔顿)的1987年5月19日公布的U.S.专利，No.4,666,908公开了通式如下的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮：其中：
R1包括一到六个碳原子的低级烷基，包括一到六个碳的低级亚烷基，包括一到六个碳的低级羟烷基，包括二到六个碳的低级羟基亚烷基，包括一到六个碳的低级氨烷基，或者，包括二到六个碳原子的低级氨基亚烷基；
n为0-4；以及
Ar为R2：或2，3，或4-嘧啶基，其中X，Y和Z各为(1)氢；(2)包括一到六个碳的低级烷基；(3)卤素；(4)羟基；(5)包括一到六个碳的低级烷氧基；(6)硝基；(7)氨基；(8)NR′R″其中R′和R″各自为(a)氢或(b)包括一到六个碳的低级烷基，该烷基可非强制性地被(i)氨基，(ii)吗啉代，或(iii)包括五到七个碳的环烷基取代，(9)磺酰基或(10)-SO2NR′R″，其中R′和R″定义如上。
该专利更具体地公开了其中Ar为R2的优选化合物。这些化合物可用于治疗心血管疾病。
Miyashita等于Heterocycles(杂环)1990.，31，1309-1341公开了通式如下的一系列吡唑并[3，4-d]嘧啶的制备：其中：
R为苯基或甲基；以及R1为氢，甲基，乙基，丙基，异丙基，苄基，乙基羧酸酯或苯基。未公开其用途。
Hamilton(汉米尔顿)的公开于1988年1月14日的PCT申请WO88/00192，公开了一系列5-取代的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮衍生物，这些化合物可用作强心剂，CNS刺激剂，抗过敏剂，抗哮喘剂或识别活化剂。
Bell(贝尔)等的公开于1992年1月2日的欧洲专利申请0463756公开了一系列5-(2，5-二取代的苯基)吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，这些化合物可用于心血管疾病的治疗。
Breuer和Treuner的1974年11月12日公布的U.S.专利3,847,908公开了下式的化合物：其中：
R1为低级烷基，环低级烷基，或苯基-低级烷基；
R2为氢或低级烷基；以及
R3为氢，低级烷基，卤素，或三氟甲基。具体公开了1，3-二甲基-6-苯乙烯基-吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-环戊基-6-(2-氯苯乙烯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-环己基-3-甲基-6-(苯乙烯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶和1，3-二乙基-6-(4-氯苯乙烯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶。据称该化合物可被用作抗微生物剂并具有抗炎和膜稳定的性质。
Morrison等的1981年4月7日公布的U.S.专利4,260,758公开了下式化合物的制备：其中R9选自低级烷基，苯基，由一个或多个羟基或低级烷氧基取代的苯基，或吡啶基。未公开该化合物的用途。
Burch的1967年3月14日公布的加拿大专利754,565公开了一系列4-取代的-1-烷基-6-(2-呋喃基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶，据称该化合物可用作制备能抑制细菌生长的4-取代的-1-烷基-6-(5-硝基-2-呋喃基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶的中间体。
Podesva等的1973年11月13日公布的U.S.专利3,772,294公开了式I化合物的制备：其中：
X表示卤原子，游离或取代的羟基，氨基或巯基以及R表示氢原子，或低级烷基或者取代或未取代的芳基。该文献公开了这些化合物可有效地被用于治疗与痛风有关的高尿酸血症，另外，其中X表示卤原子的化合物可被用作合成其他式I化合物的中间体。该文献还具体公开了4-羟基-6-苯基-1-吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Coates和Rawlings的1991年12月24日公布的U.S.专利5,075,310(该专利来自1989年6月23日公布的系列申请No.370,494)公开并要求保护下式化合物及其药学上可接受的盐；其中：为下式(a)，(b)或(c)环：X为氧或硫；以及R1为C1-C6烷基，C2-6链烯基，C3-5环烷基-C1-4烷基，或由1到6个氟取代的C1-4烷基。该文献具体公开了6-(2-丙氧苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4(5H)-酮。据称该化合物可用作支气管扩张剂及血管舒张剂。
发明概要本发明涉及式I化合物或其药学上可接受的酸加成盐和/或水合物：其中：
R1为叔丁基，或环戊基；
R3为甲基，乙基，或苯甲基；
X为-CH2-，-O-，或-NH-；以及
R6为苯基(或由一到三个，相同或不同的选自低级烷氧基，羟基，卤素，羧基低级烷氧基，4-吗啉基低级烷氧基，5-四唑基低级烷氧基，二低级烷基氨基，三氟甲基，硝基，氨基，低级烷磺酰氨基，二低级烷基氨基-低级烷基苯基羰氧基，以及1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者当X为-CH2-时，R6另外为2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基，1，2，3，4-四氢-1-喹啉基，羟基，1-咪唑基，1-低级烷基-2-，3-，4-，或5-吡咯基，1-吡唑基，3-，4-，或5-异噁唑基(或者在其任何可能的碳原子上由低级烷基取代的3-，4-，或5-异噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基。
已经发现式I化合物具有c-GMP-PDEV抑制活性，因此可用于治疗心力衰竭和/或高血压。也已发现与硝酸酯结合使用式I化合物可用于逆转或减轻硝酸酯诱导的耐药性，因而可进一步被用于治疗心绞痛，充血性心脏病和心肌梗塞。
优选的式I化合物为其中
R1，R3和X定义如上，而
R6为苯基(或由一到三个，相同或不同，选自低级烷氧基，羟基，羧基低级烷氧基，4-吗啉基低级烷氧基，5-四唑基-低级烷氧基，二低级烷基氨基，三氟甲基，硝基，氨基，低级烷基磺酰氨基，二低级烷氨基-低级烷基苯基羰氧基，和1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者当X为-CH2-时，R6另外为2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基，1，2，3，4-四氢-1-喹啉基，羟基，1-咪唑基，1-低级烷基-2-吡咯基，1-吡唑基，在其中任何可能的碳原子上由低级烷基取代的4-异噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基的化合物。
特别优选的式I化合物为其中：
R1，R3和X定义如上，以及
R6为苯基(或由一到三个，相同或不同，选自甲氧基，羟基，羧基甲氧基，2-(4-吗啉基)乙氧基，1-(5-四唑基)甲氧基，二甲氨基，三氟甲基，硝基，氨基，甲基磺酰氨基，二乙氨基甲基苯基羰氧基，和1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者当X为-CH2-时，R6另外为2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基，1，2，3，4-四氢-1-喹啉基，羟基，1-咪唑基，1-甲基-2-吡咯基，1-吡唑基，3，5-二甲基-4-异噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基的化合物。
更特别优选的上述式I化合物为其中R1为环戊基；R3为乙基；以及X和R6定义如上的化合物。
本发明优选的具体化合物为：
1-环戊基-3-乙基-6-(4-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
1-环戊基-3-乙基-6-(4-羟基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
1-环戊基-3-乙基-6-(苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，以及
1-环戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
本发明还涉及包含式I化合物以及药学上可接受的载体，辅助剂，稀释剂，或赋形剂的药物组合物。
本发明还涉及抑制哺乳动物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括对该动物使用有效量的式I化合物。
本发明还涉及治疗哺乳动物心力衰竭和/或高血压的方法，其中包括对该动物使用有效量的式I化合物。
本发明还涉及逆转或减轻哺乳动物在接受硝酸酯治疗的过程中产生的硝酸酯诱导的耐药性的方法，其中包括对该动物使用有效量的式I化合物。
本发明还涉及治疗哺乳动物心绞痛，充血性心脏病和心肌梗塞的方法，其中包括对该动物与硝酸酯结合使用有效量的式I化合物。
优选制备方案的详细描述
式I化合物可与相应的烯醇形式：以互变异构平衡的方式存在，只不过人们认为酮形式占优并全部表示为这种形式，显然本发明包括这两种形式及其混合物。
这里使用的术语低级烷基表示具有一到约四个碳原子的直链或支链烃基，包括甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，等。
这里使用的术语低级烷氧基表示具有一到约四个碳原子的直链或支链烷氧取代基，包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，仲丁氧基，等。
这里使用的术语卤素，卤化物或卤表示溴，氯，碘或氟。
其中X为-CH2-的本发明化合物的合成可按流程A所示进行：流程A在约0℃到约室温的温度下，在合适的碱，如吡啶的存在下，非强制性地在合适的溶剂，如氯仿的存在下，用过量的合适地取代的式III酰氯，其中X′为卤素，优选氯，处理合适地取代的式II 5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈，得到式IV羧酰胺。选择地，也可以通过在合适的溶剂，如二甲基甲酰胺(DMF)中。用式II 5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈处理过量的式R6CH2COOH酸或其酸加成盐与过量碱，如氢化钠，以及过量的合适的偶合剂，如N，N′-碳酰二咪唑的混合物而制得式IV羧酰胺。然后可在过量碱，优选氢氧化钠，或甲醇钠的存在下，在溶剂如水，低级链烷醇，或水/低级链烷醇混合物中，当甲醇钠用作碱时，优选乙醇，当氢氧化钠用作碱时，优选水/乙醇混合物，在以约0℃到所用溶剂或溶剂混合物的沸点的温度下，用过量的过氧化氢处理式IV羧酰胺，得到其中X为-CH2-的式I化合物。
选择性地，其中X为-CH2-的式I化合物可按流程B所示制备：流程B在低级链烷醇溶剂，优选乙醇中，在从约室温到所用溶剂的沸点的温度下，用过量碱，如碱金属低级链烷醇化物，优选乙醇钠，和过量的合适地取代的式VI酯，其中R为低级烷基，优选甲基或乙基，处理合适地取代的式V 5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，得到其中X为-CH2-的式I化合物。
其中X为-O-，或-NH-的式I化合物可按流程C所示制备：流程C在从约80℃到所有溶剂的沸点，优选约150℃到约160℃的温度下，在合适的有机溶剂，如N-甲基-2-吡咯烷酮中，用过量的o-乙基黄原酸盐，如钾盐处理合适地取代的式V 5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，得到式V II6-硫代吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。然后在过量碱，如K2CO3或氢化钠的存在下。在合适的有机溶剂，如二甲基甲酰胺中，在从约0℃到约室温的温度下，用过量合适的甲基化试剂，如甲基碘或硫酸二甲酯处理式VII化合物，得到式VII 6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。然后可在合适的溶剂，如氯仿中，在约室温的条件下，用过量合适的氧化剂，如m-氯过氧苯甲酸处理式VIII化合物，得到式IX 6-(甲基磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。在从约室温到约190℃，优选从约170℃到190℃的温度下，在过量碱，如氢化钠，的非强制性地存在下，用过量式X的R6NH2衍生物，或过量的式XI的R6OH衍生物处理式IX衍生物，得到其中X为-O-或-NH-的式I化合物。
可使用化学领域技术人员已知或常规的简单化学转化来实现式I化合物的官能基的变化。例如，芳基酯的去烷基化得到相应的酚衍生物，用甲醛和二低级烷基胺处理芳基衍生物得到相应的二低级烷基氨基甲基衍生物，在碱存在下用甲磺酰氯处理其中X为-CH2-而R6为OH的式I化合物得到相应的甲磺酸酯，将其用1-乙酰基咪唑或吡唑处理得到其中X为-CH2-而R6为1-咪唑基或1-吡唑基的式I化合物，催化还原硝基衍生物得到相应的胺，用低级烷基磺酰卤磺化胺得到相应的低级烷基磺酰胺，以及在偶合剂，例如，N，N′-碳酰二咪唑，存在下用酸处理酚得到相应的酯。
既可使用游离碱形式的式I化合物，也可使用酸加成盐形式的式I化合物，这两种形式都属于本发明的范围。酸加成盐形式为更便于使用的形式；实际上，盐形式的用途本身相当于碱形式的用途。可用来制备酸加成盐的酸优选地包括那些与游离碱结合时，产生药学上可接受的盐的酸，即，盐的阴离子在该盐的药用剂量下对动物体相对无害，以致于游离碱本身的有益性质不会由于阴离子的副作用而有影响。在本发明的实施中便于使用的形式为游离碱的形式或盐酸盐，富马酸盐，甲苯磺酸盐。甲磺酸盐或马来酸盐。但是，本发明范围内其他合适的药学上可接受的盐可由其他无机酸和有机酸形成。碱性化合物的酸加成盐可按本领域已知的标准方法制备，其中包括但不限于，将游离碱溶于含合适酸的含水醇溶液中，以及蒸发溶液分离盐，或在有机溶剂中使酸和游离碱反应，其中直接分离盐，或用第二种有机溶剂沉淀，或可通过浓缩溶液而得到。尽管优选碱性化合物的医学上可接受的盐，但本发明包括所有的酸加成盐。所有酸加成盐都可被用作游离碱形式的来源，甚至某些特殊的盐本身仅作为中间产物而被需要，例如，为了纯化或鉴定而形成的盐。或者，用作通过，例如，离子交换法，制备医学上可接受的盐的中间体的盐。
被合适地取代的式II 5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈和被合适地取代的式V 5-氨基-1H-吡唑-4-羧酰胺都是已知物，因此可按本领域已知方法制备(参见，例如，公布于1994年3月15日的U.S.专利5,294,612，其全部内容按参考文献改编于此)，或者可按下文实施例中描述的方法制备。式III酰氯，式VI酯，式X的R6NH2衍生物和式XI的R6OH衍生物既可在市场上得到，也可按本领域已知方法制备，也可按下文实施例中的方法制备。
本发明化合物的结构可通过合成方式，以及通过一种或多种选自元素分析，红外，核磁共振和质谱的方法证实。反应的过程和产物的同一性及均一性可通过一种或多种选自薄层层析(TLC)，高压液相色谱(HPLC)，或气液色谱(GLC)的方法鉴定。
下面的实施例将进一步说明本发明，但它并不限制本发明。所给出的所有熔点(m.p.)都是摄氏度(℃)，未校正。
实施例1
(a)
在20分钟的时间内，在冰浴中，将苯乙酰氯(10.6ml，0.08mol)加入搅拌着的1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(8.2g，0.04mol)在吡啶(100ml)中的溶液中。将反应混合物在此温度下搅拌2小时，然后在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，并将残留物分配于氯仿(200ml)和水(200ml)之间。分出有机层，真空浓缩，得到油状物，将其通过硅胶柱色谱，用己烷/乙醚(1/1)洗脱，用乙醚/己烷重结晶后得到8.3g(64％)白色薄片状1-环戊基-3-乙基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑。
(b)将1-环戊基-3-乙基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑(2.4g，7.4mmol)，乙醇(100ml)，30％H2O2(4.5ml，40mmol)，NaOH(0.3g，7.5mmol)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌1小时，然后回流1小时。再加入一部分30％H2O2(2.5ml)并将该混合物再回流1小时。真空浓缩溶剂，将残留物用水(25ml)和乙酸(3ml)处理，将所形成的黄色沉淀过滤收集，用水洗涤并用异丙醇重结晶，得到0.79g橙色针晶状1-环戊基-3-乙基-6-(苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。m.p.175-176℃。
选择性地，该产物也可按下述制备：将钠(2.12g)溶于乙醇(145ml)中，然后加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(10g，45mmol)。接着加入苯乙酸乙酯(2.8g)并将反应混合物回流过夜。将反应混合物冷却至室温，汽提，然后在残留物中加入水，接着加入2N HCl。过滤收集产物，用乙酸乙酯重结晶，得到10.52g(73％)1-环戊基-3-乙基-6-(苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例2
(a)
在20分钟内，在冰浴冷却下，将苯乙酰氯(2.3ml，17.2mol)在CHCl3(10ml)中的溶液加入搅拌着的1-环戊基-3-苯甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(2.3g，8.6mmol)，CHCl3(50ml)和吡啶(20ml)的溶液中。将反应混合物在冰浴中搅拌3小时，然后在室温搅拌2小时。真空除去溶剂，将残留物在CHCl3(100ml)和水(50ml)之间分配，并分出有机层，浓缩有机层得到树胶状固体，将其用异丙醇重结晶，得到1.1g(88％)白色针晶状1-环戊基-3-苯甲基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑，m.p.166-168℃。
(b)
在冰冷却的1-环戊基-3-苯甲基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑(1.1g，2.8mmol)在乙醇(30ml)中的溶液中加入30％H2O2(2.5ml)，接着加入溶于水(5ml)的NaOH(100mg)，将反应混合物在此温度下搅拌1小时，然后在室温搅拌1小时，然后在蒸汽浴中加热3.5小时，最后将其在室温搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干，并分配于水(25ml)和CHCl3(50ml)之间。分出有机层，真空浓缩，用异丙醇结晶油状残留物，得到234mg(22％)白色固体状1-环戊基-3-苯甲基-6-(苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.204-206℃。
实施例3
(a)
将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(4.50g，0.022mol)，吡啶(5.21g，0.066mol)，和CHCl3(75ml)的混合物在冰浴中搅拌0.5小时，然后在3小时内加入CHCl3(25ml)中的3，4-二甲氧基苯乙酰氯(9.44g，0.044mol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，真空除去溶剂，将残留物在CHCl3(250ml)和水之间分配。分层后，用CH2Cl2(2×150ml)萃取水层并将合并的有机层真空浓缩。将残留物溶于CHCl3(20ml)并通过硅胶柱色谱纯化，用乙醚洗脱，用己烷/CHCl3(10/1)重结晶后得到白色针晶状1-环戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(3，4-二甲氧基苯甲基)羰氨基]-1H-吡唑。
(b)
在1-环戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(3，4-二甲氧基苯甲基)羰氨基]-1H-吡唑(1.0g，2.7mmol)，乙醇(500ml)和NaOCH3(0.3g)的混合物中加入30％H2O2(4ml)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，另外加入30％H2O2(3当量)并将反应混合物在蒸汽浴上回流1小时。原料依然存在，所以另外加入3当量的30％H2O2并将反应混合物回流4小时。将反应混合物汽提至干，用乙酸和乙醇处理，并再次汽提至干。将油状残留物溶于乙醇，加入水，并用冰浴冷却该溶液。过滤收集生成的固体，在90℃干燥，得到0.3g(30％)淡黄色固体状1-环戊基-3-乙基-6-(3，4-二甲氧基苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1/10水合物，m.p.148-149℃。
实施例4
(a)
冰浴冷却下，将NaH(1.0g，25mmol，60％矿物油中的分散系)加入4-吡啶乙酸盐酸盐(4.3g，25mmol)和DMF(50ml)的混合物中。将所得混合物搅拌30分钟，然后加入N，N′-碳酰二咪唑(4.0g，24.6mmol)，30分钟后，加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(4.1g，20mmol)。在相同的温度下将反应混合物搅拌4小时，然后在室温下搅拌2天，最后在蒸汽浴上加热2小时。将反应混合物浓缩至干并加入水(50ml)和乙酸(5ml)。用CH2Cl2(300ml)萃取该混合物，将有机层真空浓缩，将所得油状物用乙醚结晶，并通过硅胶柱色谱纯化，用乙醚洗脱，得到2.8g(35％)粘油状1-环戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(4-吡啶基甲基)羰氨基]-1H-吡唑。
(b)
将1-环戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(4-吡啶基甲基)羰氨基]-1H-吡唑(2.8g，8.6mmol)，乙醇(50ml)，NaOCH3(1.0g，18mmol)和30％H2O2(4.5ml)的混合物在室温下搅拌20分钟，然后加热回流3.5小时。另外加入30％H2O2(3ml)，再将反应混合物加热回流2小时。将反应混合物真空浓缩，将残留物在CHCl3(100ml)和10％NaHCO3水溶液(50ml)之间分配，分出有机层。将有机层真空浓缩，将残留物用环己烷结晶，过滤收集固体。真空浓缩滤液，将残留物通过硅胶柱色谱纯化，用乙醚到10％甲醇/乙醚的溶剂系统洗脱，将所得产品用乙醚重结晶，得到420mg 1-环戊基-3-乙基-6-(4-吡啶基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.162-164℃。
实施例5
冰冷却下，向1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g，4.5mmol)溶于苯(10ml)形成的溶液中加入三甲基铝(4.9ml，2M，于甲基中)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后加入溶于苯(25ml)的1-(乙氧羰基甲基)吡咯(0.7g)并将该混合物回流过夜。将反应混合物冷却，加入2N HCl并用CHCl3(3x)萃取该混合物。将有机层分出，用MgSO4干燥，并真空浓缩。将残留物用乙醚煮解并从乙醚中重结晶，得到1-环戊基-3-乙基-6-(1-吡咯基甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.170-172℃。
实施例6
将钠球(207mg)溶于乙醇(15ml)并加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g)，随后加入4-甲氧基苯基乙酸酯(1.62g，9mmol)。将反应混合物回流16小时，汽提溶剂，向残留物中加入水，并将产物过滤收集，用乙醚重结晶，得到0.89g1-环戊基-3-乙基-6-(4-甲氧基苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.172-173℃。
实施例7
向1-环戊基-3-乙基-6-(4-甲氧基苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.0g，2.8mmol)溶于DMF(25ml)形成的溶液中加入97％的NaH(264mg)，20分钟后加入丙硫醇(0.65g)。将反应混合物在室温搅拌0.5小时，然后在蒸汽浴上加热20小时，最后在120℃的油浴中加热8小时。另外再加入97％NaH(264mg)和丙硫醇(0.77ml)并将反应混合物在130℃加热32小时。将反应混合物加入冰水中，加入乙酸并将形成的沉淀过滤收集并干燥，用乙酸乙酯重结晶后，得到0.69g 1-环戊基-3-乙基-6-(4-羟苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.264-267℃(dec.)。
实施例8
(a)
将4-羟基苯基乙酸甲酯(10g，0.06)在DMF(100ml)中的溶液加入置于冰浴中的含97％NaH(1.78g，0.072mol)的DMF(60ml)中。将反应混合物搅拌0.5小时，然后加入含氯乙腈(5.44g，0.072mol)的DMF(50ml)。将该反应混合物在室温下搅拌约2天，真空除去溶剂，将残留物在水和乙醚之间分配。将有机层分离，先用饱和Na2CO3，然后用盐水洗涤，并用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到12.2g 4-(氰基甲氧基)苯基乙酸甲酯。
(b)
将钠球(600mg)溶于乙醇(15ml)中，加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g)，然后加入4-(氰基甲氧基)苯基乙酸酯(1.85g)。将反应混合物回流过夜，将溶剂汽提并加入水。过滤反应混合物，将滤液用2N HCl酸化，过滤收集产物，用乙酸乙酯重结晶，得到1-环戊基-3-乙基-6-[4-(羧甲氧基)苯基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.218-220℃。
实施例9
将金属钠(310mg)溶于乙醇(75ml)中，然后加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.1g，5mmol)和2-吡啶基乙酸甲酯(1.52g，10mmol)。将反应混合物加热回流28小时，真空除去溶剂，将残留物溶于水(50ml)并用乙酸酸化。用CHCl3(100ml)萃取该混合物，除去溶剂，将油状残留物用环己烷结晶，得到0.85g粗产物。将该产物通过硅胶柱色谱纯化，用乙醚洗脱，随后用环己烷重结晶，得到黄色结晶状1-环戊基-3-乙基-6-(2-吡啶基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.120-122℃。
实施例10
(a)
将97％的NaH(3.56g，0.14mol)悬浮于DMF(100ml)中并加入4-羟苯基乙酸甲酯(10g，0.06mol)。将该反应混合物搅拌0.5小时，然后加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(11.2g)并将该反应混合物在室温搅拌约2天，然后在蒸汽浴上加热2小时。将反应混合物冷却，过滤并将滤液汽提。将残留物在水和乙醚之间分配，分层，用乙醚萃取水层。将有机层合并，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到11.59g(69％)4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基乙酸甲酯。
(b)
将钠(414mg)溶于乙醇(30ml)中并加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.0g)和4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基乙酸甲酯(5.03g，18mmol)。将反应混合物回流过夜，汽提溶剂，在残留物中加入水，随后加入足量乙酸将pH调节至8-9。通过滗析收集油状物，用水和饱和NaHCO3处理。将该混合物用乙酸乙酯萃取，用水，然后用饱和NaHCO3(2x)洗涤。将水层用另一部分乙酸乙酯萃取，将合并的有机层用2N NaOH和盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤，汽提用乙醚煮解并过滤，得到粗产物。将该粗产物通过数次酸/碱处理，随后用乙醚重结晶，得到1.67g 1-环戊基-3-乙基-6-[4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.136-137℃。
实施例11
(a)
将4-(氰基甲氧基)苯基乙酸甲酯(2.5g，12mmol)，NaN3(0.87g)，NH4Cl(0.72g，13mmol)和DMF(20ml)的混合物在125℃加热24小时。将该反应混合物冷却，加入水，并该混合物真空汽提，但勿将溶液汽提至干。重复该操作(2x)然后加入水，接着加入2N HCl。将溶液中结晶出的产物过滤收集，用水洗涤，空气干燥，得到1.7g(60％)4-(5-四唑基甲氧基)苯基乙酸甲酯。
(b)
将钠(0.253g)溶于乙醇(15ml)，然后加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.813g，3.7mmol)和4-(5-四唑基甲氧基)苯基乙酸甲酯(17g，7.3mmol)。将反应混合物回流约2天，冷却，然后真空除去溶剂。将残留物用水和乙酸处理，将形成的沉淀过滤收集并在60℃真空干燥。将该产物溶于乙酸乙酯，用Na2CO3(4×200ml)萃取，将水层用浓HCl酸化至pH2.5，然后用乙酸乙酯(2×300ml)萃取水层，并将有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将固体残留物用乙酸乙酯重结晶，得到0.21g 1-环戊基-3-乙基-6-[4-(5-四唑基甲氧基)苯基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，2/5水合物，m.p.240-242℃。
实施例12
(a)
将97％的NaH(3.0g，0.12mol)在DMF(100mL)中的悬浮液搅拌0.5小时，然后在30分钟内加入存在于DMF(50mL)中的苯并咪唑(11.8g，0.1mol)，接着加入存在于DMF(50mL)中的溴代乙酸乙酯(20g，0.12mol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，加入NH4Cl，并将反应混合物汽提，在残留物中加入水，并将其用CH2Cl2(3×200mL)萃取。将有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。将残留物用乙酸乙酯处理，过滤收集白色固体，真空浓缩滤液，将残留物用水重结晶，得到8.0g1-(乙氧羰基甲基)苯并咪唑，mp.63-64℃。
(b)
将钠(338mg)溶于乙醇(30mL)中，加入1-(乙氧羰基甲基)苯并咪唑(3.0g，14.7mmol)和-1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.6g)。将反应混合物回流过夜，汽提溶剂并用水和乙酸处理残留物。过滤收集所形成的沉淀，用水洗涤，得到1.96g(75％)1-环戊基-3-乙基-6-[1-苯并咪唑基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.256-259℃。
实施例13
将钠(0.11g)溶于乙醇，然后加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.49g，2.21mmol)，10分钟后再加入含于乙醇(2mL)中的3-吡啶基乙酸乙酯(0.73g)。将反应混合物回流过夜，再加入3-吡啶基乙酸酯(0.35g)，将反应混合物再回流过夜。将反应混合物冷却至室温，汽提溶剂，并残留物溶于水并用乙酸处理(至pH7)。将该混合物用CHCl3(3×50mL)萃取，将有机层合并，用MgSO4干燥，汽提，得到浅黄色油状物。将该油状物通过加入乙醚结晶，过滤收集产物，用乙醚洗涤，得到0.4g 1-环戊基-3-乙基-6-[3-吡啶基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例14
将37％的甲醛(5mL)加入1-环戊基-3-乙基-6-[4-羟基苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.68g，7.9mmol)和40％二乙胺(5mL)在乙酸(50mL)中的悬浮液中。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后将其在100℃的蒸汽浴上加热4小时。汽提溶剂，在残留物中加入乙醇，然后汽提乙醇，通过制备薄层层析纯化残留物，用5％异丙胺/乙酸乙酯展开，将得产物用乙醚重结晶后，得到0.79g 1-环戊基-3-乙基-6-[3，5-二甲基氨基-4-羟基苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.164-166℃。
实施例15
(a)
将溴代乙酸乙酯(20.9g)在乙腈(30mL)中的溶液加入K2CO3(27.6g，0.2mol)和1，2，3，4-四氢-2-异喹啉(13.3g，0.1mol)在乙腈(220mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌约2天，然后回流4小时。过滤反应混合物，真空浓缩滤液，将残留物在乙醚和水之间分配。将乙醚层分出，用MgSO4干燥，真空浓缩，得到一种液态物质，将其溶于乙醚(200mL)，冷却并用Et2O·HCl处理，得到12.5g(77％)1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基乙酸乙酯盐酸盐。
(b)
将1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基乙酸乙酯盐酸盐(3.63g)溶于水(100mL)，用NaHCO3处理，然后用乙醚(3×75mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到3.02g浅黄色液体状1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基乙酸乙酯。
(c)
将钠(0.24g)溶于乙醇(25mL)和1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.09g，4.91mmol)中，随后加入1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基乙酸乙酯(2.15g)。将反应混合物回流约2天，汽提溶剂，用水和乙酸处理残留物。用CHCl3(3×100ml)萃取所形成的胶状物，并将合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到黄色固体，将其用乙醚洗涤，得到粗产物(0.6g)。将该粗产物与来自相似的实验途径的粗产物合并，并将该混合物通过硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷(1/1)洗脱。另一部分产物也可从上述乙醚滤液的浓缩中得到，并可按上述进行柱层析纯化。将产物流份沉淀并用乙醚重结晶，得到白色固体状1-环戊基-3-乙基-6-(1，2，3，4-四氢-2-异喹啉基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.149-151℃。
实施例16
(a)
搅拌下，将溴代乙酸乙酯(8.4mL)滴入K2CO3(20.7g，150mmol)和1，2，3，4-四氢-1-喹啉(10.0g，75.08mmol)在乙腈(150mL)中的混合物中，并将该混合物在室温搅拌48小时。将反应混合物过滤，真空浓缩滤液，将残留物在乙醚和水之间分配。将有机层分出，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，蒸发，得到15.0g(91％)琥珀色液体状1，2，3，4-四氢-1-喹啉基乙酸乙酯。
(b)
将钠(0.33g)溶于乙醇(30mL)和1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.54g，6.94mmol)中，随后加入乙醇(5-10mL)中的1，2，3，4-四氢-1-喹啉基乙酸乙酯(3.04g)。将反应混合物加热回流约两天，汽提溶剂，将所得油状残留物用水处理并用乙酸中和。将所形成的沉淀用CHCl3提取，用MgSO4干燥，汽提，得到琥珀色油。将该油通过硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷(1/1)洗脱，随后用乙腈重结晶，得到白色结晶固体状1-环戊基-3-乙基-6-(1，2，3，4-四氢-1-喹啉基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例17
将钠(0.68g)溶于乙醇中，先后加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.0g，13.5mmol)，甘醇酸乙酯(2.8g，27mmol)。将反应混合物回流过夜，将乙醇汽提，在残留物中先后加入水和2N HCl。过滤收集形成的沉淀，先后用饱和NaHCO3和水洗涤。将产物先后用乙酸乙酯和乙醚重结晶，得到0.83g 1-环戊基-3-乙基-6-(羟甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮m.p.183-184℃。
实施例18
(a)
在-50℃下，在1-环戊基-3-乙基-6-(羟甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.0g，3.8mmol)，CH2Cl2(25mL)和三乙胺(0.77g，7.6mmol)的混合物中加入CH2Cl2(5mL)中的甲磺酰氯(0.44g，3.8mmol)。将反应混合物搅拌1小时，加入CH2Cl2和水，分出有机层，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到1.28g粗产物。将粗产物与来自相似的实验途径的产物合并，并将该混合物用乙醚(2x)重结晶，得到1-环戊基-3-乙基-6-(甲磺酰氧甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.138-140℃。
(b)
将1-环戊基-3-乙基-6-(甲磺酰氧甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.8g，15.3mmol)，1-(甲羰基)咪唑(640mg，5.8mmol)和CH3CN(36mL)的混合物加热回流6小时。将溶剂汽提，加入冰水和饱和NaHCO3，并将该混合物用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤并汽提。将该产物与来自相似的实验途径的产物合并，并将该混合物用乙酸乙酯重结晶。将该产物用2N HCl处理，用乙酸乙酯萃取，并用NaHCO3中和水层，用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤并汽提。将残留物用乙酸乙酯重结晶，得到0.54g 1-环戊基-3-乙基-6-(1-咪唑基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.252-253℃。
实施例19
将钠(1.19g)溶于乙醇(85mL)中，先后加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(5.7g，26mmol)和3-甲氧苯基乙酸乙酯(10g)。将反应混合物回流过夜，冷却至室温，汽提溶剂。在残留物中先后加入水和2N HCl，过滤收集形成的沉淀，并将其用乙酸乙酯重结晶，得到5.08g 1-环戊基-3-乙基-6-(3-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.148-150℃。
实施例20将97％NaH(1.26g)加入1-环戊基-3-乙基-6-(3-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(4.49g，13mmol)在DMF(123mL)中的溶液中，20分钟后，加入丙硫醇(2.96g，39mmol)。将反应混合物在130℃加热过夜，冷却至室温，然后先后加入冰水和乙酸。过滤收集形成的沉淀，用乙醚重结晶，在110℃及2mmHg下干燥，得到2.72g 1-环戊基-3-乙基-6-(3-羟基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.195-197℃。
实施例21
(a)
将3-羟基苯乙酸(10g，66mmol)，HCl乙醇溶液(160mL)和H2SO4(1mL)的混合物回流过夜。汽提溶剂，得到11.66g(98％)3-羟基苯乙酸乙酯。
(b)
将97％NaH(1.75g，0.07mol)在DMF(50mL)中的悬浮液搅拌15分钟，然后加入DMF(25mL)中的3-羟基苯乙酸乙酯(5.4g，0.03mol)。将反应混合物搅拌0.5小时，然后在冰浴中冷却，并加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(5.6g，0.03mol)。将反应混合物在室温下放置过夜，然后在蒸汽浴上加热四小时。汽提溶剂，将残留物在冷水和乙醚之间分配，分出有机层，并用乙醚萃取水层。将有机层合并，用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到粗产物，将其通过硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯洗脱，得到4.64g 3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯乙酸乙酯。
(c)
将钠(364mg)溶于乙醇(30mL)然后依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.75g)和乙醇(7mL)中的3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯乙酸乙酯(4.64g)。将反应混合物回流2天，汽提溶剂，在残留物中依次加入水和乙酸。将该混合物用NaHCO3处理，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取，将有机层合并并用饱和Na2CO3洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到2.89g的粗产物。将该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯洗脱，用乙醚重结晶，在75℃及0.2mmHg干燥后得到1.21g 1-环戊基-3-乙基-6-[3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例22
将钠粒(1.0g，43.5mmol)在回流下溶于乙醇(50mL)中，然后依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.2g，10mmol)和乙醇(30ml)中的1-甲基吡咯-2-乙酸甲酯(3.06g，20mmol)。将反应混合物在氩气氛下回流过夜，冷却至室温，蒸发至干。将残留物溶于水，冷却该溶液过滤收集所得固体，得到回收的原料。将滤液冷冻，过滤收集形成的固体，用水成浆，用2N HCl酸化。将该混合物冷却，过滤收集产物，在110℃真空干燥，得到1.2g 1-环戊基-3-乙基-6-(1-甲基-2-吡咯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.214.5-216.5℃。通过乙酸酸化滤液，过滤收集产物，用乙酸乙酯重结晶，可得到另一部分产物(0.6g)。
实施例23
(a)
将1-环戊基-3-乙基-6-(羟甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(5.15g)在CH2Cl2(1 20mL)中的溶液冷却至-50℃，依次加入三乙胺(4.7mL)，CH2Cl2(24mL)中的甲磺酰氯(2.09g，18mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌3小时。向反应混合物中加入水和CH2Cl2，使其分层，用CH2Cl2萃取水层。将有机层合并，用MgSO4干燥，过滤并汽提。将残留物转入乙醚中，滗出分离出的油，用活性炭处理滤液，过滤，真空浓缩。将残留物用乙醚重结晶并在75℃及0.2mmHg下干燥，得到1.58g l-环戊基-3-乙基-4-甲磺酰氨基-6-(甲磺酰氧甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶，m.p114-116℃。
(c)
将97％NaH(0.158g)在DMF(25mL)中搅拌15分钟，然后依次加入吡唑(0.372g，58mmol)，和1-环戊基-3-乙基-4-甲磺酰氧基-6-(甲磺酰氧基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.22g，2.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后在蒸汽浴上加热过夜。在反应混合物中加入水，接着加入足量2N HCl酸化混合物。将该混合物放置1.5小时，过滤收集产物并用水洗涤。将该产物通过硅胶制备薄层层析纯化，用50％乙酸乙酯/己烷展开，用乙醚重结晶，在75℃及0.2mmHg下干燥后，得到0.26g 1-环戊基-3-乙基-6-(1-吡唑基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.130-131℃。
实施例24
(a)
将4-三氟甲基苯乙酸(15g)，HCl乙醇溶液(200mL)和H2SO4(1mL)的混合物回流过夜。汽提溶剂，将残留物在乙酸乙酯和饱和NaHCO3间分配，分出有机层，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到15.35g(90％)4-三氟甲基苯乙酸乙酯。
(b)
将钠(622mg)溶于乙醇(45mL)中，然后依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.0g，13.5mmol)和4-三氟甲基苯乙酸乙酯(6.27g，27mmol)。将反应混合物回流过夜，冷却至室温，汽提溶剂。在残留物中依次加入水和2N HCl，过滤收集产物，用乙醚重结晶，在110℃及0.2mmHg干燥，得到3.03g 1-环戊基-3-乙基-6-(4-三氟甲基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.212-213℃。
实施例25
(a)和(b)
在-10到-15℃下，向90％HNO3(95mL)中加入1-环戊基-3-乙基-6-(苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(9.62g，30mmol)。将反应混合物在上述温度下搅拌1.5小时，然后将其倒入冰水中。过滤收集形成的沉淀，用乙酸乙酯重结晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到2.31g 1-环戊基-3-乙基-6-(4-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.221-223℃[标记为实施例25(a)]。将母液合并，真空浓缩，得到1-环戊基-3 乙基-6-(2-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮和1-环戊基-3-乙基-6-(3-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-的混合物[标记为实施例25(b)]。
实施例26
使用10％钯炭(200mg)作为催化剂，在55psi氢化DMF(50mL)中的1-环戊基-3-乙基-6-(4-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.12g，5.8mmol)。将反应混合物通过SUPERCELL过滤，真空浓缩滤液，将残留物用乙酸乙酯重结晶，在100℃及0.2mmHg干燥后，得到1.28g 1-环戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮1/4水合物，m.p.198-199℃。
实施例27
(a)
向2-羟基苯乙酸(25g，0.16mol)在DMF(300mL)中的溶液中依次加入K2CO3(56.7g，0.41mol)和碘甲烷(46.7g，0.32mol)。将反应混合物搅拌约3天，过滤，汽提滤液。将残留物转入乙酸乙酯，用水饱和Na2CO3和盐水洗涤，将有机层用MgSO4干燥，过滤，汽提，得到26.4g(92％)2-甲氧基苯乙酸甲酯。
(b)
将钠(590mg)溶于乙醇(45mL)，然后依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.65g，12mmol)，和2-甲氧基苯乙酸甲酯(4.7g，26mmol)。将反应混合物回流过夜，汽提溶剂，依次用水和2N HCl处理残留物。过滤收集产物，用乙酸乙酯重结晶，得到2.23g 1-环戊基-3-乙基-6-(2-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.145-146℃。
实施例28
(a)
将3-乙酰基-4-氧代戊酸乙酯(37.24g，0.2mol)，羟基胺盐酸盐(1 4.6g，0.21mol)，NaOAc(17.23g，0.21mol)和乙醇(500mL)的混合物回流4小时。将反应混合物过滤，真空浓缩滤液，并将残留物在乙酸(12.61g，0.21mol)和甲苯(300mL)中加热6到6.5小时，以除去水。过滤反应混合物，真空浓缩滤液，得到棕黄色油，将其冷却结晶。过滤收集产物，用乙醚洗涤，得到1.26g 3，5-二甲基-4-异噁唑基乙酸乙酯，m.p.180-182℃。通过浓缩乙醚滤液并在69-81.5℃及0.05mmHg蒸馏残留物将得到另一部分产物，共31.18g(85％)。
(b)
将钠粒(0.23g)溶于回流的乙醇(50mL)中，然后依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.1g，5mmol)和3，5-二甲基-4-异噁唑基乙酸乙酯(1.83g，10mmol)。将反应混合物在氩气氛下回流72小时，用乙酸酸化，然后真空浓缩。用乙醚提取残留物，将乙醚层用水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，用CH3CN/乙醚重结晶，得到0.65g黄色结晶固体状1-环戊基-3-乙基-6-(3，5-二甲基-4-异噁唑基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.179.5-180℃。
实施例29
在冰浴冷却下，将三乙胺(0.54mL，3.8mmol)加入1-环戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.3g，3.8mmol)在吡啶(30mL)中的溶液中，然后加入甲磺酰氯(0.52g，4.6mmol)。将反应混合物在相同的温度下搅拌3小时，然后在室温下搅拌过夜。在反应混合物中加入水，过滤收集粗产物。将粗产物转入乙酸乙酯中，用2N HCl洗涤，并将该混合物过滤。将滤液用MgSO4干燥，过滤，汽提，用乙酸乙酯重结晶，在110℃及0.2mmHg下干燥，得到0.65g 1-环戊基-3-乙基-6-[4-(甲磺酰氨基)苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.242-243℃。
实施例30
将1-环戊基-3-乙基-6-(2-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.64g，4.6mmol)在DMF(45ml)中的溶液用97％NaH(0.46g，19mmol)处理，随后加入3-丙硫醇(1.08g，14mmol)。将反应混合物在130℃加热过夜，冷却至室温。依次加入冰水和乙酸，过滤收集产物，并用水洗涤。将产物用乙酸乙酯重结晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到1.27g(8.2％)1-环戊基-3-乙基-6-(2-(2-羟基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.191-193℃。
实施例31
将钠(414mg)溶于乙醇(45mL)中，依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2g，9mmol)，3-噻吩基乙酸乙酯(3.1g，18mmol)。将反应混合物回流约2天，将溶剂汽提。将残留物依次用水和稀HCl处理，过滤收集产物。将产物用乙酸乙酯重结晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到1.25g 1-环戊基-3-乙基-6-(3-噻吩甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.210-211
实施例32
将钠(414mg)溶于乙醇(45mL)中，依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2g，9mmol)和2-噻吩基乙酸乙酯(3.1g，18mmol)。将反应混合物回流过夜，冷却至室温并将乙醇汽提。在残留物中依次加入水和2N HCl，过滤收集产物，并用水洗涤，将产物用乙酸乙酯重结晶，在90℃及0.2mmHg下干燥，得到119g 1-环戊基-3-乙基-6-(2-噻吩甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.173-174℃。
实施例33
(a)
在冰浴冷却下，在20分钟内，将二乙胺(32.2g，0.44mol)滴入4-氯甲基苯甲酸(17.1g，0.1mol)在乙醇(200ml)中的溶液中。将反应混合物回流17小时，冷却至室温并将溶剂汽提。将残留物溶于1NNaOH(50ml)。用乙醚(50-100ml)萃取，用2N HCl将水层酸化至pH3。汽提水层，用乙醇处理残留物，过滤，将乙醇汽提。将残留物用异丙醇(3x)重结晶，得到13.54g 4-二乙氨基甲基苯甲酸盐酸盐，m.p.189-191℃。
(b)
将4-二乙氨基甲基苯甲酸盐酸盐(360mg，1.5mmol)，N，N′-碳酰二咪唑(264mg，1.5mmol)和二噁烷(20ml)的混合物在油浴上加热1小时。将反应混合物冷却至室温，加入1-环戊基-3-乙基-6-(4-羟基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(500mg，105mmol)和二噁烷(10ml)，将此混合物在100℃加热过夜。将反应混合物冷却，汽提溶剂，然后加入水和乙酸乙酯。分出乙酸乙酯层，用2N HCl(4×150ml)洗涤。将水层合并，用浓NH4OH处理，然后用乙酸乙酯(2x)萃取。将乙酸乙酯层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到粗产物。将粗产物与来自相似实验途径的粗产物合并，将该混合物用乙醚重结晶，得到0.46g 1-环戊基-3-乙基-6-[4-[4-(二乙氨基甲基)苯基羰氧基]苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.143-145℃。
实施例34
在10％钯炭(700mg)存在下，在55psi的压力下氢化1-环戊基-3-乙基-6-(2-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮和1-环戊基-3-乙基-6-(3-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(7.1g，19mmol)在DMF(300mL)中的混合物，用SUPERCELL过滤反应混合物，将滤液汽提，得到粗产物。将该粗产物与来自另外两个相似的实验途径的粗产物合并，将该混合物用乙酸乙酯重结晶，然后通过硅胶色谱纯化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，用乙酸乙酯重结晶，得到111g 1-环戊基-3-乙基-6-(2-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.190-192℃。
实施例35
(a)
将4-二甲氨基苯乙酸(10g，56mmol)，HCl的乙醇溶液(160mL)和浓H2SO4(1mL)的混合物(1mL)回流过夜。汽提溶剂，在残留物中加入乙酸乙酯和稀NH4OH，并分层。将有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到8.32g(72％)4-二甲氨基苯乙酸乙酯。
(b)
将钠(920mg)溶于乙醇(67mL)，依次加入4-二甲氨基苯乙酸乙酯(8.32g，40mmol)和1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(4.44g，20mmol)，将反应混合物回流约2天。将反应混合物冷却至室温，汽提乙醇，在残留物中加入水。过滤收集产物，用水洗涤，用乙酸乙酯(2x)重结晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到3.41g 1-环戊基-3-乙基-6-(4-二甲氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.225-226℃。实施例36
(a)
用40％TRITONB的甲醇溶液(3mL)处理4-(1-咪唑基)苯甲醛(5.08g，29.5mmol)和甲基(甲硫基)甲基亚砜(2.57g，21mmol)在THF(5mL)中的混合物。将反应混合物回流4小时，加入另一部分甲基(甲硫基)甲基亚砜(1.09g，8.5mmol)，再将反应混合物回流2小时。将反应混合物冷却至室温，加入CH2Cl2，将有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并汽提。将残留物转入HCl乙醇溶液(180mL)，回流16小时。冷却反应混合物，汽提乙醇，将残留物用水(200mL)处理，并用乙酸乙酯(250mL)萃取。将水层用稀NH4OH处理，用乙酸乙酯(2x)萃取。然后将有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到粗产物。将该粗产物转入乙酸乙酯，依次用25％亚硫酸氢钠和盐水振摇。将水层用乙酸乙酯萃取，将合并的有机层用用MgSO4干燥，过滤并汽提，得到193g 4-(1-咪唑基)苯乙酸乙酯。
(b)
将钠(193mg)溶于乙醇(25mL)，依次加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.93g，4.2mmol)，和乙醇(7mL)中的4-(1-咪唑基)苯乙酸乙酯(1.93g，8.4mmol)。将反应混合物回流过夜，汽提乙醇，在残留物中加入水。冷却该混合物，过滤收集粗产物。将粗产物与1N HCl搅拌，过滤收集盐酸盐形式的产物。将该盐酸盐用稀NH4OH处理，过滤收集所得沉淀，将其用乙酸乙酯重结晶，在100℃知0.2mmHg下干燥，得到0.4g 1-环戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.232-234℃。
实施例37
(a)
将三乙胺(70mL，0.5mol)加入(1-乙氧基亚乙基)丙二腈(68g，0.5mol)和叔丁基肼盐酸盐(62.3g，0.5mol)在乙醇(500mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后在冰中冷却，过滤收集产物并用乙醚洗涤，得到85.9g 1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈2/3Et3N-HCl。通过浓缩母液，将残留物用乙醇重结晶可得到另外46.2g所需产物。
(b)
将1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈2/3Et3N·HCl(38g，0.12mol)和水(250mL)的混合物加热至85℃。过滤收集从反应混合物中沉淀出的产物，得到23.25g 1-叔丁基3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈，m.p.156-157℃。
(c)
在0℃，在水(200mL)，乙醇(120mL)和KOH(37g，0.56mol)的混合物中依次加入30％H2O2(89.1g，0.786mol)和1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(20.0g，0.112mol)，将反应混合物搅拌4小时，过滤收集产物，用水洗涤，干燥，得到20.64g(94％)白色针晶状1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，m.p.195-196℃。
(d)
将1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g，5.1mmol)，苯乙酸乙酯(1.67g，10.2mmol)，NaOCH3(1.74g，31mmol)和乙醇(50mL)的混合物回流约3天。将反应混合物汽提至干，将残留物用水处理，然后用乙酸酸化。过滤收集产物，用水洗涤，干燥，得到0.53g(35％)1-叔丁基-3-甲基-6-(苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮1/5水合物，m.p.196-197℃。
实施例38
(a)
将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(4.6g，20.7mmol)，o-乙基黄原酸钾盐(6.4g，40mmol)和N-甲基-2-吡咯烷酮(15mL)的混合物在150-160℃加热5小时。冷却反应混合物。加入水，并将该混合物过滤。用活性炭处理滤液，然后用乙酸酸化。过滤收集形成的沉淀，用水洗涤并在90-95℃干燥，得到4.7g 1-环戊基-3-乙基-6-(硫代)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.249-251℃。
(b)
将1-环戊基-3-乙基-6-(硫代)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(5.2g，19.6mmol)，DMF(50mL)和K2CO3(2.76g，20mmol)的混合物在室温下搅拌25分钟，然后加入硫酸二甲酯(3.88mL，40mmol)。将反应混合物搅拌2小时，然后倒入冷水中，过滤收集产物，用水洗涤，用环己烷/乙醚重结晶，在70-75℃真空干燥，得到4.6g1-环戊基-3-乙基-6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.200-202℃。
选择性地，该产物也可如下制备：在搅拌下，在15分钟内，将NaH(4.0g，0.1mol，60％矿物油中的分散系)加入1-环戊基-3-乙基-6-(硫代)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(23.4g，0.09mol)在DMF(250mL)中的混合物中。将所得混合物在冰浴中冷却，然后在20分钟内加入甲基碘(6.3mL，0.1mol)，并将所得混合物搅拌3小时。将反应混合物倒入冰水(400mL)中，过滤收集形成的沉淀，依次用水和己烷洗涤，在80-85℃真空干燥，得到18.6g(74％)1-环戊基-3乙基-6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.203-205℃。
(c)
将1-环戊基-3-乙基-6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(4g)，CHCl3(100mL)和m-氯过氧苯甲酸(10.3g)的混合物搅拌过夜。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(100mL)萃取，将CHCl3层用MgSO4干燥，过滤并浓缩至干。放置使油状残留物结晶，用环己烷重结晶，在70-75℃真空干燥，得到1-环戊基-3-乙基-6-(甲磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.＞300℃。
(d)
1-环戊基-3-乙基-6-(甲磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.3g，7.4mmol)和苯胺(1.2g，13mmol)的混合物在180-190℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温并在室温下放置过夜。在反应混合物中加入乙醚，过滤收集产物，用乙醚洗涤，在80-85℃真空干燥，得到粗产物。将粗产物用饱和NaHCO3(25mL)处理，过滤收集不溶物，将其溶于热异丙醇，用活性炭处理，真空浓缩。将残留物用乙醚结晶，在80-85℃真空干燥，得到0.58g(25％)1-环戊基-3-乙基-6-(苯氨基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例39
将1-环戊基-3-乙基-6-(甲磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(3g，9.6mmol)，苯酚(6g，64mmol)和NaH(O.5g，12.8mmol，60％矿物油中的分散系)的混合物在170-175℃加热5小时。将反应混合物倒入水(50mL)中，用CHCl3(100mL)萃取。将CHCl3层真空浓缩，将残留物通过硅胶柱色谱纯化，用10％乙醚/己烷洗脱，得到2.1g(68％)白色固体状1-环戊基-3-乙基-6-(苯氧基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.175-177℃。
生物试验结果
在标准的生物试验步骤中，已经发现式I化合物具有c-GMP-PDEV(以前被称为c-GMP-PDEI)抑制活性，因此可被用于治疗心力衰竭和高血压。现已发现，与硝酸酯结合使用式I化合物可被用于逆转或减少硝酸酯引起的耐受性，因此可被用于治疗心绞痛，充血性心脏病和心肌梗塞。
哺乳动物细胞中的环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的多同功酶形式已被鉴定。这些同功酶将环磷酸腺苷(cAMP)和/或环鸟苷单磷酸(cGMP)水解为可能无生物活性的5′-核苷磷酸。血管平滑肌中的细胞内cGMP升高引起一系列变化导致肌肉紧张的减轻。同时肾小管细胞cGMP升高刺激尿钠排泄和利尿。血管平滑肌和肾细胞含有对cGMP水解具有低km(1μM)的磷酸二酯酶同功酶，该同功酶已被称为cGMP-PDE或cGMP-PDE V(以前被称为cGMP-PD I，因为用浓度在150-200mM之间的乙酸钠从阴离子交换琼脂糖树脂上洗脱时，它在第一个PDE活性峰中)。因此cGMP-PDE同功酶的抑制是一个能生存的亚细胞机理，由于通过cGMP的增加，可产生总的外周阻力的减小以及尿钠排泄和利尿的刺激。cGMP-PDE抑制剂的发展预示着将要发现可用于治疗心力衰竭和高血压的药剂。例如，对cGMP-PDE具有高抑制作用的化合物被认为可降低血压及诱导尿钠排泄和多尿。
本发明的典型化合物的cGMP-PDE V抑制活性可能下列步骤证明。
cGMP-PDE和其他PDE同功酶可按Silver等，Sec.Messeng.Phos.13：13-25，1991中所述，通过阴离子-交换和亲合色谱从各种动物和人的心血管组织(心脏和主动脉)中分离，有无试验化合物存在下的PDE活性基本上按Thompson等，Adv Cyclic Nucleotide Res.10：69-92所述测定。为了测定化合物作为PDE抑制剂的效力和选择性，可测定它们在10μM时对环状核苷水解的影响。如果观察到≥50％的PDE活性抑制率，就会得到IC50值(导致50％PDE活性减少的化合物浓度)和相应的95％可信的间隔。IC50可按Tallarida和Murray，Manual of PharmacologicCalculations with Computer Programs，Procedure 8，Graded Dose-response，PP.14-19，Springer-Verlag，New York，1981(“计算机程序药理学计算指南”)所述的方法由相应的浓度曲线计算。
下表概括了由本发明典型化合物试验所得的结果。
以给出的μM或IC50(nM)形式的百分抑制率实施例 cGMP-PDEV1(b) 102(b) 9％(1μM)3(b) 224(b) 6505 3106 237 198(b) 12009 54010(b) 27011(b) 31012(b) 39％(1μM)或17％(0.1μM)13 66014 77％(10μM)或28％(1μM)15(c) 177016(b) 90％(10μM)或32％(1μM)17 61％(10μM)或20％(1μM)18(b) 33％(1μM)19 3320 8621(c) 42022 30023(b) 33％(1μM)24(b) 18025(a) 7626 8.727(b) 73％(1μM)或25％(0.1μM)28(b) 48％(1μM)29 94％(0.1μM)或77％(0.01μM)30 73％(1μM)或43％(0.1μM)
以给出的μM或IC50(nM)形式的百分抑制率实施例 cGMP-PDEV31 3032 89％(1μM)或58％(0.1μM)
或24％(0.01μM)33(b) 56％(0.1μM)34 78％(1μM)或45％(0.1μM)35 53％(1μM)或34％(0.1μM)36(b) 62％(1μM)或26％(0.1μM)37(d) 78％(1μM)或36％(0.1μM)38(d) 27039 74％(1μM)或33％(0.1μM)
本发明典型化合物的抗高血压活性按下列步骤证明。
将自发性高血压的大鼠(SHR)用戊巴比妥钠(50mg/kg，ip)麻醉，在腔静脉和腹主动脉的下方安装导管以给入药物和分别记录动脉血压和心率。术后恢复2天后，以5分钟的间隔对清醒的SHR作三基线血压测量。以与剂量有关的方式(0.3-10mg主剂/kg)静脉注入试验化合物或赋形剂，同时用多种波动描记器连续记录动脉血压。在给入各种剂量的试验化合物及以累积剂量方式给入下一剂量后5分钟测量平均血压反应。以与三基线测量平均值的差计算各剂量试验化合物的反应。
下表概括了由本发明典型化合物试验所得的结果。
SHR iv
以给定的mg/kg或ED25(mg/kg)表示的实施例 平均动脉血压变化的百分率1(b) -15％(1mg/kg)或-29％(30mg/kg)6 8.4或-30％(10mg/kg)7 4.610(b) -17％(10mg/kg)11(b) -4％(10mg/kg)19 11.0或-21％(10mg/kg)20 10.1或-23％(10mg/kg)24(b) -8％(10mg/kg)25(a) -5％(10mg/kg)26 4.2或-46％(10mg/kg)或
-56％(10mg/kg，po)33(b) 9.3或-27％(10mg/kg)
本发明典型化合物逆转或缓减硝酸酯诱导的耐药性的活性可按下述步骤证明：
通过反复给以高剂量的硝酸甘油(100mg/kg，s.c.，3次/天，连续给药3天)使自发性高血压大鼠(17-25周龄)对硝酸甘油产生耐药性。为了进一步证实耐药性，将1-300μg/kg剂量范围的硝酸甘油静脉给药，记录各剂量在平均动脉血压(MAP)方面的最大变化。在激发剂量的硝酸甘油给药前的5-10分钟，用本发明化合物(耐药性预处理组)或用赋形剂(0.05N NaOH)(耐药性赋形剂预处理组)对分组的耐药的大鼠进行静脉给药预处理。对非耐药大鼠(非耐药性组)给以激发剂量的硝酸甘油导致与剂量有关的10到40mmHg之间的MAP的降低。对耐药性赋形剂预处理组给入激发剂量的硝酸甘油导致明显的高血压反应的减轻。对用本发明化合物预处理的耐药大鼠(耐药性预处理组)给入激发剂量的硝酸甘油导致高血压反应的不同程度的康复。计算非耐药性组以及耐药性赋形剂预处理组和耐药性预处理组剂量-MAP曲线下的面积。磷酸酯诱导的耐药性的百分逆转率按下式计算：百分逆转率＝(AUCtol-pretreated-AUC(tol-veh)/(AUCnontol-AUCtol-veh)×100其中： AUCnontol＝非耐药性组剂量-MAP曲线下的面积。
AUCtol-veh＝耐药赋形剂预处理组剂量-MAP曲线下的面
积
AUCtol-pretreated＝耐药预处理组剂量-MAP曲线下的面积100％或更大的百分逆转率说明对硝酸酯诱导的耐药性的完全逆转，而0％的百分逆转率说明对所产生的硝酸酯诱导的耐药性完全没有逆转。下表概括了用本发明典型化合物试验所得到的结果。实施例 剂量(mg/kg) 对硝酸甘油诱导的耐药性的百分逆转率 6 1.0 69 7 3.0 140
0.3 46
1.0 45
通过本领域已知的常规药物学方法可将本发明化合物制备成适用药用的药物组合物；即通过制备包含本发明化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种生理学上可接受的载体，辅助剂，稀释剂或赋形剂的组合物，制备成用于口服给药的固体或液体形式，用于非胃肠道给药，表面给药或汽雾剂吸入给药，等。
口服给药的固体组合物包括压片剂，丸剂，粉末和颗粒。在这些固体组合物中，活性化合物与至少一种惰性稀释剂如淀粉，碳酸钙，蔗糖或乳糖混合。这些组合物也可含稀释剂以外的其他物质，例如，润滑剂，如硬脂酸镁，滑石等。
口服给药的液体组合物包括药学上可接受的乳液，溶液，悬浮液，糖浆和酏剂，这些制剂中含有常用于本领域的惰性稀释剂，如水和液体石蜡。除惰性稀释剂以外，这些组合物也可含有辅助剂，如润湿剂和悬浮剂，以及甜味剂，芳香剂，香料和防腐剂。按照本发明，用于口服的化合物也可包含在可吸收物质如明胶的胶囊中，该胶囊包含上述活性组分以及可含或可不含另外的稀释剂或赋形剂。
用于本发明非胃肠道给药的制剂包括无菌水，水-有机，以及有机溶液，悬浮液和乳液。有机溶剂或悬浮介质的例子包括丙二醇，聚乙二醇，植物油如橄榄油和注射用有机酯如油酸乙酯。这些组合物中也可含有辅助剂如稳定剂，防腐剂，润湿剂，乳化剂和分散剂。
本发明的表面给药或气雾剂吸入给药制剂包括本发明化合物溶于或分散于药学上可接受的赋形剂如水，含水醇，乙二醇，油溶液或油水乳液等中的制剂。
如果需要，可进一步将本发明化合物混入缓释或靶向释放系统如聚合物基质，脂质体，和微球体。
活性组分在这些组合物的百分比可有变化，以便获得合适的剂量。对于特殊患者的给药剂量可根据临床医生的判断而有变化，所使用的判断标准有：给药途径，治疗周期，病人的大小和身体条件，活性组分的效力和病人的反应。因此活性组分的有效剂量可在临床医生考虑了所有标准后，使用他对病人表现的最佳判断，而容易地决定。