根赤壳菌素衍生物 【技术领域】
本发明涉及具有酪氨酸激酶抑制活性和具有抗肿瘤、抗微生物或免疫抑制作用的新的根赤壳菌素衍生物或其可药用盐。
背景技术
已知下式(B)表示的微生物代谢产物根赤壳菌素具有抗菌和抗癌作用[Narure，171，344(1953)；Neoplasma，24，21(1977)]或具有免疫抑制作用(未审日本专利申请公开No.298764/94)。
而且，其中酚羟基用各种酰基修饰的根赤壳菌素衍生物具有抗肿瘤作用是已知的(未审日本专利申请公开No.226991/92)。此外，其中酚羟基用酰基或烷基修饰的根赤壳菌素衍生物具有血管生成抑制作用也已公开(未审日本专利申请公开No.279279/94)。
酪氨酸激酶是采用ATP作为磷酸盐供体并催化底物蛋白质特定酪氨酸残基中的γ-磷酸酯基转化为羟基的酶，因此在细胞内信号转导的控制机理中起重要的作用。已知多组酪氨酸激酶，并且酪氨酸激酶活性增加(例如结肠癌中的Src、乳腺癌和胃癌中的ErbB-2、白血病中的Abb等)也是已知的。酪氨酸激酶活性的无序增加可导致细胞的异常分化和增生。其结果是，酪氨酸激酶的特定抑制剂可用于防止或治疗多种疾病，包括作为抗肿瘤剂。
Lck是一种酪氨酸激酶，通过抗原刺激激活T淋巴细胞可使其得到活化，并且该酶的抑制剂可以用作免疫抑制剂。而且，Src与破骨细胞中的骨的再吸收有关也是已知地，该酶抑制剂也可作为骨重吸收的抑制剂用于治疗骨质疏松。此外，作为多种生长因子的受体类型的酪氨酸激酶EGF-R(表皮生长因子受体)抑制剂，FGF-R(纤维细胞生长因子受体)抑制剂，PDGF-R(血小板衍生的生长因子受体)抑制剂等，可用作固体瘤的生长抑制剂，血管生成抑制剂，血管平滑肌生长抑制剂等等。
对酪氨酸激酶活性的抑制作用可采用以癌基因v-Src(可从RIKEN基因库获得)转染的大鼠纤维细胞系SR-3Y1，用抗-磷酸酪氨酸抗体通过Western Blotting分析进行测量，并计算其中酪氨酸发生磷酰化的细胞内蛋白质的量。由于在该方法中采用的SR-3Y1细胞的细胞内蛋白质酪氨酸磷酰化水平随v-Src酪氨酸激酶增加，所以根赤壳菌素衍生物抑制v-Src酪氨酸激酶活性的能力可通过其中酪氨酸发生磷酰化的细胞内蛋白质的量的减少测定。Robinson，SP.等[Intemational Journal ofOncology，2，253(1993)]报道了通过Western Blotting分析测定酪氨酸磷酰化抑制作用的方法，和Kwon，H.J.等[Cancer Research，52，6926(1992)]报道了采用SR-3Y1细胞的试验实施例。
本发明公开
本发明的目的是提供具有酪氨酸激酶抑制活性和具有抗肿瘤、抗微生物或免疫抑制作用的新的根赤壳菌素衍生物或其可药用盐。
本发明涉及下式(I)表示的根赤壳菌素衍生物或其可药用盐：
其中R1和R2相同或不同，各自表示氢、烷酰基、链烯酰基或叔丁基二甲基甲硅烷基；
(1)当X表示卤素时，
Y表示氧原子或R4-O-N
{其中R4表示氢原子或表示取代或未取代的低级烷基
(所说的取代基选自羟基，低级烷氧基，低级烷酰氧基，
叠氮基，氨基，一-或二-低级烷氨基，低级烷酰基氨基，低级
烷氧羰基氨基，低级链烯氧基羰基氨基，羧基，低级烷氧羰基，
低级烷基氨基甲酰基和环亚氨基}；
R3表示氢，烷酰基，链烯酰基或-SO-Z<其中Z表示下式(A)：
{其中XA，R1A，R2A的定义分别同X，R1和R2；和
YA表示氧原子或R4A-O-N
(其中R4A的定义同R4)}>；和
(2)当X与R3彼此结合表示单键时；
Y表示R4B-O-N
(其中R4B的定义同R4)。
下文中式(I)表示的化合物被称为化合物(I)。其它通式标号的化合物也按同样的方式称呼。
在化合物(I)各基团的定义中，烷酰基是指具有1-20个碳原子的直链或支链烷酰基(例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、己酰基、月桂酰基、肉豆蔻基、棕榈酰基、硬脂酰基等)。链烯酰基是指具有3-20个碳原子的直链或支链链烯酰基(例如棕榈油酰基、亚油酰基、亚麻酰基等)。卤素是指氟，氯，溴或碘原子。低级烷基是指具有1-8个碳原子的直链或支链烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、庚基、辛基等)。
取代的低级烷基的取代基是1-3个相同或不同的基团(例如羟基、低级烷氧基、低级烷酰氧基、叠氮基、氨基、一-或二-低级烷氨基、低级烷酰基氨基、低级烷氧羰基氨基、低级链烯氧基羰基氨基、羧基、低级烷氧羰基、低级烷基氨基甲酰基和环亚氨基等)。低级烷基氨基甲酰基是指在氨基甲酰基的氮原子上取代有1-2个低级烷基基团。
这里，低级烷氧基、低级烷酰氧基、一或二-低级烷氨基、低级烷酰基氨基、低级烷氧羰基氨基、低级烷氧羰基和低级烷基氨基甲酰基中的烷基部分的定义同上述低级烷基的定义，其中一个碳原子可被硅原子替代。低级链烯氧基羰基氨基中的低级链烯基是指具有2-6个碳原子的直链或支链链烯基(例如乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基、戊二烯基、己二烯基等)。环亚氨基表示例如邻苯二甲酰亚胺基，琥珀酰亚胺基，戊二酰亚胺基等。
化合物(I)的可药用盐包括酸加成盐，金属盐，铵盐，有机胺加成盐，氨基酸加成盐等。酸加成盐的实例包括无机酸盐(例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)，和有机酸盐(例如甲酸盐、乙酸盐、草酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐等)。金属盐的实例包括碱金属盐(例如锂盐、钠盐、钾盐等)，碱土金属盐(例如镁盐、钙盐等)，铝盐，锌盐等。铵盐的实例包括铵盐，四甲基铵盐等。有机胺加成盐的实例包括与吗啉、哌啶等形成的盐。氨基酸加成盐的实例包括与甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸等形成的盐。
通常本发明化合物是采用旋光性的根赤壳菌素作为起始原料制备的，并且其所有可能的立体异构体和异构体的混合物均包括在本发明的范围之内。
下面描述了化合物(I)的制法。
化合物(I)的制备方法主要包括下述反应步骤：肟的形成(步骤1)，卤代醇的形成(步骤2)和酰化反应(步骤3)。根据目的化合物的不同可将上述反应步骤结合采用。
下面描述的制备方法中，在所用方法中定义的基团发生变化或定义的基团不适用于所采用的方法时，可通过采用引入-消除保护基的方法得到目的化合物，所述保护基是在有机合成化学中经常采用的[例如可参考“有机合成中的保护基”(Protective Group in Organic Synthesis)，T.W.Greene，John Wiley & Sons Inc.(1981)]。而且，如果必要的话，可以改变反应步骤(如引入取代基)的顺序。
制备方法1：
(在上述通式中，R1a和R2a分别表示从上述定义的R1和R2除去四甲基甲硅烷基的基团；和R4的定义如上)。
步骤1：
根赤壳菌素或采用已知方法从根赤壳菌素得到的化合物(C)(未审日本专利申请公开No.226991/92)可用作起始原料。
化合物(Ia)可通过下面化合物(C)与化合物(II)或其酸加成盐的反应制备。吡啶，氯仿，二氯甲烷，乙醚，四氢呋喃，二甲基甲酰胺，乙腈等可单独作为溶剂或以其混合物作为溶剂。当采用化合物(II)酸加成盐时，反应在碱例如胺(如吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺等)存在下，或在碱金属碳酸盐或碳酸氢盐(如碳酸钠、碳酸钾等)存在下进行，相对化合物(II)而言使用量为1当量或更多，优选采用也可作为溶剂的吡啶。化合物(II)或其酸加成盐的用量对根赤壳菌素而言通常是1当量或更多，优选2-10当量。反应通常在20-100℃进行1-80小时。
制备方法2：
{在上式中，R1a，R2a，X和Y的定义如上所述；和R3a表示氢、甲酰基或-SO-Z(其中Z的定义如上所述)}。
步骤2-1
其中R3a为氢的一系列化合物(Ib)可通过下述化合物(Ia)或(C)与酸(例如盐酸、氢溴酸等)或路易斯酸(如四氯化钛等)的反应制备。二噁烷，四氢呋喃，乙醚，氯仿，二氯甲烷，二甲基甲酰胺，乙腈等可单独作为溶剂或以它们的混合物作为溶剂。酸或路易斯酸的用量相对化合物(Ia)或(C)而言通常是1当量或更多，优选1-1O当量。反应通常在-20℃至40℃进行10分钟-48小时。
步骤2-2
其中R3a为甲酰基的一系列化合物(Ib)可在二甲基甲酰胺中，通过下述化合物(Ia)或(C)与草酰氯，磷酰氯或磷酰溴的反应制备。相对化合物(Ia)或(C)而言磷酰氯或磷酰溴的用量通常是1当量或更多，优选2-5当量。反应通常在-10℃至40℃进行1-48小时。
步骤2-3
其中R3a为-SO-Z(其中Z的定义如上所述)化合物(Ib)的二聚体可通过下述化合物(Ia)或(C)与亚硫酰氯或亚硫酰溴的反应制备。二甲基甲酰胺，氯仿，二氯甲烷，二甲亚砜，乙腈等可单独作为溶剂或以它们的混合物作为溶剂。相对化合物(Ia)或(C)而言亚硫酰氯或亚硫酰溴用量通常是1当量或更多，优选2-10当量。反应通常在-10℃至40℃进行1-48小时。
制备方法3
(在上式中，R1a，R2a，X和Y的定义如上所述；R1b和R2b的定义分别与R1a和R2a相同；和R3b表示烷酰基或链烯酰基)。
步骤3：
其中羟基用烷酰基或链烯酰基修饰的化合物(Ic)可在碱存在下，通过下述化合物(Ib’)与1当量或更多等量(优选1-100当量)的具有目标烷酰基或链烯酰基的酰氯，酸酐或混合酸酐进行反应制备。虽然任意羟基的修饰受适当引入和除去羟基保护基的影响，但是同时修饰多个羟基也是可能的。作为碱使用的吡啶，N，N-二甲基苯胺，N，N-二乙基苯胺等的用量相对化合物(Ib’)而言通常是1当量或更多，优选1-200当量。该反应在溶剂(如二甲基甲酰胺，二甲亚砜，氯仿，二氯甲烷，甲苯等)中进行。而且，可采用同时作为溶剂的碱(如吡啶等)。此外，通过加入0.1-4当量的N，N-二甲基氨基吡啶等可使反应加速。反应通常在-20℃至50℃进行5分钟-24小时。
制备方法4：
{在上式中，X，Y和R3的定义如上所述；R1c和R2c均为氢，或其中一个为氢而另一个为烷酰基或链烯酰基；和R1d和R2d表示上述的R1c和R2c至少一个氢原子被t-BuMe2Si取代的基团(其中t-BuMe2Si表示叔丁基二甲基甲硅烷基)。}
步骤4
化合物(Ie)可在碱存在下，通过化合物(Id)与叔丁基二甲基甲硅烷基氯的反应制备。氯仿，二氯甲烷，乙醚，四氢呋喃，丙酮，二甲基甲酰胺，乙腈等可单独作为溶剂或以它们的混合物作为溶剂。可采用胺(如吡啶、咪唑、三乙胺、二异丙基乙胺等)作为碱。叔丁基二甲基甲硅烷基氯的用量相对化合物(Id)而言通常是1当量或更多，优选1-10当量。碱的用量相对叔丁基二甲基甲硅烷基氯而言，通常是1当量或更多，优选1-5当量。反应通常在0-50℃进行10分钟-24小时。
在化合物(I)的制备方法中，R1，R2，R3，X或Y官能基的转化不仅可通过上述的步骤进行，而且可以通过已知的方法进行[例如，Comprehensive Organic Transformations，RC.Larock(1989)]。
将有机合成中常用的技术(如过滤、提取、洗涤、干燥、浓缩、结晶、多种类型的色谱法等)任选地结合可进行上述方法产物的分离和纯化。中间体可不经纯化用于下一个步骤。
如果需要得到化合物(I)的盐，化合物(I)的盐可在其能得到时如上述进行纯化；或者，当化合物是以游离碱形式获得时，可通过将游离碱溶解或悬浮于合适的溶剂中，并向其中加入酸或碱而形成它们的盐。
而且，化合物(I)或其可药用盐可以与水或多种溶剂的加成产物的形式存在，这些加成产物也包括在本发明的范围之内。化合物(I)的实例如表1所示。表1 (1)化合物(I)的实例化合物 R1，R2 R3 X Y 1 H HCO Cl O 2 H H Cl O 3 H H Br O 4 H Za Cl O 5 CH3CO CH3CO Cl O 6 CH3CO HCO Cl O 7 CH3CO Za Cl O 8 H —— NOH 9 H —— NOCH31O (CH3)3C(CH3)2Si —— O11 (CH3)3C(CH3)2Si —— NOH12 (CH3)3C(CH3)2Si —— NOCH2OCH313 H —— NOCH2OCH314 H —— NO(CH2)3N315 CH3(CH2)14CO HCO Cl O16 CH3(CH2)14CO Za Cl O(其中R1A和R2A的定义分别与上述的R1和R2相同)在R3和X定义中的“—”表示R3和X彼此结合形成的单键。表1(2)化合物(I)的实例化合物 R1，R2 R3 X Y17 CH3(CH2)14CO H Cl O18 CH3(CH2)14CO CH3CO Cl O19 CH3(CH2)14CO H Br O20 CH3(CH2)14CO CH3CO Br O21 CH3(CH2)14CO CH3(CH2)14CO Br O22 (CH3)3C(CH3)2Si —— NO(CH2)6Pht23 H —— NO(CH2)6Pht24 H —— NO(CH2)6N325 H —— NO(CH2)5CO2C(CH3)326 H —— NO(CH2)5CO2(CH2)2Si(CH3)327 H —— NO(CH2)6NHCO2CH2CH＝CH228 H —— NO(CH2)5CO2H29 H —— NOCH2CO2H在R3和X定义中的“—”表示R3和X彼此结合形成的单键。在Y定义中的“Pht”表示邻苯二甲酰亚胺基。表1(3)化合物(I)的实例化合物 -R11，-R2 -R3 -X ＝Y30 -H —— ＝NOCH2CON(CH3)231 -H —— ＝NO(CH2)3OH32 -CO(CH2)14CH3 —— ＝NOCH333 -H -H -Cl ＝NOCH334 -H -H -Br ＝NOCH335 -H -CHO -Cl ＝NOCH336 -H -H -Cl ＝NOCH2CON(CH3)2在R3和X定义中的“-”表示R3和X彼此结合形成的单键。
实施本发明的最好模型
下面，通过以下试验实施例描述化合物(I)的典型实例的药理活性。
试验实施例1
细胞内酪氨酸激酶的抑制试验：
采用含有10％牛胎儿血清的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)，其中已加入各种浓度的试验根赤壳菌素衍生物，在5％二氧化碳气氛中于37℃培养SR-3Y1细胞15小时。如此培养的细胞在冷却的缓冲溶液中4℃溶解20分钟进行溶胞(50mM Tris HCl，PH7.5，150mM NaCl，1％Triton X-100，0.1％SDS，1％脱氧胆酸钠，2mMEDTA，1mMPMSF，20μM亮肽酶素，0.15单位/ml抑肽酶，1mMNa3VO4)，然后在20,000g离心30分钟。测量所得上清液的蛋白质浓度后，将每道(lane)样品调整到同样的蛋白质量以通过SDS-PAGE进行蛋白质分离。将这样分离的蛋白质样品转移到硝基纤维素膜上，随后向其上加入小鼠多克隆磷酸酪氨酸抗体MX-pTYR(Kyowa MedexCO.，Ltd)作为第一抗体和辣根过氧化物酶-偶合小鼠IgG抗体(BIO-RAD Co.)作为第二抗体，从而可影响它们在膜上与蛋白质样品的反应。采用ECL试剂(Amersham Co.)进行测定，和通过扫描从X-射线胶片得到的带密度测定酪氨酸-磷酸化蛋白质的量。根赤壳菌素衍生物抑制酪氨酸磷酸化作用的活性可通过与不加药物的对照组相比，使酪氨酸-磷酸化蛋白质的比例减少一半时各衍生物的浓度(IC50)来表示。
结果列于表2中。
表2
细胞内酪氨酸激酶的抑制活性化合物 IC50(μM)根赤壳菌素 0.18
8 0.02
9 ＜0.05
10 0.15
11 0.02
14 ＜0.05从表2看出，与根赤壳菌素相比，化合物(I)清楚地显示了强烈的抑制细胞内酪氨酸激酶活性的作用，因此可用作酪氨酸激酶抑制剂。
试验实施例2
对HeLa S3胞的细胞生长抑制试验：
用含有10％牛血清和2mM的谷氨酸的MEM介质(由NissuiPharmaceutical制造)将HeLaS3胞调至3.0×104细胞/ml，并按0.1ml/孔分份将其分散于96孔微量滴定平板上。在二氧化碳气体培养箱中于37℃培养细胞20小时，除去培养液中的上清液，然后用生理盐水洗涤平板一次，之后向各个孔中加入含有各试验化合物的0.1ml介质，并在二氧化碳气体培养箱中用于37℃下培养细胞72小时。除去培养液中的上清液后，向各孔中加入含有0.02％中性红的0.1ml介质，并在二氧化碳气体培养箱中37℃下将细胞染色1小时。除去培养液中的上清液后，用生理盐水洗涤平板一次，用0.001N盐酸/30％乙醇提取染料，然后通过微量板读数器测定550nm的吸收值。通过将未-处理细胞的吸收值与用已知浓度的各样品处理过的细胞的吸收值进行比较，可以计算出各个试验化合物抑制50％细胞生长的浓度(IC50)。
结果列于表3中。
表3对HeLaS3细胞的细胞生长抑制活性化合物 IC50(μM)根赤壳菌素 6.7
4 6.0
6 5.0
7 1.5
8 0.09
9 0.05
10 3.2
11 0.12
13 0.02
14 0.05
从表3看出，化合物(I)显示了对HeLaS3细胞的细胞生长抑制活性，这种活性大于已知的根赤壳菌素的活性，因此可用作抗肿瘤剂。
试验实施例3
对P338白血病的抗肿瘤试验
移植7天后从P338腹水-诱导的小鼠(DBA/2)的腹腔中收集腹水。对腹水中的P338细胞计数，采用无菌生理盐水制成5×106细胞/ml的肿瘤细胞悬浮液，并将其中的0.2ml部分(含有1×106细胞)移植到CDF1小鼠的腹腔中，小鼠体重为20-25g。在肿瘤移植24小时后，将各个试验化合物溶于含有聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯的生理盐水中，在肿瘤移植24小时后将各个0.2ml部分加到CDF1小鼠(每组5只动物)的腹腔中，然后观察小鼠的存活天数共观察30天。通过服用试验化合物组与对照组小鼠(未-处理组)平均存活天数的比判断试验化合物的作用(延长生命期，ILS％)。
结果列于表4中。
表4
对P338白血病的抗肿瘤活性化合物 ILS(％)根赤壳菌素 27
1 38
3 46
4 42
从表4看出，与根赤壳菌素相比化合物(I)可显著地延长生命期，因而可用作抗肿瘤剂。
试验实施例4
对肉瘤180固体肿瘤的抗肿瘤试验
在ddY小鼠腹腔内移植5×106肉瘤180细胞7天后，从腹水中收集细胞，用无菌生理盐水洗涤一次，然后采用无菌生理盐水制成5×107细胞/ml的细胞悬浮液。将0.1ml细胞悬浮液移植到ddY小鼠(体重20±2g)的右腋区皮下，肿瘤移植后24小时，将0.1-0.2ml的各个试验化合物静脉注射到ddY小鼠(每组5只动物)中，上述试验化合物是溶于生理盐水或溶于含有聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯的生理盐水中的。移植7天后测量各肿瘤的主轴(a)和副轴(b)以计算肿瘤体积，即a×b2/2。通过施用试验化合物组的肿瘤体积(T)与未服药的对照组的肿瘤体积(C)的比值(T/C)表示各个试验化合物的抗肿瘤活性。
结果列于表5中。
表5
对肉瘤180固体肿瘤的抗肿瘤活性化合物 T/C(％)根赤壳菌素 88
1 51
2 50
4 39
从表5中看出，与根赤壳菌素相比化合物(I)显示出色的抗肿瘤活性，因而可用作抗肿瘤剂。
试验实施例5
抗菌活性试验：
采用下述方法制备的介质(PH7)通过琼脂稀释法测量抗菌活性：将3g细菌用胰化冻(Bacto-Tryptone)(Difco制造)，3g肉提取物，1g酵母提取物，1g葡萄糖和16g琼脂溶于1升水。抗菌活性由最小生长抑制浓度(MIC)表示。
结果列于表6中。
表6
抗菌活性 化合物 最小生长抑制浓度(μg/ml) CA BS EH根赤壳菌素 20 83 - 1 - 83 - 3 - 83 - 4 2.6 1.3 2.6 9 6.5 52 -
CA：白色假丝酵母(Candian albicans)ATCC 10231
BS：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)No.10707
EH：Enterococcus hirae ATCC 10541
从表6中看出，化合物(I)显示抗菌活性，因而可用作抗菌剂。
试验实施例6
通过混合小鼠淋巴细胞培养反应进行的T细胞生长抑制试验
从AKR小鼠(Japan SLC Co.，Ltd)身上无菌地切下脾脏并制成单细胞悬浮液。将上述悬浮液与丝裂霉素C(MMC)(Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd)混合(最后浓度50μg/ml)并在37℃培养30分钟。培养后用溶液(HBSS)洗涤细胞三次，上述溶液是将2.5％牛胎儿血清(FCS，Gibco Co.)加到Hank’平衡盐溶液(Gibco Co.)中而制成的，然后调节到1×107细胞/ml。
将50μl的B10.BR小鼠(Japan SLC Co.，Ltd)淋巴结细胞悬浮液(含有1.5×105细胞)，50μl的AKR小鼠脾细胞悬浮液(含有5×105细胞)和100μl含有各试验浓度根赤壳菌素的溶液加到96孔微量滴定平板的各孔中，并在二氧化碳培养箱中37℃培养72小时。培养完成前18小时加入1.0μCi部分的[3H]-胸腺嘧啶。培养完成后，用细胞收集器通过滤纸收集细胞并干燥，然后向其中加入甲苯闪烁剂，采用闪烁计数器测量结合到细胞上的放射活性[3H]-胸腺嘧啶的量(试验组)。在对照组中，进行同样的培养，只是不加入化合物(I)溶液，然后测量结合到细胞上的放射活性[3H]-胸腺嘧啶的量。根据下式计算T细胞的生长抑制比，从中计算抑制50％生长时各个试验化合物的浓度(IC50)。
T细胞的生长抑制比(％)
(在上式中，MMC-处理的AKR小鼠的放射活性是指结合到MMC-处理的AKR小鼠脾细胞内的[3H]-胸腺嘧啶的放射剂量，和B10.BR小鼠的放射活性是指结合到B10.BR小鼠淋巴结细胞内的[3H]-胸腺嘧啶的放射剂量。)
结果列于表7中。
表7
混合的小鼠淋巴细胞培养反应的T细胞生长抑制比(％)化合物 IC50(μM) 根赤壳菌素 0.15
3 0.3
8 0.01
9 0.02
19 0.15
从表7中可以看出，化合物(I)通过混合小鼠淋巴细胞培养反应可抑制T细胞的生长，从而明显显示了免疫抑制作用。而且，其抑制作用优于现有技术中的根赤壳菌素。
化合物(I)或其可药用盐可以其本身通过口服或非肠道施用，或者以药物组合物形式施用。所述药物组合物剂量形式的实例包括片剂，丸剂，粉剂，粒剂，胶囊，栓剂，注射液，滴输注剂等。
这些剂型一般可采用已知方法制备并且其中可含有多种填充剂，润滑剂，结合剂，崩解剂，悬浮剂，张力剂，乳化剂，吸收增强剂等。
可在药物组合物中使用的载体的实例包括水，注射用蒸馏水，生理盐水，葡萄糖，果糖，蔗糖，甘露糖醇，乳糖，淀粉，玉米淀粉，纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素，羟丙基纤维素，藻酸，滑石，柠檬酸钠，碳酸钙，磷酸氢钙，硬脂酸镁，脲，硅树脂，脱水山梨糖醇脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯等， 这些载体可根据药物制剂的类型任选采用。
虽然为了上述的目的时，根据想要的治疗作用、施用方法、治疗期、年龄、体重等可以改变剂量和施用次数， 但是通常成人可按每0.01-5mg/kg的剂量施用。
本发明的实施方式可参考下面实施例和参考实施例的叙述。这里，各化合物的结构式列于前面表1中。
实施例1
化合物1：
将1ml的磷酰氯滴加到冰浴冷却的5ml二甲基甲酰胺中，在室温搅拌30分钟后，在冰浴冷却下将这样制备的溶液缓慢加到根赤壳菌素(2g)的二甲基甲酰胺溶液(20ml)中，并在室温搅拌混合物24小时。用乙酸乙酯(200ml)稀释反应溶液，以水洗涤三次，然后用无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化残留物(2％甲醇/氯仿)，得到1.4g化合物1。
1HMR(CD3OD)δ(ppm)：8.00(1H，s)，7.14(1H，ddd，1.0，11.2，16.1Hz)，6.44(1H，s)，6.16(1H，t，10.8 Hz)，5.95(1H，d，16.1 Hz)，5.68(1H，t，10.0 Hz)，5.32(1H，m)，5.25(1H，m)，5.20(1H，dd，5.6，10.0 Hz)，4.10(1H，d，16.1 Hz)，3.65(1H，d，16.1 Hz)，1.97(1H，m)，1.42(3H，d，6.3 Hz)
FAB-MS m/z：429 [M+H]+
实施例2
化合物2：
在冰浴冷却些下将1.3ml的浓盐酸(36％)滴加到根赤壳菌素(2g)的二噁烷溶液(70ml)中，并在室温搅拌所得的混合物6小时。将反应溶液与水(100ml)混合，冰浴冷却下用饱和碳酸氢钠水溶液小心地中和，然后用乙酸乙酯(150ml)提取三次。用无水硫酸钠干燥提取物，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(2％甲醇/氯仿)，得到1g化合物2。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.25(1H，ddd，1.0，11.3，16.4 Hz)，6.50(1H，s)，6.21(1H，dt，1.0，11.7 Hz)，5.99(1H，d，16.4 Hz)，5.79(1H，dt，1.0，11.7 Hz)，5.42(1H，m)，5.17(1H，ddd，1.0，5.9，11.7 Hz)，4.25(1H，d，16.4 Hz)，4.03(1H，dd，5.9，8.1 Hz)，3.70(1H，d，16.4 Hz)，2.07(1H，ddd，1.2，6.8，15.1 Hz)，1.93(1H，ddd，3.7，8.1，15.1 Hz)，1.46(3H，d，6.3 Hz)
FAB-MS m/z：401[M+H]+
实施例3
化合物3：
在冰浴冷却些下将1.0ml的浓盐酸(47％)滴加到根赤壳菌素(2.5g)的二噁烷溶液(50ml)中，并在室温搅拌所得的混合物2小时。将反应溶液与水(100ml)混合，冰浴冷却下用饱和碳酸氢钠水溶液小心地中和，然后用乙酸乙酯(150ml)提取三次。用无水硫酸钠干燥提取物，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(2％甲醇/氯仿)，得到1.7g化合物3。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.28(1H，dd，10.8，16.0 Hz)，6.51(1H，s)，6.13(1H，t，10.8 Hz)，6.00(1H，d，16.0 Hz)，5.96(1H，t，10.8 Hz)，5.40(1H，m)，5.33(1H，dd，5.2，10.8 Hz)，4.24(1H，d，16.1 Hz)，4.18(1H，m)，3.71(1H，d，16.1 Hz)，2.08(1H，m)，1.92(1H，m)，1.45(3H，d，6.4 Hz)
FAB-MS m/z：445，447[M+H]+
实施例4
化合物4：
冰浴冷却下将0.5ml的亚硫酰氯滴加到根赤壳菌素(1.4g)的二甲基甲酰胺溶液(7.5ml)中，在室温搅拌混合物12小时。加入乙酸乙酯(100ml)稀释反应溶液并用水洗涤三次。用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(4％甲醇/氯仿)，得到1.0g化合物4。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.15(2H，dd，10.8，16.1 Hz)，6.52(2H，s)，6.27(2H，t，10.8 Hz)，6.05(2H，d，16.1 Hz)，5.73(2H，t，10.8 Hz)，5.39(2H，m)，5.35(2H，m)，4.88(2H，m)，4.28(2H，d，16.4 Hz)，3.74(2H，d，16.4 Hz)，2.27(2H，m)，2.10(2H，m)，1.50(6H，d，6.3 Hz)
FAB-MS m/z：847 [M+H]+
实施例5
化合物5：
将0.75ml乙酸酐加到化合物2(170mg)的无水吡啶溶液(1ml)中，并在室温搅拌所得的混合物10小时。用20ml乙酸乙酯稀释反应溶液，然后按水，稀盐酸水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液的顺序进行洗涤。用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(2∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到125mg化合物5。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.06(1H，s)，6.93(1H，dd，11.2，16.3Hz)，6.12(1H，t，11.2 Hz)，6.04(1H，d，16.1 Hz)，5.73(1H，t，11.2 Hz)，5.40(1H，m)，5.14(1H，t，8.0 Hz)，5.00(1H，ddd，1.1，8.0，11.2 Hz)，4.41(1H，d，16.3 Hz)，3.96(1H，d，16.3 Hz)，2.35(3H，s)，2.34(3H，s)，2.21(1H，dd，8.7，15.4 Hz)，2.04(1H，ddd，3.3，8.7，15.4 Hz)，1.96(3H，s)，1.54(3H，d，6.3 Hz)
FAB-MS m/z：527[M+H]+
实施例6
化合物6：
将乙酸酐(1ml)加到化合物1(166mg)的吡啶溶液(1ml)中，并在室温搅拌所得的混合物13小时。用水稀释反应溶液并用乙酸乙酯(50ml×3)提取。按稀盐酸水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液的顺序洗涤提取物。用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(2∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到174mg化合物6。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.99(1H，s)，7.07(1H，s)，6.93(1H，dd，11.1，16.3 Hz)，6.14(1H，t，11.1 Hz)，6.04(1H，d，16.3 Hz)，5.75(1H，t，11.1 Hz)，5.43(1H，m)，5.34(1H，t，7.5 Hz)，5.05(1H，dd，7.5，11.1 Hz)，4.31(1H，d，16.2 Hz)，3.96(1H，d，16.2 Hz)，2.35(3H，s)，2.34(3H，s)，2.14(1H，m)，2.06(1H，m)，1.57(3H，d，6.4 Hz)
FAB-MS m/z：513[M+H]+
实施例7
化合物7：
将乙酸酐(0.5ml)加到化合物4(30mg)的吡啶溶液(0.5ml)中，并在室温搅拌所得的混合物13小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到30mg化合物7。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.06(2H，s)，6.88(2H，dd，11.0，15.9Hz)，6.17(2H，t，10.8 Hz)，6.05(2H，d，16.3 Hz)，5.67(2H，t，10.4 Hz)，5.45(2H，m)，5.05(2H，dd，7.8，9.7 Hz)，4.82(2H，dd，8.5，8.4 Hz)，4.30(2H，d，15.8 Hz)，3.95(2H，D，15.8 Hz)，2.338(6H，s)，2.337(6H，s)，2.25(2H，m)，2.06(2H，m)，1.54(6H，d，6.4 Hz)
FAB-MS m/z：1015[M+H]+
实施例8
将盐酸羟胺(20mg)加到根赤壳菌素(42mg)的吡啶溶液(2ml)中，并在50℃搅拌所得的混合物8小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(25∶1氯仿/甲醇)得到10mg化合物8。通过1H NMR鉴定所得的化合物8发现为异构体的混合物(约3∶1)，这是因为肟羟基的存在所致。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.22(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，7.12(0.5H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.83(1.5H，d，16.2 Hz)，6.43(1H，s)，6.42(0.5H，s)，6.16(1H，t，11.3 Hz)，6.11(0.5H，t，11.2 Hz)，5.58(1H，dd，3.6，11.3Hz)，5.46(0.5H，dd，3.4，11.2 Hz)，5.30(1.5H，m)，4.79(0.5H，d，16.3 Hz)，4.72(0.5H，d，16.3 Hz)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.35(1.5H，m)，3.02(1.5H，m)，2.97(0.5H，m)，2.42(1.5H，m)，1.60(1.5H，m)，1.53(3H，d，6.6 Hz)，1.52(1.5H，d，7.7 Hz)
FAB-MS m/z：380[M+H]+
实施例9
化合物9：
将O-甲基羟胺盐酸盐(100mg)加到根赤壳菌素(200mg)的吡啶溶液(1ml)中，并在80℃搅拌所得的混合物90分钟。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1％甲醇/氯仿)得到34mg化合物9。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.23(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.70(1H，d，16.2 Hz)，6.4 2(1H，s)，6.14(1H，t，11.3 Hz)，5.58(1H，dd，3.6，11.3 Hz)，5.30(1H，m)，3.904(1H，d，16.1 Hz)，3.901(3H，s)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.33(1H，m)，3.01(1H，m)，2.42(1H，ddd，3.5，3.5，14.5 Hz)，1.59(1H，ddd，4.1，9.0，14.5Hz)，1.52(3H，d，6.5 Hz)FAB-MS m/z：394[M+H]+
实施例10
化合物10：
冰浴冷却根赤壳菌素(500mg)的二甲基甲酰胺溶液(7.5ml)，将其与咪唑(700mg)和叔丁基二甲基硅烷氯化物(1.1g)的二甲基甲酰胺溶液(2.5ml)依次混合，在室温搅拌所得的混合物12小时。通过加入乙酸乙酯(50ml)稀释反应溶液，然后用水洗涤两次。用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(3∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到902mg化合物10。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.58(1H，dd，10.8，16.2 Hz)，6.39(1H，s)，6.13(1H，ddd，1.1，10.8，10.8 Hz)，6.04(1H，d，16.2 Hz)，5.78(1H，dd，3.5，10.8 Hz)，5.32(1H，m)，3.89(1H，d，16.3Hz)，3.70(1H，d，16.3 Hz)，3.40(1H，ddd，1.9，1.9，3.4 Hz)，3.02(1H，ddd，1.9，2.3，9.4 Hz)，2.44(1H，ddd，3.2，3.2，14.4Hz)，1.54(3H，d，6.6 Hz)，1.50(1H，m)，1.00(9H，s)，0.94(9H，s)，0.24(3H，s)，0.22(3H，s)，0.21(3H，m)，0.20(3H，s)FAB-MS m/z：593[M+H]+
实施例11
化合物11：
将吡啶(0.1ml)和盐酸羟胺(240mg)加到化合物10(319mg)的二氯甲烷溶液(5ml)中，然后在70℃搅拌所得的混合物30小时。将反应溶液冷却到室温，用氯仿稀释，然后按稀盐酸水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液的顺序洗涤提取物。用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到18mg化合物11。通过1H NMR鉴定所得的化合物11发现为异构体的混合物(约1∶1)，这是因为肟羟基的存在所致。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.24(1H，dd，11.3，16.1 Hz)，7.13(1H，dd，11.2，16.0 Hz)，6.87(1H，d，16.1 Hz)，6.37(1H，s)，6.36(1H，s)，6.20(1H，d，16.0 Hz)，6.14(1H，t，11.3 Hz)，6.08(1H，t，11.2 Hz)，5.65(1H，dd，3.0，11.3 Hz)，5.53(1H，dd，3.1，11.2 Hz)，5.26(2H，m)，4.85(1H，d，16.3 Hz)，3.91(1H，d，16.2 Hz)，3.60(1H，d，16.2 Hz)，3.39(2H，m)，3.01(1H，d，16.3 Hz)，2.98(2H，m)，2.42(2H，m)，1.56(3H，d，6.5 Hz)，1.54(3H，d，6.5 Hz)，1.49(2H，m)，1.00(18H，s)，0.943(9H，s)，0.942(9H，s)，0.23(6H，s)，0.212(6H，s)，0.209(6H，s)，0.20(6H，s)FAB-MS m/z：608 [M+H]+
实施例12
化合物12：
在0℃下按顺序将二异丙基乙胺(160μl)和氯甲基甲基醚(75μl)加到化合物11(100mg)的二氯甲烷溶液(1ml)中，并在0℃搅拌所得的混合物7小时。减压蒸去溶剂，然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(5∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到58mg的化合物12。通过1H NMR鉴定所得的化合物12发现为异构体的混合物(约1∶1)，这是因为肟羟基的存在所致。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.24(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，7.12(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.81(1H，d，16.1 Hz)，6.36(2H，s)，6.12(1H，ddd，2.0，11.2，11.2 Hz)，6.07(1H，ddd，1.5，11.2，11.2Hz)，5.66(1H，dd，2.9，11.2 Hz)，5.52(1H，dd，3.2，11.2 Hz)，5.28(2H，m)，5.22(2H，ABq，7.3 Hz)，5.18(2H，s)，4.81(1H，d，16.4 Hz)，3.97(1H，d，16.4 Hz)，3.59(1H，d，16.4 Hz)，3.50(3H，s)，3.48(3H，s)，3.37(2H，m)，3.05(1H，d，16.4 Hz)，3.02-2.94(2H，m)，2.45-2.39(2H，m)，1.56(3H，d，7.8 Hz)，1.54(3H，d，6.6 Hz)，1.00(18H，s)，0.943(9H，s)，0.940(9H，s)，0.23(6H，s)，0.21(6H，s)，0.204(6H，s)，0.200(6H，s)FAB-MS m/z：652[M+H]+
实施例13
化合物13：
将1M四正丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(50μl)加到化合物12(22mg)的四氢呋喃溶液(0.5ml)中，并在室温搅拌所得的混合物2小时。加入乙酸乙酯稀释反应溶液，然后用水洗涤两次。用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(2％甲醇/氯仿)，得到11mg化合物13。通过1H NMR鉴定所得的化合物13发现为异构体的混合物(约1∶1)，这是因为肟羟基的存在所致。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.29(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，7.18(1H，dd，11.0，16.1 Hz)，6.77(1H，d，16.1 Hz)，6.43(2H，s)，6.17(1H，t，11.2 Hz)，6.16(1H，d，16.1 Hz)，6.13(1H，t，11.0 Hz)，5.61(1H，dd，3.4，11.2 Hz)，5.50(1H，dd，3.4，11.0 Hz)，5.30(2H，m)5.19(2H，ABq，7.3 Hz)，5.13(2H，ABq，7.1 Hz)，4.65(1H，d，16.6 Hz)，3.，95(1H，d，16.4 Hz)，3.84(1H，d，16.4 Hz)，3.46(1H，d，16.6 Hz)，3.47(3H，s)，3.43(3H，s)，3.33(1H，m)，3.30(1H，m)，3.02(1H，m)，2.97(1H，m)，2.42(2H，m)，1.68-1.58(2H，m)，1.53(3H，d，7.8 Hz)，1.51(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z：424[M+H]+
实施例14
化合物14：
在室温搅拌根赤壳菌素(36.4mg)和O-(3-叠氮基丙基)羟胺盐酸盐(20mg)的吡啶溶液(0.5ml)14小时。减压蒸去溶剂，然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1％甲醇/氯仿)，得到29.3mg化合物14。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.24(1H，ddd，1.0，11.2，16.1 Hz)，6.72(1H，d，16.1 Hz)，6.43(1H，s)，6.15(1H，ddd，1.7，11.2，11.2Hz)，5.59(1H，dd，3.7，11.2 Hz)，5.30(1H，m)，4.20(2H，m)，3.92(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.42(2H，t，6.6 Hz)，3.34(1H，m)，3.01(1H，m)，2.42(1H，ddd，3.4，3.4，14.4 Hz)，1.96(2H，m)，1.59(1H，ddd，3.9，8.8，14.4 Hz)，1.52(3H，d，6.4 Hz)FAB-MS m/z：463[M+H]+
实施例15
化合物15：
将化合物1(60mg)和4-二甲氨基吡啶(40mg)的二氯甲烷(2ml)溶液冷却到0℃，向其中缓慢滴加入棕榈酰氯(0.1ml)，并在0℃搅拌所得的混合物30分钟。减压蒸去溶剂，然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(4∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到92mg化合物15。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.98(1H，s)，7.03(1H，s)，6.94(1H，dd，11.2，16.3 Hz)，6.14(1H，t，11.2 Hz)，6.04(1H，d，16.3Hz)，5.74 1H，t，11.2 Hz)，5.40(1H，m)，5.32(1H，brt，7.6Hz)，5.05(1H，dd，7.6，11.2 Hz)，4.29(1H，d，16.3 Hz)，3.95(1H，d，16.3 Hz)，2.63-2.52(4H，m)，2.14(1H，dd，7.6，15.4Hz)，2.05(1H，m)，1.80-1.72(4H，m)，1.55(3H，d，6.3 Hz)，1.43-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.7 Hz)FAB-MS m/z：905 [M+H]+
实施例16
化合物16：
将化合物4(96mg)和4-二甲氨基吡啶(126mg)的二氯甲烷溶液(6ml)冷却到0℃，向其中缓慢滴加入棕榈酰氯并在0℃搅拌所得的混合物2小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(4∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到130mg化合物16。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.02(2H，s)，6.88(2H，m)，6.16 (1H，t，10.8 Hz)，6.15(1H，t，10.8 Hz)，6.04(1H，d，16.2 Hz)，6.03(1H，d，16.2 Hz)，5.66(1H，t，10.8 Hz)，5.64(1H，t，10.8 Hz)，5.43(2H，m)，5.06(1H，dd，6.0，10.8 Hz)，5.02(1H，dd，6.8，9.0 Hz)，4.80(1H，brt，8.8 Hz)，4.68(1H，brt，8.6 Hz)，4.29(1H，d，16.3 Hz)，4.27(1H，d，16.2 Hz)，3.95(2H，d，16.3 Hz)，2.60-2.52(8H，m)，2.29-2.18(2H，m)，2.06(2H，m)，1.81-1.71(8H，m)，1.522(3H，d，6.3 Hz)，1.517(3H，d，6.3 Hz)，1.43-1.21(96H，m)，0.88(12H，t，6.8 Hz)FAB-MS m/z：1801.9[M+H]+
实施例17
化合物17：
将浓盐酸(36％，0.5ml)滴加到化合物a(参考实施例1制备)(343mg)的二噁烷溶液(5ml)中，并在室温搅拌所得的混合物30分钟。用水洗涤反应溶液并用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(4∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到96mg化合物17。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.01(1H，s)，6.95(1H，dd，11.1，16.3Hz)，6.21(1H，t，11.1 Hz)，6.03(1H，d，16.3 Hz)，5.77(1H，t，11.1 Hz)，5.51(1H，m)，4.97(1H，ddd，1.0，6.6，11.1 Hz)，4.32(1H，d，16.2 Hz)，3.97(1H，t，6.6 Hz)，3.93(1H，d，16.2 Hz)，2.62-2.45(4H，m)，2.12(1H，m)，2.01(1H，m)，1.79-1.69(4H，m)，1.50(3H，d，6.3 Hz)，1.44-1.21(48H，m)，0.88(6H，t，6.6Hz)FAB-MS m/z：877[M+H]+
实施例18
化合物18：
将化合物17(25mg)的二氯甲烷溶液(4ml)冷却到0℃，并向其中滴加入吡啶(5滴)和乙酰氯(5滴)，在0℃搅拌所得的混合物30分钟。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(5∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到15mg化合物18。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.02(1H，s)，6.93(1H，dd，11.2，16.4Hz)，6.12(1H，t，11.2 Hz)，6.03(1H，d，16.4 Hz)，5.73(1H，t，11.2 Hz)，5.38(1H，m)，5.13(1H，t，8.0 Hz)，5.01(1H，dd，8.0，11.2 Hz)，4.34(1H，d，16.4 Hz)，3.96(1H，d，16.4 Hz)，2.61-2.55(4H，m)，2.20(1H，m)，2.03(1H，m)，1.95(3H，s)，1.80-1.71(4H，m)，1.53(3H，d，6.4 Hz)，1.43-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.6 Hz)FAB-MS m/z：919[M+H]+
实施例19
化合物19：
将浓氢溴酸(47％，3滴)缓慢滴加到化合物a(见下文，通过参考实施例1制备)(106mg)的二噁烷溶液(5ml)中，并在室温搅拌所得的混合物30分钟。用氯仿稀释反应溶液并用水洗涤。用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(3∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到41mg化合物19。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.03(1H，s)，6.99(1H，dd，10.8，16.1Hz)，6.14(1H，t，10.8 Hz)，6.05(1H，d，16.1 Hz)，5.94(1H，t，10.8 Hz)，5.50(1H，m)，5.10(1H，dd，5.9，10.8 Hz)，4.29(1H，d，16.1 Hz)，4.13(1H，br t，5.9 Hz)，3.94(1H，d，16.1 Hz)，2.60-2.54(4H，m)，2.13(1H，dd，6.9，15.2 Hz)，2.00(1H，m)，1.80-1.69(4H，m)，1.50(3H，d，6.3 Hz)，1.44-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.6 Hz)FAB-MS m/z：921，923[M+H]+
实施例20
化合物20：
按顺序将吡啶(5滴)和乙酸酐(3滴)滴加到化合物19的二氯甲烷溶液(1ml)中，并在室温搅拌所得的混合物16小时。减压蒸除溶剂并通过硅胶制备薄层色谱纯化所得的残留物(0.25mm×10cm×20cm，5∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到4.3mg化合物20。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.04(1H，s)，6.97(1H，dd，10.7，16.1Hz)，6.05(1H，t，10.7 Hz)，6.04(1H，d，16.1 Hz)，5.89(1H，t，10.7 Hz)，5.38(1H，m)，5.27(1H，brt，7.8 Hz)，5.09(1H，dd，7.8，10.7 Hz)，4.32(1H，d，16.4 Hz)，3.96(1H，d，16.4 Hz)，2.63-2.56(4H，m)，2.21(1H，dd，7.8，14.4 Hz)，2.02(1H，m)，1.976(3H，s)，1.81-1.71(4H，m)，1.53(3H，d，6.4 Hz)，1.47-1.23(48H，m)，0.88(6H，t，6.8 Hz).FAB-MS m/z：963，965[M+H]+
实施例21
化合物21：
按顺序将4-二甲氨基吡啶(300mg)和棕榈酰氯(1.0ml)加到化合物3(250mg)的二氯甲烷溶液(10ml)中，并在室温搅拌所得的混合物30分钟。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(3∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到130mg化合物21。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.04(1H，s)，6.97(1H，dd，11.0，16.8Hz)，6.04(1H，t，11.0 Hz)，6.00(1H，d，16.8 Hz)，5.89(1H，t，11.0 Hz)，5.38(1H，m)，5.28(1H，t，7.6 Hz)，5.10(1H，dd，7.6，11.0 Hz)，4.31(1H，d，16.1 Hz)，3.95(1H，d，16.1 Hz)，2.61-2.53(6H，m)，2.22(1H，dd，7.8，14.4 Hz)，2.01(1H，m)，1.81-1.71(6H，m)，1.53(3H，d，6.4 Hz)，1.43-1.26(72H，m)，0.88 6H，t，6.8 Hz)FAB-MS m/z：1160，1162 [M+H]+
实施例22
化合物22：
将偶氮二羧酸二乙酯(0.1ml)滴加到化合物11(250mg)，N-(6-羟基己基)邻苯二甲酰亚胺(244mg)和三苯膦(135mg)的四氢呋喃溶液(1.5ml)中，并在室温搅拌所得的混合物21小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(7.5∶1正已烷/乙酸乙酯)，得到49mg化合物22。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.83(2H，m)，7.71(2H，m)，7.08(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.30(1H，s)，6.27(1H，d，16.1 Hz)，6.18(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.48(1H，dd，3.2，10.5 Hz)，5.24(1H，m)，3.98(1H，d，16.1 Hz)，3.91(2H，m)，3.69(2H，m)，3.56(1H，d，16.1 Hz)，3.41(1H，m)，2.96(1H，m)，2.42(1H，m)，1.83-1.37(9H，m)，1.55(3H，d，6.5 Hz)，0.975(9H，s)，0.973(9H，s)，0.24(3H，5)，0.22(3H，s)，0.204(3H，s)，0.197(3H，s)FAB-MS m/z：837[M+H]+
实施例23
化合物23：
将四正丁基氟化铵(1M四氢呋喃溶液，0.05ml)滴加到化合物22(21.6mg)的四氢呋喃溶液(1ml)中，并在室温搅拌所得的混合物10分钟。将反应溶液倾入到饱和氯化铵水溶液中并用乙酸乙酯提取3次。用无水硫酸钠干燥提取物，减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1％甲醇/氯仿)，得到16mg化合物23。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.79-7.71(4H，m)，7.03(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.77(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.04(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.39(1H，dd，3.2，10.5 Hz)，5.26(1H，m)，3.93(2H，m)，3.84(1H，d，16.1 Hz)，3.73(1H，d，16.1 Hz)，3.62(2H，m)，3.23(1H，m)，2.91(1H，m)，2.39(1H，m)，1.80-1.33(9H，m)，1.47(3H，d，6.8 Hz)FAB-MS m/z：609 [M+H]+
实施例24
化合物24：
将O-(6-叠氮基己基)羟胺盐酸盐(575mg)加到根赤壳菌素(900mg)的吡啶(5ml)溶液中，并在室温搅拌所得的混合物78小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1％甲醇/氯仿)，得到319mg化合物24。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.23(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.72 (1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.58(1H，3.4，10.5 Hz)，5.30(1H，m)，4.19-4.08(2H，m)，3.9 1(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.34(1H，m)，3.01(1H，m)，2.42(1H， m)，1.77-1.65(2H，m)，1.62-1.56(9H，m)，1.52(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z：505[M+H]+
实施例25
化合物25：
将O-[5-(叔丁氧基羰基)戊基]羟胺盐酸盐(400mg)加到根赤壳菌素(364mg)的吡啶(3ml)溶液中，并在室温搅拌所得的混合物19小时，然后在60℃搅拌2小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1％甲醇/氯仿)，得到316mg化合物25。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.23(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.71(1H，dd，16.2 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.3，11.3 Hz)，5.58(1H，dd，3.4，10.3 Hz)，5.30(1H，m)，4.15-4.08(2H，m)，3.91(1H，d，16.0 Hz)，3.81(1H，d，16.0 Hz)，3.33(1H，m)，3.02(1H，m)，2.42(1H，m)，2.25-2.20(2H，m)，1.75-1.34(7H，m)，1.52(3H，d，6.5 Hz)，1.43(9H，s)FAB-MS m/z：550 [M+H]+
实施例26
化合物26：
将O-[5-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]氧基羰基]戊基]羟胺盐酸盐(915mg)加到根赤壳菌素(800mg)的吡啶溶液(2ml)中，并在室温搅拌所得的混合物22小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1％甲醇/氯仿)，得到295mg化合物26。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.23(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.71(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.7，11.2 Hz)，5.58(1H，dd，3.7，10.7 Hz)，5.30(1H，m)，4.19-4.13(4H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.34(1H，m)，3.01(1H，m)，2.41(1H，m)，2.33-2.29(2H，m)，1.77-1.30(7H，m)，1.52(3H，d，6.8 Hz)，1.00-0.95(2H，m)，0.03(9H，s)FAB-MS m/z：594[M+H]+
实施例27
化合物27：
将O-[6-(烯丙氧基羰基氨基)己基]羟胺盐酸盐(116mg)加到根赤壳菌素(140mg)的吡啶(3ml)溶液中，并在室温搅拌所得的混合物79小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(1％甲醇/氯仿)，得到156mg化合物27。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.23(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.71(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，t，11.2 Hz)，5.91(1H，m)，5.58(1H，dd，3.7，11.2 Hz)，5.30(1H，m)，5.27(1H，dd，1.7，17.3 Hz)，5.16(1H，brd，10.5 Hz)，4.50(2H，m)，4.18-4.06(2H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.35(1H，m)，3.12-3.07(2H，m)，3.01(1H，m)，2.41(1H，m)，1.76-1.30(9H，m)，1.52(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z：563[M+H]+
实施例28
化合物28：
将6-氨基氧基己酸盐酸盐(270mg)加到根赤壳菌素(430mg)的吡啶溶液(2ml)中，并在室温搅拌所得的混合物12小时，然后在60℃搅拌1小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(2％甲醇/氯仿)，得到213mg化合物28。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.23(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.71(1H，d，16.2 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.8，11.3 Hz)，5.58(1H，dd，3.6，10.8 Hz)，5.30(1H，m)，4.16-4.08(2H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.33(1H，m)，3.02(1H，m)，2.42(1H，m)，2.30(2H，m)，1.77-1.45(7H，m)，1.52(3H，d，6.5 Hz)FAB-MS m/z：494[M+H]+
实施例29
化合物29：
将氨基氧基乙酸半盐酸盐(1.0g)加到根赤壳菌素(1.5g)的吡啶溶液(5ml)中，并在室温搅拌所得的混合物20小时，然后在60℃搅拌1.5小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(2％甲醇/氯仿)，得到692mg化合物29。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.27(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.82(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.17(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.61(1H，dd，3.4，10.5 Hz)，5.31(1H，m)，4.64(2H，m)，3.91(1H，d，16.4 Hz)，3.82(1H，d，16.4 Hz)，3.34(1H，m)，3.02(1H，m)，2.42(1H，m)，1.60(1H，ddd，4.2，9.0，14.4 Hz)，1.53(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z：438[M+H]+
实施例30
化合物30：
按顺序将N-羟基琥珀酰亚胺(2.5g)和4-二甲基氨基吡啶(310mg)加到化合物29(5.2g)的四氢呋喃溶液(100ml)中，在室温搅拌混合物几分钟，然后向其中滴加二环己基碳化二亚胺(4.5g)的四氢呋喃溶液(30ml)。室温搅拌2小时后，通过过滤除去这样沉淀得到的脲衍生物，减压浓缩所得的滤液得到琥珀酰亚胺酯粗结晶。将所得的琥珀酰亚胺酯溶于100ml二氯甲烷中并按顺序与三乙胺(4.5ml)和二甲胺盐酸盐(2.0g)混合，然后于室温搅拌所得混合物。搅拌12小时后，减压除去反应溶剂，并将所得的残留物溶于乙酸乙酯(500ml)中，用1N盐酸水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥。通过硅胶柱色谱法纯化(100g；2％甲醇/氯仿)得到2g化合物30。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.27(1H，dd，11.3，16.1 Hz)，6.81(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.17(1H，dd，10.5，11.3 Hz)，5.61(1H，dd，3.5，10.5 Hz)，5.30(1H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.82(1H，d，16.1 Hz)，3.34(1H，m)，3.08(3H，s)，3.02(1H，dd，2.2，3.7，8.9 Hz)，2.95(3H，s)，2.42(1H，ddd ，3.6，3.7，14.5Hz)，1.60(1H，ddd，4.1，8.9，14.5 Hz)，1.52(3H，d，6.6Hz)FAB-MS m/z 465[M+H]+
实施例31
化合物31：
将根赤壳菌素(364mg)和O-(3-羟基丙基)羟胺盐酸盐(137mg)溶于3ml吡啶中并在室温搅拌64小时。减压蒸去溶剂然后通过硅胶柱色谱法纯化所得残留物(15g；1.5％甲醇/氯仿)，得到186mg化合物31。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.23(1H，dd，11.3，16.1 Hz)，6.72(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.6，11.3 Hz)，5.59(1H，dd，3.5，10.6 Hz)，5.30(1H，m)，4.22 (2H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.67(2H，m)，3.33(1H，m)，3.01(1H，m)，2.41(1H，m)，1.92(2H，m)，1.58(1H，m)，1.52(3H，d，6.5 Hz)FAB-MS m/z 438[M+H]+
实施例32
化合物32：
将三乙胺(0.2ml)和4-二甲氨基吡啶(78mg)加入化合物9(100mg)的二氯甲烷溶液(6ml)中，在冰浴冷却下向混合物中滴加入棕榈酰氯(0.2ml)的四氢呋喃溶液(2ml)。在0℃搅拌1小时，然后在室温搅拌2小时，接着减压蒸去溶剂。将所得的残留物溶于二乙醚中，用饱和氯化铵水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化铵水溶液洗涤并通过硅胶柱色谱法纯化(15g；20％乙酸乙酯/己烷)，得到156mg化合物32。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.09(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.98(1H，s)，6.73(1H，d，16.2 Hz)，6.09(1H，dd，10.7，11.3 Hz)，5.64(1H，dd，3.1，10.7 Hz)，5.34(1H，m)，4.02(1H，d，16.3 Hz)，3.96(3H，s)，3.73(1H，d，6.3 Hz)，3.43(1H，m)，2.97(1H，m)，2.57(2H，m)，2.46(2H，m)，2.41(1H，m)，1.77-1.59(4H，m)，1.56(3H，d，6.5 Hz)，1.46-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.8Hz)FAB-MS m/z 870[M+H]+
实施例33
化合物33：
将2滴浓盐酸(36％)加到化合物9(33mg)的二噁烷溶液(1.5ml)中，并在室温静置混合物30分钟。用乙酸乙酯(5ml)稀释反应溶液，用水洗涤两次，然后用无水硫酸钠干燥。通过硅胶制备薄层色谱进行纯化(0.5ml×10cm×20cm；氯仿-甲醇-乙酸，194∶5∶1)得到12mg化合物33。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：6.66(2H，m)，6.42(1H，s)，6.10(1H，m)，5.80(1H，t，10.3 Hz)，5.32(1H，m)，4.97(1H，dd，3.4，10.3 Hz)，4.59(1H，d，15.4 Hz)，3.89(3H，s)，3.84(1H，m)，3.67(1H，d，15.4 Hz)，2.09(1H，m)，1.94(1H，m)，1.45(3H，d，6.1 Hz)FAB-MS m/z 430[M+H]+
实施例34
化合物34：
用化合物9(22mg)，按实施例3的方法可以得到8mg化合物34。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：6.63(2H，m)，6.42(1H，s)，5.99(1H，m)，5.93(1H，t，10.3 Hz)，5.31(1H，m)，5.10(1H，dd，3.6，10.3 Hz)，4.65(1H，d，15.7 Hz)，3.68(1H，m)，3.67(1H，d，15.7 Hz)，2.03(1H，m)，1.97(1H，ddd，3.6，9.8，14.4 Hz)，1.44(3H，d，6.0 Hz)FAB-MS m/z 474，476[M+H]+
实施例35
化合物35：
在冰浴冷却下，将0.16ml草酰氯滴加到化合物9(362mg)的二甲基甲酰胺溶液(7ml)中，在冰浴冷却下搅拌30分钟，然后在室温搅拌15小时。用50ml乙酸乙酯稀释反应溶液，用水洗涤两次并用无水硫酸钠干燥。进行硅胶柱色谱法纯化(10g；2％甲醇/氯仿)后得到94mg化合物35。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：8.10(1H，s)，6.87(1H，d，16.0 Hz)，6.75(1H，dd，11.1，16.0 Hz)，6.49(1H，s)，6.19(1H，t，11.1Hz)，5.58(1H，t，11.1 Hz)，5.45(1H，m)，5.32(1H，m)，5.27(1H，dd，4.5，11.1 Hz) 3.91(3H，s)，3.85(1H，d，15.9 Hz)，3.75(1H，d，15.9 Hz)，2.03(1H，m)，1.95(1H，dd，4.8，14.4Hz)，1.51(3H，d，6.4 Hz)FAB-MS m/z 458[M+H]+
实施例36
化合物36：
用化合物30(410mg)，按实施例33的方法可以得到188mg化合物36。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：6.78(1H，d，16.0 Hz)，6.70(1H，dd，10.8，16.0 Hz)，6.42(1H，s)，6.10(1H，dd，10.8，11.4 Hz)5.82(1H，t，11.4 Hz)，5.33(1H，m)，4.98(1H，dd，3.1，11.4 Hz)，4.87-4.79(2H，m)，4.61(1H，d，15.1 Hz)，3.84(1H，m)，3.67(1H，d，15.1 Hz)，3.07(3H，s)，2.95(3H，s)，2.09(1H，m)，1.93(1H，m)，1.45 3H，d，6.0 Hz)FAB-MS m/z 501 [M+H]+
实施例37
片剂：
将化合物4(50g)，乳糖(40g)，玉米淀粉(68g)和羧甲基纤维素钾(10g)混合，并通过加入10％羟丙基纤维素溶液捏和所得混合物。将捏和溶液加到模压制粒机上制备颗粒，这些颗粒可随后与硬脂酸镁混合得到完全(whole)颗粒，用作制备片剂的颗粒。以适用的方式将其置于制片机上，可以得到每片含有50mg化合物4的片剂(170mg)。
实施例38
胶囊：
加入10％羟丙基纤维素溶液捏和由30g化合物4，80g乳糖和58g土豆淀粉组成的混合物。将捏和溶液加到模压制粒机上制备颗粒，这些颗粒可随后与硬脂酸镁混合并采用胶囊包装机封装在硬胶囊中，得到每个含有30mg化合物4的胶囊(170mg)。
实施例39
软胶囊：
将化合物4(10g)溶于100g大豆油中，并以适用的方式将所得的溶液注射到胶囊中，以制备每个含有10mg化合物4的胶囊(110mg)。
参考实施例1
14，16-二棕榈酰基根赤壳菌素(化合物a)：
将根赤壳菌素(5g)、吡啶(3.3ml)和4-二甲氨基吡啶(1.2g)的甲苯溶液(150ml)冷却到0℃，向溶液中缓慢滴加入棕榈酰氯(12.5ml)，在0℃搅拌所得的混合物30分钟。用氯仿(400ml)稀释反应溶液并用稀盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥，然后通过硅胶柱色谱纯化(4∶1正己烷/乙酸乙酯)得到12g化合物a。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：7.52(1H，dd，10.3，16.1 Hz)，7.02(1H，s)，6.15(1H，t，10.3 Hz)，6.06(1H，d，16.1 Hz)，5.79(1H，dd，3.9，10.3 Hz)，5.40(1H，m)，4.03(1H，d，16.4 Hz)，3.92(1H，d，16.4 Hz)，3.52(1H，m)，3.02(1H，ddd，2.2，2.2，7.8 Hz)，2.58(2H，t，7.6 Hz)，2.49(2H，ddd，1.7，7.3，7.3 Hz)，2.40(1H，3.4，3.4，14.7 Hz)，1.78-1.60(5H，m)，1.54(3H，d，6.6Hz)，1.49-1.23(48H，m)，0.88(6H，t，6.8 Hz).FAB-MS m/z：841[M+H]+
工业实用性
本发明根赤壳菌素衍生物可在药剂中使用，该药剂具有抗肿瘤、抗菌或免疫抑制作用。