一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法.pdf

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1、10申请公布号CN102356913A43申请公布日20120222CN102356913ACN102356913A21申请号201110253396722申请日20110831A23L2/39200601A23L1/21220060171申请人哈尔滨北极人商贸有限公司地址150010黑龙江省哈尔滨市道里区新阳路5082号4单元1层1号72发明人赵德生54发明名称一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法57摘要本发明提供了一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法。以鼠李糖乳杆菌，副干酪乳杆菌副干酪亚种，嗜酸乳杆菌，酿酒酵母，产朊假丝酵母五株益生菌为出发菌株，经扩大培养、粉末冻干菌种制备、复合益生菌发酵剂冻。

2、干粉的复配，获得复合益生菌发酵剂冻干粉。将浓缩蓝莓果浆按其重量的5添加白砂糖后，经臭氧杀菌，按加糖浓缩果浆固形物重量的0025接种复合益生菌发酵剂冻干粉，30静止保温发酵48小时，冷冻干燥后获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书6页CN102356921A1/2页21一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法，其特征是按下述方法制备1益生菌的选择及培养基的制备A菌鼠李糖乳杆菌CICC6162LACTOBACILLUSRHAMNOSUS，培养基为蛋白胨2G，酵母提取物1G，大豆蛋白胨1G，蛋白质酶解物NO3DIFCO1G，5柠檬酸铁2。

3、ML，人工海水700ML，蒸馏水300ML，PH75，经121灭菌20分钟冷却至30备用。B菌副干酪乳杆菌副干酪亚种CICC22812LACTOBACILLUSPARACASEISUBSPPARACASEI，培养基为酪蛋白胨100G，牛肉膏100G，酵母粉50G，葡萄糖50G，乙酸钠50G，柠檬酸二胺20G，TWEEN8010G，K2HPO420G，MGSO47H2O02G，MNSO4H2O005G，CACO3200G，蒸馏水10L，PH68，经121灭菌20分钟冷却至30备用。C菌嗜酸乳杆菌CICC6093LACTOBACILLUSACIDOPHILUS培养基为酪蛋白胨10G/L，肉汤提取物。

4、10G/L，酵母提取物5G/L，葡萄糖20G/L，吐温801G/L，K2HPO42G/L，醋酸钠5G/L，柠檬酸二铵2G/L，MGSO47H2O02G/L，MNSO4H2O005G/L，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。D菌酿酒酵母CICC31447SACCHAROMYCESCEREVISIAE培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。E菌产朊假丝酵母CICC31126CANDIDAUTILIS培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。2原菌种活化分别量取09的生理盐水10ML于5只试管内，经121灭菌20分钟冷却至30，。

5、将5株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入09的生理盐水中，震荡使其溶解，在30恒温箱中静止活化30分钟，备用。3母发酵剂的制备分别量取5株益生菌培养基各200ML于5只500ML三角瓶内，121灭菌20分钟冷却至30，按培养基体积的10接种21步骤中已经活化的菌种，在30厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。4生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10的脱脂奶乳浊液，分装于5只500ML三角瓶内，每瓶200ML，121灭菌20分钟冷却至30，分别按2体积比例接种母发酵剂，30厌氧培养3640小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数109个/ML，视同为发酵成熟，如果活菌数。

6、109个/ML，继续培养，直至达到109个/ML。5粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1CM，加盖瓶塞后放入30冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。6复合益生菌发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末23份，B菌粉末24份，C菌粉末12份，D菌粉末23份，E菌粉末23份，充分混匀后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固形物重量的0025。7浓缩果浆的制备权利要求书CN102356913ACN102356921A2/2页3将100公斤蓝莓原果浆低温。

7、减压浓缩至4045公斤，按浓缩果浆重量的5添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。8杀菌浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0203MG/L时，停止臭氧通入，密闭无菌保存20分钟。9升温将经8步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30。10复合益生菌发酵按该浆料固形物重量的0025添加6步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉，充分搅拌混匀后，30静止保温发酵48小时。11冷冻干燥将10步骤发酵处理后的物料，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。权利要求书CN102356913ACN102356921A1/6页4一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法一技术领域0001本发明涉及一种益生菌。

8、发酵蓝莓果浆粉的制备方法，具体涉及一种采用复合益生菌发酵蓝莓浓缩果浆后，经冷冻干燥而制得的蓝莓果浆粉，属生物工程领域。二背景技术0002蓝莓为杜鹃花科越橘属植物中蓝果类型商品名统称，是具有很高经济价值和广阔开发前景的小浆果，其蓝色的果实不仅极具吸引力，而且肉质细腻、甜酸适度、香气清爽、风味独特，既可鲜食，又可加工成多种食品、保健品，深受消费者喜爱。蓝莓果实中不但富含钙、铁、磷、钾、钠、硒等多种矿物质和维生素A、维生素C、维生素E等，还含有丰富的花青苷、原花色素、SOD等成分，营养十分丰富。医学研究表明，蓝莓果实抗氧化活性极高，具有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目及保护毛细管的作用和抗癌、抗溃。

9、疡、抗炎症等功效。因此，蓝莓被国际粮农组织列为五大健康食品之一。目前，全世界野生蓝莓采收量约8万吨，其中，中国野生蓝莓每年采收量8000吨左右，约占全世界总量的10。00031997年以来，随着国际消费市场对蓝莓需求量的逐年增加，人工栽培蓝莓面积呈现快速发展势头，世界蓝莓产量迅速增长。目前，全世界已有超过30个国家人工栽培蓝莓，且栽培面积每年以30的速度递增。国际市场，蓝莓除以鲜果形式直接销售外，还被加工为三类产品一是作为糕点、酸奶、馅饼等食品的配料；二是加工成罐头、果酱、果粉晶、蜜饯、果酒、浓缩果汁等；三是通过精深加工提取果实中的花色苷，用于生产食用色素、制造医疗保健用品和高级化妆品。000。

10、4本项发明以蓝莓浓缩果浆为原料，经过益生菌复合菌种共同发酵，再经冷冻干燥后制得一种益生菌发酵蓝莓果浆粉，本发明首次将蓝莓与益生菌相结合，开发出一种富含活性益生菌的蓝莓果粉，填补了国内外蓝莓发酵食品的空白。三发明内容0005本发明目的在于提供一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法。0006本发明的目的是这样实现的本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为重量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的00071益生菌的选择及培养基的制备0008A菌鼠李糖乳杆菌CICC6162LACTOBACILLUSRHAMNOSUS，培养基为蛋白胨2G，酵母提取物1G，大豆蛋白胨1G，蛋白质酶解物NO3DIFCO1G，5柠。

11、檬酸铁2ML，人工海水700ML，蒸馏水300ML，PH75，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0009B菌副干酪乳杆菌副干酪亚种CICC22812LACTOBACILLUSPARACASEISUBSPPARACASEI，培养基为酪蛋白胨100G，牛肉膏100G，酵母粉50G，葡萄糖50G，乙酸钠50G，柠檬酸二胺20G，TWEEN8010G，K2HPO420G，MGSO47H2O02G，MNSO4H2O005G，CACO3200G，蒸馏水10L，PH68，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0010C菌嗜酸乳杆菌CICC6093LACTOBACILLUSACIDOPHILUS培养基为酪蛋白。

12、说明书CN102356913ACN102356921A2/6页5胨10G/L，肉汤提取物10G/L，酵母提取物5G/L，葡萄糖20G/L，吐温801G/L，K2HPO42G/L，醋酸钠5G/L，柠檬酸二铵2G/L，MGSO47H2O02G/L，MNSO4H2O005G/L，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0011D菌酿酒酵母CICC31447SACCHAROMYCESCEREVISIAE培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0012E菌产朊假丝酵母CICC31126CANDIDAUTILIS培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟。

13、冷却至30备用。00132复合益生菌发酵剂冻干粉的制备过程001421原菌种活化0015分别量取09的生理盐水10ML于5只试管内，经121灭菌20分钟冷却至30，将5株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入09的生理盐水中，震荡使其溶解，在30恒温箱中静止活化30分钟，备用。001622益生菌扩大培养0017221母发酵剂的制备0018分别量取5株益生菌培养基各200ML于5只500ML三角瓶内，121灭菌20分钟冷却至30，按培养基体积的10接种21步骤中已经活化的菌种，在30厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。0019222生产发酵剂的制备0020首先配制质量百分比浓度为10的。

14、脱脂奶乳浊液，分装于5只500ML三角瓶内，每瓶200ML，121灭菌20分钟冷却至30，分别按2体积比例接种母发酵剂，30厌氧培养3640小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数109个/ML，视同为发酵成熟，如果活菌数109个/ML，继续培养，直至达到109个/ML。002123粉末冻干菌种的制备0022将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1CM，加盖瓶塞后放入30冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。002324复合益生菌发酵剂冻干粉的制备0024按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末23份，B菌粉末24份，C菌粉末12份。

15、，D菌粉末23份，E菌粉末23份，充分混匀后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固形物重量的0025。0025需要进一步说明的是本发明中选用的益生菌购于中国工业微生物菌种保存中心，这些益生菌的活化、冻干方法不仅仅限于本发明所述的具体方法，培养基的成分也不限于此，其它常规技术和方法都是可以的，只要可以提高菌种的活力、并将其制备成冻干粉状而方便使用即可。00263益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备002731浓缩果浆的制备0028将100公斤蓝莓原果浆低温减压浓缩至4045公斤，按浓缩果浆重量的5添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。002932杀菌。

16、说明书CN102356913ACN102356921A3/6页60030浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0203MG/L时，停止臭氧通入，密闭无菌保存20分钟。003133升温0032将经32步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30。003334复合益生菌发酵0034按该浆料固形物重量的0025添加24步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉，充分搅拌混匀后，30静止保温发酵48小时。003535冷冻干燥0036将34步骤发酵处理后的物料，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。四具体实施方式0037下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述0038实施例一0039本发明采用的5株。

17、益生菌均采购于中国工业微生物菌种保藏中心，分别为鼠李糖乳杆菌CICC6162，副干酪乳杆菌副干酪亚种CICC22812，嗜酸乳杆菌CICC6093，酿酒酵母CICC31447，产朊假丝酵母CICC31126，本发明中将上述菌株简称为A菌、B菌、C菌、D菌、E菌。00401益生菌的选择及培养基的制备0041A菌鼠李糖乳杆菌CICC6162LACTOBACILLUSRHAMNOSUS，培养基为蛋白胨2G，酵母提取物1G，大豆蛋白胨1G，蛋白质酶解物NO3DIFCO1G，5柠檬酸铁2ML，人工海水700ML，蒸馏水300ML，PH75，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0042B菌副干酪乳杆菌副干。

18、酪亚种CICC22812LACTOBACILLUSPARACASEISUBSPPARACASEI，培养基为酪蛋白胨100G，牛肉膏100G，酵母粉50G，葡萄糖50G，乙酸钠50G，柠檬酸二胺20G，TWEEN8010G，K2HPO420G，MGSO47H2O02G，MNSO4H2O005G，CACO3200G，蒸馏水10L，PH68，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0043C菌嗜酸乳杆菌CICC6093LACTOBACILLUSACIDOPHILUS培养基为酪蛋白胨10G/L，肉汤提取物10G/L，酵母提取物5G/L，葡萄糖20G/L，吐温801G/L，K2HPO42G/L，醋酸钠5G/。

19、L，柠檬酸二铵2G/L，MGSO47H2O02G/L，MNSO4H2O005G/L，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0044D菌酿酒酵母CICC31447SACCHAROMYCESCEREVISIAE培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0045E菌产朊假丝酵母CICC31126CANDIDAUTILIS培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。00462复合益生菌发酵剂冻干粉的制备过程004721原菌种活化0048分别量取09的生理盐水10ML于5只试管内，经121灭菌20分钟冷却至30，将5株益生菌安瓶内的冻干菌。

20、粉末在无菌状态下全部倒入09的生理盐水中，震荡使其溶解，在30恒温箱中静止活化30分钟，备用。说明书CN102356913ACN102356921A4/6页7004922益生菌扩大培养0050221母发酵剂的制备0051分别量取5株益生菌培养基各200ML于5只500ML三角瓶内，121灭菌20分钟冷却至30，按培养基体积的10接种21步骤中已经活化的菌种，在30厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。0052222生产发酵剂的制备0053首先配制质量百分比浓度为10的脱脂奶乳浊液，分装于5只500ML三角瓶内，每瓶200ML，121灭菌20分钟冷却至30，分别按2体积比例接种母发酵剂，30厌。

21、氧培养3640小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数109个/ML，视同为发酵成熟，如果活菌数109个/ML，继续培养，直至达到109个/ML。005423粉末冻干菌种的制备0055将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1CM，加盖瓶塞后放入30冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。005624复合益生菌发酵剂冻干粉的制备0057按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2份，B菌粉末2份，C菌粉末1份，D菌粉末2份，E菌粉末2份，充分混匀后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固。

22、形物重量的0025。00583益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备005931浓缩果浆的制备0060将100公斤蓝莓原果浆低温减压浓缩至4045公斤，按浓缩果浆重量的5添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。006132杀菌0062浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0203MG/L时，停止臭氧通入，密闭无菌保存20分钟。006333升温0064将经32步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30。006534复合益生菌发酵0066按该浆料固形物重量的0025添加24步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉，充分搅拌混匀后，30静止保温发酵48小时。006735冷冻干燥0068将34步骤发酵处理后的物料，放入冷。

23、冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。0069实施例二00701益生菌的选择及培养基的制备0071A菌鼠李糖乳杆菌CICC6162LACTOBACILLUSRHAMNOSUS，培养基为蛋白胨2G，酵母提取物1G，大豆蛋白胨1G，蛋白质酶解物NO3DIFCO1G，5柠檬酸铁2ML，人工海水700ML，蒸馏水300ML，PH75，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0072B菌副干酪乳杆菌副干酪亚种CICC22812LACTOBACILLUSPARACASEISUBSP说明书CN102356913ACN102356921A5/6页8PARACASEI，培养基为酪蛋白胨100G，牛肉膏10。

24、0G，酵母粉50G，葡萄糖50G，乙酸钠50G，柠檬酸二胺20G，TWEEN8010G，K2HPO420G，MGSO47H2O02G，MNSO4H2O005G，CACO3200G，蒸馏水10L，PH68，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0073C菌嗜酸乳杆菌CICC6093LACTOBACILLUSACIDOPHILUS培养基为酪蛋白胨10G/L，肉汤提取物10G/L，酵母提取物5G/L，葡萄糖20G/L，吐温801G/L，K2HPO42G/L，醋酸钠5G/L，柠檬酸二铵2G/L，MGSO47H2O02G/L，MNSO4H2O005G/L，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。。

25、0074D菌酿酒酵母CICC31447SACCHAROMYCESCEREVISIAE培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。0075E菌产朊假丝酵母CICC31126CANDIDAUTILIS培养基为5B麦芽汁，PH6265，经121灭菌20分钟冷却至30备用。00762复合益生菌发酵剂冻干粉的制备过程007721原菌种活化0078分别量取09的生理盐水10ML于5只试管内，经121灭菌20分钟冷却至30，将5株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入09的生理盐水中，震荡使其溶解，在30恒温箱中静止活化30分钟，备用。007922益生菌扩大培养0080221。

26、母发酵剂的制备0081分别量取5株益生菌培养基各200ML于5只500ML三角瓶内，121灭菌20分钟冷却至30，按培养基体积的10接种21步骤中已经活化的菌种，在30厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。0082222生产发酵剂的制备0083首先配制质量百分比浓度为10的脱脂奶乳浊液，分装于5只500ML三角瓶内，每瓶200ML，121灭菌20分钟冷却至30，分别按2体积比例接种母发酵剂，30厌氧培养3640小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数109个/ML，视同为发酵成熟，如果活菌数109个/ML，继续培养，直至达到109个/ML。008423粉末冻干菌种的制备0085将成熟。

27、的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1CM，加盖瓶塞后放入30冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。008624复合益生菌发酵剂冻干粉的制备0087按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末3份，B菌粉末4份，C菌粉末2份，D菌粉末3份，E菌粉末3份，充分混匀后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固形物重量的0025。00883益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备008931浓缩果浆的制备0090将100公斤蓝莓原果浆低温减压浓缩至4045公斤，按浓缩果浆重量的5添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。009132杀菌说明书CN102356913ACN102356921A6/6页90092浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0203MG/L时，停止臭氧通入，密闭无菌保存20分钟。009333升温0094将经32步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30。009534复合益生菌发酵0096按该浆料固形物重量的0025添加24步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉，充分搅拌混匀后，30静止保温发酵48小时。009735冷冻干燥0098将34步骤发酵处理后的物料，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。说明书CN102356913A。