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1、10申请公布号CN102333883A43申请公布日20120125CN102333883ACN102333883A21申请号200980152145022申请日2009102361/19726020081023USC12P19/34200601A01N59/12200601G01N33/4820060171申请人安全生活/特莱奥辛公司地址美国佛蒙特州72发明人皮埃尔J梅西尔马克托德杰曼74专利代理机构中国专利代理香港有限公司72001代理人李波刘健54发明名称快速、安全地进行PCR扩增的技术57摘要本发明涉及从生物样品中快速、安全的鉴定病原体的方法。可以使用碘化树脂破坏病原体，同时将病原体D。
2、NA保留在可分析的状态。DNA随后可以用作PCR分析的底物。这些碘化树脂的使用以比现有技术方法明显加快的方式工作，并允许科学家在生物安全3级BSL3条件下工作的时间最少。30优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2011062286PCT申请的申请数据PCT/US2009/0057822009102387PCT申请的公布数据WO2010/047827EN2010042951INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书10页CN102333898A1/1页21一种分析生物样品的方法，其包括以下步骤A提供含有病原体的液体样品，B将所述液体样品与碘化树脂接触，C将所。
3、述碘化树脂从所述液体中分离出来，和D通过分析技术来确定病原体的身份。2如权利要求1所述的方法，其中所述碘化树脂是珠子或者片段。3如权利要求1所述的方法，其中样品的接触用旋涡振荡设备来增强。4如权利要求3所述的方法，其中所述液体部分的分离使用离心来进行。5如权利要求所述的方法，其中所述分析技术是PCR。6一种分析生物样品的方法，其包括以下步骤A提供含有病原体的液体样品，B将所述液体样品与碘化树脂相接触，C离心包含所述碘化树脂的所述液体样品，D将所述液体样品的一部分移去，E将所述液体样品的该部分加入对病原体特异性的PCR溶液，和F对PCR方法的结果进行定量。7如权利要求7所述的方法，其中所述病原体。
4、是细菌或者病毒。8如权利要求7所述的方法，其中样品的接触用旋涡振荡设备来起始。9一种实施如权利要求1所述方法的检测试剂盒，其包含扩增核酸的组分。10一种分析生物样品中病原体的试剂盒，其包括样品支持物中的碘化树脂，所述支持物包含至少能够加入所述生物样品的足够空间。11如权利要求10所述的试剂盒，其进一步包括扩增核酸的组分。12一种前PCR诊断试剂盒，其包含碘化树脂，所述试剂盒允许去除加热和/或冷却和/或超声步骤和设备。13一种生物分子DNA/RNA的鉴定试剂盒，其包含碘化树脂，在无加热和/或冷却和/或超声设备的情况下允许PCR设备行使其功能。权利要求书CN102333883ACN10233389。
5、8A1/10页3快速、安全地进行PCR扩增的技术发明领域0001本发明涉及提取DNA以用于PCR扩增反应和其他分子生物学方法的新的广谱的快速制备方法。0002发明背景0003聚合酶链式反应PCR提供了一种在需要或不需要提前培养生物体的情况下，增加目的序列拷贝数扩增信号的方法，因而，该方法允许增加检测在来自混合群体的具有DNA的样品中以少量存在的DNA序列的灵敏度OU，CY等人，SCIENCE239292295；SAIKI，RK等人SCIENCE239487494；SAIKI，RK等人SCIENCE23013501354；SCHARF，SJ等人SCIENCE23310761078。该方法包括使D。
6、NA解链，并使短寡聚体引物退火至在目的序列侧面的区域。在游离的脱氧核苷酸存在的情况下，向混合物中加入DNA聚合酶，并使DNA从引物延伸穿过目的区域。新的双链体又一次被解链，并重复这一过程。这导致特定靶的指数累积，约为2N，其中N是解链和引物延伸的循环数。基因组单拷贝序列能够以高特异性扩增大于1000万倍。该方法通过使用从水生栖热菌THERMUSAQUATICUSTAQ中分离出来的热稳定聚合酶而得到改进，其避免了在每次解链循环后添加新的聚合酶的需要，并且已显示出具有高特异性。0004在微生物学领域和医学实践领域必需的一个方面是在属、种或血清型水平上确定地鉴定出微生物的能力。正确的鉴定不仅在实验室。
7、中是一个必要的手段，而且它也在食品加工过程、农产品的生产过程中和监测环境介质如地下水时对控制微生物的污染发挥显著作用。应用于微生物污染的规定的严格性增加已导致必需专用于污染监控的工业资源相应地增加。0005由于具有鉴定微生物和检测病毒DNA的能力，PCR在检测和诊断疾病中的作用越来越重要。例如，WEIBURG等EP517361公开了一种包括PCR扩增大肠杆菌ECOLI的DNA用于检测和鉴定病原微生物的方法。细菌和病毒DNA的检测在许多疾病的治疗中都有很大的帮助。因此，在现在的医学领域，对于医生或其他医学人员重要的是快速、准确地检测与患者有关的生物液体或其他液体中的病原微生物。0006在进行PC。
8、R之前，首先必需对样品中的DNA或RNA进行纯化。纯化DNA需要进行提取步骤，其一般涉及破坏待分析样品的细胞膜，使细胞内的蛋白变性以及将DNA从变性的蛋白质和其他细胞组分中分离出来。对于临床医生和法医科学家可用的DNA提取技术既耗时，又费力，通常需要进行多个步骤并且使用危险试剂。传统的DNA提取技术包括密度梯度离心，有机溶剂沉淀和/或盐沉淀。除了上述问题，这些技术还会增加样品之间交叉污染的风险。0007与DNA提取和纯化相关的问题已引起了设计为提高效率和安全性的新方法。固相提取方法，如美国专利5234809和美国专利7238530所公开的那些方法，已经被用于纯化包括DNA和RNA在内的核酸分子。
9、。该方法包括裂解细胞，将释放的DNA结合到固相支持物上，洗去杂质以及提取纯化的DNA。优选的裂解剂是离液剂硫氰酸胍和盐酸胍。固相支持物优选硅颗粒。尽管该方法旨在简化样品的处理过程，但其仍然是微生物特异性的并且仍然需说明书CN102333883ACN102333898A2/10页4要多个实验步骤。此外，DNA的提取方法需要使用高浓度的有毒试剂。0008也设计了液相方法用于简化DNA的提取方法。一种此类方法需要使用螯合树脂CHELEX100，一种含有成对的亚氨基二乙酸盐的苯乙烯二乙烯基苯共聚物。这种树脂能够清除金属污染物如镁，而这些金属污染物催化核酸的降解。此外，CHELEX100能够破坏细胞膜并。
10、使DNA变性。在实践中，将样品溶于蛋白酶K存在下的水中并于55孵育溶液约1个小时。接着将混合物加热至100的温度另外进行15分钟。然后将混合物漩涡振荡并且离心。变性后的蛋白和金属离子沉淀到管底部。来自上清液的等分物ALIQUOT可用于进行PCR。需要注意的是这种方法需要多个操作过程，复杂的人为干预，并且要加热到100，这些增加了处理时间和处理过程的危险，尤其是当使用危险的致病性材料操作时。另外，并不是所有类型的样品都适用于该方法操作。0009还需要注意的是，市场上的大多数试剂盒所提供的是制备非致病性样品的有限的装置MEANS，这迫使分析者在具有生物危险的条件下进行PCR实验。这带来了重大的安全。
11、问题，而这些问题在本领域中并没有得到充分的解决。这样，研究者可能需要在生物安全3级或4级BSL3或BSL4的实验室来进行实验，这进一步增加了处理时间。0010因此，需要发展简化的、更加快捷和低危险性的方法来分析生物样品。尤其是需要发展更快、更安全和更经济的方法来分析致病性样品。方法必须能够快速、高效地使病原体失活，同时保持待扩增和分析的核酸如DNA的完整性。此外，简化的方法允许在偏远的小型诊所和医务中心使用并不昂贵的PCR设备，这将有助于医务工作者获得快速、确定的诊断结果，以便于治疗他们的患者。0011发明概述0012本发明提供了非常快速、简便的一步裂解液体样品如血液、唾液、尿液或其他中细胞的。
12、方法，该方法的目的在于从样品中发现的病原体中提取核酸如DNA或者RNA，同时为实验室工作者提供了不需要使用复杂设备如加热设备或超声设备就能进行处理的无生物危险的样品。所述DNA能作为PCR或者其他微生物方法的底物，这引起病原体的快速扩增和鉴定，同时破坏可能的INQUESTION病原体的活性。0013在本发明的一个方面中，使用碘化树脂作为活性剂来裂解含有病原体如病毒或细菌的液体样品中的细胞，并且破坏病原体的致病能力。接着用PCR方法对来自裂解细胞的核酸进行扩增和鉴定。碘化树脂不会对DNA的完整性产生负面影响，因此，PCR的性能和灵敏度都是最优化的。0014本发明的一个方面是分析生物样品的方法，其。
13、包括以下步骤提供含有病原体的液体样品，将该液体样品与碘化树脂相接触，将碘化树脂从液体中分离出来和通过分析技术确定病原体身份IDENTITY。0015本发明的另一个方面是分析生物样品的诊断试剂盒，其包括以下步骤提供含有病原体的液体样品，将该液体样品与碘化树脂相接触，将碘化树脂从液体中分离出来和通过分析技术确定病原体身份。0016本发明的另一个方面是包含碘化树脂的前PCR诊断试剂盒，所述试剂盒允许省去加热和/或冷却和/或超声步骤和设备。0017发明详述0018本发明提供了分离病原样品的DNA的快速、安全的方法，所述DNA用于PCR或者其说明书CN102333883ACN102333898A3/10。
14、页5他的微生物方法。该方法包括使用需求的DEMAND消毒剂碘化树脂作为活性剂来裂解细菌的细胞膜或病毒的保护性外壳，由此从病原体中将核酸物质移出。碘化树脂破坏病原体的毒性效应，同时保持所述病原体的DNA。令人惊奇的，已发现新的技术显著地减少了实验步骤的数目、时间和用PCR分析生物样品所需要的劳动力，同时破坏可能的微生物的致病性。0019碘化树脂已被建议用作需求的消毒剂，命名为消毒剂，其中碘基于按需作用DEMANDACTION被几乎完全释放。碘化树脂“TRIOSYN”树脂，如美国专利5639453452专利所公开的那种，可用于增强裂解作用和破坏微生物的致病性而不对PCR过程产生负面影响。452专利。
15、的内容被全部引入本文作为参考。TRIOSYN样品珠子，片段，粉末全部都包含三碘化物分子，其是用于破坏诸如病毒、细菌和真菌等的微生物细胞膜的抗微生物组合物。除了存在的三碘化物，由于具有不规则的形状和锋利的边缘，片段和粉末具有另一种抗微生物活性，这使得TRIOSYN片段或颗粒能机械地插进细菌的细胞膜或者病毒的保护性衣壳。0020用于本发明的三种这类TRIOSYN树脂粉末是指TRIOSYNT50粉末、TRIOSYNT45粉末、TRIOSYNT40粉末。这些数字代表碘相对于树脂的大致重量百分比。具有其他的碘重量百分比的粉末也可以用于本发明。碘化树脂粉末中碘的不同百分比赋予粉末不同的性质，尤其是在裂解和。
16、杀生物活性的不同水平。用于方法的具体树脂是基于所需要的应用。在被处理用于PCR的样品中的TRIOSYN树脂珠子的用量为每500L细菌悬浮液约00025G到约05G的范围。0021在本发明的一个方面，提供了快速、安全的从包含病原体的液体样品中纯化DNA或RNA的方法。所述样品可以是例如血液、唾液或者尿液。将含有病原体的样品加入到无菌的微量离心管中。接着再加入TRIOSYN珠子或片段，旋涡振荡样品。旋涡时间在15分钟之间，取决于样品和碘化树脂活性剂的性质。然后将样品离心，使碘化树脂转移到管底部。离心可进行约110分钟，优选约5分钟。离心之后，大部分DNA和RNA在上清液里而不是管底部。同样地，通常。
17、使DNA降解的杂质转移到管底部。这些杂质可能包括被碘化树脂变性的蛋白质和与碘化树脂进行交换的金属离子。因此，上清液中的DNA或RNA包含有活性的VIABLE且可作为底物用于包括PCR的进一步应用的DNA或者RNA。碘化树脂不会破坏样品的DNA或RNA。0022在可选的实施方案中，在旋涡振荡之前，可以向包含碘化树脂的样品中加入蛋白酶K。蛋白酶K将辅助碘化树脂将样品中的蛋白变性。0023当用碘化树脂使样品无害之后，可以不需要进一步的制备和处理，用PCR分析安全地来检测样品，以便于确定样品中包含何种病毒或细菌。PCR扩增是本领域中的标准方法。例如，PCR扩增步骤以在美国专利5234809，59289。
18、06和7238530中描述，其在此全部引入作为参考。重要的是，碘化树脂不会对PCR过程和酶具有负面影响。因此，使用本发明中的方法，医务人员能够快速、安全地确定存在于特定生物样品中病毒或细菌的特性。此外，由于该方法的简便和低成本，该方法使得小型的医疗中心和偏远的地区都可以安置PCR设备，并使得医务人员能够快速地获得诊断结果。然而，现有的技术并不能实现这一点，因为其需要特殊和复杂的诊断试剂盒，这些试剂盒要求使用昂贵的加热或超声设备来能够实施该检测。说明书CN102333883ACN102333898A4/10页60024示例微生物0025以下是可使用本发明的方法检测的微生物的非限制性列表。0026。
19、有尾噬菌体目CAUDOVIRALES0027肌尾噬菌体科MYOVIRIDAE包括肠杆菌噬菌体T40028短尾噬菌体科PODOVIRIDAE0029长尾噬菌体科SIPHOVIRIDAE包括肠杆菌噬菌体0030疱疹病毒目HERPESVIRIDAE0031水生动物疱疹病毒科ALLOHERPESVIRIDAE0032疱疹病毒科HERPESVIRIDAE包括人疱疹病毒、水痘带状疹子病毒0033MALACOHERPESVIRIDAE0034未指定的科0035囊泡病毒科ASCOVIRIDAE0036腺病毒科ADENOVIRIDAE0037非洲猪瘟病毒科ASFARVIRIDAE包括非洲猪瘟病毒0038杆状病毒。
20、科BACULOVIRIDAE0039COCCOLITHOVIRIDAE0040覆盖噬菌体科CORTICOVIRIDAE0041微小纺锤形噬菌体科FUSELLOVIRIDAE0042滴状病毒科GUTTAVIRIDAE0043虹彩病毒科IRIDOVIRIDAE0044脂毛噬菌体科LIPOTHRIXVIRIDAE0045线形病毒科NIMAVIRIDAE0046乳头瘤病毒科PAPILLOMAVIRIDAE0047藻类DNA病毒科PHYCODNAVIRIDAE0048芽生噬菌体科PLASMAVIRIDAE0049多瘤病毒科POLYOMAVIRIDAE包括猴病毒40、JC病毒0050痘病毒科POXVIRI。
21、DAE包括牛痘病毒，天花0051古噬菌体科RUDIVIRIDAE0052复层噬菌体科TECTIVIRIDAE0053未指定的属0054MIMIVIRUS0055未指定的噬菌体科0056丝状噬菌体科INOVIRIDAE0057微小噬菌体科MICROVIRIDAE0058未指定的科0059联体病毒科GEMINIVIRIDAE0060圆环病毒科CIRCOVIRIDAE0061纳米病毒科NANOVIRIDAE0062细小病毒科PARVOVIRIDAE包括细小病毒B19说明书CN102333883ACN102333898A5/10页70063未指定的属0064指环病毒属ANELLOVIRUS0065塔状。
22、突起的0066水生呼肠孤病毒属AQUAREOVIRUS模式种A型水生呼肠孤病毒0067质型多角体病毒属CYPOVIRUS模式种1型质型多角体病毒CPV10068斐济病毒属FIJIVIRUS模式种FIJI病病毒0069虫源呼肠孤病毒属IDNOREOVIRUS模式种1型虫源呼肠孤病毒0070真菌呼肠孤病毒属MYCOREOVIRUS模式种1型真菌呼肠孤病毒0071正呼肠孤病毒属ORTHOREOVIRUS模式种哺乳动物正呼肠孤病毒0072水稻病毒属ORYZAVIRUS模式种水稻齿矮病病毒0073非塔状突起的0074科罗拉多蜱传染症病毒属COLTIVIRUS模式种科罗拉多壁虱热病毒CTFV0075环状病。
23、毒属ORBIBIRUS模式种蓝舌病毒0076植物呼肠孤病毒属PHYTOREOVIRUS模式种矮稻小病毒0077轮状病毒属ROTAVIRUS模式种A型轮状病毒痢疾的常见病因0078东南亚十二节段RNA病毒属SEADORNAVIRUS0079套式病毒目NIDOVIRALES0080动脉炎病毒科ARTERIVIRIDAE0081冠状病毒科CORONAVIRIDAE包括冠状病毒，SARS0082杆套病毒科RONIVIRIDAE0083未指定0084星状病毒科ASTROVIRIDAE0085双RNA病毒科BARNAVIRIDAE0086雀麦花叶病毒科BROMOVIRIDAE0087杯状病毒科CALICI。
24、VIRIDAE包括诺瓦克病毒0088长线形病毒科CLOSTEROVIREDAE0089豇豆花叶病毒科COMOVIREDAE0090二順反子病毒科DICISTROVIRIDAE0091黄病毒科FLAVIVIRIDAE包括黄热病毒、西尼罗河病毒、丙肝病毒、登革热病毒0092弯曲病毒科FLEXIVIRIDAE0093光滑病毒科LEVIVIRIDAE0094黄症病毒科LUTEOVIRIDAE包括大麦黄色侏儒病毒0095海洋RNA病毒科MARNAVIRIDAE0096裸露RNA病毒科NARNAVIRIDAE0097野田病毒科NODAVIRIDAE0098小核醣核酸病毒科PICORNAVIRIDAE包括脊。
25、髓灰质炎病毒，普通感冒病毒，甲型肝炎病毒0099马铃薯Y病毒科POTYVIRIDAE说明书CN102333883ACN102333898A6/10页80100随伴病毒科SEQUIVIRIDAE0101四病毒科TETRAVIRIDAE0102披膜病毒科TOGAVIRIDAE包括风疹病毒、罗斯河病毒、辛德毕斯病毒、基孔肯亚热病毒0103番茄丛矮病毒科TOMBUSVIRIDAE0104芜菁发黄镶嵌病毒科TYMOVIRIDAE0105未指定的属0106甜菜坏死黄脉病毒属BENYVIRUS0107樱桃锉叶病毒属CHERAVIRUS0108真菌传杆状病毒属FUROVIRUS0109E型肝炎病毒属HEPEV。
26、IRUS包括戊型肝炎病毒0110大麦病毒属HORDEIVIRUS0111悬钩子病毒属IDAEOVIRUS0112欧尔密病毒属OURMIAVIRUS0113花生丛簇病毒属PECLUVIRUS0114马铃薯病毒属POMOVIRUS0115温州蜜柑萎缩病毒属SADWAVIRUS0116南方菜豆花叶病毒属SOBEMOVIRUS0117烟草花叶病毒属TOBAMOVIRUS包括烟草花叶病毒0118烟草脆裂病毒属TOBRAVIRUS0119伞形植物病毒属UMBRAVIRUS0120单股反链病毒目MONONEGAVIRALES0121玻那病毒科BORNAVIRIDAE博纳病病毒0122丝状病毒科FILOVIR。
27、IDAE包括埃博拉病毒，马尔堡病毒0123副黏液病毒科PARAMYXOVIRIDAE包括麻疹病毒，腮腺炎病毒，尼帕病毒，亨德拉病毒0124弹状病毒科RHABDOVIRIDAE包括狂犬病病毒0125未指定的0126沙粒病毒科ARENAVIRIDAE包括拉沙病毒0127布尼亚病毒科BUNYAVIRIDAE包括汉滩病病毒0128正粘病毒科ORTHOMYXOVIRIDAE包括流感病毒0129未指定的属0130病毒属DELTAVIRUS0131蛇状病毒属OPHIOVIRUS0132纤细病毒属TENUIVIRUS0133巨脉病毒属VARICOSAVIRUS0134转座病毒科METAVIRIDAE0135假。
28、病毒科PSEUDOVIRIDAE0136逆转录病毒科RETROVIRIDAE逆转录病毒，如HIV说明书CN102333883ACN102333898A7/10页90137嗜肝DNA病毒科HEPADNAVIRIDAE如乙型肝炎病毒0138花椰菜花叶病毒科CAULIMOVIRIDAE如花椰菜花叶病毒0139下述门的细菌0140酸杆菌门ACIDOBACTERIA0141放线菌门ACTINOBACTERIA0142产水菌门AQUIFICAE0143拟杆菌门BACTEROIDETES/疣微菌门VERRUCOMICROBIA0144绿弯菌门CHLOROFLEXI0145产金菌门CHRYSIOGENETES。
29、0146蓝藻门CYANOBACTERIA0147脱铁杆菌门DEFERRIBACTERES0148异常球菌栖热菌门DEINOCOCCUSTHERMUS0149网团菌门DICTYOGLOMI0150纤维杆菌门FIBROBACTERES0151厚壁菌门FIRMICUTES0152梭杆菌门FUSOBACTERIA0153芽单胞菌门GEMMATIMONADETES0154硝化螺旋菌门NITROSPIRAE0155浮霉菌门PLANCTOMYCETES0156变形菌门PROTEOBACTERIA0157螺旋体门SPIROCHAETES0158联合菌门SYNERGISTETES0159软壁菌门TENERICU。
30、TES0160热脱硫杆菌门THERMODESULFOBACTERIA0161热袍菌门THERMOTOGAE实施例0162下述部分描述本发明的示例性实施方式。对于本领域技术人员显而易见的是本文提供的所描述的本发明的实施方式只为说明性的且不是限制性的，仅通过举例的方式提供。除另有明确说明，该说明书中公开的所有特征可被具有相同或者类似目的的可替换的特征所替换。因此，其修饰的多种其他实施方式被认为落入如本文所定义的本发明的范围及其等价物中。0163碘化树脂对病原体的活性实验数据0164以下实施例显示需求的消毒剂碘化树脂除去微生物病原性的能力。0165一般步骤01661将指示量的TRIOSYN加入到事先。
31、标记的管中。01672加入10ML万古霉素抗性的肠球菌ENTEROCOCCI“VRE”悬浮液或甲氧西林抗性的金黄色葡萄球菌MRSA、疱疹病毒、肝炎病毒、沙眼衣原体。01683漩涡振荡设置5指示的接触时间。说明书CN102333883ACN102333898A8/10页1001694溶解于PBS中并立即涂板不要中和。0170实施例10171将TRIOSYNT40珠子0025G加入到事先标记的管中，向管中加入10ML的VRE悬浮液一个菌落用300500L稀释，接着漩涡振荡样品。样品于0、2、5、10、15和30分钟的时间点对活性VRE的存在进行分析。发现在2分钟和5分钟的时间点，活性VRE减少，到。
32、10分钟的时间点，管中基本上没有活性VRE。在15分钟和30分钟的时间点，没有活性VRE的存在。该实验过程中设置对照，该对照为在没有TRIOSYNT40珠子存在下漩涡振荡VRE悬浮液，其结果是活性VRE的量没有减少。0172实施例20173将TRIOSYNT40珠子0025G加入到事先标记的管中，向管中加入10ML的VRE悬浮液一个菌落用300500L稀释，接着漩涡振荡样品。样品于0、2、5、10、15和30分钟的时间点对活性VRE的存在进行分析。发现在0分钟的时间点，活性VRE减少，到2分钟的时间点，管中基本上没有活性VRE。在5、10、15和30分钟的时间点，没有活性VRE的存在。该实验过。
33、程中设置对照，该对照为在没有TRIOSYNT50珠子存在下漩涡振荡VRE悬浮液，其结果是活性VRE的量没有减少。0174实施例30175将TRIOSYNT40珠子0025G加入到事先标记的管中，向管中加入10ML的VRE悬浮液一个菌落用300500L稀释，接着漩涡振荡样品。样品于0、2、5、10、15和30分钟的时间点对活性VRE的存在进行分析。发现在0和2分钟的时间点，活性VRE减少，到5分钟的时间点，管中基本上没有活性VRE。在10、15和30分钟的时间点，没有活性VRE的存在。该实验过程中设置对照，该对照为在没有TRIOSYNT45珠子存在下漩涡振荡VRE悬浮液，其结果是活性VRE的量没。
34、有减少。0176实施例40177将TRIOSYNT40珠子0025G加入到事先标记的管中，向管中加入10ML的VRE悬浮液一个菌落用300500L稀释，接着漩涡振荡样品。样品于0、2、5、10、15和30分钟的时间点对活性VRE的存在进行分析。发现在0分钟的时间点，管中基本上没有活性VRE，片段不需要涡旋振荡。在2、5、10、15和30分钟的时间点，没有活性VRE的存在。该实验过程中设置对照，该对照为在没有TRIOSYNT50珠子存在下漩涡振荡VRE悬浮液，其结果是活性VRE的量没有减少。0178实施例50179将PUROLITEA605碘化树脂珠子0025G加入到事先标记的管中，向管中加入1。
35、0ML的VRE悬浮液一个菌落用300500L稀释，接着漩涡振荡样品。样品于0、2、5、10、15和30分钟的时间点对活性VRE的存在进行分析。发现在0分钟的时间点，管中基本上没有活性VRE，片段不需要涡旋振荡。在2、5、10、15和30分钟的时间点，没有活性VRE的存在。该实验过程中设置对照，该对照为在没有PUROLITEA605珠子存在下漩涡振荡VRE悬浮液，其结果是活性VRE的量没有减少。0180实施例6对照实施例0181将TRIOSYN402CL树脂珠子0025G加入到事先标记的管中，向管中加入10ML的VRE悬浮液一个菌落用300500L稀释，接着漩涡振荡样品。样品于0、2、5、10、。
36、15和说明书CN102333883ACN102333898A9/10页1130分钟的时间点对活性VRE的存在进行分析。申发现在任何一个时间点TRIOSYN402CL珠子都没有清除活性VRE。0182实施例15中的结果表明碘化树脂能够完全破坏病原体的感染宿主的能力。不含碘的对照树脂珠子实施例6不能使微生物失活。基于这些发现，我们检测了含有碘化树脂的样品是否可以用作DNA扩增的底物。0183进行PCR实验的实验步骤0184以下结果显示本发明的方法可用于有效地对病原体的DNA进行PCR。如上文所讨论的，由于病原体的活力VIRILITY被有效地破坏，因此该方法使得研究者们能够在没有污染，或者不需要在严。
37、格的生物风险条件下工作来实施PCR实验。0185实施例70186FORTUITIMMACFARLAND30187在无菌的微型离心管中，加入500L以1500的分枝杆菌FORTUITIMMACFARLAND3悬浮液的稀释液。0188加入4剂量约0025GT50TRIOSYN碘化树脂珠子。0189以最高速漩涡振荡2分钟。0190离心5分钟，在分歧杆菌特异性的PCR反应混合物中检测5L上清液。0191对PCR的结果进行定量显示了用该步骤制备的DNA具有高质量，可以成功地被扩增和分析。因此，碘化树脂没有对DNA带来不利的影响。0192我们怀疑PCR扩增的高质量部分涉及PCR溶液中不存在存活的微生物，这。
38、些微生物会对PCR过程带来负面的影响。我们通过将LOEWENSTEINJENSEN管与悬浮液一起孵育，在72小时后检验是否存在细菌生长，来检测TRIOSYNT50珠子的微生物效力。用碘化树脂珠子制备的样品在72小时后并没有显示出有细菌生长。没有碘化树脂珠子的对照样品在72小时后显示出显著的细菌生长菌落数200。0193实施例80194万古霉素抗性的肠球菌VRE0195与分枝杆菌使用同样的方法4剂量T50TRIOSYN碘化树脂珠子，漩涡振荡2分钟，用上清液进行PCR。0196该实验的结果显示很好的PCR数据。0197实施例90198衣原体0199尿液样品，初始离心浓缩液加入200L水4剂量T50。
39、TRIOSYN碘化树脂珠子；漩涡振荡2分钟，用PCR分析上清液。0200该实验的结果显示了很好的PCR数据。0201实施例100202疱疹病毒HSV0203从运输液中回收样品。0204加入4剂量T50TRIOSYN碘化树脂珠子，漩涡振荡2分钟，用上清液进行PCR。0205该实验的结果显示了很好的PCR数据。0206实施例710中所示的结果表明碘化树脂能够完全破坏病原体的感染宿主的能说明书CN102333883ACN102333898A10/10页12力。此外，该方法允许使用者能够对样品进行高质量的PCR扩增，而不受病原体可能的感染。使用AMBERLITE树脂非碘化树脂的对照实验不能允许任何PCR扩增。因此，碘化树脂没有破坏微生物DNA的完整性。此外，实验可以在不使用消毒剂、化学添加剂、过滤冷却、超声和加热的情况下进行，因此大大加速了进程。PCR步骤的进行时间相应地也显著减少。说明书CN102333883A。