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作为 GSK-3 抑制剂的螺环状氨基喹诺酮
    本申请是申请日为 2008 年 9 月 12 日， 申请号为 200880115090.1， 发明名称为 “作 为 GSK-3 抑制剂的螺环状氨基喹诺酮” 的申请的分案申请。
     优先权主张
     本申请主张 Cociorva 等人于 2007 年 9 月 12 日提交的美国临时申请 60/993,545 的优先权。上述申请的披露内容被全文引入作为参考。
     技术领域
     本发明提供了治疗 GSK-3 介导的疾病的化合物、 组合物和方法。本发明提供的化 合物为作为 GSK-3 抑制剂的螺环状氨基喹诺酮。 背景技术 糖原合成酶激酶 (GSK-3) 是一种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶， 具有由不同基因编码 的 α 和 β 异构体 [Coghlan 等人， Chemistry & Biology， 7， 793-803(2000) 以及 Kim 和 Kimmel， Curr.Opinion Genetics Dev.， 10， 508-514(2000)]。GSK-3 已经与各种疾病相关 联， 包括糖尿病、 阿耳茨海默氏病、 CNS 紊乱如躁狂抑郁性紊乱和神经退行性疾病以及心肌 肥厚 [ 参见， 例如， WO 99/65897 ； WO 00/38675 ； 和 Haq 等人， J.Cell Biol.(2000)151， 117]。 这些疾病可源于或者可导致 GSK-3 参与的特定细胞信号转导途径的异常运行。
     已发现 GSK-3 可磷酸化一系列调节蛋白并调整这些调节蛋白的活性。这包括糖原 合成酶 ( 其为碳源合成所需的速率限制性酶 )、 微管相关蛋白 Tau、 基因转录因子 β- 连珠 蛋白、 翻译起始因子 elF-2B 以及 ATP 柠檬酸裂解酶、 洋虫胶、 热休克因子 -1、 c-Jun、 c-myc、 c-myb、 CREB 和 CEPBα。这些多样化的靶标使 GSK-3 与细胞代谢、 增殖、 分化和发育的许多 方面相关联。
     GSK-3 的 小 分 子 抑 制 剂 已 有 报 道 [WO 99/65897(Chiron) 和 WO 00/38675(SmithKline Beecham)]， 然而， 仍然需要寻找更有效治疗 GSK-3 介导的疾病的治 疗剂。
     发明概述
     第一方面， 本发明提供了一种化合物， 所述化合物可具有式 (I) ：
     或其药学上可接受的衍生物， 其中R2 可以为氢或低级烷基 ；
     R3 可以为氢、 CN、 C(O)R3a、 C(NH)NHOH 或 5- 四唑基 ； 3a
     R 可以为 OH、 烷氧基或 NHR3b ；
     R3b 可以为氢、 NH2、 OH 或低级烷基 ； 5a 5b
     R 和 R 各自独立地可以为氢、 低级烷基或芳烷基， 其任选地被 1 至 3 个各自独立 0 0 地选自 Q 基团的取代基取代 ； 其中 Q 可以为卤素、 氰基、 硝基、 NH2、 烷基或烷氧基 ； 6
     R 可以为卤素 ；
     在每种情况下， Ra 和 X3 独立地选自如下的 (i) 或 (ii) ：
     (i)Ra 可以为氢或低级烷基 ； 且 3
     X 可以为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基、 取代或未取代的 3-6 元环亚烃基或取代或 未取代的 3-6 元杂亚环基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基团 ； 或者 a 3
     (ii)R 和 X 与它们键合的氮原子一起可形成 5 至 7 元饱和或不饱和的环， 该环 任选地含有一个或多个 O 或 S 原子或者一个或多个额外的 N 原子 ；
     Rb 可以为 -(CHR7a)nR7、 -NR7bR7、 -OR7、 -S(O)r-R7、 -NR7bCOY1R7 或 -Y2CONR7bR7 ；
     Y1 可以为键、 O 或 NR7b ；
     Y2 可以为键或 O ；
     n为0或1；
     r 为 0 至 2 的整数 ；
     R7 可以为烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂环 7 基， 其中 R 任选地被 1 至 5 个取代基所取代， 每个取代基独立地选自 Q1 基团 ；
     R7a 可以为氢、 烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂 7a 环基， 其中 R 任选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q1 基团 ；
     R7b 可以为氢、 烷基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基或稠合杂环基芳基， 其中 R7b 任 选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q1 基团 ；
     其中 Q1 可以为卤素、 羟基、 氧、 硫代、 氰基、 硝基、 叠氮基、 巯基、 甲酰基、 羟基羰基、 羟基羰基烷基、 烷基、 卤代烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷 基、 烷氧基、 卤代烷氧基、 环烷氧基、 杂环氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳烷氧基、 杂芳烷氧基、 烷 基羰基、 芳基羰基、 杂芳基羰基、 烷氧基羰基、 芳氧基羰基、 芳烷氧基羰基、 未取代的或取代 的氨基羰基、 烷基羰氧基、 芳基羰氧基、 芳烷基羰氧基、 烷氧基羰氧基、 芳氧基羰氧基、 芳烷 氧基羰氧基、 未取代的或取代的氨基羰氧基、 未取代的或取代的氨基、 烷基硫代、 环烷基硫 代、 芳基硫代、 杂芳基硫代、 芳烷基硫代、 杂芳烷基硫代、 烷基亚硫酰基、 环烷基亚硫酰基、 芳 基亚硫酰基、 杂芳基亚硫酰基、 芳烷基亚硫酰基、 杂芳烷基亚硫酰基、 烷基磺酰基、 环烷基磺 酰基、 芳基磺酰基、 杂芳基磺酰基、 芳烷基磺酰基、 杂芳烷基磺酰基、 烷氧基磺酰基、 芳氧基 磺酰基、 未取代的或取代的氨基磺酰基或羟基磺酰基 ；
     X1 可以为 O 或 NR8 ；
     R8 可以为氢或低级烷基 ；
     X2 可以为 CH2、 O、 NR1 或 S ；
     R1 可以为氢或低级烷基 ；
     A 为键或取代或未取代的 C1-C2 亚烃基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基团； 其中 Q2 为烷基或卤代烷基 ；
     p为0或1； 且
     q 为 0 至 2 的整数。
     在式 (I) 化合物中， R5a 和 R5b 可以为氢。
     在前述化合物中， R2 可以为氢。
     在前述化合物中， X1 可以为 O。
     在前述化合物中， Y1 可以为键。
     在前述化合物中， R3 可以为 CN ； 或者， R3 可以为 C(O)R3a， 其中 R3a 为 OH ； 或者， R3 可 以为 C(NH)NHOH ； 或者 R3 可以为 5- 四唑基。
     在式 (I) 化合物中， R5a 和 R5b 为氢， X1 为 O 而 R2 为氢。
     在前述化合物中， Ra 可以为氢。
     在前述化合物中， X3 可以为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基， 其中该取代基当存在时 2 2 选自 1 至 4 个 Q 基团， 其中 Q 可以为烷基或卤代烷基。
     在前述化合物中， A 可以为取代或未取代的 C1-C2 亚烃基。其中 A 可以被 1 至 4 个 2 2 Q 基团所取代， 其中 Q 可以为烷基或卤代烷基 ； 且 p 为 0。
     在前述化合物中， X2 可以为 CH2。在该化合物中， A 为 CH2 ； p 为 0 而 q 为 2。或者， 1 在该化合物中， X 为 O。
     在前述化合物中， X2 可以为 O。
     在前述化合物中， R6 可以为 F。
     所述化合物可具有式 (Ia) ：
     或其药学上可接受的衍生物， 其中 3 3a
     R 可以为氢、 CN、 C(O)R 、 C(NH)NHOH 或 5- 四唑基 ； 3a
     R 可以为 OH、 烷氧基或 NHR3b ；
     R3b 可以为氢、 NH2、 OH 或低级烷基 ； 5a 5b
     R 和 R 各自独立地可以为氢或低级烷基 ；
     R6 可以为卤素 ；
     在每种情况下， Ra 和 X3 独立地选自如下的 (i) 或 (ii) ：
     (i)Ra 为氢或低级烷基 ； 且 3
     X 为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基、 取代或未取代的 3-6 元环亚烃基或取代或未取 代的 3-6 元杂亚环基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基团 ； 或 a 3
     (ii)R 和 X 与它们键合的氮原子一起可形成 5 至 7 元饱和或不饱和的环， 该环中 任选地含有一个或多个 O 或 S 原子或者一个或多个额外的 N 原子 ；
     Rb 为 -(CHR7a)nR7、 -NR7bR7、 -OR7、 -S(O)1-R7、 -NR7bCOY1R7 或 -Y2CONR7bR7 ；
     Y1 为键、 O 或 NR7b ；
     Y2 为键或 O ；
     n为0或1；
     l 为 0 至 2 的整数 ；
     R7 为烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂环基， 其 7 1 中 R 任选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q 基团 ； 7a
     R 为氢、 烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂环基， 7a 其中 R 任选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选 自 Q1 基团 ；
     R7b 为氢、 烷基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基或稠合杂环基芳基， 其中 R7b 任选地 被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q1 基团 ；
     其中 Q1 为卤素、 羟基、 氧， 硫代、 氰基、 硝基、 叠氮基、 巯基、 甲酰基、 羟基羰基、 羟基 羰基烷基、 烷基、 卤代烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基、 烷 氧基、 卤代烷氧基、 环烷氧基、 杂环氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳烷氧基、 杂芳烷氧基、 烷基羰 基、 芳基羰基、 杂芳基羰基、 烷氧基羰基、 芳氧基羰基、 芳烷氧基羰基、 未取代的或取代的氨 基羰基、 烷基羰氧基、 芳基羰氧基、 芳烷基羰氧基、 烷氧基羰氧基、 芳氧基羰氧基、 芳烷氧基 羰氧基、 未取代的或取代的氨基羰氧基、 未取代的或取代的氨基、 烷基硫代、 环烷基硫代、 芳 基硫代、 杂芳基硫代、 芳烷基硫代、 杂芳烷基硫代、 烷基亚硫酰基、 环烷基亚硫酰基、 芳基亚 硫酰基、 杂芳基亚硫酰基、 芳烷基亚硫酰基、 杂芳烷基亚硫酰基、 烷基磺酰基、 环烷基磺酰 基、 芳基磺酰基、 杂芳基磺酰基、 芳烷基磺酰基、 杂芳烷基磺酰基、 烷氧基磺酰基、 芳氧基磺 酰基、 未取代的或取代的氨基磺酰基或羟基磺酰基 ； 且
     Q2 为烷基或卤代烷基。
     在式 (Ia) 的化合物中， R5a 和 R5b 可以为氢。
     在前述式 (Ia) 的化合物中， R3 可为 CN ； 或者， R3 可为 C(O)R3a， 其中 R3a 为 OH ； 或者 3 3 R 可为 C(NH)NHOH ； 或者 R 可为 5- 四唑基。
     在前述式 (Ia) 的化合物中， Ra 可为氢。
     第二方面， 本发明提供了选自以下的化合物 ：
     第三方面， 本发明提供了选自以下的化合物 ：
     第四方面， 本发明提供了包含如上所述的化合物及药学上可接受的载体的药物组合物。 第五方面， 本发明提供了用于治疗、 预防或改善 GSK-3 介导的疾病的方 法， 其包 括施用如上所述的化合物。
     在所述方法中， 所述 GSK-3 介导的疾病为糖尿病、 与糖尿病相关的病症、 阿耳茨海 默氏病、 帕金森氏症、 进行性核上性麻痹、 亚急性硬化性全脑炎帕金森氏综合征、 脑炎后帕 金森氏综合征、 拳击手脑炎、 关岛帕金森症 - 失智复合症、 皮克氏病、 皮层基底节变性、 额颞
     痴呆、 亨丁顿氏舞蹈症、 AIDS 相关的痴呆、 肌萎缩性侧索硬化、 多发性硬化、 神经外伤性疾 病、 抑郁症、 双相情感性精神障碍、 类风湿性关节炎、 炎症性肠病、 溃疡性结肠炎、 克罗恩病、 败血病、 胰癌、 卵巢癌或骨质疏松症。
     本发明提供的化合物可用于治疗、 预防或改善 GSK-3 介导的疾病。
     第六方面， 本发明提供了如上所述的化合物在制备用于治疗、 预防或改善 GSK-3 介导的疾病的药物中的用途。
     第七方面， 本发明提供了一种制造物品， 其包含 ： 包装材料， 包含在该包装材料中 的可用于治疗、 预防或改善 GSK-3 介导的疾病的如上所述的化合物或其药学上可接受的衍 生物， 以及说明该化合物或其药学上可接受的衍生物被用于治疗、 预防或改善 GSK-3 介导 的疾病的标签。
     本发明还提供了包含式 (I) 的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
     本发明还提供了通过施用本发明提供的化合物和组合物治疗、 预防或改善 GSK-3 介导的疾病的一种或多种症状的方法。
     发明详述
     A. 定义
     除非另行指明， 此处所用的技术和科学术语的含义等同于本领域普通技术人员的 普遍理解。所有的专利、 申请、 公开的申请以及其它出版物均在此全文引用作为参考。对于 此处一个术语存在多个定义的情况， 除非另行指明， 应采用本节所用定义。
     此处所用的术语烷基、 烷氧基、 羰基等的含义等同于本领域技术人员的通常理解。
     此处所用的烷基碳链， 如非指明， 包含 1 至 20 个碳、 1 至 16 个碳或 1 至 6 个碳， 且为直连或带支链。在特定的实施方案中， 烷基碳链包含 1 至 6 个碳。此处示例性的烷基 基团包括但不限于甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 异丁基、 正丁基、 仲丁基、 叔丁基、 异戊基、 新戊 基、 叔戊基、 异己基。此处所用的低级烷基指具有约 1 个碳至约 6 个碳的碳链。
     此处所用的烯基碳链， 如非指明， 包含 2 至 20 个碳、 2 至 16 个碳或 2 至 6 个碳， 且 为直连或带支链。在特定的实施方案中， 烯基碳链包含 2 至 6 个碳。在特定的实施方案中， 包含 2 至 20 个碳原子的烯基碳链带有 1 至 8 个双键， 而在特定的实施方案中， 包含 2 至 16 个碳的烯基碳链带有 1 至 5 个双键。在特定的实施方案中， 2-6 个碳的烯基碳链包含 1-2 个 双键。此处示例性的烯基基团包括但不限于乙烯基、 1- 丙烯基、 2- 丙烯基、 异丙烯基、 1- 丁 烯基、 2- 丁烯基、 3- 丁烯基、 1， 3- 丁二烯基。此处所用的低级烯基指具有约 2 个碳至约 6 个 碳的碳链。
     此处所用的炔基碳链， 如非指明， 包含 2 至 20 个碳、 2 至 16 个碳或 2 至 6 个碳， 且 为直连或带支链。在特定的实施方案中， 炔基碳链包含 2 至 6 个碳。在特定的实施方案中， 包含 2 至 20 个碳原子的炔基碳链带有 1 至 8 个三键， 而在特定的实施方案中， 包含 2 至 16 个碳的炔基碳链带有 1 至 5 个三键。在特定的实施方案中， 2-6 个碳的炔基碳链包含 1-2 个 三键。此处示例性的炔基包括但不限于乙炔基、 1- 丙炔基和 2- 丙炔基。此处所用的低级炔 基指具有约 2 个碳至约 6 个碳的碳链。
     此处所用的 “烷氧基” 包含 1 至 20 个碳、 1 至 16 个碳或 1 至 6 个碳， 且为直连或带 支链。在特定的实施方案中， 烷氧基碳链包含 1 至 6 个碳。此处示例性的烷氧基基团包括 但不限于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 异丁氧基、 正丁氧基、 仲丁氧基、 叔丁氧基、 异戊氧基、 正戊氧基、 新戊氧基、 异己氧基。
     此处所用的 “芳烷基” 指其中一个氢原子被芳基取代的烷基基团。
     此处所用的 “卤代基” 、 “卤素” 、 或 “卤化物 “指 F、 Cl、 Br 或 I。
     此处所用的 “芳基” 指包含 6 至 19 个碳原子的芳香族单环或多环基团。芳基基团 包括但不限于例如芴基、 取代的芴基、 苯基、 取代的苯基、 萘基和取代的萘基等基团。
     此处所用的 “环烷基” 在特定的实施方案中指具有 3 至 10 个碳原子， 在其它实施 方案中指具有 3 至 6 个碳原子的饱和的单或多环状环系统 ； 环烯基和环炔基指分别包括至 少一个双键和至少一个三键的单或多环状换系统。在特定的实施方案中， 环烯基和环炔基 基团可包含 3 至 10 个碳原子， 对于环烯基基团， 在进一步的实施方案中， 可包含 4 至 7 个碳 原子， 而环炔基基团在进一步的实施方案中可包含 8 至 10 个碳原子。该环烷基、 环烯基和 环炔基环系统可由一个环或者两个或多个环组成， 这些环可以融合、 桥接或螺旋连接的方 式连接在一起。
     此处所用的 “杂环基” 在一个实施方案中指 3 至约 10 元、 在另一实施方案中指 4 至 7 元、 在进一步的实施方案中指 5 至 6 元的单环或多环状非芳香族环系统， 其中该环系统中 一个或多个、 在特定实施方案中 1 个至 3 个原子为杂原子， 即， 非碳元素， 包括但不限于氮、 氧或硫。 在该杂原子为氮的实施方案中， 该氮任选地被烷基、 烯基、 炔基、 芳基、 杂芳基、 芳烷 基、 杂芳烷基、 环烷基、 杂环基、 环烷基烷基、 杂环基烷基、 酰基、 氨基羰基、 烷氧基羰基、 胍基 取代， 或者该氮可被季铵化以形成铵基团， 其中所述取代基选自上述取代基。
     此处所用的 “杂芳基” 在特定实施方案中指约 5 至约 15 元的单环或多环状芳香族 环系统， 其中该环系统中的一个或多个原子、 在一个实施方案中 1 个至 3 个原子为杂原子， 即， 非碳的元素， 包括但不限于氮、 氧或硫。 该杂芳基基团可以可选地稠合至苯环。 杂芳基基 团包括但不限于呋喃基、 咪唑基、 嘧啶基、 四唑基、 噻吩基、 吡啶基、 吡咯基、 N- 甲基吡咯基、 喹啉基和异喹啉基。
     此处所用的 “稠合杂环基芳基” 指与杂环基基团稠合的芳基。在一个实施方案中， 稠合杂环基芳基中杂环基包含了约 5-6 个环原子而其芳基为苯基。稠合杂环基芳基可通过 该环系统的任意原子键合。代表性稠合杂环基芳基基团包括 1， 3- 苯并二氧戊环 -4- 基、 1， 3- 苯并二氧戊环 -5- 基、 1， 3- 苯并二氧戊环 -6- 基、 1， 3- 苯并二氧戊环 -7- 基、 4- 二氢吲 哚基、 5- 二氢吲哚基、 6- 二氢吲哚基和 7- 二氢吲哚基。
     此处所用的 “稠合芳基杂环基” 指与芳基基团稠合的稠合杂环基。 在一个实施方案 中， 稠合芳基杂环基中的芳基为苯基而杂环基包含了约 5-6 个环原子。 稠合芳基杂环基可 通过该环系统的任意原子键合。 代表性的稠合芳基杂环基基团包括 1- 二氢吲哚基、 2- 二氢 吲哚基、 3- 二氢吲哚基、 1， 2， 3， 4- 四氢喹啉 -1- 基、 1， 2， 3， 4- 四氢喹啉 -2- 基、 1， 2， 3， 4- 四 氢喹啉 -3- 基和 1， 2， 3， 4- 四氢喹啉 -4- 基。
     此处所用的 “卤代烷基” 指其中一个或多个氢原子被卤素取代的烷基基团。此处 所用的 “低级卤代烷基” 指其中一个或多个氢原子被卤素取代的低级烷基基团。这样的基 团包括但不限于氯甲基、 三氟甲基和 1- 氯 -2- 氟乙基。
     此处所用的 “杂芳烷基” 指其中一个氢原子被杂芳基取代的烷基基团。
     此处所用的 “卤代烷氧基” 指 RO-， 其中 R 为卤代烷基基团。
     此处所用的 “环烷氧基” 指 RO-， 其中 R 为环烷基基团。此处所用的 “芳氧基” 指 RO-， 其中 R 为芳基。
     此处所用的 “杂芳氧基” 指 RO-， 其中 R 为杂芳基。
     此处所用的 “杂环氧基” 指 RO-， 其中 R 为杂环基。
     此处所用的 “芳烷氧基” 指 RO-， 其中 R 为芳烷基。
     此处所用的 “杂芳烷氧基” 指 RO-， 其中 R 为杂芳烷基。
     此处所用的 “烷基羰基” 指 RCO-， 其中 R 为烷基基团。
     此处所用的 “芳基羰基” 指 RCO-， 其中 R 为芳基。
     此处所用的 “杂芳基羰基” 指 RCO-， 其中 R 为杂芳基。
     此处所用的 “烷氧基羰基” 指 RCO-， 其中 R 为烷氧基基团。
     此处所用的 “芳氧基羰基” 指 RCO-， 其中 R 为芳氧基。
     此处所用的 “芳烷氧基羰基” 指 RCO-， 其中 R 为芳烷氧基。
     此处所用的 “未取代的或取代的氨基羰基” 指 -C(O)NR′ R， 其中 R′和 R 独立地为 氢、 烷基芳基、 杂芳基、 芳烷基或杂芳烷基。
     此处所用的 “烷基羰氧基” 指 -OC(O)R， 其中 R 为烷基。
     此处所用的 “芳基羰氧基” 指 -OC(O)R， 其中 R 为芳基。
     此处所用的 “芳烷基羰氧基” 指 -OC(O)R， 其中 R 为芳烷基。
     此处所用的 “烷氧基羰氧基” 指 -OC(O)OR， 其中 R 为烷基。
     此处所用的 “芳氧基羰氧基” 指 -OC(O)OR， 其中 R 为芳基。
     此处所用的 “芳烷氧基羰氧基” 指 -OC(O)OR， 其中 R 为芳烷基。
     此处所用的 “未取代的或取代的氨基羰氧基” 指 -OC(O)NR′ R， 其中 R′和 R 独立 地为氢、 烷基芳基、 杂芳基、 芳烷基或杂芳烷基。
     此处所用的 “未取代的或取代的氨基” 指 -NR′ R， 其中 R′和 R 独立地为氢、 烷基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基、 烷基羰基、 芳基羰基、 杂芳基羰基、 烷氧基羰基、 芳氧基羰 基、 芳烷氧基羰基、 未取代的或取代的氨基羰基、 烷基磺酰基、 环烷基磺酰基、 芳基磺酰基、 杂芳基磺酰基、 芳烷基磺酰基或杂芳烷基磺酰基 .
     此处所用的 “烷基硫代” 指 -SR， 其中 R 为烷基。
     此处所用的 “环烷基硫代” 指 -SR， 其中 R 为环烷基。
     此处所用的 “芳基硫代” 指 -SR， 其中 R 为芳基。
     此处所用的 “杂芳基硫代” 指 -SR， 其中 R 为杂芳基。
     此处所用的 “芳烷基硫代” 指 -SR， 其中 R 为芳烷基。
     此处所用的 “杂芳烷基硫代” 指 -SR， 其中 R 为杂芳烷基。
     此处所用的 “烷基亚硫酰基” 指 -S(O)R， 其中 R 为烷基。
     此处所用的 “环烷基亚硫酰基” 指 -S(O)R， 其中 R 为环烷基。
     此处所用的 “芳基亚硫酰基” 指 -S(O)R， 其中 R 为芳基。
     此处所用的 “杂芳基亚硫酰基” 指 -S(O)R， 其中 R 为杂芳基。
     此处所用的 “芳烷基亚硫酰基” 指 -S(O)R， 其中 R 为芳烷基。
     此处所用的 “杂芳烷基亚硫酰基” 指 -S(O)R， 其中 R 为杂芳烷基。
     此处所用的 “烷基磺酰基” 指 -S(O)2R， 其中 R 为烷基。
     此处所用的 “环烷基磺酰基” 指 -S(O)2R， 其中 R 为环烷基。此处所用的 “芳基磺酰基” 指 -S(O)2R， 其中 R 为芳基。
     此处所用的 “杂芳基磺酰” 指 -S(O)2R， 其中 R 为杂芳基。
     此处所用的 “芳烷基磺酰基” 指 -S(O)2R， 其中 R 为芳烷基。
     此处所用的 “杂芳烷基磺酰基” 指 -S(O)2R， 其中 R 为杂芳烷基。
     此处所用的 “烷氧基磺酰基” 指 -S(O)2R， 其中 R 为烷氧基。
     此处所用的 “未取代的或取代的氨基磺酰基” 指 -S(O)2NR′ R， 其中 R′和 R 独立 地为氢、 烷基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基或杂芳烷基。
     此处所用的化合物的药学上可接受的衍生物包括盐、 酯、 烯醇醚、 烯醇酯、 乙缩醛、 缩酮、 原酸酯、 半缩醛、 半缩酮、 酸、 碱、 溶剂化物、 水合物或其前药。该种衍生物可由本领域 的技术人员通过已知用于该种衍生化的方法简单地制备。 所生成的化合物可被施用至动物 或人， 而没有实质性的毒性作用， 且具有药学活性或者为前药。 药学上可接受的盐包括但不 限于胺盐， 例如但不限于 N， N′ - 二苄乙烯二胺， 氯普鲁卡因， 胆碱， 氨， 二乙醇胺和其它羟 基烷基胺， 乙二胺， N- 甲葡胺， 普鲁卡因， N- 苄基苯乙胺， 1- 对 - 氯苄基 -2- 吡咯烷 -1′ - 基 甲基苯并咪唑， 二乙胺和其它烷基胺， 哌嗪和三 ( 羟甲基 ) 氨基甲烷 ； 碱金属盐， 例如但不限 于锂， 钾和钠 ； 碱土金属盐， 例如但不限于钡， 钙和镁 ； 过度金属盐， 例如但不限于锌 ； 以及 无机盐， 例如但不限于， 磷酸氢钠和磷酸氢二钠 ； 还包括但不限于无机酸的盐， 例如但不限 于盐酸盐和硫酸盐 ； 以及有机酸的盐， 例如但不限于醋酸盐， 乳酸盐， 苹果酸盐， 酒石酸盐， 柠檬酸盐， 抗坏血酸盐， 琥珀酸盐， 酪酸盐， 戊酸盐， 甲磺酸盐和延胡索酸盐。药学上可接受 的酯包括但不限于酸性基团 ( 包括但不限于羧酸、 磷酸、 次膦酸、 磺酸、 亚磺酸和硼酸 ) 的 烷基、 烯基、 炔基、 芳基、 芳烷基和环烷基酯。药学上可接受的烯醇醚包括但不限于式 C ＝ C(OR) 的衍生物， 其中 R 为氢、 烷基、 烯基、 炔基、 芳基、 芳烷基和环烷基。药学上可接受的烯 醇酯包括但不限于式 C ＝ C(OC(O)R) 的衍生物， 其中 R 为氢、 烷基、 烯基、 炔基、 芳基、 芳烷基 和环烷基。药学上可接受的溶剂化物和水合物为化合物与一个或多个溶剂或水分子， 或者 1 至约 100 个， 或 1 至约 10 个， 或者 1 至约 2、 3 或 4 个溶剂或水分子的络合物。
     应当理解， 本发明提供的化合物可具有手性中心。 这种手性中心可以是 (R) 或 (S) 构型， 或者为其混合物。因此， 本发明提供的化合物可以是对映体纯的， 或立体异构纯或非 对映体混合物。
     此处所用的基本纯的表示表现为足够的同质性， 其不含可通过本领域技术人员用 于评估杂质的标准分析方法如薄层层析法 (TLC)、 凝胶电泳、 高效液相层析 (HPLC)、 核磁共 振 (NMR) 和质谱 (MS) 等容易测得的杂质， 或者该其使得进一步纯化不能可检测地改变该物 质的物理和化学属性， 例如酶催化活性 和生物活性。纯化所述化合物以生成基本化学纯 的化合物的方法已为本领域技术人员所知。然而， 基本化学纯的化合物可以是立体异构体 的混合物。在这种情况下， 进一步的纯化可能提高该化合物的特定活性。本发明意在包括 所有该种可能的异构体， 以及它们的外消旋和光学纯形式。光学活性 (+) 和 (-)、 (R)- 和 (S)- 或 (D)- 和 (L)- 异构体可采用手性合成原料或手性试剂制备或者通过常规技术 ( 如反 相 HPLC) 拆分。当此处所述的化合物包含烯烃双键或其它几何不对称中心时， 除非另行指 明， 该化合物意在同时包括 E 和 Z 几何异构体。类似的， 也意在包括所有互变异构形式。
     此处所用 IC50 的指特定测试化合物在测试应答的测定中实现最大应答的 50％抑 制时的数量、 浓度或剂量。此处所用的 EC50 指可引发由特定测试化合物诱导、 引起或增强的特定剂量依赖性 应答的最大量 50％的该特定测试化合物的剂量、 浓度或数量。
     此处所用的治疗指使得疾病或病症的一种或多种症状得以改善或以其它方式被 有益地改变的任意方式。治疗还包括此处组合物的任意药学用途， 例如用以治疗糖尿病。
     此处所用的通过施用特定化合物或药物组合物改善特定病症的症状指任何与该 化合物或组合物的施用相关的减轻， 无论这种减轻是永久或暂时的， 持续或是短暂的。
     此处所用的术语 “预防” 指防止特定疾病或紊乱在曾患有该病或紊乱的患者体内 复发和 / 或延长患有该疾病或紊乱的患者的缓解期。
     此处所用的术语 “GSK-3 介导的疾病” 或 “GSK-3 介导的病症” 指 GSK-3 参与作用 的任意疾病或其它有害的病症或状态。该种疾病或病症包括但不限于糖尿病、 与糖尿病相 关的病症、 慢性神经退化性病症包括痴呆如阿耳茨海默氏病、 帕金森氏症、 进行性核上性麻 痹、 亚急性硬化性全脑炎帕金森氏综合征、 脑炎后帕金森氏综合征、 拳击手脑炎、 关岛帕金 森症 - 失智复合症、 皮克氏病、 皮层基底节变性、 额颞痴呆、 亨丁顿氏舞蹈症、 AIDS 相关的 痴呆、 肌萎缩性侧索硬化、 多发性硬化、 神经外伤性疾病例如急性中风、 癫痫、 情感障碍如抑 郁症、 精神分裂症和双向性精神障碍、 类风湿性关节炎、 炎症性肠病、 溃疡性结肠炎、 克罗恩 病、 败血病、 胰癌、 卵巢癌和骨质疏松症。
     B. 化合物
     本发明提供了式 (I) 的化合物 ：
     或其药学上可接受的衍生物， 其中 2 R 为氢或低级烷基 ； R3 为氢、 CN、 C(O)R3a、 C(NH)NHOH 或 5- 四唑基 ； 3a R 为 OH、 烷氧基或 NHR3b ；R3b 为氢、 NH2、 OH 或低级烷基 ； 5a 5b
     R 和 R 各自独立地为氢、 低级烷基或芳烷基， 其任选地被 1 至 3 个各自独立地选 0 自 Q 基团的取代基取代 ；
     其中 Q0 为卤素、 氰基、 硝基、 NH2、 烷基或烷氧基 ； 6
     R 为卤素 ；
     在每种情况下， Ra 和 X3 独立地选自如下的 (i) 或 (ii) ：
     (i)Ra 为氢或低级烷基 ； 且 3
     X 为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基、 取代或未取代的 3-6 元环亚烃基或取代或未取 代的 3-6 元杂亚环基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基团 ； 或者 a 3
     (ii)R 和 X 与它们键合的氮原子一起可形成 5 至 7 元饱和或不饱和的环， 该环中任选地含有一个或多个 O 或 S 原子或者一个或多个额外的 N 原子 ；
     Rb 为 -(CHR7a)nR7、 -NR7bR7、 -OR7、 -S(O)1-R7、 -NR7bCOY1R7 或 -Y2CONR7bR7 ；
     Y1 为键、 O 或 NR7b ；
     Y2 为键或 O ；
     n为0或1；
     l 为 0 至 2 的整数 ；
     R7 为烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂环基， 其 7 1 中 R 任选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q 基团 ； 7a
     R 为氢、 烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂环基， 7a 其中 R 任选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q1 基团 ；
     R7b 为氢、 烷基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基或稠合杂环基芳基， 其中 R7b 任选地 被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q1 基团 ；
     其中 Q1 为卤素、 羟基、 氧、 硫代、 氰基、 硝基、 叠氮基、 巯基、 甲酰基、 羟基羰基、 羟基 羰基烷基、 烷基、 卤代烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基、 烷 氧基、 卤代烷氧基、 环烷氧基、 杂环氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳烷氧基、 杂芳烷氧基、 烷基羰 基、 芳基羰基、 杂芳基羰基、 烷氧基羰基、 芳氧基羰基、 芳烷氧基羰基、 未取代的或取代的氨 基羰基、 烷基羰氧基、 芳基羰氧基、 芳烷基羰氧基、 烷氧基羰氧基、 芳氧基羰氧基、 芳烷氧基 羰氧基、 未取代的或取代的氨基羰氧基、 未取代的或取代的氨基、 烷基硫代、 环烷基硫代、 芳 基硫代、 杂芳基硫代、 芳烷基硫代、 杂芳烷基硫代、 烷基亚硫酰基、 环烷基亚硫酰基、 芳基亚 硫酰基、 杂芳基亚硫酰基、 芳烷基亚硫酰基、 杂芳烷基亚硫酰基、 烷基磺酰基、 环烷基磺酰 基、 芳基磺酰基、 杂芳基磺酰基、 芳烷基磺酰基、 杂芳烷基磺酰基、 烷氧基磺酰基、 芳氧基磺 酰基、 未取代的或取代的氨基磺酰基或羟基磺酰基 ；
     X1 为 O 或 NR8 ；
     R8 为氢或低级烷基 ；
     X2 为 CH2、 O、 NR1 或 S ；
     R1 为氢或低级烷基 ；
     A 为键或取代或未取代的 C1-C2 亚烃基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基 团；
     其中 Q2 为烷基或卤代烷基 ；
     p为0或1； 且
     q 为 0 至 2 的整数。
     在一个实施方案中， R5a 和 R5b 各自为氢。
     在一个实施方案中， R2 为氢。
     在另一个实施方案中， X1 是 O。
     在另一个实施方案中， Y1 是键。
     在另一实施方案中， R3 为 CN。
     在另一实施方案中， R3 为 C(O)R3a。
     在另一实施方案中， R3 为 C(NH)NHOH。
     在另一实施方案中， R3 为 5- 四唑基。在一个实施方案中， R3a 为 OH。
     在一个实施方案中， X1 为 O 而 R2 为氢。
     在另一个实施方案中， Ra 是氢。
     在一个实施方案中， X3 为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基， 其中该取代基当存在时选 2 2 自 1 至 4 个 Q 基团， 其中 Q 为烷基或卤代烷基。
     在另一实施方案中， A 为取代或未取代的 C1-C2 亚烃基。
     在另一实施方案中， A 被 1 至 4 个 Q2 基团所取代， 其中 Q2 为烷基或卤代烷基 ； 且p 为 0。
     在一个实施方案中， X2 为 CH2。
     在另一个实施方案中， X2 是 O。
     在另一实施方案中， A 为 CH2 ； p 为 0 且 q 为 2。 1
     在另一个实施方案中， X 是 O。
     在特定的实施方案中， R6 为 F。
     在特定的实施方案中， 该化合物具有式 (Ia) ：
     或其药学上可接受的衍生物， 其中 3 3a
     R 为氢、 CN、 C(O)R 、 C(NH)NHOH 或 5- 四唑基 ； 3a
     R 为 OH、 烷氧基或 NHR3b ；
     R3b 为氢、 NH2、 OH 或低级烷基 ； 5a 5b
     R 和 R 各自独立地为氢或低级烷基 ；
     R6 为卤素 ；
     在每种情况下， Ra 和 X3 独立地选自如下的 (i) 或 (ii) ：
     (i)Ra 为氢或低级烷基 ； 且 3
     X 为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基、 取代或未取代的 3-6 元环亚烃基或取代或未取 代的 3-6 元杂亚环基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基团 ； 或者
     (ii)Ra 和 X3 与它们键合的氮原子一起可形成 5 至 7 元饱和或不饱和的环， 该环中 任选地含有一个或多个 O 或 S 原子或者一个或多个额外的 N 原子 ；
     Rb 为 -(CHR7a)nR7、 -NR7bR7、 -OR7、 -S(O)r-R7、 -NR7bCOY1R7 或 -Y2CONR7bR7 ；
     Y1 为键、 O 或 NR7b ；
     Y2 为键或 O ；
     n为0或1；
     r 为 0 至 2 的整数 ；
     R7 为烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂环基， 其 7 1 中 R 任选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q 基团 ；
     R7a 为氢、 烷基、 芳基、 环烷基、 杂环基、 杂芳基、 稠合杂环基芳基或稠合芳基杂环基， 7a 其中 R 任选地被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选 自 Q1 基团 ；
     R7b 为氢、 烷基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基或稠合杂环基芳基， 其中 R7b 任选地 被 1 至 5 个取代基取代， 每个取代基独立地选自 Q1 基团 ；
     其中 Q1 为卤素、 羟基、 氧、 硫代、 氰基、 硝基、 叠氮基、 巯基、 甲酰基、 羟基羰基、 羟基 羰基烷基、 烷基、 卤代烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基、 烷 氧基、 卤代烷氧基、 环烷氧基、 杂环氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳烷氧基、 杂芳烷氧基、 烷基羰 基、 芳基羰基、 杂芳基羰基、 烷氧基羰基、 芳氧基羰基、 芳烷氧基羰基、 未取代的或取代的氨 基羰基、 烷基羰氧基、 芳基羰氧基、 芳烷基羰氧基、 烷氧基羰氧基、 芳氧基羰氧基、 芳烷氧基 羰氧基、 未取代的或取代的氨基羰氧基、 未取代的或取代的氨基、 烷基硫代、 环烷基硫代、 芳 基硫代、 杂芳基硫代、 芳烷基硫代、 杂芳烷基硫代、 烷基亚硫酰基、 环烷基亚硫酰基、 芳基亚 硫酰基、 杂芳基亚硫酰基、 芳烷基亚硫酰基、 杂芳烷基亚硫酰基、 烷基磺酰基、 环烷基磺酰 基、 芳基磺酰基、 杂芳基磺酰基、 芳烷基磺酰基、 杂芳烷基磺酰基、 烷氧基磺酰基、 芳氧基磺 酰基、 未取代的或取代的氨基磺酰基或羟基磺酰基 ； 且 2
     Q 为烷基或卤代烷基。
     在一个实施方案中， 该化合物具有式 (Ia)， 其中 R5a 和 R5b 为氢。
     在一个实施方案中， 该化合物具有式 (Ia)， 其中 R3 为 CN。
     在一个实施方案中， 该化合物具有式 (Ia)， 其中 R3 为 C(O)R3a。
     在一个实施方案中， 该化合物具有式 (Ia)， 其中 R3 为 C(NH)NHOH。
     在一个实施方案中， 该化合物具有式 (Ia)， 其中 R3 为 5- 四唑基。
     在一个实施方案中， 该化合物具有式 (Ia)， 其中 R3a 为 OH。
     在一个实施方案中， 该化合物具有式 (Ia)， 其中 Ra 为氢。
     在特定的实施方案中， 该化合物具有式 (Ib) ：
     或其药学上可接受的衍生物， 其中 R6 为卤素 ； n 为 1-3 ； X3 为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基团， Q2 为烷基或卤代烷基 ； 和其他变量如 本文别处所述。
     在特定的实施方案中， 该化合物具有式 (Ic) ：
     或其药学上可接受的衍生物， 其中 n 为 1-3 ； X3 为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基， 其中该取代基当存在时选自 1 至 4 个 Q2 基团， Q2 为烷基或卤代烷基 ； 和其他变量如本文别处 所述。
     在特定的实施方案中， 该化合物具有式 (Id) ：
     或其药学上可接受的衍生物， 其中 X3 为取代或未取代的 C1-C3 亚烃基， 其中该取代 2 2 3 基当存在时选自 1 至 4 个 Q 基团， Q 为烷基或卤代烷基 ； R 为 CN、 C(O)OH、 C(O)NH2、 C(NH) NHOH 或 5- 四唑基 ； 和其他变量如本文别处所述。
     在特定的实施方案中， 本发明提供的化合物显示了在无细胞 GSK3 激酶测定中对 GSK3 不超过约 20μM， 在一个实施方案中不超过约 10μM、 不超过约 5μM 或不超过 1μM 的 IC50。在一个实施方案中， 本发明提供的化合物显示了与至少一种其它类型的激酶相比对 GSK3 具有选择性的抑制活性。
     在特定的实施方案中， 本发明提供的 GKS3 抑制剂基本没有抗菌活性或具有极低 的抗菌活性。该抗菌活性可通过本领域已知的估算受试化合物的最小抑制浓度 (MIC) 的 方法进行测定 ( 例如， E.Coli and/or S.aureus， Clinical andLaboratory Standards Institute.Methods for Dilution Antimicrobial SusceptibilityTests for Bacteria That Grow Aerobically ； Approved Standard-Sixth Edition ： CLSIdocument M7-A4. CLSI， Wayne， PA.(2003))。
     C. 化合物的制备
     本发明提供的化合物可通过如下所示的本领域技术人员已知的方法和类似于此 处实施例章节中所述的如下方法及这些方法的常规改变进行制备。
     Kyorin Pharmaceutical Co.， Ltd.， 日本未审查专利公布 S62-252772，
     Ube Industries， Ltd.， 日本未审查的专利公布 S63-264439，
     Bayer AG， 日本未审查的专利公布 H1-268679，
     Ihara Chemical Industry Co.， Ltd.， 日本未审查的专利公布 H10-70584，
     Daiichi Seiyaku Co.， Ltd.， 日本未审查的专利公布 S59-1489，
     Tokyo Tanabe Co.， Ltd.， 日本未审查的专利公布 S62-53987，
     F.Hoffinann-La Roche Ltd.， 日本未审查的专利公布 S63-132891， H。
     Koga 等人， J.Med.Chem.， 1980， 23， 1358，
     Y.Yoshida 等人， Synlett， 2003， 2139，
     I.Hayakawa 等人， Chem.Pharm.Bull， 1984， 32， 4907，
     S.Atarashi 等人， Chem.Pharm.Bull.， 1987， 35， 1986，
     S.Atarashi 等人， J.Heterocyclic Chem.， 1991， 28， 329，
     H.Egawa 等人， Chem.Pharm.Bull， 1986， 34， 4098，
     L.A.Mitscher 等人， J.Med.Chem.， 1987， 30， 2283，
     G.B.Mullen 等人， J.Med.Chem.， 1988， 31， 1694， J.S.Kiely 等人， J.Med.Chem.， 1988， 31， 2004， H.Ishikawa 等人， Chem.Pharm.Bull， 1989， 37， 2103， V.D.Parikh 等人， J.Heterocyclic Chem.， 1988， 25， 1567， H.Ishikawa 等人， Chem.Pharm.Bull， 1990， 38， 2459， P.Remuzon 等人， J.Med.Chem.， 1991， 34， 29， D.J.Augeri 等人， J.Heterocyclic Chem.， 1990， 27， 1509， T.Okada 等人， J.Heterocyclic Chem.， 1991， 28， 1067， D.T.W.Chu 等人， J.Heterocyclic Chem.， 1987， 24， 453， 以及 S.L.Dax 等人， J.Org.Chem.， 1992， 57， 744。 J.S.Kiely 等人， J.Heterocyclic Chem.， 1989， 26， 1675。 M.Fujita 等人， Chem.Pharm.Bull， 1996， 44， 987。 由本发明的通式 (1) 代表的化合物可通过合成 1 或常规方法的组合进行制备。 合成 1其中 X1a 为 X1 或 N-PG1(PG1 为保护基团 )， 而 A、 R2、 R 3、 R5a、 R5b、 R6、 Ra、 R b、 X1、 X2、 X3、 p 和 q 如上所述。
     保护基团 PG1 代表酰基基团 ( 例如乙酰基基团 )、 低级烷氧基羰基基团 ( 例如叔丁 氧基羰基基团 )、 芳氧基羰基基团 ( 例如， 任选地具有取代基的苯甲氧基羰基基团 )、 芳烷基 基团 ( 例如苄基基团和对甲氧基苄基基团 ) 或者甲硅烷基基团 ( 例如三甲基甲硅烷基基团 和叔丁基二甲基甲硅烷基基团 )。
     当通式 (2) 中的 X1a 代表 X1 时， 可采用碱 ( 例如三乙胺、 吡啶、 异丙基乙胺和 1， 8- 二 氮杂双环十一炔 ) 于合适的溶剂中 ( 例如， N， N- 二甲基甲酰胺、 二甲亚砜、 N- 甲基吡咯烷 酮、 甲苯、 乙腈、 四氢呋喃、 甲醇、 乙醇或其混合物 ) 或者在无溶剂下在室温至 180℃下持续 1-48 小时进行通式 (2) 和通式 (3) 向通式 (1) 的转化 ( 即， 流程 1-A)。 1a 1
     当通式 (2) 中的 X 代表了时 N-PG ， 从通式 (2) 和通式 (3) 向通式 (1) 的转化 ( 即， 流程 1-A) 可在上述流程之后采用一般脱保护方法实现 ( 例如 ProtectingGroups in Organic Synthesis(John Wily 和 Sons(1999) 中所述的方法 )。
     在由本发明的通式 (1) 代表的化合物中， 由通式 (Ib) 或 (Ic) 代表的化合物也可 通过合成 2 制备。
     合成 2
     其中 A、 Ra、 Rb、 R2、 R3b、 R5a、 R5b、 R6、 X1、 X2、 X3、 p 和 q 如上所述。
     可采用氰化物盐 ( 例如氰化钾和氰化钠 ) 于合适的溶剂中 ( 例如， N， N- 二甲基甲 酰胺和二甲亚砜 ) 在室温至 180℃下持续 1-72 小时进行通式 (Ia) 向通式 (Ib) 的转化 ( 即， 流程 2-A)
     可替代地， 可在合适的溶剂 ( 例如二苯醚、 均三甲基苯、 N， N- 二甲基甲酰胺、 二甲 亚砜、 甲苯、 乙腈、 四氢呋喃、 甲醇、 乙醇、 乙酸或其混合物 ) 中在室温至 250℃下持续 1-72 小时进行上述转化。该反应可在酸 ( 例如氢氯酸 ) 或铜盐 ( 例如氯化铜 ) 缺失或存在下进 行。
     由通式 (1a) 向通式 (1c) 的转化 ( 即， 流程 2-B) 可按照如下进行 ： 通式 (1a) 首先 与亚硫酰氯、 亚硫酰溴、 乙酸酐、 氯甲酸乙酯、 氯甲酸甲酯等在合适的溶剂 ( 例如 N， N- 二甲 基甲酰胺、 二氯甲烷、 氯仿、 四氢呋喃或其混合物 ) 中于 -15℃至室温下反应 5 分钟至 3 小 时。这将羧基基团转化为反应活性衍生化基团。该反应可在碱 ( 例如吡啶和三乙胺 ) 的存 在下进行。然后， 将该反应产物与通式 (4) 在碱 ( 例如吡啶和三乙胺 ) 存在下在合适的溶 剂 ( 例如 N， N- 二甲基甲酰胺、 二氯甲烷、 氯仿、 四氢呋喃或其混合物 ) 中在 0℃至 100℃的 温度下反应 30 分钟至 24 小时。
     可替代地， 所述转化可按如下进行 ： 将通式 (1a) 与通式 (4) 通过使用缩合剂 ( 例 如二环己基碳二亚胺、 3-(3- 二甲氨基丙基 )-1- 乙基碳二亚胺氯化物、 氰基膦酸二乙酯、 二 苯基磷酰叠氮化物和羰基二咪唑 ) 在合适的溶剂 ( 例如 N， N- 二甲基甲酰胺、 二氯甲烷、 氯 仿、 四氢呋喃或其混合物 ) 中于 0℃至 50℃的温度下反应 1-24 小时。该反应可在碱 ( 例如 吡啶、 三乙胺和 N- 甲基吗啡 ) 的存在或缺失下进行。
     在由本发明的通式 (1) 代表的化合物中， 由通式 (1d)、 (1e) 或 (1f) 代表的化合物 也可通过合成 3 制备。
     合成 3
     其中 A、 Ra、 Rb、 R2、 R5a、 R5b、 R6、 X1、 X2、 X3、 p 和 q 如上所述。
     由通式 (1ca) 至通式 (1d) 的转化 ( 即， 流程 3-A) 可按如下进行 ： 将通式 (1ca) 与 脱羟基剂 ( 例如三氟乙酸酐和三氯氧磷 ) 在碱 ( 吡啶和三乙胺 ) 的存在下于合适的溶剂 ( 例如二氯甲烷、 氯仿、 四氢呋喃及其混合物 ) 中在 0℃至 50℃的温度下反应 1-24 小时。反 应后， 该反应产物可根据需要以碱 ( 例如碳酸钾、 氢氧化钠和 NH 硅胶 ) 处理。
     由通式 (1d) 向通式 (1e) 的转化 ( 即， 流程 3-B) 可采用叠氮化物 ( 例如叠氮化钠 和三甲硅烷基叠氮化物 ) 于合适的溶剂 ( 例如 2- 丙醇、 水及其混合物 ) 中在锌盐 ( 例如氯 化锌和溴化锌 ) 的存在下在室温至 50℃下进行 1-24 小时。
     通式 (1d) 向通式 (1f) 的转化 ( 即， 流程 3-C) 可采用羟胺在合适的溶剂 ( 例如乙 醇、 甲醇、 N， N- 二甲基甲酰胺、 四氢呋喃或其混合物 ) 中在 0℃至回流温度下进行 1-24 小 时。该反应可在碱 ( 例如重碳酸钾、 碳酸钠、 吡啶和三乙胺 ) 的存在或缺失下进行。
     在合成 1 中， 由通式 (2) 代表的化合物可通过合成 4 生成。
     合成 4
     其中 A、 R2、 R3、 R5a、 R5b、 R6、 X1a、 X2、 p 和 q 如上所述。通式 (5) 和通式 (6) 至通式 (7) 的转化 ( 即， 流程 4-A) 可按如下进行 ： 将通式 (5) 与乙酸酐和邻酸酯 ( 例如邻甲酸乙酯和邻乙酸乙酯 ) 的混合物在 100℃至 150℃下反 应 1-8 小时， 然后将反应产物与通式 (6) 在合适的溶剂 ( 例如甲苯、 四氢呋喃、 甲醇、 乙醇、 叔丁醇或其混合物 ) 中在室温下反应 1-24 小时。该反应可在碱 ( 碳酸钾、 碳酸钠、 t-BuOK、 t-BuONa、 三乙胺和吡啶 ) 的存在或缺失下进行。
     由通式 (7) 至通式 (8) 的转化 ( 即， 流程 4-B) 可采用碱 ( 例如氢化钾、 氢化钠、 碳 酸钾、 碳酸钠、 t-BuOK 和 t-BuONa) 或氟化物盐 ( 例如氟化钾和氟化钠 ) 于合适的溶剂 ( 例 如 N， N- 二甲基甲酰胺、 二甲亚砜、 四氢呋喃或其混合物 ) 中在 0℃至 150℃下进行 1-24 小 时。
     由通式 (8) 至通式 (2) 的转化 ( 即， 流程 4-C) 可在碱 ( 例如三乙胺、 吡啶、 异丙基乙胺和 1， 8- 二氮杂双环十一炔 ) 的存在下于合适的溶剂 ( 例如 N， N- 二甲基先按、 二甲亚 砜、 甲苯、 乙腈、 四氢呋喃、 甲醇、 乙醇或其混合物 ) 中或无溶剂状态下在室温至 180℃下进 行 1-24 小时。
     在通式 (2) 代表的化合物中， 由通式 (2a) 代表的化合物也可通过合成 5 制备。
     合成 5
     其中 A、 R2、 R3、 R6、 X1a、 X2、 p 和 q 如上所述。
     由通式 (10) 和通式 (6) 至通式 (11) 的转化 ( 即， 流程 5-A) 可通过与流程 4-A 类 似的方法进行。
     由通式 (11) 至通式 (12) 的转化 ( 即， 流程 5-B) 可通过与流程 4-B 类似的方法进 行。
     由通式 (12) 至通式 (13) 的转化 ( 即， 流程 5-C) 可通过一般硝化例如在浓缩的硫 酸中使用硝化试剂 ( 例如硝酸钾、 硝酸钠和硝酸 ) 的反应进行。该反应可在 0℃至 50℃进 行 1-8 小时。
     由通式 (13) 至通式 (2a) 的转化 ( 即， 流程 5-D) 可采用金属 ( 例如还原铁、 锡和 锌 ) 在酸 ( 例如氢氯酸和乙酸 ) 的存在下于合适的溶剂 ( 例如四氢呋喃、 甲醇、 乙醇、 水或 其混合物 ) 中或在无溶剂状态下在室温至 120℃下进行 1-48 小时。
     可替代地， 可通过采用金属催化剂 ( 例如披钯碳、 披铂活性炭、 氧化的铂和兰尼 镍 ) 于合适的溶剂 ( 例如甲醇、 乙醇、 乙酸乙酯、 四氢呋喃、 N， N- 二甲基甲酰胺、 乙酸及其混 合物 ) 中在室温至 80℃下氢化 1-24 小时进行该转化。该反应可在常压至 0.5Mpa 的氢气氛 围中进行。
     此外， 可通过采用连二亚硫酸钠在合适的溶剂 ( 例如水、 甲醇、 乙醇、 四氢呋喃或 其混合物 ) 中在室温至 100℃下还原 1-24 小时进行转化。
     在合成 4 或合成 5 中， 通式 (15)、 (16)、 (17) 和 (18) 的化合物也可通过合成 6 制 备。
     合成 6
     其中 R5 为氢、 NO2 或 R5aR5bN-， 而 A、 Ra 、 Rb、 R2、 R6、 X1a、 X2、 p 和 q 如上所述。 由通式 (14) 至通式 (15) 的转化 ( 即， 流程 6-A) 可通过与流程 2-B 类似的方法进 由通式 (15) 至通式 (16) 的转化 ( 即， 流程 6-B) 可通过与流程 3-A 类似的方法进 由通式 (16) 至通式 (17) 的转化 ( 即， 流程 6-C) 可通过与流程 3-B 类似的方法进 由通式 (16) 至通式 (18) 的转化 ( 即， 流程 6-D) 可通过与流程 3-C 类似的方法进 在合成 5 中通式 (13) 代表的化合物中， 由通式 (13b) 代表的化合物也可通过合成 合成 7行。
     行。
     行。
     行。
     7 制备。
     其中 R3aa 为烷氧基， X 为卤素， 而 A、 R2、 R5、 R6、 X1a、 X2、 p 和 q 如上所述。
     由通式 (13a) 和通式 (19) 至通式 (20) 的转化 ( 即， 流程 7-A) 可在合适的溶剂 ( 例如四氢呋喃、 二乙醚或其混合物 ) 中在 -78℃至 0℃的温度下进行 1-24 小时。该转化可
     在铜盐 ( 例如碘化铜和氯化铜 ) 缺失或存在下进行。
     通式 (20) 向通式 (13b) 的转化 ( 即， 流程 7-B) 可采用二氧化锰在合适的溶剂 ( 例 如二氯甲烷、 氯仿、 甲苯、 乙醇或其混合物 ) 中在室温至 130℃下进行 1-120 小时。
     可替代地， 所述转化可采用醌化合物 ( 例如二氯二氰基 - 对 - 苯醌和四氯苯醌 ) 在室温至 130℃下进行 1-24 小时。
     在合成 5 中通式 (13) 代表的化合物中， 由通式 (13d) 代表的化合物可通过合成 8 制备。
     合成 8
     其中 A、 R2、 R3、 X1a、 X2、 p 和 q 如上所述。
     由通式 (13c) 向通式 (21) 的转化 ( 即， 流程 8-A) 可采用碳酸铵在合适的溶剂 ( 例如 N， N- 二甲基甲酰胺、 二甲亚砜、 乙醇、 甲醇、 水或其混合物 ) 中在室温至 -78℃下进行 1-72 小时。
     由通式 (21) 至通式 (13d) 的转化 ( 即， 流程 8-B) 可采用亚硝酸酯 ( 例如， 亚硝 酸 叔丁酯、 亚硝酸戊酯、 亚硝酸异戊酯 ) 在铜盐 ( 例如氯化铜和溴化铜 ) 存在下在合适的溶剂 如乙腈中在 0℃至 100℃下进行 1-48 小时。
     可替代地， 所述转化可按如下进行 ： 将通式 (21) 与亚硝酸盐 ( 例如亚硝酸钾和亚 硝酸钠 ) 在酸 ( 例如氢氯酸、 硫酸和乙酸 ) 存在下在合适的溶剂 ( 例如， 四氢呋喃、 1， 4- 二 噁烷、 H2O 或其混合物 ) 中在 0℃至室温下反应 5 分钟至 1 小时， 然后， 用铜盐 ( 例如氯化 铜和溴化铜 ) 在合适的溶剂 ( 例如， 例如， 四氢呋喃、 1， 4- 二噁烷、 H2O 或其混合物 ) 中在 0℃ -100℃下处理该反应产物 1-48 小时。
     在 合 成 1-8 中， 具 有 代 表 N-PG1 的 取 代 基 X1a 的 化 合 物 可 通 过 常 规 方 法 如 Protecting Groups in Organic Synthesis(John Wily and Sons(1999)) 中所述的方法转 化为取代基 X1a 为 NH 的化合物。
     在合成 1-8 中， 具有代表芳烷基基团 ( 其任选地具有取代基 ) 的取代基 R5a 和 / 或 R5b 的化合物可通过常规方法， 例如， 通过采用酸 ( 例如氢氯酸和三氟乙酸 )、 无机碱 ( 例如 碳酸钾和氢氧化钠 )、 有机碱 ( 例如肼 )、 季铵盐 ( 例如四丁基氟化铵 ) 和金属 ( 例如披钯 5a 碳 ) 的催化还原转化为取代基 R 和 / 或 R5b 为 H 的化合物。
     在合成 1-8 中， 具有代表烷氧基羰基基团的取代基 R3 的化合物可通过常规方法， 例如无溶剂反应或在合适的溶剂 ( 例如甲醇、 乙醇、 四氢呋喃、 水或其混合物 ) 在碱 ( 例如 氢氧化钾、 氢氧化钠、 碳酸钾和碳酸钠 ) 或酸 ( 例如硫酸、 氢氯酸和乙酸 ) 存在下在室温至 3 120℃下反应 1-48 小时转化为取代基 R 为 COOH 的化合物。
     由通式 (1) 表示的化合物的光学异构体可通过前述合成 1-8 或常规方法的组合采
     用光学活性起始原料制备。
     可替代地， 这些光学异构体可由通式 (1) 代表的外消旋体通过采用光学活性酸或 碱的分步结晶或采用手性支持物的色谱制备得到。
     以下显示了化合物制备的某些示例性反应方案 ：
     合成 9
     合成 10在一个实施方案中， 合成 9 的产物为 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(2-( 吡啶 -2- 基 氨基 ) 乙氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸 (8)， 如合 成 11 所示。
     合成 11
     D. 药物组合物
     本发明提供的药物组合物包含治疗活性量的一种或多种此处所述的可用于预防、 治疗或改善 GSK-3 介导的疾病的一种或多种症状的化合物。
     本发明提供的化合物的药物组合物可全身或局部或口服或肠胃外施用， 例如直 肠、 皮下、 肌肉内、 静脉或经皮施用。
     所述组合物包含一种或多种本发明提供的化合物。 所述化合物可被配制成适当的 药物制剂， 例如用于口服施用的溶液、 悬浮液、 片剂、 分散片剂、 丸剂、 胶囊、 颗粒、 粉末、 细微 粉末、 注射剂、 缓释制剂或酏剂， 或者用于肠胃外施用的无菌溶液或悬浮液， 以及配制为透 皮贴剂制剂和干粉吸入器。在特定的实施方案中， 本发明提供的组合物可根据常规药物制 备技术通过添加常规赋形剂、 填充剂、 结合剂、 崩解剂、 涂层剂、 糖衣剂、 PH 调节剂、 助 溶剂 或者水性或非水性溶剂进行制备。一般而言， 上文所述的抗体通过本领域公知的技术和程 序 ( 例如， 参见 Ansel Introduction to Pharmaceutical DosageForms， Seventh Edition 1999) 被配制成为药物组合物。
     在所述组合物中， 有效量的一种或多种化合物或其药学上可接受的衍生物与适当 的药物载体或溶媒相混合。如上所述， 所述化合物可在配制前被衍生为相应的盐、 酯、 烯醇 醚或酯、 碱、 溶剂化物、 水合物或前药。所述化合物在所述组合物中的浓度能够在施用时有 效递送能够治疗、 预防或改善 GSK-3 介导的疾病的一种或多种症状的量。
     所述组合物通常被配制为可进行单剂量施用。为了配制组合物， 可将一定重量百 分比的化合物以使所治疗的疾病被减轻或改善的有效浓度溶解、 悬浮、 分散或以其它方式 混合在选定的溶媒中。 适用于施用本发明提供的化合物的药物载体包括本领域技术人员已
     知的适于特定施用模式的任意载体或溶媒。
     此外， 所述化合物可配制为所述组合物中的单一药物活性成分， 或者可联合其它 活性成分。包含靶向组织的脂质体 ( 例如， 靶向肿瘤的脂质体 ) 的脂质体悬浮液也可被用 作药学上可接受的载体。这些可通过本领域技术人员已知的方法进行制备。例如， 脂质体 制剂可参照本领域已知的方法进行制备。简单而言， 可通过在烧瓶中干燥蛋磷脂酰胆碱和 脑磷脂酰丝氨酸 ( 摩尔比 7 ∶ 3) 形成如多层囊泡 (MLV) 等脂质体。添加不含二价阳离子 的磷酸盐缓冲液 (PBS) 中的本发明化合物溶液， 然后振荡烧瓶直至脂质膜被分散。洗涤所 得的囊泡以去除未封装的化合物， 离心成为圆球， 然后重悬浮于 PBS。
     所述活性化合物以足以显示治疗有用效果、 且不对所治疗患者产生不想要的副作 用的有效量包含在药学上可接受的载体中。 所述治疗有效量浓度可通过在此处所述的体外 和体内系统中测试化合物， 然后从其外推为人用剂量进行经验确定。
     在所述药物组合物中的活性化合物的浓度将取决于所述活性化合物的吸收、 失活 和排泄速率， 所述化合物的物理化学特性， 给药方案， 施用量以及本领域技术人员已知的其 它因素。例如， 所述递送的量足以改善 GSK- 介导的疾病的一种或多种症状。
     在特定的实施方案中， 治疗有效的剂量应当形成约 0.1ng/ml 至约 50-100μg/ml 的活性成分血清浓度。在一个实施方案中， 所述药物组合物提供了约 0.001mg 至约 2000mg 化合物 / 公斤体重 / 天的剂量。可制备药物单位剂形式以提供每个剂量单位形式约 1mg 至 约 1000mg， 在特定的实施方案中， 从约 10mg 至约 500mg 的必要活性成分或必要成分组合。
     所述活性成分可立即施用， 或者可被分为一定量的更小剂量， 从而以一定的时间 间隔施用。 应理解 ： 确切的剂量和治疗时间与待治疗疾病相关联， 并可通过已知的测试方案 凭经验确定， 或者可从体内或体外测试数据推断得到。应注意浓度和剂量值也可随着待缓 和的疾病的严重性而有所变化。 应当进一步理解 ： 对于任何特定的个体， 应根据个体需求和 施用或管理施用所述组合物的人员的专业判断随时间调整具体的剂量方案， 且本发明提供 的浓度范围仅作为示例， 无意对所主张的组合物的范围或实施构成限制。
     药学上可接受的衍生物包括酸、 碱、 烯醇醚或酯、 盐、 酯、 水合物、 溶剂化物和前药 形式。可通过选择衍生物使得其药物代谢动力学属性优于相应的中性化合物。
     因此， 有效量的此处所述的一种或多种所述化合物或其药学上可接受的衍生物与 适当的用于全身、 表面或局部施用的药物载体或溶媒混合以形成药物组合物。所包含的化 合物的量能够有效治疗或预防激酶介导的， 包括但不限于 GSK-3 介导的疾病， 或者改善其 一种或多种症状。活性化合物在所述组合物中的浓度将取决于该活性化合物的吸收、 失活 和排泄速率， 给药方案， 施用量， 具体的制剂以及本领域技术人员已知的其它因素。
     所述化合物预期以适当的途径施用， 包括， 口服、 肠胃外、 直肠、 表面和局部施用。 对于口服施用， 可配制胶囊和片剂。所述组合物呈液态、 半液态或固态形式， 并可配制为适 于各种施用途径的形式。
     用于肠胃外、 皮肤内、 皮下或表面应用的溶液或悬浮液可包括如下任意成分 ： 无菌 稀释剂， 例如注射用水， 盐溶液， 不挥发性油， 聚乙二醇， 甘油， 丙二醇， 二甲基乙酰胺或其它 合成溶剂 ； 抗菌剂， 例如苯甲醇和甲基对羟苯甲酸酯 ； 抗氧化剂， 例如抗坏血酸和亚硫酸氢 钠； 螯合剂， 例如乙二胺四乙酸 (EDTA) ； 缓冲液， 例如醋酸盐， 柠檬酸盐和磷酸盐 ； 以及调节 张力的药剂， 例如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可装入由玻璃、 塑料或其它适当材料制成的安瓿、 一次性注射器或者单或多剂量的小瓶中。
     例如， 当化合物显示溶解性不足时， 可使用增溶化合物的方法。 这种方法已为本领 域技术人员所知， 并包括但不限于使用共溶剂， 例如二甲亚砜 (DMSO)， 使用表面活性剂， 例 如 或者溶解于碳酸氢钠水溶液。
     在混合或添加所述化合物时， 所得的混合物可以是溶液、 悬浮液、 乳液等。所得混 合物的形式取决于多种因素， 包括目标施用模式以及该化合物在所选载体或溶媒中的可溶 性。有效浓度足以改善待治疗的疾病、 紊乱或病症的症状， 并可通过经验确定。
     所述药物组合物可作为包含适当量所述化合物或其药学上可接受的衍生物的单 位剂型 ( 例如， 片剂、 胶囊、 丸剂、 粉末、 颗粒、 无菌肠胃外溶液或悬浮液、 和口服溶液或悬浮 液、 以及油水乳液 ) 施用至人和动物。所述治疗活性化合物及其衍生物被配制为单位剂型 或多重剂型进行施用。 此处所用的单位剂型指本领域已知的适用于人和动物个体并单独包 装的物理分散单元。 每个单位剂量包含了足以形成所需治疗效果的预定量的所述治疗活性 化合物， 以及所需的药物载体、 溶媒或稀释剂。 单位剂型的示例包括安瓿和注射器以及单独 包装的片剂和胶囊。单位剂型可分成若干份施用， 或者施用多个单位剂型。多重剂型是包 装在单独容器中的多个相同的单位剂型， 并以分离的单位剂型施用。示例性的多重剂型包 括小瓶， 片剂或胶囊的瓶子或品脱或加仑瓶。 因此， 多重剂型是不被分离包装的多个单位剂 型。 还可制备缓释制剂。缓释制剂的适当示例包括， 含有本发明提供的所述化合物 的固体疏水聚合物的半透过性基质， 其中所述基质为固定形状的物品， 例如， 膜或微胶囊。 缓释基质的示例包括聚酯、 水凝胶 ( 例如， 聚 (2- 羟乙基 - 甲基丙烯酸甲酯 )， 或聚 ( 乙烯 醇 ))、 聚乳酸、 L- 谷氨酸和乙基 -L- 谷氨酸盐的共聚物、 非降解乙烯 - 醋酸乙烯酯、 可降解 TM 乳酸 - 羟基乙酸共聚物如 LUPRONDEPOT ( 由乳酸 - 羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的 可注射微球 ) 和多聚 -D-(-)-3- 羟丁酸。乙烯 - 醋酸乙烯酯和乳酸 - 羟基乙酸等聚合物能 够在 100 天以上释放分子， 特定的水凝胶可在更短的时间内释放蛋白。当包于胶囊内的化 合物在身体内长时间存留时， 它们可能由于暴露在 37℃的潮湿环境下而变性或聚集， 从而 导致生物活性的丧失及其结构的可能改变。 可根据所涉及的作用机制设计合理的稳定化策 略。例如， 如果据发现所述聚集机制是通过硫 - 二 硫化物交换形成分子间 S-S 键， 则可通 过修饰硫氢基残基， 从酸性溶液冻干， 控制含水量， 使用适当的添加剂， 和形成特定的聚合 物基质组合物实现稳定化。
     可制备包含 0.005％至 100％的活性成分， 其余为无毒性载体的剂型或组合物。对 于口服施用， 可通过加入任意常用的赋形剂 ( 例如， 药物级甘露醇、 乳糖、 淀粉、 硬脂酸镁、 滑石、 纤维素衍生物、 明胶、 琼脂、 果胶、 阿拉伯胶、 橄榄油、 芝麻油、 可可脂、 乙二醇、 交联羧 甲基纤维素钠、 葡萄糖、 蔗糖、 碳酸镁或糖精钠 ) 形成药学上可接受的非毒性组合物。这种 组合物包括溶液、 悬浮液、 片剂、 胶囊、 粉剂和缓释剂型， 例如， 但不限于， 植入物和微胶囊化 的递送系统， 以及可生物降解的生物相容性聚合物， 例如胶原蛋白、 乙烯醋酸乙烯酯、 聚酸 酐、 聚乙醇酸、 聚原酸酯、 聚乳酸及其它。 制备这些组合物的方法已为本领域技术人员所知。 组合物可包含约 0.001％ -100％的活性成分， 在特定的实施方案中， 包含约 0.1-85％或约 75-95％的活性成分。
     所述活性化合物或药学上可接受的衍生物可与防止该化合物被身体迅速清除的载体 ( 例如延时配方或涂层 ) 一起制备。
     所述组合物可包含其它活性化合物以获得所需的属性组合。为治疗或预防目的， 本发明提供的所述化合物或此处所述其药学上可接受的衍生物还可与另一本领域已知对 此处涉及的一种或多种疾病或医学病症 ( 例如， GSK-3 介导的疾病 ) 有治疗价值的药理试 剂一起有益地施用。应理解， 这种联合疗法构成了本发明提供的所述组合物和治疗方法的 另一方面。
     本 发 明 提 供 的 无 乳 糖 组 合 物 可 包 含 本 领 域 公 知 的 以 及 如 在 美 国 药 典 (USP) SP(XXI)/NF(XVI) 中列举的赋形剂。 一般而言， 无乳糖组合物包含药上学相容且药学上可接 受的量的活性成分、 结合剂 / 填充剂以及润滑剂。示例性的无乳糖剂型包含活性成分、 微晶 纤维素、 预胶化淀粉以及硬脂酸镁。
     本发明进一步包括包含本发明提供的化合物的无水药物组合物和剂型。例如， 添加水 ( 例如， 5％ ) 是制药领域广泛采用的一种模拟长期贮存以测定如保质期或制剂长 期稳定性等特性的方法。例如， 参见 Jens T.Carstensen， DrugStability ： Principles & Practice， 2d.Ed.， Marcel Dekker， NY， NY， 1995， 第 379-80 页。实际上， 水和热可加速一些 化合物的分解。 因此， 水的作用对制剂可能具有非常重要的影响， 因为在制剂的生产、 处理、 包装、 贮存、 运输以及使 用中常遇到水分和 / 或湿气。
     此处所述的无水药物组合物和剂型可采用无水或低含水量的成分并在低水分或 低湿度条件下制备。在特定的实施方案中， 包含了乳糖和至少一种具有伯胺或仲胺的活性 成分的药物组合物和剂型在生产、 包装和 / 或贮存过程中在遇到水分和 / 或湿气时可以是 无水的。
     无水药物组合物的制备和贮存应当保持其无水性质。相应的， 在特定的实施方案 中， 可以使用本领域已知的防水材料包装无水组合物从而使之包含在适当的制剂试剂盒 中。合适包装的示例包括但不限于密封箔、 塑胶、 单位剂量容器 ( 例如， 小药水瓶 )、 泡罩包 装以及条状包装。
     口服剂型
     口服药物剂型可以是固体、 凝胶或液体。 固体剂型为片剂、 胶囊、 颗粒和散装粉剂。 口服片剂的类型包括压缩的、 可咀嚼的片剂以及包被有肠溶衣、 糖衣或膜的片剂。 胶囊可以 是硬胶囊或软凝胶胶囊， 而颗粒和粉末可以非泡腾或泡腾形式提供， 并混合其它本领域技 术人员已知的成分。
     在特定的实施方案中， 所述制剂为固体剂型， 例如胶囊或片剂。 所述片剂、 丸剂、 胶 囊、 锭剂等可包含如下任意成分或性质类似的化合物 ： 结合剂、 稀释剂、 崩解剂、 润滑剂、 助 流剂、 甜味剂以及调味剂。
     结合剂的示例包括微晶纤维素、 黄芪树胶、 葡萄糖溶液、 阿拉伯胶浆、 明胶溶液、 蔗 糖和淀粉糊。润滑剂包括滑石、 淀粉、 硬脂酸镁或钙、 石松子和硬脂酸。稀释剂包括， 例如， 乳糖、 蔗糖、 淀粉、 高岭土、 盐、 甘露醇和磷酸二钙。助流剂包括但不限于胶体二氧化硅。崩 解剂包括交联羧甲基纤维素钠、 淀粉乙醇酸钠、 褐藻酸、 玉米淀粉、 马铃薯淀粉、 膨润土、 甲 基纤维素、 琼脂和羧甲基纤维素。着色剂包括， 例如， 任意批准的水溶性 FD 和 C 染料， 其混 合物 ； 以及悬浮在水合氧化铝中的水不溶的 FD 和 C 染料。甜味剂包括蔗糖、 乳糖、 甘露醇和 人工甜味剂 ( 如糖精 ) 和任何数量的喷雾干燥调味料。调味剂包括从水果等植物中提取的天然调味料， 以及能产生快感的合成化合物的混合物， 例如， 但不仅限于， 薄荷和水杨酸甲 酯。 润湿剂包括丙二醇单硬脂酸酯， 山梨糖醇酐单油酸酯， 二甘醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月 桂酸醚。肠溶衣包括脂肪酸、 脂肪、 蜡、 虫胶、 氨化虫胶和醋酸纤维素邻苯二甲 酸酯。膜覆 层包括羟乙基纤维素、 羧甲基纤维素钠、 聚乙二醇 4000 和醋酸纤维素邻苯二甲酸。
     当需要口服施用时， 所述化合物可提供于在胃内的酸性环境中对其进行保护的组 合物中。 例如， 所述组合物可配制在能在胃中保持完整性， 并在肠中释放所述活性化合物的 肠溶衣中。所述组合物联合解酸剂或其它该类成分进行配制。
     当所述剂量单位形式为胶囊时， 除了上述类型的物质外， 它可包含液体载体 ( 例 如脂肪油 )。此外， 剂量单位形式可包含各种可改变该剂量单位的物理形式的其它物质， 例如， 糖衣和其它肠溶剂。所述化合物还可作为酏剂、 悬浮液、 糖浆、 糯米纸囊剂、 喷洒剂 (sprinkle)、 口香糖等施用。糖浆中除了所述活性化合物外可包含作为甜味剂的蔗糖和某 些防腐剂、 染料以及着色剂和调味剂。
     所述活性物质还可与其它不损害所需作用的活性物质混合， 或者与补充该所需作 用的物质 ( 例如解酸剂、 H2 阻断剂和利尿剂 ) 相混合。所述活性成分为此处所述的化合物 或其药学上可接受的衍生物。可包含更高浓度， 最高为质量比约 98％的所述活性成分。
     包含在片剂中的药学上可接受的载体为结合剂、 润滑剂、 稀释剂、 崩解剂、 着色剂、 调味剂以及润湿剂。肠溶片剂由于肠溶衣而能抵御胃酸的作用， 并在中性或碱性的肠内溶 解或崩解。 糖衣片为压缩片剂， 其中应用了不同层的药学上可接受的物质。 包膜片为压缩片 剂， 其上包被了聚合物或其它适用的覆层。复压片为采用前述药学上可接受的物质通过一 个以上压缩循环压制的片剂。着色剂也可用于上述剂型。调味剂和甜味剂可用于压缩片、 糖衣片、 复压片和咀嚼片。调味和甜味剂可特别用于咀嚼片和锭剂的形成。
     液体口服剂型包括水溶液、 乳液、 悬浮液、 溶液和 / 或从非泡腾颗粒复原的悬浮液 以及从泡腾颗粒复原的泡腾制剂。水溶液包括， 例如， 酏剂和糖浆。乳液或者为水包油型， 或者为油包水型。
     酏剂为透明、 甜味的水醇制剂。用于酏剂的药学上可接受的载体包括溶剂。糖浆 为糖 ( 例如， 蔗糖 ) 的浓缩水溶液， 并可包含防腐剂。乳液是一种两相体系， 其中一种液体 以细小颗粒形式完全分散在另一种液体中。用于乳液的 药学上可接受的载体为非水性液 体、 乳化剂和防腐剂。悬浮液使用药学上可接受的悬浮剂和防腐剂。用于将复原为液体口 服剂型的非泡腾颗粒的药学上可接受的物质包括稀释剂、 甜味剂和润湿剂。用于将复原为 液体口服剂型的泡腾颗粒的药学上可接受的物质包括有机酸和二氧化碳源。 着色剂和调味 剂可用于上述所有剂型。
     溶剂包括甘油、 山梨醇、 乙醇和糖浆。 防腐剂的示例包括甘油、 尼泊金甲酯和丙酯、 苯甲酸、 苯甲酸钠和乙醇。 用于乳液的非水性液体的示例包括矿物油和棉花籽油。 乳化剂的 示例包括明胶、 阿拉伯树胶、 斑脱土， 以及表面活性剂， 例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。 悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、 胶质、 黄芪胶、 硅酸镁铝以及阿拉伯树胶。稀释剂包括乳糖和 蔗糖。甜味剂包括蔗糖、 糖浆、 甘油和人工甜味剂如糖精。润湿剂包括丙二醇单硬脂酸酯、 山梨糖醇酐单油酸酯、 二甘醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂酸醚。有机酸包括柠檬酸和酒石 酸。二氧化碳源包括重碳酸钠和碳酸钠。着色剂包括任意批准的水溶性 FD 和 C 染料， 及其 混合物。调味剂包括从水果等植物中提取的天然调味料， 以及能产生愉快味觉的合成化合物的混合物。
     对于固体剂型， 所述含于例如碳酸丙烯、 植物油或甘油三酸酯中的溶液或悬浮液 可装填在凝胶胶囊中。这种溶液及其制备和胶囊化披露于美国专利 4,328,245 ； 4,409,239 和 4,410,545。对于液体剂型， 所述液体 ( 例如， 含于聚乙二醇 ) 可被足量的药学上可接受 的液体载体 ( 例如， 水 ) 稀释， 从而易于定量施用。
     可替代地， 液体或半固体口服制剂可通过将所述活性化合物或盐溶解或分散在植 物油、 甘油、 甘油三酸酯、 丙二醇酯 ( 例如碳酸丙二酯 ) 和其它这类载体中， 并将这些溶液或 悬浮液包封于硬或软凝胶胶囊壳中得到制备。 其它有用的制剂包括但不限于包含本发明提 供的化合物， 二烷基化单或聚亚烷基二醇， 包括但不限于 1.2， 2- 二甲氧基甲烷、 二甘醇二 甲醚、 三甘醇二甲醚、 四甘醇二甲醚、 聚乙二醇 -350- 二甲醚、 聚乙二醇 -550- 二甲醚、 聚乙 二醇 -750- 二甲醚， 其中 350、 550 和 750 指该聚乙二醇的大约平均分子量， 以及一种或多种 抗氧化剂， 例如二丁基羟基甲苯 (BHT)、 二丁基羟基茴香醚 (BHA)、 没食子酸丙酯、 维生素 E、 对苯二酚、 羟基香豆素、 乙醇胺， 卵磷脂、 脑磷脂、 抗坏血酸、 苹果酸、 山梨糖醇、 磷酸、 硫二丙 酸及其酯类、 和二硫代氨基甲酸盐的 制剂。
     其它的制剂包括但不限于包含药学上可接受的缩醛的水醇溶液。 在这类制剂中所 用的醇为具有一个或多个羟基基团的任意药学上可接受的水混溶溶剂， 包括但不限于丙二 醇和乙醇。缩醛包括但不限于低级烷基醛 ( 例如乙醛二乙缩醛 ) 的二 ( 低级烷基 ) 缩醛。
     在所有的实施方案中， 片剂和胶囊制剂可参照本领域技术人员的已知技术进行包 被， 从而改变或维持所述活性成分的溶解。因此， 例如， 它们可以用常规的可肠内消化的包 衣 ( 例如水杨酸苯酯， 蜡和醋酸纤维素邻苯二甲酸 ) 进行包被。
     可注射物、 溶液和乳液
     本发明也预期肠胃外施用， 其一般特征为通过皮下、 肌肉或静脉注射。可注射物 可制备为常规形式， 可以是液体溶液或悬浮液， 适于在注射前配制为溶液或悬浮液的固体 形式， 或者作为乳液。适用的赋形剂为， 例如， 水、 盐水、 右旋糖、 甘油或乙醇。此外， 根据需 要， 待施用的所述药物组合物还可包含微量的无毒性辅助物质， 例如润湿或乳化剂、 pH 缓 冲剂、 稳定剂、 助溶剂、 以及其它该类药剂， 例如， 醋酸钠、 山梨醇单月桂酸酯、 油酸三乙醇胺 以及环式糊精。此处还预期通过缓慢释放或持续释放系统从而维持恒定剂量水平的灌输。 简单而言， 本发明提供的化合物被分散在固相内部基质 (solidinner matrix)， 例如聚甲基 丙烯酸甲酯、 聚丁基丙烯酸甲酯、 塑化或未塑化聚氯乙烯、 塑化尼龙、 塑化聚乙醇对苯、 天然 橡胶、 聚异戊二烯、 聚异丁烯、 聚丁二烯、 聚乙烯、 乙烯醋酸乙烯共聚物、 硅橡胶、 聚二甲基硅 氧烷、 碳酸盐岩有机硅共聚物、 亲水聚合物例如丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的水凝胶、 胶原蛋 白、 交联聚乙烯醇和部分交联水解聚醋酸乙烯酯中， 该固相内部基质被不溶于体液的外部 聚合物膜 ( 如聚乙烯、 聚丙烯、 聚二甲基硅氧烷、 氯丁橡胶、 氯化聚乙烯、 聚氯乙烯、 氯乙烯 与醋酸乙烯酯共聚物、 偏二氯乙烯、 乙烯和丙烯、 离子聚对苯二甲酸乙二醇酯、 丁基橡胶、 环 氧氯丙烷橡胶、 乙烯 / 乙烯醇共聚物、 乙烯 / 醋酸乙烯 / 乙烯醇三聚物、 以及乙烯 / 乙烯氧 基醇共聚物 ) 所包围。所述化合物在释放速率控制步骤中扩散通过所述外部聚合物膜。在 这类肠胃外组合物中包含的活性化合物的比例高度依赖于它的特性性质， 以及该化合物的 活性和个体需求。
     所述组合物的肠胃外施用包括静脉、 皮下和肌肉施用。肠胃外施用的制剂包括易于注射的无菌溶液、 无菌干燥可溶性产品 ( 例如冻干粉 )、 易于在使用前与溶剂混合的制剂 ( 例如可皮下注射片剂 )、 易于注射的无菌悬浮液、 易于在使用前与溶媒混合的无菌干燥可 溶性产品以及无菌乳液。所述溶液可以是水性溶液或非性水溶液。
     在静脉施用时， 适用的载体包括生理盐水或磷酸缓冲盐 (PBS)， 以及包含增厚剂和 助溶剂 ( 例如， 葡萄糖、 聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物 ) 的溶液。
     用于肠胃外制剂的药学上可接受的载体包括水性溶媒、 非水性溶媒、 抗菌剂、 等张 剂、 缓冲液、 抗氧化剂、 局部麻醉剂、 悬浮剂和分散剂、 乳化剂、 掩蔽剂或螯合剂、 以及其它药 学上可接受的物质。
     水性溶媒的示例包括氯化钠注射液、 林格注射液、 等渗右旋糖注射液、 无菌注射用 水、 右旋糖和乳酸盐林格注射液。非水性肠胃外溶媒包括植物来源的不挥发性油、 棉籽油、 玉米油、 芝麻油和花生油。应向包含苯酚或甲酚、 汞制剂、 苯甲醇、 氯丁醇、 甲基和丙基对羟 基苯甲酸酯、 硫柳汞、 苯扎氯铵和苄索氯铵的包装于多剂量容器的肠胃外制剂添加抑菌或 抑真菌浓度的抗菌剂。等张剂包括氯化钠和右旋糖。缓冲液包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧 化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。悬浮和分散剂包括羧甲基纤维素钠， 羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯酮。乳化剂包括聚山梨醇酯 80( 80)。金属离 子的掩蔽和螯合剂包括 EDTA。药学上可接受的载体还包括用于水混容性溶媒的乙醇、 聚乙 二醇和丙二醇 ； 以及用于 pH 调节的氢氧化钠、 盐酸、 柠檬酸或乳酸。 可调节所述药学活性化合物的浓度， 使得注射提供可生成所需药理作用的有效 量。如本领域所知， 确切剂量取决于该患者或动物年龄、 体重和状况。
     单位剂量的肠胃外制剂包装于安瓿、 小瓶或带有针头的注射器中。如本领域已知 和实践， 所有的肠胃外施用的制剂应当被灭菌。
     举例而言， 静脉或动脉输注包含活性化合物的无菌水溶液是有效的施用模式。另 一实施方案是包含活性物质的无菌水性或油性溶液或悬浮液， 根据需要注射以生成所需的 药理活性。
     可注射物设计用于局部或全身施用。 一般地， 治疗有效剂量经配制包含 针对待治 疗组织的至少约 0.1％ w/w 至约 90％ w/w 或更高， 例如超过 1％ w/w 的活性化合物浓度。该 活性成分可一次施用， 或者可被分为一定量的更小剂量， 从而以一定的时间间隔施用。 应理 解： 确切的剂量和治疗时间与待治疗组织的功能相关联， 并可通过已知的测试方案凭经验 测定或可从体内或体外测试数据推断得到。 应注意浓度和剂量值也可随着待治疗个体的年 龄而有所变化。 应当进一步理解 ： 对于任何特定的个体， 应根据个体需求和施用或管理施用 所述组合物的人员的专业判断随时间调整具体的剂量方案， 且本发明提供的浓度范围仅作 为示例， 无意对所主张的剂型的范围或实施构成限制。
     所述化合物可以被微粒化或其它适当的形式被悬浮， 或者可被衍生化以生成更为 易溶的活性产物或生成前药。所得混合物的形式取决于多种因素， 包括目标施用模式以及 该化合物在所选载体或溶媒中的可溶性。该有效浓度足以改善疾病的症状， 并可通过经验 确定。
     冻干粉
     此处还感兴趣的是冻干粉， 其可复原为溶液、 乳液和其它混合物进行施用。 它们还 可被复原并配制为固体或凝胶。
     所述无菌冻干粉可通过将本发明提供的化合物或其药学上可接受的衍生物溶解 于适当的溶剂后制备。 所述溶剂可包含增强稳定性的赋形剂或所述粉末或由所述粉末制备 的复原溶液的药理成分。 可使用的赋形剂包括但不限于右旋糖、 山梨醇、 果糖、 玉米糖浆、 木 糖醇、 甘油、 葡萄糖、 蔗糖或其它适当的药剂。所述溶剂还可包含缓冲液， 例如柠檬酸盐、 磷 酸钠或钾或者本领域技术人员已知的其它所述类缓冲液， 在一个实施方案中， 所述缓冲液 约为中性 pH。 对所述溶液进行无菌过滤后， 在本领域技术人员已知的标准条件下进行冻干， 以提供所需的剂型。一般而言， 所得的溶液将被分配到小瓶中进行冻干。每个小瓶将包含 单独剂量 ( 即， 10-1000mg 或 100-500mg) 或多重剂量的所述化合物。所述冻干粉将被贮存 在适当的条件下， 例如约 4℃下或室温下。
     以注射用水复原所述冻干粉提供了用于肠胃外施用的剂型。为进行复原， 可在每 毫升无菌水或其它合适的载体中添加约 1-50mg、 约 5-35mg、 或约 9-30mg 的冻干粉。确切的 量取决于所选的化合物。所述数量可通过经验确定。
     表面施用
     可按照描述制备表面施用混合物， 以进行局部和全身施用。所得混合物可以是 溶液、 悬浮液、 乳液等， 并被配制成乳膏、 凝胶、 软膏、 乳剂、 溶液、 酏剂、 涂剂、 悬浮液、 酊剂、 膏剂、 泡沫剂、 气雾剂、 灌洗剂、 喷雾剂、 栓剂、 绷带， 皮肤贴剂或任意其它适于表面施用的剂 型。
     所述化合物或其药学上可接受的衍生物可被配制成气雾剂以进行表面应用， 例如 吸入 ( 例如， 参见美国专利 4,044,126、 4,414,209 和 4,364,923， 其描述了传递可用于治疗 炎性疾病 ( 特别是哮喘 ) 的类固醇的气雾剂 )。用于向呼吸道施用的所述类剂型可作为用 于喷雾器的气雾剂或溶液， 或者作为吸入的微细粉末， 其可单独使用或与乳糖等惰性载体 混合。在这个情况下， 所述剂型的颗粒将具有小于 50 微米或小于 10 微米的直径。
     所述化合物可配制成表面应用， 例如以凝胶、 乳膏和涂剂的形式表面应用于 ( 例 如眼中的 ) 皮肤和粘膜， 并应用于眼部或脑池内或椎管内。在透皮递送和向眼部或粘膜施 用， 或者吸入疗法中可考虑表面施用。也可施用活性化合物单独的或其与其它药学上可接 受的赋形剂联合的鼻部溶液。
     这 些 溶 液， 特 别 是 针 对 眼 部 使 用 的 溶 液， 可 用 适 当 的 盐 配 制 为 pH 约 5-7 的 0.01％ -10％等张溶液。
     用于其它施用途径的组合物
     本发明还预期其它施用途径， 例如表面应用、 透皮贴剂以及直肠施用。
     举例来说， 用于直肠施用的药物剂型为用于全身作用的直肠栓剂、 胶囊和片剂。 此 处所用的直肠栓剂指用于插入直肠的固体， 其在体温下溶化或软化， 从而释放一种或多种 药理或治疗活性成分。 用于直肠栓剂的药学上可接受的物质为基质或溶媒以及提高熔点的 药剂。基质的示例包括可可脂 ( 可可油 )， 甘油 - 明胶， carbowax( 聚乙二醇 ) 和脂肪酸的 单、 双和甘油三酸脂的适当混合物。可使用各种基质的组合。用于提高栓剂熔点的药剂包 括鲸蜡和蜡。直肠栓剂可通过压缩法或通过制模进行制备。直肠栓剂的示例性重量为约 2 至 3 克。
     用于直肠施用的片剂和胶囊可采用相同的药学上可接受的物质， 通过口服施用制 剂相同的方法进行制备。缓释组合物
     本发明提供的活性成分可通过本领域普通技术人员公知的控释方式或递送装置 施用。 其示例包括但不限于披露于美国专利 3,845,770、 3,916,899、 3,536,809、 3,598,123、 和 4,008,719 、 5,674,533 、 5,059,595 、 5,591,767 、 5,120,548 、 5,073,543 、 5,639,476 、 5,354,556 、 5,639,480 、 5,733,566 、 5,739,108 、 5,891,474 、 5,922,356 、 5,972,891 、 5,980,945 、 5,993,855 、 6,045,830 、 6,087,324 、 6,113,943 、 6,197,350 、 6,248,363 、 6,264,970、 6,267,981、 6,376,461,6,419,961、 6,589,548、 6,613,358、 6,699,500 以 及 6,740,634 的内容， 其内容分别在此引用作为参考。 所述剂型可通过使用如羟丙基甲基纤维 素、 其它聚合物质、 凝胶、 渗透膜、 渗透系统、 多层涂层、 微颗粒、 脂质体、 微球体或其组合以 不同比例提供所需的释放曲线从而用于提供一种或多种活性成分的缓释或控释。 本领域技 术人员已知的适用控释剂型 ( 包括此处所述的剂型 ) 可容易地选择用于本发明提供的活性 成分。
     所有的控释药物产品的共同目标为较其非控释对照改进药物疗法。 在一个实施方 案中， 一种优化设计的控释制剂在药物治疗中的使用特征为通过最小量的药物治愈或在最 短的时间内控制症状。 在特定的实施方案中， 控释制剂的优点包括延长药物的活性、 减少用 药频率以及提高患者适应性。 此外， 控释制剂可用于影响作用发生的时间以及其它特征， 例 如药物的血液水平以及从而影响副作用 ( 例如， 不良作用 ) 的发生。
     大多控释制剂被设计成最初释放能够迅速产生所需疗效的药物 ( 活性成分 ) 量， 然后逐渐并且持续释放另一药物量以在更长时间内维持这种治疗或预防效果的水平。 为在 体内维持这种药物的恒定水平， 所述药物应当从所述剂型中以一定速率释放从而能够取代 被代谢或从体内排泄的药物量。 活性成分的控释可受到各种条件刺激， 包括但不限于 pH、 温 度、 酶、 水或其它生理条件或化合物。
     在一些实施方案中， 所述药剂可通过静脉输注、 植入性渗透泵、 透皮贴剂、 脂 质体或其它施用模式进行施用。在一个实施方案中， 可使用泵 ( 例如， 参见 CRC Crit. Ref.Biomed.Eng.14 ： 201(1987) ； Buchwald 等 人， Surgery 88 ： 507(1980) ； Saudek 等 人， N.Engl.J.Med.321 ： 574(1989))。在另一实施方案中， 可施用聚合材料。在另一实施方 案中， 控释系统可被放置在治疗靶标附近， 即， 从而仅需要全身剂量的一部分 ( 例如， 参见 Goodson， Medical Applications of Controlled Release， vol.2， 第 115-138 页 (1984)。
     在部分实施方案中， 控释装置被导入个体体内不适当免疫激活或肿瘤位点的附 近。其它控释系统在 Langer(Science 249 ： 1527-1533(1990)) 的综述中被讨论。所述活性 成分被分散在固相内部基质 (solid inner matrix)， 例如聚甲基丙烯酸甲酯、 聚丁基丙烯 酸甲酯、 塑化或未塑化聚氯乙烯、 塑化尼龙、 塑化聚乙醇对苯， 天然橡胶， 聚异戊二烯、 聚异 丁烯、 聚丁二烯、 聚乙烯、 乙烯醋酸乙烯共聚物、 硅橡胶、 聚二甲基硅氧烷、 碳酸盐岩有机硅 共聚物、 亲水聚合物例如丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的水凝胶、 胶原蛋白、 交联聚乙烯醇和部 分交联水解聚醋酸乙烯酯中， 该固相内部基质被不溶于体液的外部聚合物膜 ( 如聚乙烯、 聚丙烯、 聚二甲基硅氧烷、 氯丁橡胶、 氯化聚乙烯、 聚氯乙烯、 氯乙烯与醋酸乙烯酯共聚物、 偏二氯乙烯、 乙烯和丙烯、 离子聚对苯二甲酸乙二醇酯、 丁基橡胶、 环氧氯丙烷橡胶、 乙烯 / 乙烯醇共聚物、 乙烯 / 醋酸乙烯 / 乙烯醇三聚物、 以及乙烯 / 乙烯氧基醇共聚物 ) 所包围。 然后所述活性成分在释放速率控制步骤中扩散通过所述外部聚合物膜。 在这类肠胃外组合物中包含的活性成分的比例高度依赖于它的特殊性质， 以及个体需求。
     靶向剂型
     本发明提供的化合物或其药学上可接受的衍生物还可配制为靶向待治疗个体的 身体的特定组织、 受体或其它区域。许多这类靶向方法已为本领域技术人员公知。所有 这种靶向方法均预期用于本发明的组合物。靶向方法的非限制性示例可参见， 例如， 美国 专 利 6,316,652、 6,274,552、 6,271,359、 6,253,872、 6,139,865、 6,131,570、 6,120,751、 6,071,495 、 6,060,082 、 6,048,736 、 6,039,975 、 6,004,534 、 5,985,307 、 5,972,366 、 5,900,252、 5,840,674、 5,759,542 和 5,709,874。
     在一个实施方案中， 包含组织靶向脂质体 ( 例如， 肿瘤靶向脂质体 ) 的脂质体悬浮 液也可被用作药学上可接受的载体。这些可通过本领域技术人员已知的方法进行制备。例 如， 脂质体制剂可参照美国专利 4,522,811 所述进行制备。简单而言， 可通过在烧瓶中干燥 蛋磷脂酰胆碱和脑磷脂酰丝氨酸 ( 摩尔比 7 ∶ 3) 形成如多层囊泡 (MLV) 等脂质体。添加 含于缺乏二价阳离子的磷酸盐缓冲液 (PBS) 中的本发明化合物的溶液， 然后振荡烧瓶直至 脂质膜分散。洗涤所得囊泡以去除未封装的化合物， 离心称为圆球， 然后重悬浮于 PBS。
     制造物品
     所述化合物或其药学上可接受的衍生物可被包装为包括包装材料、 本发明提供的 化合物或其药学上可接受的衍生物 ( 其可用于治疗、 预防或改善与激酶活性， 包括但不限 于 GSK-3 活性相关的一种或多种症状 )， 以及说明所述化合物或其药学上可接受的衍生物 可用于治疗、 预防活改善激酶介导的疾病的一种或多种症状 ( 包括但不限于 GSK-3 介导的 疾病 ) 标签的制造物品。
     本发明提供的物品包括包装材料。 用于包装药物产品的包装材料已为本领域技术 人员公知。例如， 参见美国专利 5,323,907、 5,052,558 和 5,033,252。药物包装材料的示例 包括但不限于泡罩包装、 瓶、 管、 吸入器、 泵、 袋、 小瓶、 容器、 注射器、 瓶以及适用于选定剂型 及目标施用和治疗模式的任意包装材料。 本发明包括本发明化合物和组合物的多种剂型。
     E. 治疗方法
     本发明还提供了所述化合物和组合物的使用方法。 所述方法同时包括所述化合物 和组合物的体外和体内使用。
     在一些实施方案中， 本发明提供了通过施用本发明化合物和组合物抑制 GSK-3 作 用的方法。在一个实施方案中， 所述方法包括将 GSK-3 与本发明提供的化合物接触。
     F. 化合物活性的评估
     本发明提供的化合物的 GSK3 抑制活性可采用此处所述的实验以及本领域普通技 术人员公知的实验简单地检测。
     用于鉴定 GSK3 特异性抑制剂的示例性方法包括无细胞和基于细胞的 GSK3 激酶实 验。无细胞 GSK3 激酶实验检测通过与多肽 GSK3 直接相互作用来发挥功能的抑制剂， 而基 于细胞的 GSK3 激酶实验即可以检测通过与 GSK3 本身直接相互作用来发挥功能的抑制剂也 可以检测通过干扰 GSK3 表达或者干扰生成成熟活性 GSK3 所需的翻译后加工来发挥功能的 抑制剂。美国申请 20050054663 描述了示例性的无细胞和基于细胞的 GSK3 激酶实验。此 处所用的示例性实验简述如下 ：
     在 30 ℃ 下 20mM MOPS， pH 7.0(10mM 乙 酸 镁、 0.2mM EDTA、 2mMEGTA、 30mM 氯 化镁、 62.5μM 磷 酸 - 糖 原 合 成 酶 肽 -2、 5μM ATP、 10mM β- 磷 酸 甘 油、 1mM 原 钒 酸 钠 和 1mM 二硫苏糖醇 ) 中存在或不存在不同浓度化合物的条件下， 孵育 10-25ng 重组全长人 GSK3β(Upstate)1 小时。然后进行 KinaseGlo 萤光素酶反应。
     激酶反应完成后， 添加等体积的 KinaseGlo 萤光素酶试剂 (Promega)， 在 5-10 分钟 内用发光板读取器读取发光。 化合物活性表达为相对于最大剂量下观察到的最大抑制的抑 制百分比， 然后使用曲线拟合软件 (GraphPad Prizm) 计算 IC50 值。 实施例 实施例 1 ：
     8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环戊 烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸
     1A)3-[1-( 羟甲基 ) 环戊氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯的制备。
     将 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四氟苯基 ) 丙酸乙酯 (3.17g， 12mmol)、 乙酸酐 (3.34mL， 3.6g， 30mmol) 和原甲酸三乙酯 (3.00mL， 2.6g， 18mmol) 的搅拌溶液在 130℃下加热 1.5 小 时。 将该混合物真空浓缩并高真空干燥 3 小时。 将粗产物溶解于 EtOH(15mL)， 并冷却至 0℃， 然后极为缓慢地添加 1- 氨基 -1- 环戊烷甲醇 (1.01g， 8.8mmol)。1.5 小时后， 蒸发去除溶 剂以得到成为黄色油的标题化合物 (3.1g 粗产物 )， 其可不经进一步纯化用于下一步骤。
     1B)9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     向 3-[1-( 羟甲基 ) 环戊氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸酯 (570mg， 1.46mmol) 的 THF(10mL) 溶液在冰冷下添加 KOH(164mg， 2.93mmol) 的碎片。1.5 小时后添 加更多的 KOH(80mg， 1.42mmol)， 然后将反应混合物升温至室温并搅拌过夜。用 0.5N HCl 酸化该反应混合物至 pH2。过滤收集白色沉淀物以得到可用于下一步骤的粗制标题化合物 (454mg， 1.3mmol， 89％ )。
     1C)9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯 (13.2g， 38mmol) 在乙酸 / 水 /H2SO4(8 ∶ 6 ∶ 1v/v， 75mL) 混合物中的溶液回流加热 2 小时。将该反应混合物注入冰水。形成沉淀物并通过过 滤收集， 用水洗涤， 然后干燥得到成为浅黄色固体的标题化合物 (10.5g， 32.7mmol， 86％ )。
     1D)9′， 10′ - 二氟 -8′ - 硝基 -7′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6- 羧酸的制备。
     将 9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸 (1.8g， 5.6mmol) 在浓 H2SO4(10mL) 中的溶液在 0℃下用 固体 KNO3(736mg， 7.29mmol) 分批处理。0℃下搅拌 1 小时后， 将反应混合物注入 500mL 冰 水中， 过滤所得的沉淀物， 并用冰水洗涤。 干燥所得的固体得到成为淡黄色固体的标题化合 物 (1.8g， 88％ )。
     1E)8′ - 氨基 -9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 9′， 10′ - 二氟 -8′ - 硝基 -7′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸 (3.9g， 0.01mmol) 的乙醇 / 乙酸 (1 ∶ 1， v/v， 100mL) 溶液在大气压下 10％ Pd/C(390mg) 上 80℃下氢化 18 小时。然后添加 200mLDMF， 加 热该反应混合物至澄清。在 Celite 过滤去除催化剂， 将其用热 DMF 洗涤两次， 将合并的滤 出液真空干燥得到标题化合物 (2.85g， 73％ )， 其作为粗品用于下一步骤。
     1F)8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环 戊烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 8′ - 氨基 -9′ 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸 (500mg， 1.37mmol) 和 N-(2- 吡啶基 )-1， 2- 乙 二胺 (226mg， 1.64mmol) 以及 19μL 三乙胺在 DMSO(5mL) 中的溶液 90 ℃下搅拌 24 小时。 将反应混合物注入水中， 过滤收集形成的沉淀物。使粗制产品通过硅胶柱 (CH2Cl2/CH3OH 10 ∶ 1v/v)， 然后从二乙醚重结晶得到成为黄色固体的标题化合物 (284mg， 42％ )。MS(EP) + m/z ： 454(M +1)。( 计算得到 C23H24FN5O4， 453.18)。
     实施例 2 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(4- 甲基喹啉 -2- 基氨基 )- 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     将 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸 (13mg， 0.04mmol)、 N1-(4- 甲基喹啉 -2- 基 ) 乙烷 -1， 2- 二胺 (10mg， 0.05mmol) 和 11μL 三乙胺在 DMSO(0.3mL) 中的溶液在 90℃下搅拌 72 小时。冷却该反应 混合物并冻干过夜。将粗产物投入 CH2Cl2， 通过制备 TLC 纯化得到成为黄色固体的 8- 氨 基 -9- 氟 -10-(2-(4- 甲基喹啉 -2- 基氨基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 + [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸 (0.8mg， 4％ )。MS(EP)m/z ： 518(M +1)。( 计算 得到 C28H28FN5O4， 517.21)。
     实施例 3 ： 10-(3-(1H-1， 2， 4- 三唑 -1- 基 ) 丙基氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     将 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1 ′ - 环 戊 烷 ]-6- 羧 酸 (13mg， 0.04mmol)、 3-(-1H-1， 2， 4- 三 唑 -1- 基 ) 丙 -1- 胺 (5mg， 0.04mmol) 和 5.5μL 三 乙 胺 在 DMSO(0.3mL) 中 的 溶 液 在 90 ℃ 下 搅 拌 24 小 时。 冷 却 该 反应混合物并冻干过夜。将粗产物投入 ACN， 并通过制备 HPLC 纯化得到成为黄色固体的 10-(3-(1H-1， 2， 4- 三唑 -1- 基 ) 丙基氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] + 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸 (3.2mg， 18％ )。MS(EP)m/z ： 443(M +1)。
     ( 计算得到 C21H23FN6O4， 442.18)。
     实施例 4 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-(4- 氟苯基 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-(4- 氟苯基 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 -[[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类似 的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 470(M++1)。( 计算得到 C25H25F2N3O4， 469.18)。
     实 施 例 5： 8- 氨 基 -10-(3-(3， 4- 二 氢 喹 啉 -1(2H)- 基 )- 丙 基 氨 基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧 酸。
     8- 氨基 -10-(3-(3， 4- 二氢喹啉 -1(2H)- 基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 -[[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与 上述实施例所述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 507(M++1)。( 计算得到 C28H31FN4O4， 506.23)。
     实施例 6 ： 8- 氨基 -10-(4-(4- 氯苯基 ) 丁 -2- 基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(4-(4- 氯苯基 ) 丁 -2- 基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述 类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 500(M++1)。( 计算得到 C26H27ClFN3O4， 499.17)。
     实施例 7 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-( 呋喃 -2- 氨甲酰 )- 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二
     氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-( 呋喃 -2- 氨甲酰 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所 + 述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 485(M +1)。( 计算得到 C24H25FN4O6， 484.18)。
     实施例 8 ： 8- 氨基 -10-(3-( 金刚烷氨甲酰 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(3-( 金刚烷氨甲酰 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 + 似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 553(M +1)。( 计算得到 C30H37FN4O5， 552.27)。
     实施例 9 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(4- 氟苯氧基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(4- 氟苯氧基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类似 的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 472(M++1)。( 计算得到 C24H23F2N3O5， 471.16)。
     实施例 10 ： 8- 氨基 -10-(2-(4- 氯 -3- 甲基苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(2-(4- 氯 -3- 甲基苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所 述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 502(M++1)。( 计算得到 C25H25ClFN3O5， 501.15)。
     实施例 11 ： 10-(2-(1H- 吲哚 -3- 基硫 ) 乙氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     10-(2-(1H- 吲哚 -3- 基硫 ) 乙氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 似的合 成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 509(M++1)。( 计算得到 C26H25FN4O4S， 508.16)。
     实施例 12 ： 8- 氨基 -10-(2-(4- 氯苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3-1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(2-(4- 氯苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类似 的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 487.9(M++1)。( 计算得到 C24H23ClFN3O5， 487.13)。
     实施例 13 ： 8- 氨基 -10-(2-(2， 4- 二氯苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(2-(2， 4- 二氯苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 521.9(M++1)。( 计算得到 C24H22Cl2FN3O5， 521.09)。
     实施例 14 ： 8- 氨基 -10-(3-(3， 4- 二甲氧基苯基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 - 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(3-(3， 4- 二甲氧基苯基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所 + 述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 512(M +1)。( 计算得到 C27H30FN3O6， 511.21)。
     实 施 例 15 ： 8- 氨 基 -10-(2-(2， 6- 二 甲 基 喹 啉 -4- 基 氨 基 )- 乙 氨 基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(2-(2， 6- 二甲基喹啉 -4- 基氨基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与 上述实施例所述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 532(M++1)。( 计算得到 C29H30FN5O4， 531.23)。
     实 施 例 16 ： 8- 氨 基 -9- 氟 -10-(2-(3- 甲 基 -1H-1， 2， 4- 三 唑 -5- 基 硫 ) 乙 氨 基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(3- 甲基 -1H-1， 2， 4- 三唑 -5- 基硫 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上 + 述实施例所述类似的合成步骤制备得到。 MS(EP)m/z ： 474.9(M +1)。 ( 计算得到 C21H23FN6O4S， 474.15)。
     实施例 17 ： 8- 氨基 -10-(2-(4- 环己基苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(2-(4- 环己基苯氧基 ) 乙氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 536(M++1)。( 计算得到 C30H34FN3O5， 535.25)。
     实 施 例 18 ： 8- 氨 基 -9- 氟 -10-(2-(1- 甲 基 -1H- 咪 唑 -2- 基 硫 )- 乙 氨 基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨 基 -9- 氟 -10-(2-(1- 甲 基 -1H- 咪 唑 -2- 基 硫 ) 乙 氨 基 )-7- 氧 -2， 7- 二 氢 螺 环 [[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij] 喹 啉 -3， 1’ - 环 戊 烷 ]-6- 羧 酸 可 由 8- 氨 基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与 上述实施例所述类似的合成步骤制备得到。 MS(EP)m/z ： 474(M++1)。 ( 计算得到 C22H24FN5O4S， 473.15)。
     实施例 19 ： 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(2-( 哌啶 -1- 基磺酰基 )- 乙氨基 )-2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(2-( 哌啶 -1- 基磺酰基 ) 乙氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例 所述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 509(M++1)。( 计算得到 C23H29FN4O6S， 508.18)。
     实施例 20 ： 8- 氨基 -10-(2-(1， 1- 二氧 -1H-1λ-6- 苯并 [d] 异噻唑 -3- 基氨基 ) 乙 氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧 酸。
     8- 氨 基 -10-(2-(1， 1- 二 氧 -1H-1λ-6- 苯 并 [d] 异 噻 唑 -3- 基 氨 基 ) 乙 氨 基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可 由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4]- 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环 戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类似的合成步骤制备得到。 MS(EP)m/z ： 541.9(M++1)。 ( 计算得到 C25H24FN5O6S， 541.14)。
     实施例 21 ： 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(2-(1- 苯基 -1H- 四唑 -5- 基硫 ) 乙氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨 基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(2-(1- 苯 基 -1H- 四 唑 -5- 基 硫 ) 乙 氨 基 )-2， 7- 二 氢 螺 环 [[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij] 喹 啉 -3， 1’ - 环 戊 烷 ]-6- 羧 酸 可 由 8- 氨 基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与 上述实施例所述类似的合成步骤制备得到。 MS(EP)m/z ： 538(M++1)。 ( 计算得到 C25H24FN7O4S， 537.16)。
     实 施 例 22 ： 10-(3-(1H- 苯 并 [d] 咪 唑 -1- 基 )-2- 羟 基 丙 基 氨 基 )-8- 氨 基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     10-(3-(1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-2- 羟基丙基氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 -[[1， 4] 噁嗪 -[2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸 采用与上述实施例所述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 508.0(M++1)。( 计算得到 C26H26FN5O5， 507.19)。
     实施例 23 ： 8- 氨基 -10-(3-( 乙基 ( 苯基 ) 氨基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3)4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(3-( 乙基 ( 苯基 ) 氨基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例 所述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 495(M++1)。( 计算得到 C27H31FN4O4， 494.23)。
     实施例 24 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-( 二氢吲哚 -1- 基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-( 二氢吲哚 -1- 基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 479(M++1)。( 计算得到 C26H27FN4O4， 478.20)。
     实施例 25 ： 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(2-( 对甲苯氧基 ) 乙氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(2-( 对甲苯氧基 ) 乙氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类似 的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 468(M++1)。( 计算得到 C25H26FN3O5， 467.19)。
     实施例 26 ： 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 )-2， 7- 二氢螺 环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 似的合 成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 453(M++1)。( 计算得到 C24H25FN4O4， 452.19)。
     实施例 27 ： 8- 氨基 -10-(3-(2- 氯苯基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(3-(2- 氯苯基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类似 的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 486(M++1)。( 计算得到 C25H25ClFN3O4， 485.15)。
     实施例 28 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-(4- 甲氧基苯基 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-(4- 甲氧基苯基 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 482(M++1)。( 计算得到 C26H28FN3O5， 481.20)。
     实施例 29 ： 8- 氨基 -10-(3-(3， 4- 二乙氧基苯基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(3-(3， 4- 二乙氧基苯基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所 + 述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 540(M +1)。( 计算得到 C29H34FN3O6， 539.24)。
     实施例 30 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(2- 甲基喹啉 -4- 基氨基 )- 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(2- 甲基喹啉 -4- 基氨基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所 + 述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 518(M +1)。( 计算得到 C28H28FN5O4， 517.21)。
     实施例 31 ： 8- 氨基 -10-(4-(2- 氯苯基 ) 丁 -2- 基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -10-(4-(2- 氯苯基 ) 丁 -2- 基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 -[[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所 述类似的合 成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 500(M++1)。( 计算得到 C26H27ClFN3O4， 499.17)。
     实施例 32 ： 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-(1， 3， 5- 三甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 丙基 氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-(1， 3， 5- 三甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 丙基氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与 上述实施例所述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 484(M++1)。( 计算得到 C25H30FN5O4， 483.23)。
     实施例 33 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-(3- 甲氧基苯基 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-(3- 甲氧基苯基 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类 似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 482(M++1)。( 计算得到 C26H28FN3O5， 481.20)。
     实施例 34 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(4- 甲氧基苯氧基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(2-(4- 甲氧基苯氧基 ) 乙氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所
     述类似的合成步骤制备得到。MS(EP)m/z ： 484(M++1)。( 计算得到 C25H26FN3O6， 483.18)。
     实施例 35 ：
     8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 )-6-1H- 四唑 -5- 基 ) 螺环 -[[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-7(2H)- 酮盐酸化物
     35A)9， 10- 二氟 -8- 硝基 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 氨甲酰的制备。
     将 9， 10- 二氟 -8- 硝基 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸 (3g， 8.2mmol) 悬浮于 SOCl2(25ml)， 回流 3 小时， 直至得到澄清溶 液。反应完成后， 真空去除 SOCl2。用二噁烷稀释剩余的固体， 并在冰浴中冷却。在剧烈搅
     拌下小心添加浓 NH4OH 溶液。形成沉淀物， 通过过滤采集， 并用水洗涤。将固体真空干燥得 到 2.2g(75％产率 ) 的标题化合物。该化合物不经进一步纯化用于下一步骤。
     35B)8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 氨甲酰的制备。
     向 9， 10- 二氟 -8- 硝基 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 氨甲酰 (1g， 2.7mmol) 的水 / 甲醇混合物 (1 ∶ 1v/v， 30mL) 的悬浮液中 添加连二亚硫酸钠 (Na2S2O4， 3.75g， 22mmol)。 将该悬浮液回流 5 小时， 直至所有的起始原料 消失。完成后， 将反应混合物冷却至室温， 并添加 50ml 水。20 分钟后， 通过过滤收集浅黄色 固体， 并用水洗涤。 真空干燥固体得到 660mg(73％产率 ) 的标题化合物， 其可不经进一步纯 化用于下一步骤。
     35C)8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 腈的制备。
     向 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 氨甲酰 (1g， 2.9mmol) 和三乙胺 (2mL， 10mmol.) 在 DCM(20ml) 中的冷溶 液中逐滴添加 POCl3(780μl， 8.7mmol.)， 并在 0℃下额外搅拌 5 小时。形成深色的混合物。 反应完全后， 真空去除 DCM， 并用水洗涤该残留物数次。将固体真空干燥得到 540mg(58.7％ 产率 ) 的标题化合物。该产物除了在 DMF 和 DMSO 外都非常易溶， 并可不经进一步纯化用于 下一步骤。
     35D)8- 氨基 -9， 10- 二氟 -6-(1H- 四唑 -5- 基 ) 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹 啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-7(2H)- 酮的制备。
     向腈 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 腈 (180mg， 0.56mmol) 在异丙醇和水 (1 ∶ 1v/v， 15ml) 中的混合物中添加 80mg 叠氮化钠 (1.14mmole) 和 170mg 氯化锌 (1.14mmole)。将混合物加热至 110℃达 18 小 时。过滤收集沉淀物并用水洗涤。将固体真空干燥得到 135mg(67％产率 ) 的标题化合物。 该化合物不经进一步纯化用于下一步骤。
     35E)8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-( 吡啶 -2- 基 )- 丙基氨基 )-6-1H- 四唑 -5- 基 ) 螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-7(2H)- 酮盐酸化物的制备。
     MS(EP)m/z ： 477.5(M+1)。( 计算得到 C24H25FN8O2， 476.51)。
     化合物 36-42 可由 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 腈或 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸采用与上述实施例所述类似的合成步骤制 备得到。
     实施例 36 ： 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 )-2， 7- 二氢螺 环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 腈盐酸化物。
     MS(EP)m/z ： 434.4(M+1)。( 计算得到 C24H24FN5O2， 433.48)。
     实施例 37 ： 10-(3-(1H- 咪唑 -1- 基 ) 丙基氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 腈盐酸化物的制备。
     MS(EP)m/z ： 423.4(M+1)。( 计算得到 C22H23FN6O2， 422.46)。
     实施例 38 ： 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-(1， 3， 5- 三甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 丙基 氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 腈盐酸化物。
     MS(EP)m/z ： 465.5(M+1)。( 计算得到 C25H29FN6O2， 464.54)。
     实 施 例 39 ： 8- 氨 基 -9- 氟 -10-(3-(4- 氟 苯 基 )-3-(4- 甲 氧 基 苯 基 ) 丙 基 氨 基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     MS(EP)m/z ： 576.6(M+1)。( 计算得到 C32H31F2N3O5， 575.6)。
     实施例 40 ： 8- 氨基 -10-(3-(4- 氯苯基 ) 丙基氨基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     MS(EP)m/z ： 486.9(M+1)。( 计算得到 C25H25ClFN3O4， 485.94)。
     实 施 例 41 ： 8- 氨 基 -10-(3-(3， 5- 二 甲 基 -1H- 吡 唑 -1- 基 ) 丙 基 氨 基 )-9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环戊烷 ]-6- 羧 酸。
     MS(EP)m/z ： 470.5(M+1)。( 计算得到 C24H28FN5O4， 469.51)。
     实施例 42 ： 8- 氨基 -9- 氟 -10-(3-(5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 丙基氨基 )-7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     MS(EP)m/z ： 456(M+1)。( 计算得到 C23H26FN5O4， 455.48)。
     实施例 43 ：
     8 ′ - 氨基 -9 ′ - 氟 -7 ′ - 氧 -10 ′ -[3-(1- 咪唑 ) 丙基 ] 螺环 [ 环戊烷 -1， 3′ -(2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 甲脒
     43A)8 ′ - 氨基 -9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 -[ 环戊烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 甲脒的制备。
     向 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [1， 4] 噁嗪 -[2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 腈 (400mg， 1.26mmol) 在 5ml 乙醇 / 二甲基甲酰胺 (50 ∶ 50， v ∶ v) 中 的溶液中添加氢氧化铵 (260mg， 3.78mmol) 和碳酸钾 (521mg， 3.78mmol)。将反应混合物加 热至回流达 3 小时， 然后冷却至室温。滤走未溶解的无机物质， 真空浓缩滤出液得到固体物 质， 将其重悬浮于甲醇 (50mL) 中， 过滤， 用甲醇洗涤， 并真空干燥得到成为黄色固体的标题 化合物 (200mg， 45％产率 )。MS(EP)m/z ： 351(M+1)。( 计算得到 C16H16F2N4O3， 350.12)。
     43B)8 ′ - 氨基 -9 ′ - 氟 -7 ′ - 氧 -10 ′ -[3-(1- 咪唑基 )- 丙基 ] 螺环 [ 环戊 烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 甲脒的制备。
     该标题化合物可参照上文步骤由 8′ - 氨基 -9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 -[ 环 戊烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 甲脒制备得到。 MS(EP) 425.42)。 m/z ： 426.4(M+1)。( 计算得到 C19H20FN9O2，
     实施例 44 ：
     8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[2-( 吡啶 -2- 基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环 丁烷 -1， 3’ (2’ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸
     44A)3-[1-( 羟甲基 ) 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯的制 备。
     将 搅 拌 中 的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 乙 酯 (2.00g， 7.57mmol)、 Ac2O(4.29mL， 45.4mmol) 和 原 甲 酸 三 乙 酯 (2.51mL， 15.1mmol) 的 溶 液 在 120 ℃ 下 加 热 3 小时。真空浓缩该混合物并高真空干燥。将粗产物溶解于甲苯 (30mL)， 并在冰冷下添加 (1- 氨 基 环 丁 基 ) 甲 醇 (1.04g， 7.57mmol) 在 甲 苯 (5mL) 中 的 悬 浮 液、 三 乙 胺 (1.06mL， 7.57mmol)。将混合物在室温下搅拌 18 小时， 并真空浓缩得到粗产物。通过柱层析 ( 己 烷∶ EtOAc 10 ∶ 1 → 1 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成为白色固体的标题化合物 (1.57g， 55％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.95-1.11(3H， m)， 1.85-1.90(1H， m)， 1.91-2.07(2H， m)， 2.17-2.26(2H， m)， 2.27-2.36(2H， m)， 3.80-3.83(2H， m)， 4.00-4.10(2H， m)， 6.95-7.13(1H， + m)， 8.17-8.22(1H， m)， 9.87-11.36(1H， m).ESIMS(+) ： 376[M+H] 。
     44B)9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2，
     3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     在氩气氛围下， 将 3-[1-( 羟甲基 ) 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙 烯酸乙酯 (1.52g， 4.05mmol) 的 DMF(10mL) 溶液添加至冰冷的含于油的 60 ％ NaH(356mg， 8.91mmol) 在 DMF(10mL) 中的悬浮液中。 将反应混合物搅拌 4 小时， 并注入冰水中。 用 AcOEt 萃取产物， 用 MgSO4 干燥并通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 2 ∶ 1 → AcOEt) 纯化该粗产物以得 到成为白色固体的标题化合物 (604mg， 44 ％ )。Mp 255-256 ℃ .1H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.29(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.91-2.07(2H， m)， 2.16-2.22(2H， m)， 2.65-2.76(2H， m)， 4.24(2H， q， J-7.3Hz)， 4.62(2H， s)， 7.62(1H， dd， J ＝ 10.4， 7.9Hz)， 8.80(1H， s).ESIMS(+) ： + 336 [M+H] 。
     44C)9 ′， 10 ′ - 二氟 -8 ′ - 硝基 -7 ′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 9 ′， 10 ′ - 二 氟 -7 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 羧酸乙酯 (580mg， 1.73mmol) 在浓 H2SO4(7mL) 中的溶液 在 0 ℃下用固体 KNO3(245mg， 2.42mmol) 分批处理。将反应混合物在 0 ℃下搅拌 1 小时， 并注入冰水中。过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤， 并干燥得到成为浅黄色固体的标题化 1 合 物 (600mg， 91 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSOd6)δ1.30(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.93-2.09(2H， m)， 2.16-2.25(2H， m)， 2.73-2.80(2H， m)， 4.26(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.69(2H， s)， 8.87(1H， + s).ESIMS(+) ： 381[M+H] 。
     44D)8 ′ - 氨基 -9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 9 ′， 10 ′ - 二氟 -8 ′ - 硝基 -7 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 羧酸乙酯 (580mg， 1.53mmol) 在 DMF(30mL) 中的 溶液在 50℃氢气氛围下用 10％ Pd/C(60mg) 处理 3 小时。用 Celite 过滤除去催化剂， 并将 滤出液注入冰水中。搅拌 1 小时后过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤， 并干燥得到成为浅黄 1 色固体的标题化合物 (468mg， 88％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.29(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.92-2.02(2H， m)， 2.10-2.19(2H， m)， 2.61-2.69(2H， m)， 4.23(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.39(2H， + s)， 7.38(2H， brs)， 8.65(1H， brs).ESIMS(+) ： 351[M+H] 。
     44E)8 ′ - 氨基 -9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 8 ′ - 氨 基 -9 ′， 10 ′ - 二 氟 -7 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯 并 噁 嗪 ]-6 ′ - 羧 酸 乙 酯 (440mg， 1.26mmol) 在 AcOH-H2O-H2SO4(2 ∶ 1 ∶ 0.3v/v， 9.9mL) 混合物中的溶液在 100℃下加热 3 小时。将反应 混合物注入冰水， 并搅拌。30 分钟后， 过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为 1 黄色固体的该标题化合物 (384mg， 94％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.94-2.03(2H， m)， 2.14-2.20(2H， m)， 2.69-2.77(2H， m)， 4.44(2H， s)， 7.32(2H， brs)， 8.91(1H， s)， 14.67(1H， + s)。ESIMS(+) ： 323[M+H] 。
     44F)8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环 丁烷 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 8 ′ - 氨 基 -9 ′， 10 ′ - 二 氟 -7 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯 并 噁 嗪 ]-6 ′ - 羧 酸 (360mg， 1.12mmol)、 N-2- 吡 啶 yl-1， 2- 乙 二 胺 (230mg， 1.68mmol) 和 三 乙 胺 (0.234mL， 1.68mmol) 在 DMSO(5mL) 中 的 溶 液
     在 100 ℃下搅拌 3 小时。将反应混合物注入冰水， 并搅拌 30 分钟。过滤收集所得的沉淀 物， 用水洗涤， 悬浮于 EtOH(10mL)， 并回流搅拌 1 小时。将悬浮液冷却至室温， 过滤收集 1 所得的沉淀物， 并干燥得到成为白色固体的标题化合物 (459mg， 93 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSOd6)δ1.91-2.03(2H， m)， 2.08-2.17(2H， m)， 2.61-2.69(2H， m)， 3.44-3.48(2H， m)， 3.58-3.66(2H， m)， 6.35-6.40(1H， m)， 6.45-6.49(2H， m)， 6.71(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 6.88(2H， brs)， 7.35(1H， td， J ＝ 6.7， 1.8Hz)， 7.97(1H， dd， J ＝ 4.9， 1.2Hz)， 8.71(1H， s)， 15.30(1H， s).HRESIMS(+) ：440.17267(-0.74mmu)。
     实施例 45 ：
     8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ) 螺环 [ 环丁 烷 -1， 2′ (3′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de] 苯并氧氮杂卓 ]-6′ - 羧酸
     45A)3-[[1-( 羟甲基 ) 环戊基 ]- 甲氨基 ]-2-(3， 4， 5， 6- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙 酯的制备。
     将 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 乙 酯 (7.93g， 30.0mmol)、 Ac2O(17.0mL， 180mmol) 和原甲酸三乙酯 (10.0mL， 60.1mmol) 的溶液在 120℃下加热 3 小时。真空浓缩该 混合物并高真空干燥。将粗产物溶解于无水甲苯 (120mL) 中， 并在 0℃下缓慢添加 [1-( 氨 甲基 )- 环丙基 ]] 甲醇 (3.04g， 30.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌 3 小时， 蒸发去除 溶剂。 通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 1 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成为淡黄色固体的标题化合物 1 (10.5g， 94％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ0.50-0.70(4H， m)， 0.97， 1.10( 各 t， J ＝ 7.3Hz， 总 3H)， 1.66(1H， t， J ＝ 4.9Hz)， 3.47(2H， d， J ＝ 6.1Hz)， 3.56(2H， d， J ＝ 4.9Hz)， 4.01-4.09(2H m)， 6.96-7.13(1H， m)， 8.06-8.12(1H， m)， 9.71， 11.1( 各 br， 总 1H).ESIMS(+) ： 375[M+H]。
     45B)10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 NaH(2.29g， 57.3mmol， 60％； 含于油中 ) 的 DMF(110mL) 溶液冷却至 0℃， 并用含 于 DMF(15mL) 的 3-[[1-( 羟甲基 ) 环戊基 ] 甲氨基 ]-2-(3， 4， 5， 6- 四氟苯甲酰基 ) 氨基丙烯酸乙酯 (9.76g， 26.0mmol) 逐滴处理。将反应混合物在室温下搅拌 1 小时， 然后在 85℃ 下搅拌 1 小时。将反应混合物注入冰水中， 过滤所得的沉淀物并用水洗涤。将所得的固体 溶解于 100mL EtOH-CH2Cl2(2 ∶ 1) 并过滤。将滤出液浓缩至 70mL， 过滤收集所得的沉淀 物， 用 EtOH 洗涤并干燥得到成为淡黄色固体的标题化合物 (6.73g， 77％ )。1H-NMR(400MHz CDCl3)δ0.65(2H， t， J ＝ 6.1Hz)， 0.82(2H， t， J ＝ 6.1Hz)， 1.41(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 4.21(2H， s)， 4.35(2H， s)， 4.39(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 8.05(1H， dd， J ＝ 10.4， 8.6Hz)， 8.25(1H， + s).ESIMS(+) ： 335[M+H] 。
     45C)9 ′， 10 ′ - 二氟 -8 ′ - 硝基 -7 ′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 2 ′ (3 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     10 ′， 11 ′ - 二 氟 -8 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 2 ′ (3 ′ H)-[7H] 吡 啶 并 [1， 2， 3， -ef]- 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯可通过对本文别处所示的步骤的常规修改制备得 到。将 10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 2′ (3′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3， -ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (1.50g， 4.47mmol) 在浓 H2SO4(15mL) 中的溶液在 0℃下用 固体 KNO3(633mg， 6.26mmol) 分批处理。在 0℃下搅拌 2 小时后， 将反应混合物注入 100mL 冰水中， 过滤所得的沉淀物。以 DMF 重结晶所得的固体， 用 EtOH 洗涤并干燥得到成为淡黄 色固体的标题化合物 (651mg， 38％ )。1H-NMR(400MHZ， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.76-2.00(2H， m)， 2.15-2.25(2H， m)， 2.27-2.40(2H， m)， 4.23(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.53(2H， s)， 8.69(1H， s).ESIMS(+) ： 381[M+H]+。
     45D)8 ′ - 氨基 -9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 2 ′ (3 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 9′， 10′ - 二氟 -8′ - 硝基 -7′ - 氧 - 螺环 [ 环丁烷 -1， 2′ (3′ H)-[7H] 吡 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯 (450mg， 1.15mmol) 和 10％ Pd/C(40.5mg) 的 DMF(20mL) 溶液在氢气气氛下 (0.3MPa) 于 50℃下搅拌 3 小时。用 Celite 过滤除去催化 剂， 并真空浓缩滤出液。将所得的固体溶解于 EtOH-CH2Cl2(1 ∶ 5) 并过滤。除去 CH2Cl2， 过
     滤所得的沉淀物， 用 EtOH 洗涤， 并干燥得到成为浅黄色固体的标题化合物 (270mg， 67％ )。 1 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.74-1.96(2H， m)， 2.02-2.13(2H， m)， 2.14-2.25(2H， m)， 4.20(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.33(2H， s)， 7.33(2H， brs)， 8.43(1H， + s).ESIMS(+) ： 350[M+H] 。
     45E)8 ′ - 氨基 -9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 2 ′ (3 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 8 ′ - 氨基 -9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 2 ′ (3 ′ H)-[7H] 吡 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯 (247mg， 0.705mmol) 和 1M NaOH 水溶液 (3.5mL) 的 EtOH(3.5mL) 溶液在 50℃下搅拌 1.5 小时。去除溶剂， 并将残留物溶解在水中。 将溶液用 2M HCl 酸化至 pH 7， 过滤所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为黄色固体的标 1 题化合物 (216mg， 95％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.73-1.97(2H， m)， 2.04-2.27(4H， m)，4.50(2H， s)， 7.25(2H， brs)， 8.76(1H， s)， 14.67(1H， s).ESIMS(+) ： 322[M+H]+。
     45F)8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环 丁烷 -1， 2 ′ (3′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 8′ - 氨基 -9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 2′ (3′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸 (200mg， 0.621mmol)、 三乙胺 (0.130mL， 0.933mmol) 和 N-2- 吡啶基 -1， 2- 乙二胺 (128mg， 0.933mmol) 在 DMSO(4mL) 中的溶液在 100℃下搅拌 3 小时。 将反应混合物注入冰水， 过滤所得的沉淀物， 用乙醇洗涤并干燥得到成为黄色固体的 1 标题化合物 (223mg， 82％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.30-1.50(2H， m)， 1.53-1.73(1H， m)， 3.01-3.12(2H， m)， 3.19-3.30(2H， m)， 3.94(2H， s)， 5.65(1H， brs)， 6.01-6.12(2H， m)， 6.29(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 6.43(2H， brs)， 6.90-7.01(1H， m)， 7.52-7.60(1H， m)， 8.13(1H， s)， 14.90(1H， s).HRESIMS(+) ： 440.17258( 计算得到 C22H23FN5O4， 440.17341)。
     实施例 46 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙 氨基 ] 螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸
     46A)3-[1-(2- 羟乙基 ) 环丙基氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5， - 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯 的制备。
     将 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 乙 酯 (3.09g， 11.7mmol)、 Ac2O(6.7mL， 70.9mmol) 和原甲酸三乙酯 (3.90mL， 23.5mmol) 的溶液在 120℃下加热 3 小时。真空浓缩 该混合物并高真空干燥。将粗产物溶解于无水甲苯 (40mL) 中， 并在 0℃下极为缓慢地添加 (1- 氨基 - 环丙基 )- 乙醇 (1.82g， 11.7mmol)。将反应混 合物在室温下搅拌 5 小时， 并用 甲苯稀释。用水、 盐水洗涤该有机层， 并干燥。蒸发去除溶剂， 并通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 1 2 ∶ 1 → 1 ∶ 1) 纯化粗产物得到成为黄色油的标题化合物 (2.99g， 68％ )。 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.85-0.92(2H， m)， 0.94-1.11(5H， m)， 1.85-1.91(2H， m)， 3.85-3.89(2H， m)， 8.19(1H， d， J ＝ 14.1Hz)， 9.84， 11.2( 各 d， J ＝ 3.99-4.09(2H， m)， 6.95-7.13(1H， m)， + 13.4Hz， 总 1H).EIMS(+)375[M] 。
     46B)10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 -[ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 NaH(617mg， 15.4mmol， 60％ ； 含于油中 ) 的 DMF(30mL) 溶液冷却至 0℃， 并用含 于 DMF(4mL) 的 3-[1-(2- 羟乙基 ) 环丙基氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5， - 四氟苯甲酰基 ) 丙基氨基丙 烯酸乙酯 (2.63g， 7.01mmol) 逐滴处理。 将反应混合物室温搅拌 1 小时， 并在 80℃下继续搅 拌 1 小时。 将反应混合物注入冰水中， 过滤所得的沉淀物并用水洗涤。 将所得的固体溶解于 100mL EtOH 并过滤。将滤出液浓缩至 50mL， 过滤收集所得的沉淀物， 用 EtOH 洗涤并干燥得 1 到成为淡褐色固体的标题化合物 (1.43g， 61％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.03(2H， br)，
     1.18(2H， br)， 1.26(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 2.03-2.73(2H， br)， 4.21(2H， q， J-7.3Hz)， 7.66(1H， + dd， J ＝ 10.4， 7.9Hz)， 8.51(1H， s).EIMS(+)335[M] 。
     46C)10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 三氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡 啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (1.2g， 3.58mmol) 在浓 H2SO4(15mL) 中的溶液在 0℃下用固体 KNO3(510mg， 5.04mmol) 分批处理。在 0℃下搅拌 2 小时后， 将反 应混合物注入冰水中， 过滤所得的沉淀物。用 EtOH 洗涤所得的固体， 干燥得到成为褐色固 1 体的标题化合物 (554mg， 41％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.02(2H， br)， 1.10-1.27(5H， m)， 1.91-2.86(2H， br)， 4.21(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.61(2H， br)， 4.52(2H， br)， 8.58(1H， + s).EIMS(+)380[M] .HREIMS(+)380.0856( 计算得到 C17H14F2N2O6， 380.0820)。
     46D)9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10 ′， 11 ′ - 二氟 2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 -[ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (500mg， 1， 31mmol) 和 10％ Pd/C(100mg) 的 DMF(30mL) 溶液在氢气气氛下于 50℃下搅拌 1.5 小时。用 Celite 过滤除去催化剂， 并真空浓缩滤出液。将所得的固体溶解于 CH2Cl2 和 EtOH(3 ∶ 1， 65mL) 并 过滤。除去 CH2Cl2， 过滤分离所得的沉淀物， 用 EtOH 洗涤， 并干燥得到成为浅褐色固体的标 1 题化合物 (355mg， 77％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ0.99(2H， br)， 1.13(2H， br)， 1.25(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.64-2.91(2H， br)， 4.18(2H， q， J ＝ 7.3Hz)54.35(2H， br)， 7.46(2H， br)， + 8.35(1H， s).EIMS(+)350[M] 。
     46E)9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ .[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (320mg， 0.913mmol) 含 于 AcOH-H2O-H2SO4(6 ∶ 4 ∶ 1v/v， 5.3mL) 的 溶 液 回 流 加 热 1 小 时。 将 该 反 应 混 合 物
     注入冰水， 并过滤收集该沉淀物， 用水洗涤， 得到标题化合物。1H-NMR(400MHz DMSO， ) δ0.63-1.55(4H， br)， 1.90-3.11(2H， br)， 3,78-4.96(2H， br)， 7.40(2H， s)， 8.64(1H， s)， + 14.5(1H， s).EIMS(+)322[M] 。
     46F)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸的制备。
     将 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧 - 螺环 [ 环丙烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3， -ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (150mg， 0.465mmol)、 三 乙 胺 (0.100mL， 0.717mmol) 和 N-2-( 吡 啶 基 )-1， 2- 乙 二 胺 (95.5mg， 0.696mmol) 在 DMSO(2mL) 中的溶液在 100℃下搅拌 3 小时。将反应混合物注入冰水中， 过滤所得的沉淀 物并用乙醇洗涤。将所得的固体溶解于 DMF 并过滤。将滤出液注入水中， 过滤所得的沉淀 物， 用水洗涤并干燥得到成为深黄色固体的标题化合物 (95.6mg， 47％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO) δ 0.81-1.50(4H ， m) ， 3.40-3.51(2H ， m) ， 3.55-3.66(2H ， m) ， 3.80-4.60(4H ， m) ， 6.32(1H， brs)， 6.40-6.50(2H， m) ， 6.70(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 9.97(2H， brs)， 7.30-7.40(1H， m)， 7.90-8.00(1H， m)， 15.14(1H， s).HRESIMS(+) ： 440.17315( 计 算 得 到 C22H22FN5O4， 440.17340)。
     实施例 47 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙 氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸
     47A)(1- 羟基环丁基 )- 乙酸乙酯的制备
     通过注射器将三甲基氯硅烷 (1.14mL， 8.92mmmol) 添加至锌粉 (7.97g， 0.122mol) 在无水 Et2O(200mL) 的悬浮液中。将混合物在室温下搅拌 15 分钟。 将该混合物加热至 回流， 去除热源， 添加溴乙酸乙酯 (10.3mL， 92.9mmol)， 该添加的速率使得该醚溶液略微沸 腾。将该混合物回流一小时， 然后再在室温下搅拌一小时。添加在醚 (30mL) 中的环戊酮 (6.00g， 75.9mmol) 溶液， 同时通过间歇冷却将混合物的温度保持在 19-20℃。室温下搅拌 一小时后， 将混合物注入冰冻的 25 ％氨水中 (400mL)。用醚萃取水相， 用 K2CO3 干燥合并 的相。过滤并蒸发溶剂， 得到成为无色油的标题化合物 (6.50g， 54 ％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.29(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.47-1.64(1H， m)， 1.76-1.87(1H， m)， 1.93-2.06(2H， m)，
     2.12-2.22(2H， m)， 2.67(2H， s)， 3.70(1H， s)， 4.19(2H， q， J ＝ 7.3Hz)。
     47B)(1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙酸乙酯的制备。
     在室温下将 H2SO4(2.20mL， 41.3mmol) 缓慢加入 1- 羟基环丁基乙酸乙酯 (6.45g， 40.8mmol) 和苄腈 (40mL， 0.392mol) 的混合物中。将混合物室温搅拌 1 小时， 并在 80℃下 继续搅拌 1 小时。在冰水浴中冷却该混合物， 添加 2N NaOH 溶液， 直至混合物达到 pH ＝ 7。 用乙酸乙酯萃取该混合物， 用无水 Na2SO4 干燥合并的有机萃取物， 过滤并真空浓缩。对残 留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 5 ∶ 1) 得到成为无色固体的标题化合物 (5.40g， 51 ％ )。 1 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.22(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.84-2.07(2H， m)， 2.22-2.32(2H， m)， 2.44-2.55(2H， m)， 3.05(2H， s)， 4.11(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 6.73(1H， s)， 7.39-7.52(3H， m)， 7.72-7.79(2H， m)。
     47C)2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ] 乙醇的制备。
     将 LiAlH4(3.88g， 0.102mol) 在室温下添加至 1-( 苯甲酰基氨基 )- 环丁基乙 酸乙 酯 (5.30g， 20.3mmol) 的 THF(100mL) 溶液。 将混合物搅拌 1 小时， 然后再回流一小时。 将混 合物在冰水浴中冷却， 加入数滴水， 再将该混合物静置过夜。用乙酸乙酯稀释该混合物， 用 无水 Na2SO4 干燥， 过滤， 并真空浓缩。蒸馏该残留物得到成为无色油的标题化合物 (2.53g， 1 61％ )。H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.69-1.86(2H， m)， 1.88(2H， t， J ＝ 5.5Hz)， 1.92-2.09(4H， m)， 3.73(2H， s)， 3.87(2H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.22-7.35(5H， m)。
     47D)2-[1- 氨基环丁基 ] 乙醇的制备。
     将 10％ Pd-C(500mg) 加入 2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ] 乙醇 (4.00g， 19.5mmol) 的 EtOH(100mL) 溶液， 将该混合物在 0.5Mpa H2 气氛下室温搅拌 6 小时。 过滤该混合物， 并真空 1 浓缩滤出液。 蒸馏该残留物得到成为无色油的标题化合物 (1.65g， 73％ )。 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.60-1.72(2H， m)， 1.75(2H， t， J ＝ 5.5Hz)， 1.77-1.87(2H， m)， 2.03-2.13(2H， m)，3.81(2H， q， J ＝ 5.5Hz)。
     47E)3-[1-(2- 羟乙基 ) 环丁氨基 -]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯的 制备。
     将 搅 拌 中 的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 酯 (3.67g， 13.9mmol)、 Ac2O(7.89mL， 83.5mmol) 和原甲酸三乙酯 (4.63mL， 27.8mmol) 的溶液在 120 ℃下加热 3 小 时。真空浓缩该混合物并高真空干燥。在 0℃下向该混合物在无水甲苯 (50mL) 中的溶液 缓慢添加含于无水甲苯 (20mL) 的 1- 氨基 -1-(2- 羟乙基 ) 环丁烷 (1.60g， 13.9mmol)。 将所得混合物在室温下搅拌 2 小时， 蒸发去除溶剂。对残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷 ＝ 1 ∶ 1) 得 到 成 为 浅 黄 色 固 体 的 标 题 化 合 物 (3.30g， 61 ％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3) δ0.96(0.6H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.09(2.4H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.85-2.03(12H， m)， 2.06-2.13(2H， m)， 2.20-2.30(2H， m)， 2.32-2.43(2H， m)， 3.82-3.88(2H， m)， 4.02(0.4H， q， J ＝ 7.3Hz)，
     4.07(1.6H， q， J ＝ 7.3Hz)， 6.94-7.03(0.2H， m)， 7.05-7.13(0.8H， m)， 8.23-8.30(1H， m)， 10.05-10.17(0.2H， m)， 11.36-11.50(0.8H， m)。
     47F)10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     向 3-[1-(2- 羟 乙 基 ) 环 丁 氨 基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 甲 酰 基 ) 丙 烯 酸 乙 酯 (2.80g， 7.19mmol) 的 DMF(30mL) 溶液添加 NaH(350mg， 8.75mmol)。将混合物在室温下搅拌 30 分钟， 然后再在 80℃下加热 30 分钟。 在 0℃下向该混合物中分批添加水， 过滤分离所得的 沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为无色固体的标题化合物 (655mg， 26％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.67-1.79(1H， m)， 1.91-2.04(1H， m)， 2.42-2.53(4H， m)， 2.67(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 4.24(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.55(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.72(1H， dd， J ＝ 10.4 和 7.9Hz)， 8.41(1H， s)。
     47G)10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10 ′， 11 ′ - 二 氟 -2 ′， 3 ′ - 二 氢 -8 ′ - 氧 - 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯 并 氧 氮 杂 卓 ]-7 ′ - 羧 酸 乙 酯 (925mg， 2.65mmol) 在 浓 H2SO4(11mL) 中的溶液在 0℃下用固体 KNO3(363mg， 3.59mmol) 分批处理。在 0℃下搅拌 2 小 时后， 将反应混合物注入冰水中， 合并过滤所得的沉淀物并用水洗涤。对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝ 10 ∶ 1) 得到成为黄色固体的标题化合物 (822mg， 79％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)，1.68-1.78(1H， m)， 1.90-2.03(1H， m)， 2.40-2.58(4H， m)， 2.69(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 4.24(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.63(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 8.44(1H， s)。
     47H)9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -9′ - 硝基 -8′ - 氧 - 螺环 -[ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (770mg， 1.95mmol) 的 DMF(70mL) 溶液在氢气气氛下于 50 ℃下用 10 ％ Pd/C(200mg) 处理 1 小时。用 Celite 过滤除去催化剂， 并真空浓缩滤出液。对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝ 10 ∶ 1) 得到 成为无色固体的标题化合物 (559mg， 79％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.26(3H， t， J＝ 7.3Hz)， 1.65-1.77(1H， m)， 1.87-2.01(1H， m)， 2.35-2.62(6H， m)， 4.21(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.31-4.42(2H， bit)， 7.40-7.60(2H， brs)， 8.23(1H， s)。
     47I)9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 2N NaOH(7.0mL， 14.0mmol) 在室温下加入 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3 ′ - 二 氢 -8 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯 并 氧 氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙酯 (513mg， 1.41mmol) 在 EtOH(14mL) 中的混合物， 并将混合物在 50 ℃下加热 3 小时。将 2N HCl(7.0mL) 和水加入该反应混合物。过滤收集所得的沉淀
     物， 用水洗涤， 并干燥得到成为无色固体的标题化合物 (427mg， 90 ％ )。 1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.64-1.77(1H， m)， 1.89-2.02(1H， m)， 2.56-2.70(2H5br)， 4.30-4.50(2H， br)， 7.35-7.52(2H， brs)， 8.47(1H， s)， 14.60(1H， s)。
     47J)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸的制备。
     将 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸 (186mg， 0.553mmol)、 N2- 吡 啶 基 -1， 2- 乙 二 胺 (115mg， 0.838mmol) 和 三 乙 胺 (117μL) 在 DMSO(2.5mL) 中 的 溶 液 在 120 ℃ 下 搅 拌 4 小 时。 在 0 ℃ 下 将 反 应 混 合 物 分 批 添 加 至 冰 水， 并向该混 合 物 添 加 2N HCl(3 滴 )。 过 滤 分 离 所 得 的 沉 淀 物， 用 EtOH 洗 涤， 并干燥得到成为黄 1 DMSO-d6)51.61-1.74(1H， m)， 色 固 体 的 标 题 化 合 物 (165mg， 66 ％ )。 H-NMR(400MHz， 1.84-2.00(1H， m)， 2.30-2.65(6H， m)， 3.40-3.50(2H， m)， 3.52-3.62(2H， m)， 4.10-4.33(2H， br) ， 6.20-6.30(1H ， m) ， 6.42-6.51(2H ， m) ， 6.69(1H ， t， J ＝ 5.5Hz) ， 6.90-7.08(2H ， br) ， 7.32-7.40(1H ， m) ， 7.97(1H ， dd ， J ＝ 4.3 和 1.2Hz) ， 8.26(1H ， s) ， 15.23(1H ， s).HRESIMS(+)454.18677( 计算得到 C 23H25FN5O4， 454.18906)。
     实施例 48 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙 氨基 ] 螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸
     48A)3-[1-(2- 羟乙基 ) 环戊氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯的制 备。
     将 搅 拌 中 的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 乙 酯 (20.3g， 76.8mmol)、 Ac2O(44.0mL， 0.465mol) 和原甲酸三乙酯 (25.6mL， 0.154mol) 的溶液在 120 ℃下加 热 3 小时。真空浓缩该混合物， 并在高真空下干燥。在 0℃下将含于无水甲苯 (50mL) 的 1- 氨 基 -1-(2- 羟乙基 ) 环戊烷 (9.94g， 76.9mmol) 缓慢添加至该混合物在无水甲苯 (200mL)
     中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌 2 小时。蒸发去除溶剂。对残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 2 ∶ 1) 得到成为无色固体的标题化合物 (23.2g， 75％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.96(0.6H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.09(2.4H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.48-1.54(1H， m)， 1.74-1.90(6H， m)， 1.97-2.06(4H， m)， 3.78-3.85(2H， m)， 3.98-4.10(2H， m)， 6.95-7.12(1H， m)， 8.17-8.24(1H， m)， 9.81-9.94(0.3H， m)， 11.20-11.35(0.7H， m)。
     48B)6， 7， 8- 三氟 -1， 4- 二氢 -1-[1-(2- 羟乙基 ) 环戊基 ]-4- 氧 -3- 喹啉羧酸乙 酯的制备。
     向 3-[1-(2- 羟 乙 基 )- 环 戊 氨 基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 甲 酰 基 ) 丙 烯 酸 乙 酯 (22.7g， 56.3mmol) 在 THF(200mL) 中的冰冻溶液中添加 NaH(3.60g， 90.0mmol)， 并将该混 合物在室温下搅拌 1 小时。在 0℃下向该混合物分批添加水。用乙酸乙酯提取所得的混 合物， 并真空浓缩合并的有机萃取物。对残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 2 ∶ 1) 得到 DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J＝ 成为无色固体的标题化合物 (14.1g， 65％ )。1H-NMR(400MHz， 7.3Hz)， 1.53-1.75(4H， m)， 2.10-2.26(4H， m)， 2.31-2.44(2H， m)， 4.23(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.55-4.60(1H， m)， 7.99-8.07(1H， m)， 8.80(1H， s)。
     48C)10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     向 6， 7， 8- 三氟 -1， 4- 二氢 -1-[1-(2- 羟乙基 ) 环戊基 ]-4- 氧 -3- 喹啉羧酸乙酯 (3.84 g， 10.0mmol) 的 DMF(40mL) 溶液添加 NaH(480mg， 12.0mmol)， 并将该混合物在 80℃下 加热 30 分钟。 在 0℃下用水分批处理该混合物。 用乙酸乙酯提取所得的混合物， 并真空浓缩 合并的萃取物。对残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 2 ∶ 1) 得到成为无色固体的标题化合 物 (1.12g， 31％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.42(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.52-1.64(2H， m)， 1.75-1.88(0H， m)， 2.11-2.21(2H， m)， 2.27-2.37(2H， m)， 2.47(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 4.39(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.47(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.98(1H， dd， J ＝ 9.8 和 7.9Hz)， 8.67(1H， s)。
     48D)10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡 啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (50.0g， 0.138mmol) 在浓 H2SO4(1mL) 中的溶液在 0℃下用固体 KNO3(20.0mg， 0.199mmol) 分批处理。在 0℃下搅拌 1 小时后， 将 反应混合物注入冰水中， 过滤合并所得的沉淀物， 用水洗涤并溶解于 CH2Cl2-MeOH(5 ∶ 1v/ v)。真空浓缩合并的萃取物。对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝ 10 ∶ 1) 得到成为黄色 固体的标题化合物 (26.0mg， 46％ )。 1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.37(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.52-1.66(2H， m)， 1.78-1.90(2H， m)， 2.15-2.30(4H， m)， 2.50(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 4.36(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.55(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 8.69(1H， s)。
     48E)9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (2.00g， 4.90mmol) 的 DMF(120mL) 溶液在氢气气氛下于 50℃下用 10％ Pd/C(400mg) 处理 1.5 小时。用 Celite 过滤除去催化剂， 并真空浓缩滤出液。 对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝ 10 ∶ 1) 得到成为 1 黄色固体的标题化合物 (527mg， 28％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.26(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.37-1.50(2H， m)， 1.65-1.77(2H， m)， 2.06-2.25(4H， m)， 2.36(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 4.20(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.30(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.53(2H， brs)， 8.47(1H， s)。
     48F)9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 2N NaOH(6.5mL， 13.0mmol) 在室温下加入到 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (482mg， 1.27mmol) 在 EtOH(13mL) 中的混合物中， 并将混合物在 50℃ 下加热 3 小时。将 2N HCl(6.5mL) 和水加入该反应混合物。过滤收集所得的沉淀物， 用水 1 洗涤， 并干燥得到成为无色固体的标题化合物 (425mg， 96 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.35-1.52(2H， m)， 1.65-1.75(2H， m)， 2.10-2.30(4H， m)， 2.43(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 4.34(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.50(2H， brs)， 8.67(1H， s)， 14.5(1H， brs)。
     48G)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸的制备。
     将 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环戊烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (200mg， 0.571mmol) 和 N-(2- 吡啶基 )-1， 2- 乙二胺 (118mg， 0.860mmol) 在 DMSO(2.5mL) 中的溶液在 100℃下搅 拌 4 小时。在 0℃下向该反应混合物分批添加冰水， 过滤分离所得的沉淀物， 并依次用水、 iPr2O 和 EtOH 洗涤。干燥所得的沉淀物以得到成为淡黄色固体的该标题化合物 (185mg， 69 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.34-1.49(2H， m)， 1.60-1.75(2H， m)， 2.03-2.23(4H， m)， 2.34(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 3.40-3.55(2H， m)， 3.55-3.64(2H， m)， 4.17(2H， t， J-6.7Hz)， 6.25-6.33(1H， br)， 6.43-6.51(2H， m)， 6.69(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.06(2H， br)， 7.35(1H， ddd， J ＝ 6.7， 6.7 和 1.8Hz)， 8.86(1H， dd， J ＝ 4.9 和 1.2Hz)， 8.49(1H， s)， 15.1(1H， brs). HRESIMS(+)4678.20118( 计算得到 C24H27FN5O4， 468.20471)。
     实施例 49 ：
     9 ′ - 氨基 -10 ′ - 氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -3 ′ - 甲基 -8 ′ - 氧 11 ′ -[2-(2- 吡啶 基氨基 ) 乙氨基 ]- 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 羧酸
     49A)2-(1- 羟基环丁基 ) 丙酸乙酯的制备。
     通过注射器将三甲基氯硅烷 (950μL， 7.43mmmol) 添加至锌粉 (6.65g， 0.102mol) 在无水 Et2O(170mL) 的悬浮液中。将混合物在室温下搅拌 15 分钟， 加热至回流， 去除热源， 以使醚轻微沸腾的速率添加 2- 溴丙酸乙酯 (10.1mL， 77.8mmol)。加热至回流 1 小时后， 将 混合物在室温下搅拌 1 小时。 添加在 Et2O(10mL) 中的环丁酮 (5.00g， 63.2mmol) 溶液， 同时 通过间歇冷却将混合物的温度保持在 19-20℃。 室温下搅拌 1 小时后， 将混合物注入冰冻的25％氨水中 (400mL)。用醚萃取水相， 用 K2CO3 干燥合并的有机相， 浓缩， 得到成为无色油的 1 标题化合物 (12.9g， 100％ )。 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.21(3H， d， J ＝ 6.8Hz)， 1.29(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.51-1.64(1H， m)， 1.80-1.90(1H， m)， 1.96-2.17(4H， m)， 2.70(1H， q， J＝ 7.3Hz)， 3.44(1H， s)， 4.18(2H， qd， J ＝ 7.3 和 1.2Hz)。
     49B)2-[1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ]- 丙酸乙酯的制备。
     在 室 温 下 将 H2SO4(3.90mL， 73.2mmol) 缓 慢 加 入 2-(1- 羟 基 环 丁 基 ) 丙 酸 乙 酯 (12.5g， 72.6mmol) 和苄腈 (75mL) 的混合物中。 将混合物在室温下搅拌 1 小时， 然后在 80℃ 下搅拌 1 小时。在冰水浴中冷却该混合物， 添加 2N NaOH 溶液， 直至混合物达到 pH ＝ 7。用 乙酸乙酯萃取该混合物， 用无水 Na2SO4 干燥合并的有机萃取物， 过滤并真空浓缩。对残留 物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 5 ∶ 1) 得到成为淡黄色固体的标题化合物 (9.24g， 46 ％ )。H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.25(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.30(3H， d， J ＝ 7.3Hz)， 1.73-1.87(1H， m)， 1.98-2.09(2H， m)， 2.21-2.32(1H， m)， 2.53-2.63(1H， m)， 2.84-2.94(1H， m)， 3.11(1H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.08-4.20(2H， m)， 6.88(1H， brs)， 7.40-7.52(3H， m)， 7.75-7.80(2H， m)。
     49C)2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ] 丙醇的制备。
     1将 LiAlH4(6.30g， 0.166mol) 添加至 2-[1-( 苯甲酰基氨基 )- 环丁基 ] 丙酸乙酯 (9.07g， 32.9mmol) 的 THF(160mL) 溶液中并将该混合物在室温下搅拌 1 小时， 然后回流 1 小时。用冰水浴冷却该混合物， 并加入数滴水。用乙酸乙酯稀释该混合物， 用无水 Na2SO4
     干燥， 过滤， 并真空浓缩。蒸馏该残留物得到成为淡黄色油的标题化合物 (6.92g， 96％ )。 1 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.00(3H， d， J ＝ 6.7Hz)， 1.66-1.77(1H， m)， 1.81-1.97(2H， m)， 2.02-2.10(1H， m)， 2.10-2.24(3J， m)， 3.59(1H， dd， J ＝ 11.0 和 7.9Hz)， 3.71(1H， d， J＝ 11.6Hz)， 3.74(1H， dd， J ＝ 11.0 和 3.7Hz)， 3.89(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 7.23-7.36(5H， m)。
     49D)2-(1- 氨基环丁基 ) 丙醇的制备。
     将 10％ Pd-C(700mg) 加入到 2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ] 丙醇 (6.81g， 31.1mmol) 2 的 EtOH(150mL) 溶 液 中， 将 该 混 合 物 在 5kgf/cm H2 气 氛 下 室 温 搅 拌 6 小 时。 过 滤 该 混 合物， 并真空浓缩滤出液。蒸馏该残留物得到成为无色油的标题化合物 (2.96g， 74 ％ )。 1 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.03(3H， d， J ＝ 7.3Hz)， 1.63-1.74(3H， m)， 1.78-1.94(2H， m)， 2.10-2.28(2H， m)， 3.50(1H， dd， J ＝ 11.0 和 4.3Hz)， 3.91(1H， dd， J ＝ 11.0 和 3.1Hz)。
     49E)3-[1-(1- 羟基 -2- 丙基 )- 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸 乙酯的制备。
     将 搅 拌 中 的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 酯 (6.13g， 23.2mmol)、 0.140mol) 和原甲酸三乙酯 (7.80mL， 46.8mmol) 的溶液在 120 ℃下加热 3 小 Ac2O(13.2mL， 时。真空浓缩该混合物并高真空干燥。在 0 ℃下向无水甲苯 (100mL) 中的残留物混合物 缓慢添加含于无水甲苯 (40mL) 的 2-(1- 氨基环丁基 ) 丙醇 (3.00g， 23.2mmol)。将该混 合物在室温下搅拌 2 小时， 蒸发去除溶剂。对残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 1 ∶ 1) 得 到成为无色固体的标题化合物 (6.23g， 67％ )。 1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.95(0.6H， t， J ＝ 7.3Hz)， 0.97(3H， d， J ＝ 7.3Hz)， 1.09(2.4H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.54(1H， t， J ＝ 4.9Hz)， 1.85-2.15(3H， m)， 2.19-2.50(4H， m)， 3.62-3.75(2H， m)， 4.02(0.2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.07(0.8H， q， J ＝ 7.3Hz)， 6.97-7.13(1H， m)， 8.24(0.8H， d， J ＝ 15.3Hz)， 8.25(0.2H， d， J ＝ 15.3Hz)， 10.03(0.2H， d， J ＝ 14.1Hz)， 11.40(0.8H， d， J ＝ 14.1Hz)。
     49F)10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -3 ′ - 甲基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     在 0℃下将 NaH(40mg) 添加至 3-[1-(1- 羟基 -2- 丙基 )- 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯 (404mg， 1.00mmol) 的 DMF(4mL) 溶液。在 0℃下搅拌一小时 后再添加 NaH(40mg)。 将混合物在 0℃下搅拌 1 小时， 在室温下搅拌 1 小时， 并在 70℃下搅拌 1 小时。在 0℃下向该混合物中分批添加水， 过滤分离所得的沉淀物， 用乙酸乙酯洗涤并干 1 燥得到成为淡黄色固体的标题化合物 (289mg， 80％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ0.93(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.66-1.77(1H， m)， 1.85-2.00(1H， m)， 2.35(1H， q，
     J ＝ 10.4Hz)， 2.53-2.69(3H， m)， 2.96-3.05(1H， m)， 3.82(1H， t， J ＝ 11.6Hz)， 4.24(2H， qd， J ＝ 7.3 和 2.4Hz)， 4.77(1H， dd， J ＝ 12.9 和 8.9Hz)， 7.73(1H， dd， J ＝ 10.4 和 8.6Hz)， 8.25(1H， s)。
     49G)10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -3′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     在 0 ℃ 下 用 固 体 KNO3(377mg， 3.73mmol) 分 批 处 理 在 浓 H2SO4(12mL) 中 的 10 ′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -3′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (1.00g， 2.75mmol) 溶液。 在 0℃下搅拌 2 小时后， 将反应混合物注入冰水中， 合并过滤所得的沉淀物并用水洗涤。从 DMF(20mL) 重结 晶所得的固体， 得到成为黄色固体的标题化合物 (923mg， 82％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ0.94(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.26(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.67-1.78(1H， m)， 1.83-1.98(1H， m)， 2.40-2.64(4H， m)， 2.92-3.05(1H， m)， 3.98(1H， t， J ＝ 11.6Hz)， 4.24(2H， t， J ＝ 7.3Hz)， 4.80(1H， dd， J ＝ 11.6 和 7.9 Hz)， 8.25(1H， s)。
     49H)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -3′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -3′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙酯 (900mg， 2.20mmol) 的 DMF(55mL) 溶液在氢气气氛下于 50 ℃下用 10 ％ Pd/C(180mg) 处理 3 小时。 用 Celite 过滤除去催化剂， 并真空浓缩滤出液。用 EtOH 洗涤残留物， 过滤收集并干燥得 1 到成为浅黄色固体的标题化合物 (756mg， 91 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ0.89(3H， brs)， 1.26(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.65-1.77(1H， m)， 1.80-1.95(1H， m)， 2.30-2.67(4H， m)， 2.82-2.94(1H， m)， 3.52-3.66(1H， m)， 4.15-4.28(2H， m)， 4.58-4.70(1H， m)， 7.40-7.65(2H， br)， 8.05(1H， s)。
     49I)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -3′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 2N NaOH(10.0mL) 在室温下加入 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二 氢 -3′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮 杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (720mg， 1.90mmol) 在 EtOH(20mL) 中的混合物， 并将混合物在 50℃ 下加热 3 小时。将 2N HCl(10.0mL) 和水加入该反应混合物。过滤收集所得的沉淀物， 用水 1 洗涤， 并干燥得到成为黄色固体的标题化合物 (654mg， 98％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ0.90(3H， d， J ＝ 5.5Hz)， 1.64-1.76(1H， m)， 1.81-1.96(1H， m)， 2.35-2.72(4H， m)， 2.88-3.02(1H， m)， 3.64(1H， t， J ＝ 11.6Hz)， 4.60-4.75(1H， m)， 7.46(2H， brs)， 8.26(1H， s)， 14.60(1H， brs)。
     49J)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -3′ - 甲基 -8′ - 氧 11′ -[2-(2- 吡 啶基氨基 ) 乙氨基 ]- 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9 ′ - 氨 基 -10 ′， 11 ′ - 二 氟 -2 ′， 3 ′ - 二 氢 -3 ′ - 甲 基 -8 ′ - 氧 螺 环 -[ 环 丁 烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯 并 氧 氮 杂 卓 ]-7 ′ - 羧 酸 (300mg， 0.856mmol)、 N-2-( 吡啶基 )-1， 2- 乙二胺 (177mg， 1.29mmol) 和三乙胺 (180μL) 在 DMSO(4mL) 中的溶液在 120 ℃下搅拌 5 小时。在 0 ℃下向该反应混合物分批加入冰 水， 并用 CH2Cl2 萃取该混合物。用无水 Na2SO4 干燥该合并的有机萃取物， 过滤， 并真空浓 缩。对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝ 10 ∶ 1) 得到成为黄色无定形固体的标题化合物 (177mg， 44 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ0.86(3H， d， J ＝ 5.5Hz)， 1.62-1.73(1H， m)， 1.79-1.93(1H， m)， 2.25-2.38(1H， m)， 2.38-2.64(3H， m)， 2.80-2.93(1H， m)， 3.27-3.50(3H， m)， 3.52-3.14(2H， m)， 4.50-4.60(1H， m)， 6.28(1H， brs)， 6.42-6.52(2H， m)， 6.69(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.01(2H， brs)， 7.32-7.40(1H， m)， 7.96(1H， dd， J ＝ 4.9 和 1.2Hz)， 8.07(1H， s)， 15.24(1H， s).HRESIMS(+)468.20923( 计算得到 C24H27FN5O4， 468.20471)。
     实施例 50 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -2′ - 甲基 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶 基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 羧酸
     50A)1-[( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙醛的制备。在 -78 ℃下于 30 分钟内将 DIBAL(40.0mL， 1M 甲苯溶液 ) 逐滴加入到搅拌中的 [1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙酸乙酯 (6.86g， 26.3mmol) 的 THF(130mL) 溶液中。 在 -78℃ 下搅拌 6 小时后， 在 -78℃下于 30 分钟内向该混合物逐滴添加 MeOH(10mL)。然后向该混 合物添加饱和 NH4Cl(20mL) 水溶液， 在室温下将混合物搅拌 1 小时。用 Et2O 萃取该混合 物， 用无水 Na2SO4 干燥， 过滤， 并真空浓缩。对残留物快速层析 ( 己烷∶ AcOEt ＝ 2 ∶ 1) 得到成为无色固体的标题化合物 (1.82g， 32％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.87-2.07(2H， m)， 2.25-2.34(2H， m)， 2.36-2.45(2H， m)， 3.28(2H， s)， 6.57(1H， brs)， 7.39-7.45(2H， m)， 7.46-7.53(1H， m)， 7.70-7.76(2H， m)， 9.79(1H， s)。
     50B)1-[1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ]-2- 丙醇的制备。
     在 -0℃下将甲基氯化镁 (14.0mL， 3M THF 溶液 ) 加入到搅拌中的 [1-( 苯甲酰基 氨基 ) 环丁基 ] 乙醛 (2.82g， 13.0mmol) 的 THF(30mL) 溶液中， 并将该混合物在室温下搅 拌 5 小时。在 0℃下将饱和 NH4Cl(10mL) 水溶液加入该混合物， 并用乙酸乙酯萃取所得的 混合物。用无水 Na2SO4 干燥该合并的有机萃取物， 过滤， 并真空浓缩。对残留物快速层析 ( 己烷∶ AcOEt ＝ 2 ∶ 1) 得到成为无色油的标题化合物 (2.65g， 87％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.25(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.77-2.12(5H， m)， 2.28-2.40(1H， m)， 2.52(1H， q， J＝ 10.4Hz)， 2.75-2.85(1H， m)， 3.26(1H， d， J ＝ 3.7Hz)， 3.97-4.07(1H， m)， 6.91(1H， brs)， 7.39-7.46(2H， m)， 7.46-7.53(1H， m)， 7.75-7.82(2H， m)。
     50C)1-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ]-2- 丙醇的制备。
     将 LiAlH4(1.20g， 31.6mol) 在室温下添加至 l-[1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 丙醇 (2.64g， 11.3mmol) 的 THF(40mL) 溶液。将混合物在室温下搅拌 1 小时， 并回流 30 分钟。 用冰水浴冷却该混合物， 并加入数滴水。然后用乙酸乙酯稀释该混合物， 用无水 Na2SO4 干
     燥， 过滤， 并真空浓缩。快速层析 (AcOEt) 该残留物得到成为无色油的标题化合物 (2.25g， 91 ％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.21(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.63(1H， dd， J ＝ 13.7 和 2.4Hz)， 1.73-1.90(5H， m)， 2.04-2.13(1H， m)， 2.18-2.27(1H， m)， 3.59(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 3.81(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 4.07-4.16(1H， m)， 7.22-7.35(5H， m)。
     50D)1-(1- 氨基环丁基 )-2- 丙醇的制备。
     将 10 ％ Pd-C(300mg) 加 入 到 1-[1-( 苄 基 氨 基 ) 环 丁 基 ]-2- 丙 醇 (2.24g， 10.2mmol) 的 EtOH(50mL) 溶液中， 将该混合物在 5kgf/cm2H2 气氛下室温搅拌 10 小时。过 滤该混合物， 并真空浓缩滤出液。蒸馏该残留物得到成为淡黄色油的标题化合物 (1.24g， 94％ )。 1
     H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.17(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.43(1H， ddd， J ＝ 14.7， 10.4 和 1.2Hz)， 1.61-1.69(1H， m)， 1.72(1H， dd， J ＝ 14.7 和 1.8Hz)， 1.75-1.90(3H， m)， 1.93-2.03(1H， m)， 2.12-2.20(1H， m)， 4.00-4.08(1H， m)。
     50F)3-[1-(2- 羟基丙基 ) 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯的制备。
     将 搅 拌 中 的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 乙 酯 (2.45g， 9.27mmol)、 Ac2O(5.30mL， 56.1mmol) 和原甲酸三乙酯 (3.10mL， 18.6mmol) 的溶液在 120 ℃下加热 3 小 时。真空浓缩该混合物并高真空干燥。在 0℃下将含于无水甲苯 (10mL) 的 1-[1- 氨基环 丁基 ]-2- 丙醇 (1.20g， 9.29mmol) 缓慢添加至残留物在无水甲苯 (30mL) 中的混合物， 并在 室温下搅拌 2 小时。蒸发去除溶剂。对残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 1 ∶ 1) 得到成 为浅黄色固体的标题化合物 (3.10g， 83％ )。 1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.95(0.6H， t， J＝
     7.3Hz)， 1.09(2.4H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.29(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.51(1H， brs)， 1.83-2.05(4H， m)， 2.18-2.35(3H， m)， 2.41-2.53(1H， m)， 3.95-4.15(3H， m)， 6.96-7.13(1H， m)， 8.27(0.8H， d， J ＝ 14.7Hz)， 8.31(0.2H， d， J ＝ 14.7Hz)， 10.30(0.2H， d， J ＝ 13.4Hz)， 11.56(0.8H， d， J ＝ 13.4Hz)。
     50G)10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -2 ′ - 甲基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     在 0℃下将 NaH(40mg) 添加至 3-[1-(2- 羟基 1 丙基 ) 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四 氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯 (404mg， 1.00mmol) 的 DMF(4mL) 溶液。 在 0℃下搅拌 1 小时后添加 NaH(40mg)。将混合物在 0℃下搅拌 1 小时， 在室温下搅拌 1 小时， 并在 80℃下搅拌 1 小时。 在 0℃下向该混合物中分批添加水， 过滤分离所得的沉淀物， 依次用水和 iPr2O 洗涤并干燥 1 得到成为无色固体的标题化合物 (244mg， 67％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.43(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.72(1H， q， J ＝ 10.4Hz)， 1.90-2.04(1H， m)， 2.24(1H， q， J ＝ 10.4Hz)， 2.34-2.43(1H， m)， 2.53-2.74(4H， m)， 4.24(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.48-4.58(1H， m)， 7.72(1H， qd， J ＝ 10.4 和 7.9Hz)， 8.40(1H， s)。
     50H)10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -2′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8 氧 - 螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10 ′， 11 ′ - 二 氟 -2 ′， 3 ′ - 二 氢 -2 ′ - 甲 基 -8 ′ - 氧 螺 环 -[ 环 丁 烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙酯 (182mg， 0.501mmol) 在浓 H2SO4(2mL) 中的溶液在 0℃下用固体 KNO3(72.0mg， 0.712mmol) 分批处理。 在 0℃下搅拌 2 小时后， 将反应混合物注入冰水， 过滤分离所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥 1 得到成为淡黄色固体的标题化合物 (190mg， 93％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.45(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.61-1.77(1H， m)， 1.90-2.03(1H， m)， 2.29-2.48(3H， m)， 2.57-2.72(3H， m)， 4.24(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.62-4.73(1H， m)， 8.43(1H， s)。
     50I)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -2′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -2′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 -[ 环 丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙酯 (1.13g， 2.77mmol) 的 DMF(70mL) 溶液在氢气气氛下于 50℃下用 10％ Pd/C(230mg) 处理 2 小时。用 Celite 过滤除去催化剂， 并真空浓缩滤出液。用 EtOH 洗涤残留物， 过滤收集并干燥得到成 1 为浅黄色固体的标题化合物 (824mg， 79％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.26(3H， t， J＝ 7.3Hz)， 1.36(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.70(1H， q， J ＝ 10.4Hz)， 1.86-2.00(1H， m)， 2.25(1H， q， J ＝ 10.4Hz)， 2.30-2.39(1H， m)， 2.42-2.63(4H， m)， 4.14-4.27(2H， m)， 4.27-4.37(1H， m)， 7.49(2H， brs)， 8.22(1H， s)。
     50J)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -2′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 2N NaOH(10.0mL) 在室温下加入到 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二 氢 -2′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮 杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (768mg， 2.03mmol) 在 EtOH(20mL) 中的混合物中， 并将混合物在 50℃ 下加热 3 小时。将 2N HCl(10.0mL) 和水加入该反应混合物。过滤收集所得的沉淀物， 用水 1 洗涤， 并干燥得到成为黄色固体的标题化合物 (703mg， 99％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.37(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.70(1H， q， J ＝ 11.0Hz)， 1.88-2.02(1H， m)， 2.31(1H， q， J＝ 11.0Hz)， 2.37-2.69(5H， m)， 4.30-4.42(1H， m)， 7.43(1H， brs)， 8.47(1H， s)， 14.61(1H， brs)。
     50K)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -2′ - 甲基 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡 啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2， 3 ′ - 二氢 -2 ′ - 甲基 -8 ′ - 氧螺环 -[ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (351mg， 1.00mmol)、 N-2- 吡 啶 基 -1， 2- 乙 二 胺 (210mg， 1.53mmol) 和 三 乙 胺 (0.22mL) 的 DMSO(5mL) 溶 液 在 120℃下搅拌 5 小时。在 0℃下向该反应混合物分批加入冰水， 并用 CH2Cl2 萃取该混合物。 用无水 Na2SO4 干燥该合并的萃取物， 过滤， 并真空浓缩。 对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝10 ∶ 1) 得到成为黄色无定形固体的标题化合物 (278mg， 59％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.29(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.67(1H， q， J ＝ 10.4Hz)， 1.84-1.99(1H， m)， 2.21(1H， q， J ＝ 10.4Hz)， 2.30-2.40(1H， m)， 2.40-2.62(4H， m)， 3.40-3.50(2H， m)， 3.53-3.67(2H， m)， 4.08-4.20(1H， m)， 5.91(1H， brs)， 6.42-6.50(2H， m)， 6.65(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.00(2H， brs) ， 7.32-7.38(1H ， m) ， 7.94(1H ， dd ， J ＝ 4.9 和 1.2Hz) ， 8.25(1H ， s) ， 15.24(1H ， s).HRESIMS(+)467.20453( 计算得到 C24H27FN5O4， 468.20471)。
     实施例 51 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯 并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸
     51A)5-[[1-( 羟甲基 ) 环丁基 ]- 甲基氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸 乙酯的制备。
     将 搅 拌 中 的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 乙 酯 (2.80g， 10.6mmol)、 Ac2O(6.01mL， 63.6mmol) 和 原 甲 酸 三 乙 酯 (3.53mL， 21.2mmol) 的 溶 液 在 120 ℃ 下 加 热 3 小时。真空浓缩该混合物并高真空干燥。将粗产物溶解于甲苯 (30mL)， 并在冰冷下添加 [1-( 氨甲基 ) 环丁基 ]] 甲醇盐酸化物 (1.60g， 10.6mmol) 在甲苯 (20mL) 中的悬浮液和三乙 胺 (1.48mL， 10.6mmol)。将混合物在室温下搅拌 6 小时， 并真空浓缩得到粗产物。通过柱层 析 ( 己烷∶ EtOAc 10 ∶ 1 → 2 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成为白色固体的标题化合物 (1.88g， 46％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.95-1.12(3H， m)， 1.66-1.69(1H， m)， 1.81-1.91(4H， m)， 1.94-2.03(2H， m)， 3.57(2H， d， J ＝ 6.7Hz)， 3.72(2H， d， J ＝ 4.3Hz)， 4.00-4.10(2H， m)， 6.96-7.12(1H， m)， 8.09-8.15(1H， m)， 9.65-11.15(1H， m)。
     51B)10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     在氩气氛围和冰冷下， 将 5-[[1-( 羟甲基 ) 环丁基 ] 甲氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 甲 酰 基 ) 丙 烯 酸 乙 酯 (1.88g， 4.83mmol) 的 DMF(10mL) 溶 液 添 加 至 含 于 油 的 60 ％
     NaH(424mg， 10.6mmol) 在 DMF(15mL) 中的悬浮液中。将反应混合物室 温搅拌 1 小时， 并在 90℃下继续搅拌 1 小时。将混合物注入冰水， 真空过滤收集所得的沉淀物， 用乙醇和水洗涤 1 以得到成为淡黄色固体的标题化合物 (1.41g， 84％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.29(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.80-2.09(6H， m)， 4.24(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.43(2H， s)， 4.61(2H， s)， + 7.73(1H， dd， J ＝ 10.4， 7.9Hz)， 8.74(1H， s).EIMS(+) ： 349[M] 。
     51C)10′， 11′ - 二氟 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10， 11- 二 氟 -8- 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 3 ′ (4 ′ H)-[2H， 8H]- 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7- 羧酸乙酯 (1.29g， 3.69mmol) 在浓 H2SO4(15mL) 中的溶液 在 0 ℃下用固体 KNO3(523mg， 5.17mmol) 分批处理。在 0 ℃下搅拌 3 小时后， 将反应混合 物注入冰水中， 过滤所得的沉淀物， 用水洗涤， 并悬浮于热 EtOH 中。将反应混合物回流搅 拌 1 小时， 冷却至室温并过滤收集该沉淀物以得到成为浅黄色固体的标题化合物 (1.20g， 1 82％ )。H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J-7.3Hz)， 1.80-1.88(1H， m)， 1.92-2.00(2H， m) ， 2.02-2.09(3H， m) ， 4.23(2H， q， J ＝ 7.3Hz) ， 4.51(2H， s) ， 4.61(2H ， s) ， 8.81(1H ， + s).ESIMS(+) ： 395[M+H] 。
     51D)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)[2H， 8H) 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (1.18g， 2.99mmol) 在 DMF(60mL) 中的溶液在 50℃氢气氛围 (0.35MPa) 下用 10％ Pd/C(120mg) 处理 7 小时。通过 Celite 过 滤去除催化剂， 并向滤出液中添加硅胶 (50g)。将混合物搅拌 30 分钟， 过滤去除硅胶， 并真 空去除溶剂。用 EtOH 洗涤沉淀物， 干燥得到成为淡黄色固体的标题化合物 (320mg， 29％ )。 1 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.26(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.76-2.04(6H， m)， 4.17-4.26(4H， m)， + 4.51(2H， s)， 7.57(2H， brs)， 8.52(1H， s).ESIMS(+) ： 365[M+H] 。
     51E)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H，
     8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9 ′ - 氨 基 -10， 11 ′ - 二 氟 -8 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 3 ′ -(4 ′ H)-[2H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯 并 氧 氮 杂 卓 ]-7 ′ - 羧 酸 乙 酯 (300mg， 0.823mmol) 在 AcOH-H2O-H2SO4(2 ∶ 1 ∶ 0.3v/v， 6.6mL) 混合物中的溶液在 100℃下加热 2 小时。 将反应混 合物注入冰水， 过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为褐色固体的标题化合物 1 (242mg， 87％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.76-2.07(6H， m)， 4.27(2H， s)， 4.69(2H， s)， + 7.48(2H， brs)， 8.92(1H， s)， 14.63(1H， s)。ESIMS(+) ： 337[M+H] 。
     51F)9 ′ - 氨基 -10 ′ - 氟 -8 ′ - 氧 -11-[2-( 吡啶 -2- 基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 -7′ - 羧酸的制 备。
     将 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (220mg， 0.654mmol)、 N-2- 吡啶基 -1， 2- 乙 二胺 (135mg， 0.981mmol) 和三乙胺 (0.137mL， 0.981mmol) 在 DMSO(5mL) 中的溶液在 100℃下搅拌 5 小时。用 Celite 过滤除去沉淀物， 向滤出液中添加水， 过滤收集所得的沉淀 1 物， 用 EtOH 洗涤并干燥得到成为淡褐色固体的标题化合物 (197mg， 66％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.73-1.87(3H， m)， 1.91-2.06(3H， m)， 3.43-3.47(2H， m)， 3.53-3.60(2H， m)，
     4.02(2H ， s) ， 4.55(2H ， s) ， 6.25-6.32(1H ， m) ， 6.45-6.49(2H ， m) ， 6.65-6.73(1H ， m) ， 7.02(2H， brs)， 7.35(1H， td， J ＝ 6.7， 1.8Hz)， 7.95(1H， dd， J ＝ 5.5， 1.2Hz)， 8.65(1H， s)， 15.25(1H， s).HRESIMS(+) ： 454.18998(+0.93mmu)。
     实施例 52 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丙 烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸
     52A)3-[[1-( 羟甲基 ) 环丙基 ]- 甲基氨基 ]-2-( 五氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯的制 备。
     将 3- 氧 -3-( 五氟苯基 ) 丙酸乙酯 (7.01g， 24.8mmol)、 Ac2O(14.0mL， 148mmol) 和 原甲酸三乙酯 (8.25mL， 49.6mmol) 的溶液在 120 ℃下加热 2 小时。真空浓缩该混合物并 真空干燥。将粗产物溶解于无水甲苯 (120mL) 中， 并在 0 ℃下极为缓慢地添加 [1-( 氨甲 基 )- 环丙基 ]] 甲醇 (2.51g， 24.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌 3 小时， 蒸发去除溶 剂。通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 2 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成为淡黄色固体的标题化合物 (7.30g， 75％ )。Mp.74.5-76.0℃。1H-NMR(400MHZ， CDCl3)δ0.57-0.63(4H， m)， 1.12(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.62(2H， t， J ＝ 5.5Hz)， 3.50(2H， d， J ＝ 5.5Hz)， 3.98-4.17(2H， m)， 8.17(1H， + d， J ＝ 5.5Hz)， 11.22(1H， brs).EMS(+)393[M] . 计算得到 C17H16F5NO4 ： C， 51.80 ； H， 3.90 ； N， 3.56. 实际测得 ： C， 51.91 ； H， 4.10 ； N， 3.56。
     52B)9′， 10， 11′ - 三氟 -8′ - 氧螺环 -[ 环丙烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 NaH(920mg， 23.0mmol， 60％含于油中 ) 的 DMF(50mL) 溶液冷却至 0℃， 并用含于 DMF(10mL) 的 3-[[1-( 羟甲基 ) 环丙基 ] 甲氨基 ]-2-( 五氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯 (4.10g， 10.4mmol) 逐滴处理。将反应混合物在室温下搅拌 4 小时， 并在 80 ℃下搅拌 1 小时。然 后将反应混合物注入冰水中， 过滤所得的沉淀物并用水洗涤。将所得的固体溶解于 100mL EtOH-CH2Cl2(2 ∶ 1) 并过滤。 将滤出液浓缩至 30mL， 过滤收集所得的沉淀物， 用 EtOH 洗涤并 1 干燥得到成为淡黄色固体的标题化合物 (2.45g， 67％ )。M.p.209-211℃。 H-NMR(400MHz，DMSO)δ0.56(2H， t， J ＝ 6.1Hz)， 0.77(2H， t， J ＝ 6.1Hz)， 1.26(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 4.20(2H， + s)， 4.21(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.49(2H， s).EIMS(+)353[M] 。
     52C)10′， 11′ - 二氟 -9′ -(2， 4- 二甲氧基苄基氨基 )-8′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 9 ′， 10 ′， 11 ′ - 三 氟 -8 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丙 烷 -1， 3 ′ (4 ′ H)-[2H， 8H] 吡 啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙酯 (1.51g， 4.27mmol)、 三乙胺 (0.890mL， 6.34mmol) 和 2， 4- 二甲氧基苄胺 (0.635mL， 4.29mmol) 的甲苯 (30mL) 溶液在 90℃下搅拌 6 小时。将反应混合物注入水， 并以 EtOAc 萃取。用水和盐水洗涤有机层， 用无水 Na2SO4 干 燥， 去除溶剂。通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 2 ∶ 3) 纯化该粗产物得到成为黄色固体的标题 化合物 (1.48g， 69％ )。
     M.p.131-132℃ .1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.58(2H， t， J ＝ 5.5Hz)， 0.75(2H， t， J ＝ 5.5Hz)， 1.36(3H， t， J-7.3Hz)， 3.78(3H， s)， 3.82(3H， s)， 4.03(2H， s)， 4.26(2H， brs)， 4.35(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.59(2H， dd， J ＝ 6.1， 3.0Hz)， 6.37-6.46(2H， m)， 7.23(1H， d， J＝ + 7.9Hz)， 8.01(1H， s)， 10.48(1H， brs).EIMS(+)500[M] 。
     52D)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 -[ 环丙烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -9′ -(2， 4- 二甲氧基苄基氨基 )-8′ - 氧螺环 -[ 环丙烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (1.42g， 2.84mmol) 的三氟乙酸 (30mL) 溶液在室温下搅拌 15 分钟。用 CH2Cl2 稀释反应混合物， 并用饱和 NaHCO3、 盐水洗涤， 用无水 Na2SO4 干燥。 去除溶剂， 将所得的固体溶解于 DMF 并过滤。 将滤出 液注入水中， 过滤所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为黄色固体的标题化合物 (835mg， 1 84％ )。 M.p.278-279℃。 H-NMR(400MHz， DMSO)δ0.50(2H， dd， J ＝ 6.1， 4.8Hz)， 0.71(2H， dd， J ＝ 6.1， 4.8Hz)， 1.25(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 4.03(2H， s)， 4.17(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.44(2H， s)， 7.68(2H， brs)， 8.32(1H， s).ESIMS(+) ： 351[M+H]。
     52E)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -8′ - 氧螺环 -[ 环丙烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 3 ′ -(4 ′ H)-[2H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef] 苯 并 氧 氮 杂 卓 ]7 ′ - 羧 酸 乙 酯 (830mg， 2.37mmol) 和 1M NaOH 的 EtOH(20mL) 溶液在室温下搅拌 3 分钟。去除溶剂， 并将残留物溶解在水中。将溶液 用 2MHCl 酸化至 pH 7， 过滤所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为淡黄色固体的标题 1 化合物 (757mg， 99％ )。 H-NMR 400MHz， DMSO)δ0.51(2H， dd， J ＝ 6.1， 4.8Hz)， 0.73(2H， dd， J ＝ 6.1， 4.8Hz)， 4.07(2H， s)， 4.62(2H， s)， 7.58(2H， brs)， 8.67(1H， s)， 14.66(1H， s).ESIMS(+) ： 323[M+H]。
     52F)9 ′ - 氨基 -10 ′ - 氟 -8 ′ - 氧 -11 ′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丙烷 -1， 3′ (4′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丙烷 -1， 3 ′ -(4 ′ H)-[2H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙基乙基酯 (505mg， 1.57mmol)、 三乙胺 (0.320mL， 2.30mmol) 和 N-2- 吡啶基 -1， 2- 乙二胺 (322mg， 2.35mmol) 在 DMSO(8mL) 中的溶 液在 100℃下搅拌 3 小时。将反应混合物注入冰水， 过滤所得的沉淀物， 用乙醇洗涤并干燥 得到成为黄色固体的标题化合物 (595mg， 86％ )。 1
     H-NMR(400MHz， DMSO)δ0.39(2H， t， J ＝ 6.1Hz)， 0.68(2H， t， J ＝ 6.1Hz)， 3.40-3.50(2H ， m) ， 3.52-3.64(2H ， m) ， 3.86(2H ， s) ， 4.48(2H ， brs) ， 6.28(1H ， brs) ， 6.40-6.50(2H， m)， 6.66(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.09(2H， brs)， 7.34(1H， td， J ＝ 6.7， 1.8Hz)， 7.90-7.98(1H， m)， 7.90-8.00(1H， m)， 8.43(1H， s)， 15.26(1H， s).ESIMS(+) ： 440[M+H]+。
     实施例 53 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙 氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并二氮卓 ]-7′ - 羧酸
     53A)(1- 羟基环丁基 ) 乙酸乙酯的制备。
     通过注射器将三甲基氯硅烷 (1.14mL， 8.92mmmol) 添加至锌粉 (7.97g， 0.122mol) 在无水 Et2O(200mL) 的悬浮液中。将混合物在室温下搅拌 15 分钟， 加热至回流， 去除热源， 以使醚轻微沸腾的速率添加溴乙酸乙酯 (10.3mL， 92.9mmol)。 加热至回流 1 小时后， 将混合 物在室温下搅拌 1 小时。 添加在醚 (30mL) 中的环戊酮 (6.00g， 75.9mmol) 溶液， 同时通过间 歇冷却将混合物的温度保持在 19-20℃。室温下搅拌 1 小时后， 将混合物注入冰冻的 25％ 氨水中 (400mL)。 用醚萃取水相， 用 K2CO3 干燥合并的有机相， 蒸发溶剂得到成为无色油的标 1 题化合物 (6.50g， 54％ )。 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.29(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.47-1.64(1H， m)， 1.76-1.87(1H， m)， 1.93-2.06(2H， m)， 2.12-2.22(2H， m)， 2.67(2H， s)， 3.70(1H， s)， 4.19(2H， q， J ＝ 7.3Hz)。
     53B)[1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙酸乙酯的制备。
     在 室 温 下 将 H2SO4(2.20mL， 41.3mmol) 缓 慢 加 入 (1- 羟 基 环 丁 基 ) 乙 酸 乙 酯 (6.45g， 40.8mmol) 和苄腈 (40mL， 0.392mol) 的混合物中。将混合物室温搅拌 1 小时， 并在 80℃下继续搅拌 1 小时。 在冰水浴中冷却该混合物， 添加 2N NaOH 溶液， 直至溶液达到 pH ＝ 7。用乙酸乙酯萃取该混合物， 用无水 Na2SO4 干燥合并的有机萃取物， 过滤并真空浓缩。对 残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 5 ∶ 1) 得到成为无色固体的标题化合物 (5.40g， 51％ )。 1 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.22(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.84-2.07(2H， m)， 2.22-2.32(2H， m)， 2.44-2.55(2H， m)， 3.05(2H， s)， 4.11(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 6.73(1H， s)， 7.39-7.52(3H， m)， 7.72-7.79(2H， m)。
     53C)[1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙酸的制备。
     在室温下将 3N KOH(10mL， 30mmol) 添加至 1-( 苯甲酰基氨基 )- 环丁基乙酸乙 酯 (3.87g， 14.8mmol) 的 EtOH(30mL) 溶液， 并将混合物搅拌 1 小时。真空浓缩该反应混合 物， 并添加 6N HCl(5.0mL)。过滤收集所得的沉淀物， 用水和二异丙醚洗涤， 并干燥得到成 1 为无色固体的标题化合物 (3.15g， 91％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.76-1.89(2H， m)， 2.16-2.26(2H， m)， 2.28-2.40(2H， m)， 2.90(2H， s)， 7.43(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.50(1H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.83(2H， d， J ＝ 6.7Hz)， 8.45(1H， s)， 12.00(1H， brs)。
     53D)[1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙酰胺的制备。
     将 [1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙酸 (1.00g， 4.29mmol) 和亚硫酰氯 (3.20mL， 43.9mmol) 的混合物在室温下搅拌 1 小时。真空浓缩该混合物。向冰水浴中冷却的残留 物在 THF(30mL) 的混合物中添加 25 ％氨水 (30mL)。将混合物在室温下搅拌 1 小时。用 AcOEt-MeOH(3 ∶ 1v/v) 稀释该混合物并用水洗涤。用无水 Na2SO4 干燥有机相， 过滤， 并真 空浓缩得到成为无色固体的标题化合物 (925mg， 93％ )。 1
     H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.75-1.87(2H， m)， 2.14-2.23(2H， m)， 2.37-2.47(2H， m)， 2.70(2H， s)， 6.80(1H， s)， 7.29(1H， s)， 7.43(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.50(1H， t， J ＝ 6.7Hz)， 7.82(2H， d， J ＝ 6.7Hz)， 8.39(1H， s)。
     53E)2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ] 乙胺的制备。
     在室温下 30 分钟内将 LiAlH4(570mg， 15.0mmol) 分批加入到 [1-( 苯甲酰基氨基 ) 环丁基 ] 乙酰胺 (687mg， 3.00mmol) 的 THF(30mL) 溶液中， 并将该混合物加热回流 5 小时。 将混合物在冰水浴中冷却， 加入含水 THF 和数滴水， 再将该混合物静置过夜。用 Celite 过 滤该混合物， 以无水 Na2SO4 干燥该溶液。真空浓缩该溶液得到成为淡黄色油的标题化合 物 (609mg， 99 ％ )。1H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.65-1.80(2H， m)， 1.82(2H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.86-2.02(4H， m)， 2.82(2H， t， J ＝ 7.3Hz)， 3.65(2H， s)， 7.20-7.38(5H， m)。
     53F)2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ]-N-( 叔丁氧基羰基 ) 乙胺的制备。
     将 BoC2O(230mg， 1.05mmol) 加入到冰水浴中的 2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ] 乙胺 (205mg， 1.00mmol) 的 THF(1mL) 溶液中。在冰水浴中将混合物搅拌 30 分钟。真空浓缩该混 合物， 对残留物快速层析 (AcOEt ∶己烷＝ 2 ∶ 1) 得到成为无色固体的标题化合物 (164mg， 54 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.36(9H， s)， 1.60-1.84(6H， m)， 1.84-1.94(2H， m)， 2.92-3.04(2H， m)， 3.53(2H， s)， 6.83(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.21(1H， t， J ＝ 7.3Hz)， 7.29(2H， t， J ＝ 7.3Hz)， 7.35(2H， dJ ＝ 7.3Hz)。
     53G)2-(1- 氨基环丁基 )-N-( 叔丁氧基羰基 ) 乙胺的制备。
     向 2-[1-( 苄基氨基 ) 环丁基 ]-N-( 叔丁氧基羰基 ) 乙胺 (117mg， 0.384mmol) 的 EtOH(5mL) 溶液添加 10％ Pd-C(35mg)， 并将混合物在 5kgf/cm2H2 气体下和室温下搅拌 5 小 时。过滤该混合物， 并真空浓缩该滤出液。蒸馏该残留物得到成为无色固体的标题化合物 1 (76.0mg， 92％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.37(9H， s)， 1.49-1.58(2H， m)， 1.62-1.77(4H， m)， 1.82-1.91(2H， m)， 2.92-3.01(2H， m)， 6.78(1H， t， J ＝ 5.5Hz)。
     53H)3-[1-[2-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 乙基 ] 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰 基 ) 丙烯酸乙酯的制备。
     将 搅 拌 中 的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 基 ) 丙 酸 乙 酯 (5.28g， 20.0mmol)、 Ac2O(11.4mL， 0.121mol) 和原甲酸三乙酯 (6.66mL， 40.0mmol) 的溶液在 120 ℃下加热 34、 时。真空浓缩该混合物并高真空干燥。在 0 ℃下将含于无水甲苯 (30mL) 的 2-[1-( 苄 基 氨 基 ) 环 丁 基 ]-N-( 叔 丁 氧 基 羰 基 ) 乙 胺 (4.29g， 20.0mmol) 缓 慢 添 加 至 该 残 留 物 在无水甲苯 (70mL) 中的混合物中， 并在室温下搅拌 14、 时。蒸发去除溶剂， 对残留物 快 速 层 析 (AcOEt ∶ 己 烷 ＝ 2 ∶ 1) 得 到 成 为 淡 黄 色 油 的 标 题 化 合 物 (9.10g， 93 ％ )。 1 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ0.98(0.7H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.10(2.3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.43(9H， s)， 1.90-2.07(4H， m)， 2.17-2.38(4H， m)， 3.12-3.23(2H， m)， 4.00-4.15(2H， m)， 4.53-4.65(1H， br)， 6.95-7.03(0.7H， m)， 7.05-7.13(0.3H， m)， 8.13(1H， d， J ＝ 14.1Hz)， 9.88(0.3H， d， + + J ＝ 13.5Hz)， 11.29(0.7H3 d， J ＝ 13.5Hz).HRMS(ESI ) 对 C18H19F4NO4[M+H] ： 计 算 得 到， 489.20126 ； 实际测得 489.20200。
     53I)1′ -( 叔丁氧基羰基 )-10′， 11′ - 二氟 -10′， 11′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并二氮卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 3-[1-[2-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 乙基 ] 环丁氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰 基 ) 丙烯酸乙酯 (500mg， 1.02mmol) 的 DMF(5mL) 溶液在冰水浴中冷却。添加 NaH(82.0mg， 2.05mmol)， 将混合物搅拌 30 分钟， 然后室温下搅拌 24、 时。将混合物冷却至 0℃， 向该混合 物中分批添加水。 过滤合并所得的沉淀物， 依次用水和二异丙醚洗涤， 并干燥得到成为淡黄色固体的标题化合物 (312mg， 68％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-de)δ1.28(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.42(5H， s)， 1.54(4H， s)， 1.67-1.80(1H， m)， 1.80-1.95(1H， m)， 2.10-2.22(1H， m)， 2.22-2.37(2H， m)， 2.40-2.56(1H， m)， 2.65-2.80(2H， m)， 4.17-4.37(3H， m)， 7.93-8.01(1H， m)， 8.47(0.44H， s)， 8.51(0.56H， s)。
     53J)10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并二氮卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 1′ -( 叔丁氧基羰基 )-10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁 烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯 并 二 氮 卓 ]-7 ′ - 羧 酸 乙 酯 (5.50g， 12.3mmol) 在浓 H2SO4(60mL) 中的溶液在 0℃下用固体 KNO3(1.37g， 13.6mmol) 分批处理。 在 0℃下搅拌 1 小时后， 将反应混合物注入冰水中， 合并过滤所得的沉淀物并用水洗涤。对残 留物快速层析 (CH2Cl2-AcOEt ＝ 1 ∶ 1) 得到成为黄色固体的标题化合物 (3.28g， 68 ％ )。
     H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.26(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.63-1.75(1H， m)， 1.85-1.98(1H， m)， 2.35-2.57(6H， m)， 3.47-3.55(2H， m)， 4.22(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 6.96-7.02(1H， m)， 8.32(1H， s)。
     53K)9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并二氮卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     1将 10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并二氮卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (1.23g， 3.13mmol) 的 DMF(77mL) 溶液在氢气气氛下于 50℃下用 10％ Pd/C(250mg) 处理 1 小时。用 Celite 过滤 除去催化剂， 并真空浓缩滤出液。对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝ 2 ∶ 1) 得到成为黄色 固体的标题化合物 (1.00g， 88％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.25 (3H， X， J ＝ 7.3Hz)， 1.62-1.73(1H， m)， 1.82-1.96(1H， m)， 2.24-2.41(4H， m)， 2.45-2.60(2H， m)， 3.27-3.38(2H， m)， 4.19(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 5.28-5.34(1H， m)， 7.10(2H， brs)， 8.12(1H， s)。
     53L)9 ′ - 氨 基 -10， 11 ′ - 二 氟 -2 ′， 3 ′ - 二 氢 -8 ′ - 氧 螺 环 [ 环 丁 烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并二氮卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 2N NaOH(7.0mL， 14.0mmol) 在 室 温 下 加 入 到 9 ′ - 氨 基 -10 ′， 11 ′ - 二 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4]- 苯 并二氮卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (515mg， 1.41mmol) 在 EtOH(15mL) 中的混合物中， 并将混合物 在 50℃下加热 3 小时。将 2N HCl(7.0mL) 和水加入该反应混合物。过滤收集所得的沉淀 物， 用水洗涤， 并干燥得到成为黄色固体的标题化合物 (397mg， 83 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.61-1.73(1H， m)， 1.82-1.97(1H， m)， 2.30-2.44(4H， m)， 2.55-2.69(2H， m)， 3.25-3.50(2H， m)， 5.53-5.59(1H， br)， 7.03(2H， brs)， 8.35(1H， s)， 14.75(1H， s)。
     53M)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并二氮卓 ]-7′ - 羧 酸的制备。
     将 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′氧 - 螺环 [ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯 并 二 氮 卓 ]-7 ′ - 羧 酸 (300mg， 0.895mmol)、 N2- 吡啶基 -1， 2- 乙二胺 (185mg， 1.35mmol) 和三乙胺 (0.23mL) 在 DMSO(4mL) 中的溶液在 120℃下搅拌 5 小时。向该反应混合物分批加入冰水， 并用 CH2CH2 萃取该混合物。用无水 Na2SO4 干燥有机层， 过滤， 并真空浓缩。对残留物快速层析 (CH2Cl2-MeOH ＝ 10 ∶ 1) 得到成 为黄色固体的标题化合物 (259mg， 64％ )。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.58-1.70(1H， m)， 1.78-1.92(1H， m)， 2.21-2.38(4H， m)， 2.43-2.60(2H， m)， 3.19-3.37(2H， m)， 3.37-3.51(4H， m)， 4.50(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 5.50-5.58(1H， br)， 6.42-6.51(2H， m)， 6.65(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 6.82(2H， brs)， 7.36(1H， td， J ＝ 6.7 和 1.8Hz)， 7.95(1H， dd， J ＝ 4.9 和 1.2Hz)， 8.18(1H， s)， 15.28(1H， s).HRESIMS(+)453.20466( 计算得到 C23H26FN6O， 453.20504)。
     实施例 54 ：
     8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 草脲 胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸。
     54A)[3-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 草脲胺 -3- 基 ] 甲醇的制备。
     向 1-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 环戊烷羧酸 (6.57g， 28.4mmol) 的 THF(60mL) 溶液中室 温下添加 LiAlH4(2.89g， 61.0mol)。 搅拌 5 小时后， 将反应混合物注入冰水冰搅拌 30 分钟。 向该混合物添加 AcOEt， 并搅拌 30 分钟。过滤该混合物并用 AcOEt 萃取滤出液。用水和盐 水洗涤萃取混合物， 用 MgSO4 干燥， 并真空浓缩。通过柱层析 ( 己烷∶ AcOEt 1 ∶ 1) 纯化残 留物得到成为无色固体的 [3-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 草脲胺 -3- 基 ] 甲醇 (2.82g， 46％ )。 1 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.36(9H， s)， 1.84-1.91(1H， m)， 1.93-2.02(1H， m)， 3.46(2H， d， J ＝ 5.5Hz)， 3.59-3.62(1H， d， J ＝ 8.6Hz)， 3.66-3.70(3H， m)， 4.83(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 6.78(1H， brs)。
     54B)(3- 氨基草脲胺 -3- 基 ) 甲醇盐酸化物的制备。
     将 [3-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 草脲胺 -3- 基 ] 甲醇 (2.50g， 11.5mmol) 的 4M HCl- 二 噁烷 (30mL) 溶液室温搅拌 2 小时。真空浓缩该混合物， 并干燥得到成为淡褐色油的 (3- 氨 1 DMSO-d6)δ1.89-2.01(2H， 基草脲胺 -3- 基 ) 甲醇盐酸化物 (2.17g， 定量 )。H-NMR(400MHz， m)， 3.51-3.58(2H， m)， 3.66(2H， s)， 3.71-3.76(1H， m)，3.86-3.92(1H， m)， 8.33(3H， brs)。
     54C)3-[3-[1-( 羟甲基 )] 草脲胺基氨基 ]-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯 的制备。
     将 2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基乙酸乙酯 (3.04g， 11.5mmol)、 Ac2O(6.52mL， 69.0mmol) 和原甲酸三乙酯 (3.83mL， 23.0mmol) 的溶液在 120 ℃下加热 3 小时。真空浓缩该混合物 并高真空干燥。将粗产物溶解于 EtOH(50mL)， 并添加 (3- 氨基草脲胺 -3- 基 ) 甲醇盐酸 化物 (2.17g， 11.5mmol) 和三乙胺 (1.92mL， 13.8mmol)。在室温下搅拌 17 小时后， 真空浓 缩该混合物得到粗产物。通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 4 ∶ 1 → 1 ∶ 2) 纯化该粗产物得到 成为黄色油的 3-[3-[1-( 羟甲基 ) 草脲胺基氨基 ]--(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 ) 丙烯酸酯 1 (4.18g， 93％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO)δ0.87(3H x 1/4， t， J ＝ 7.3Hz)， 0.99(3H x 3/4， t， J ＝ 7.3Hz)， 2.09-2.14(2H， m)， 3.56-3.74(3H， m)， 3.78-3.97(5H， m)， 5.50(1H x 1/4， t， J ＝ 5.5Hz)， 5.54(1H x 3/4， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.33-7.46(1H， m)， 8.20-8.27(1H， m)， 9.88(1Hx 1/4， d， J ＝ 14.7Hz)， 11.27(1H x 3/4， d， J ＝ 14.7Hz)。
     54D)9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ -2′ H]-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     在氩气气氛下和冰冷下向 3-[3-[1-( 羟甲基 ) 草脲胺基氨基 ]-2-(2， 3， 4， 5- 四 氟 苯 甲 酰 基 )- 丙 烯 酸 酯 (3.94g， 10.6mmol) 的 DMF(50mL) 溶 液 中 添 加 含 于 油 的 60 ％ NaH(892mg， 22.3mmol)。60℃下搅拌 5 小时后， 将反应混合物注入冰水， 过滤收集所得的沉 淀物， 用水和 EtOH 洗涤， 并干燥得到成为无色固体的 9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 - 草 脲胺 -3， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 羧酸乙酯 (2.93g， 1 79％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 2.38-2.42(2H， m)， 3.78(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 3.92-3.98(1H， m)， 4.09-4.14(1H， m)， 4.20-4.25(3H， m)， 4.57(1H， d， J＝ 11.6Hz)， 4.65(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 7.67(1H， dd， J ＝ 10.4， 8.6Hz)， 8.50(1H， s)。
     54E)9′， 10′ - 二氟 -8′ - 硝基 -7′ - 氧螺环 -[ 草脲胺 -33′ (2′ H)-[7H] 吡 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯 并 噁 嗪 ]-6 ′ - 羧 酸 乙 酯 (2.90g， 8.26mmol) 在 浓 H2SO4(40mL) 中 的 溶 液 在 0 ℃下用固体 KNO3(1.17g， 11.6mmol) 分批处理。0 ℃下搅拌 2 小时后， 将反应混合物 注入冰水， 过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为无色固体的 9 ′， 10 ′ - 二 氟 -8 ′ - 硝 基 -7 ′ - 氧 螺 环 [ 草 脲 胺 -3， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡 啶 并 -[1， 2， 3-de][1， 4] 1 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 羧酸乙酯 (3.20g， 98 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.26(3H， t， J＝ 7.3Hz)， 2.41-2.46(2H， m)， 3.78(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 3.92-3.98(1H， m)， 4.09-4.14(1H， m)， 4.21-4.29(3H， m)， 4.62(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 4.72(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 8.53(1H， s)。
     54F)8 ′ - 氨基 -9 ′， 10 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧螺环 -[ 草脲胺 -3， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 9′， 10′ - 二氟 -8′ - 硝基 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯 (3.15g， 7.95mmol) 和铁 (2.66mg， 47.7mmol) 在 AcOH (40mL) 中的混合物在 90℃下搅拌 5 小时。将反应混合物真空浓缩后， 添加 DMF， 并 用 Celite 过滤该混合物。将滤出液注入水中， 过滤收集所得的沉淀物并干燥得到成为无色 固体的 8′ - 氨基 -9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸乙酯 (1.54g， 53％ )。 1H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.25(3H， t， J-7.3Hz)， 2.29-2.38(2H， m)， 3.72(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 3.90-3.96(1H， m)， 4.06-4.11(1H， m)， 4.15(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 4.19(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.32(1H， d， J＝ 11.0Hz)， 4.41(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 7.42(2H， brs)， 8.34(1H， s)。
     54G)8′ - 氨基 -9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 8 ′ - 氨 基 -9 ′， 10 ′ - 二 氟 -7 ′ - 氧 螺 环 [ 草 脲 胺 -3， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯 并 噁 嗪 ]-6 ′ - 羧 酸 乙 酯 (1.51g， 4.12mmol) 在 AcOH-H2O-H2SO4(2 ∶ 1 ∶ 0.3v/v， 26.4mL) 混合物中的溶液在 100℃下加热 2 小时。将反应 混合物注入冰水并搅拌。30 分钟后， 过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为淡 黄色固体的 8′ - 氨基 -9′， 10′ - 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡 1 啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 羧酸 (1.32g， 95 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)
     δ2.38-2.44(2H， m)， 3.76(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 3.91-3.97(1H， m)， 4.09-4.14(1H， m)， 4.25(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 4.38(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 4.50(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 7.36(2H， brs)， 8.59(1H， s)， 14.62(1H， s)。
     54H)8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-(2- 吡啶基 ) 丙基氨基 ] 螺环 [ 草 脲胺 -13′ (2H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸的制备。
     将 8 ′ - 氨 基 -9 ′， 10 ′ - 二 氟 -7 ′ - 氧 螺 环 [ 草 脲 胺 -3， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 羧酸 (300mg， 0.887mmol)、 3-(2- 吡啶基 ) 丙 胺 (181mg， 1.33mmol) 和 三 乙 胺 (0.185mL， 1.33mmol) 在 DMSO(4mL) 中 的 溶 液 在 100 ℃ 下 搅 拌 6 小 时。 向 该 反 应 混 合 物 添 加 水 和 饱 和 NH4Cl 溶 液 至 pH ＜ 4， 并 搅 拌 30 分 钟。过滤收集所得的沉淀物， 用水和 EtOH 洗涤并干燥得到成为淡黄色固体的 8 ′ - 氨 基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-(2- 吡啶基 ) 丙基氨基 ] 螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 1 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 羧酸 (373mg， 93％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.90-1.98(2H， m)， 2.26-2.39(2H， m)， 2.77(2H， t， J ＝ 7.3Hz)， 3.42-3.51(2H， m)， 3.73(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 3.91-3.97(1H， m)， 4.07-4.13(1H， m)， 4.16(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 4.24(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 4.35(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 6.01-6.10(1H5m)， 6.92(2H， brs)， 7.18(1H， dd， J ＝ 6.7， 5.5Hz)， 7.24(1H， d， J ＝ 7.9Hz)， 7.67(1H， td， J ＝ 7.3， 1.8Hz)， 8.42(1H， s)， 8.45(1H， d， J ＝ 4.3Hz)， 15.27(1H， s).HRESIMS(+)455.17350( 计 算 得 到 C23H23FN4O5， 455.17307)。
     实施例 55-81 ：
     通过采用上述步骤可制备实施例 55-81 的化合物 ：
     实施例 82 ： 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基 氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]。将 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 )- 乙 氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (300mg， 0.662mmol) 和氰化钠 (325mg， 6.63mmol) 在无水 DMSO(6mL) 中的混合物在 120℃下 搅拌 3 小时。 冷却后， 将反应混合物注入水 (100mL)， 并以 EtOAc 萃取。 用水和盐水洗涤萃取 混合物， 用 Na2SO4 干燥， 并真空浓缩。通过柱层析 (Chromatorex NH-DM2035(Fuji Sylysia CHemical Co.， Ltd.)EtOAc) 纯 化 该 残 留 物 得 到 成 为 黄 色 固 体 的 标 题 化 合 物 (197mg， 1 72 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.60-1.72(1H， m)， 1.80-1.93(1H， m)， 2.28-2.44(6H， m)， 3.39(2H， q， J ＝ 5.5Hz)， 3.45-3.53(2H， m)， 4.10-4.19(2H， m)， 5.55(1H， td， J ＝ 6.1， 2.4Hz)， 5.64(1H， d， J ＝ 7.9Hz)， 6.42-6.47(2H， m)， 6.61(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.01(2H5 brs)， 7.31-7.36(1H， m)， 7.44(1H， d， J ＝ 7.9Hz)， 7.94(1H， dd， J ＝ 4..9， 1.2Hz)..HRESIMS(+) ： 410.19901( 计算得到 C22H25FN5O2， 410.19923)。
     实施例 83-85 ：
     以 下 化 合 物 可 按 上 述 制 备 9 ′ - 氨 基 -10 ′ - 氟 -2 ′， 3 ′-二 氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基 氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ] 的相同方式进行制备。该化合物参照实施例 82 的步 骤制备 ：
     实施例 86 ： 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶 基 - 氨基 )- 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 氨甲酰。
     在 0℃下将三乙胺 (0.14mL， 1.00mmol) 和氯甲酸乙酯 (0.076mL， 0.795 mmol) 添加 至 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 )- 乙氨基 ] 螺 环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (300mg， 0.662mmol) 的 DMF(5mL) 溶液中。0℃下搅拌 1.5 小时后， 添加 25％ NH3 水溶液 (5mL)。将混 合物在室温下搅拌 6 小时。将反应混合物注入水 (200mL)， 并以 EtOAc 萃取。用水和盐水洗 涤混合物， 用 Na2SO4 干燥， 并真空浓缩。通过柱层析 (CH2Cl2 MeOH 50 ∶ 1) 纯化该残留物得 到成为黄色固体的标题化合物 (270mg， 90％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.62-1.73(1H， m)， 1.90(1H， q， J ＝ 9.2Hz)， 2.28-2.47(6H， m)， 3.42(2H， q， J ＝ 5.5Hz)， 3.49-3.57(2H， m)， 4.11-4.25(2H， m)， 5.85-5.89(1H， m)， 6.42-6.49(2H， m)， 6.64(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.08(2H，
     brs)， 7.26(1H， d， J ＝ 4.9Hz)， 7.31-7.37(1H， m)， 7.95(1H， dd， J ＝ 4.9， 1.2Hz)， 8.26(1H， s)， 9.13(1H， d， J ＝ 4.9Hz).HRESIMS(+) ： 453.20594( 计算得到 C23H26FN6O3， 453.20504)。
     实施例 87 ： 8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-(2- 吡啶基 ) 丙基氨基 ] 螺 环 [ 草脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 氨甲酰。
     该 标 题 化 合 物 可 参 照 实 施 例 86 的 步 骤 由 实 施 例 54 的 化 合 物 制 备 得 到。 H-NMR(400MHz ， DMSO-d 6) δ 1.88-1.96(2H ， m) ， 2.18-2.25(1H 5m) ， 2.30-2.37(1H ， m) ， 2.76(2H， t， J ＝ 7.3Hz)， 3.37-3.47(2H， m)， 3.72(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 3.91-3.96(1H， m)， 4.05-4.12(2H， m)， 4.21(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 4.29(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 5.62-5.69(1H， m)， 7.01(2H， brs)， 7.17(1H， dd， J ＝ 6.7， 5.5Hz)57.23(1H， d， J ＝ 7.9Hz)， 7.33(1H， d， J＝
     14.3Hz)， 7.67(1H5td， J ＝ 7.3， 1.8Hz)， 8.45(1H， d， J ＝ 4.3Hz)， 8.48(1H， s)， 9.18(1H， d， J ＝ 4.9Hz)。
     实施例 88 ： 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶 基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 碳酰肼。
     在 0℃下将三乙胺 (0.185mL， 1.33mmol) 和氯甲酸乙酯 (0.100mL， 1.04mmol) 添加 至 9 ′ - 氨基 -10 ′ - 氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧 -11 ′ -[2-(2- 吡啶基 - 氨基 ) 乙氨 基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (400mg， 0.882mmol) 的 DMF(6mL) 溶液。0℃下搅拌 1.5 小时后， 添加一水合肼 (4mL)。将混 合物在室温下搅拌 6 小时。将反应混合物注入水 (100mL) 中， 过滤收集该固体， 并干燥得 1 到成为黄色固体的标题化合物 (369mg， 89％ )。 H-NMR(400MHz， DMSOd6)δ1.63-1.73(1H， m)， 1.83-1.97(1H， m)， 2.26-2.55(6H， m)， 3.42(2H， q， J ＝ 6.1Hz)， 3.49-3.57(2H， m)， 4.12-4.25(2H， m)， 4.47(2H， d， J ＝ 4.3Hz)， 5.87(1H， td， J ＝ 6.1， 1.8Hz)， 6.42-6.48(2H， m)， 6.64(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.07(2H， brs)， 7.31-7.37(1H， m)， 7.95(1H， dd， J ＝ 5.5， 1.2Hz)， 8.23(1H， s)， 10.47(1H， s).HRESIMS(+) ： 468.2143( 计 算 得 到 C23H27FN7O3， 468.2159)。
     实施例 89 ： 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶 基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂
     卓 ]-7′ - 碳氧肟酸。
     在 0℃下将三乙胺 (0.185mL， 1.33mmol) 和氯甲酸乙酯 (0.100mL， 1.04mmol) 添加 至 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺 环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (400mg， 0.882mmol) 的 DMF(6mL) 溶液。0℃下搅拌 1.5 小时后， 添加 50％ NH2OH 水溶液 (3mL)。将 混合物在室温下搅拌 6 小时， 并注入水 (60mL) 中。过滤收集所得的固体并干燥。从 MeOH 1 重结晶该残留物得到成为黄色固体的标题化合物 (135mg， 33％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.62-1.73(1H， m)， 1.84-1.97(1H， m)， 2.28-2.56(6H， m)， 3.42(2H， q， J ＝ 6.1Hz)， 3.50-3.57(2H， m)， 4.12-4.26(2H， m)，5.87-5.93(1H， m)， 6.42-6.48(2H， m)， 6.64(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 7.05(2H， brs)， 7.32-7.36(1H， m)， 7.95(1H， dd， J ＝ 4.9， 1.2Hz)， 8.22(1H， s)， 9.02(1H， d， J ＝ 1.8Hz)， 11.54(1H， d， J ＝ 1.8Hz)..HRESIMS(+) ： 469.2036( 计算得到 C23H26FN6O4， 469.2000)。
     实 施 例 90 ： 9 ′ - 氨 基 -10 ′ - 氟 -2 ′， 3 ′ - 二 氢 -N- 甲 基 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 氨甲酰。
     在 0 ℃下将三乙胺 (0.185mL， 1.33mmol) 和氯甲酸乙酯 (0.100mL， 1.04mmol) 添 加至 9 ′ - 氨基 -10 ′ - 氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧 -11 ′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨 基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H]] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (400mg， 0.882mmol) 的 DMF(6mL) 溶液。在 0℃下搅拌 1.5 小时后， 添加含于 THF(4mL) 的 2M 甲胺。将混合物在室温下搅拌 6 小时。将反应混合物注入水 (60mL)， 并以 EtOAc 萃取。用 水和盐水洗涤萃取混合物， 用 Na2SO4 干燥， 并真空浓缩。通过柱层析 (CH2Cl2 MeOH 20 ∶ 1) 纯化该残留物得到成为黄色固体的标题化合物 (370mg， 90％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6) δ1.62-1.73(1H， m)， 1.84-1.97(1H， m)， 2.28-2.48(6H， m)， 3.41(3H， d， J ＝ 4.9Hz)， 2.79(2H， q， J ＝ 5.5Hz)， 3.49-3.56(2H， m)， 4.12-4.24(2H， m)， 5.85(1H， td， J ＝ 5.5， 2.4Hz)， 6.42-6.48(2H， m)， 6.61-6.66(1H， m)， 7.07(2H， brs)， 7.31-7.36(1H， m)， 7.94(1H， dd， J ＝ 4.9， 1.8Hz)， 8.25(1H， s)， 9.64(1H， q， J ＝ 4.9Hz).HRESIMS(+) ： 467.2182( 计算得 到 C23H28FN6O3， 467.2207)。
     实施例 91 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨 基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 腈。
     91A)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 氨甲酰的制备。
     将三乙胺 (2.50mL， 17.9mmol) 和氯甲酸乙酯 (1.36mL， 14.2mmol) 添加至 9′ - 氨 基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸 (4.00g， 11.9mmol) 的 DMF(200mL) 溶液。在 0℃ 下搅拌 2 小时后， 添加 25％ NH3 水溶液 (7mL)， 然后将混合物在室温下搅拌 3 小时。将反应 混合物注入水中 (1.5L)， 过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为褐色固体的标 题化合物 (3.23g， 81％ )。1H-NMR(400MHz， DMSOd6)δ1.64-1.76(1H， m)， 1.87-2.00(1H， m)， 2.35-2.48(4H， m)， 2.53-2.64(2H， m)， 4.30-4.42(2H， m)， 7.33-7.68(3H， m)， 8.44(1H， s)， 8.94(1H， d， J ＝ 4.3Hz).ESIMS(+) ： 336[M+H]+。
     91B)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 -7′ - 腈的制备。
     在 0 ℃ 下 将 三 乙 胺 (4.38mL， 31.4mmol) 和 三 氟 乙 酸 酐 (2.68mL， 19.3mmol) 的 CH2Cl2(30mL) 溶液添加至 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 氨甲酰 (1.70g， 5.06mmol) 在 CH2Cl2(120mL) 中的悬浮液中。在 0℃下搅拌 1 小时后， 用水、 饱和 NaHCO3 水 溶液和盐水洗涤该反应混合物， 用 Na2SO4 干燥， 并真空浓缩。通过柱层析 (Chromatorex NH-DM2035(Fuji Sylysia CHemical Co.， Ltd.) 己烷∶ CH2Cl2 1 ∶ 1) 纯化该残留物得到 成为无色固体的标题化合物 (1.12g， 70 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-de)δ1.62-1.73(1H， m)， 1.83-1.96(1H， m)， 2.35-2.57(6H， m)， 4.32-4.42(2H， m)， 7.48(2H， brs)， 8.41(1H， + s).ESIMS(+) ： 318[M+H] 。
     91C)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 腈 的制备。
     将 9 ′ - 氨基 -10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 腈 (830mg， 2.62mmol)、 N2-( 吡 啶基 )-1， 2- 乙二胺 (718mg， 5.23mmol) 和三乙胺 (0.730mL， 0.330mmol) 在 DMSO(16mL) 中 的溶液在 60℃下搅拌 10 小时。冷却后， 将反应混合物注入冰水 (150mL)。过滤收集所得的 沉淀物， 用水洗涤并干燥。通过柱层析 (Chromatorex NH-DM2035(Fuji Sylysia CHemical Co.， Ltd.) 己烷∶ CH2Cl2 1 ∶ 2 → CH2Cl2 → CH2Cl2 ∶ MeOH100 ∶ 1) 所得的固体得到成为 褐色固体的标题化合物 (860mg)。再次通过柱层析 (CH2Cl2 ∶ MeOH 30 ∶ 1) 纯化该固体得 到成为黄色固体的标题化合物 (500mg， 44％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.58-1.72(1H， m)， 1.80-1.92(1H， m)， 2.30-2.47(6H， m)， 3.41(2H， q， J ＝ 6.1Hz)， 3.48-3.56(2H， m)， 4.13-4.24(2H ， m) ， 5.93-6.01(1H ， m) ， 6.42-6.48(2H ， m) ， 6.65(1H ， t， J ＝ 6.1Hz) ， 7.05(2H， brs)， 7.31-7.37(1H， m)， 7.94(1H， dd， J ＝ 4.9， 1.2Hz)， 8.16(1H， s).HRESIMS(+) ： 435.19403( 计算得到 C23H24FN6O2， 435.19443)。
     实施例 92 ： 8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-(2- 吡啶基 ) 丙基氨基 ] 螺 环 [ 草脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈。
     将 8 ′ - 氨基 -9 ′ - 二氟 -7 ′ - 氧 -10 ′ -[3-(2- 吡啶基 ) 丙基氨基 ]- 螺环 [ 草脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 氨甲酰 (165mg， 0.364mmol)、 POCl3(167mg， 1.09mmol) 和 三 乙 胺 (0.254mL， 1.82mmol) 在 CH2Cl2(2mL) 中 的混合物在室温下搅拌 10 小时。向该反应混合物添加饱和 NaHCO3 水溶液至 pH ＞ 7， 并 用 AcOEt 萃取。用盐水洗涤有机层， 用 Na2SO4 干燥， 并真空去除溶剂。通过柱层析 ( 己 烷 ∶ EtOAc 1 ∶ 1 → EtOAc → EtOAc ∶ MeOH 10 ∶ 1) 纯 化 该 粗 产 物 得 到 成 为 黄 色 固 体 的 8 ′ - 氨 基 -9 ′ - 氟 -7 ′ - 氧 -10 ′ -[3-(2- 吡 啶 基 )- 丙 基 氨 基 ] 螺 环 [ 草 脲 胺 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 腈 (42.4mg， 27 ％ )。 1 H-NMR(400MHz ， DMSO-d 6) δ 1.88-1.95(2H ， m) ， 2.17-2.25(1H ， m) ， 2.35-2.42(1H ， m) ， 2.75(2H， t， J ＝ 7.3Hz)， 3.38-3.46(2H5 m)， 3.70(1H， d， J-10.4Hz)， 3.89(1H， td， J ＝ 8.6， 5.5Hz)， 3.97(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 4.13-4.19(1H， m)， 4.22(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 4.24(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 5.73-5.80(1H， m)， 6.99(2H， brs)， 7.18(1H， dd， J ＝ 6.7， 5.5Hz)， 7.23(1H， d， J ＝ 7.9Hz)， 7.67(1H， td， J ＝ 7.3， 1.8Hz)， 8.23(1H， s)， 8.45(1H， d， J ＝ 4.3Hz).
     HRESIMS(+)436.17877( 计算得到 C23H22FN5O3， 436.17849)。
     实施例 93 ： 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[3-(1- 咪唑 基 ) 丙基氨基 ] 螺环 -[ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 -[1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 腈。
     该 标 题 化 合 物 可 采 用 与 上 述 实 施 例 中 所 述 类 似 的 步 骤 由 9 ′ - 氨 基 -10 ′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef] 1 [1， 5] 苯 并 氧 氮 杂 卓 ]-7 ′ - 腈 制 备 得 到。 H-NMR(400MHz， CDCl3)δ1.80-2.04(2H， m)， 2.06-2.13(1H， m)， 2.38-2.55(6H， m)， 3.44(2H， dq， J ＝ 2.4， 6.7Hz)， 4.06(2H， t， J ＝ 6.7Hz)， 4.31-4.40(2H， m)， 4.46(1H， td， J ＝ 6.7， 1.8Hz)， 6.50(2H， brs)， 6.93(1H， t， J＝ 1.2Hz)， 7.09(1H， t， J ＝ 1.2Hz)， 7.49(1H， s)， 7.65(1H， s).HRESIMS(+) ： 423.19445( 计算 得到 C23H23FN6O2， 423.19448)。
     实施例 94 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶 基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 羧酸。
     94A)10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′， 6′， 7- 四氢 -6′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺 环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的 制备。
     将含于 THF(10.8mL， 32.4mmol) 的 3M 甲基氯化镁在氩气气氛下和 -78 ℃下添加 至搅拌中的 10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (3.88g， 9.84mmol) 和碘化亚铜 (562mg， 2.95mmol) 在 THF(200mL) 中的混合物。 将反应混合物在室温下搅拌 24 小时， 并注入水 (1L) 中。添加浓 HCl(50mL) 至 pH ＜ 1， 并将混合物搅拌 30 分钟。用 AcOEt 萃取粗产物， 用饱和 NaHCO3 水溶液和盐水洗涤， 用 MgSO4 干燥并真空去除溶剂。通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 20 ∶ 1 → 5 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成为黄色固体的标题化合物 (1.71g， 42 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.09(3H， d， J ＝ 6.1Hz)， 1.27(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.60-1.69(1H， m)， 1.72-1.83(1H， m)， 1.94-2.15(4H， m)， 2.24-2.35(1H， m)， 2.51-2.57(1H，
     m)， 4.28(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.39-4.50(2H， m)， 4.58-4.63(1H， m)， 11.64(1H， s)。
     94B)10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′， 6′， 7′ - 四氢 -6′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8′ - 氧 螺环 [ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙 酯 (1.50g， 3.66mmol) 和二氧化锰 (32.0g， 366mmol) 在 CH2Cl2(40mL) 中的混合物在室温 下搅拌 40 小时。通过 Celite 过滤该混合物， 并真空浓缩滤出液。通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 2 ∶ 1 → 1 ∶ 2) 纯化该粗产物得到成为淡黄色固体的标题化合物 (168mg， 11％ )。 1 H-NMR(400MHz， DMSOd6)δ1.25(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.59-1.67(1H， m)， 1.81-1.88(1H， m)， 2.08-2.18(1H， m)， 2.27(3H， s)， 2.34-2.54(4H， m)， 2.80-2.92(1H， m)， 4.20-4.27(2H， m)， 4.63-4.83(2H， m)。
     94C)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 -[ 环 丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙酯 (160mg， 0.392mmol) 和铁 (146mg， 2.35mmol) 在 AcOH(4mL) 中的混合物在 90 ℃下搅拌 3 小时。真 空浓缩该反应混合物， 并添加 1M HCl 水溶液 (5.0mL)。用 AcOEt 萃取粗产物， 依次用饱和 NaHCO3 水溶液和盐水洗涤， 用 MgSO4 干燥并真空去除溶剂。 干燥残留物得到成为淡黄色无定 1 形固体的标题化合物 (146mg， 98％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.24(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.58-1.65(1H， m)， 1.75-1.87(1H， m)， 1.93-2.05(1H， m)， 2.16(3H， s)， 2.22-2.34(2H， m)， 2.37-2.46(1H， m)， 2.51-2.60(1H， m)， 2.68-2.80(1H， m)， 4.18-4.24(2H， m)， 4.26-4.36(1H， m)， 4.53-4.64(1H， m)， 7.23(2H， brs)。
     94D)9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 [ 环 丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9′ - 氨基 -10′， H′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 -[ 环 丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7 ′ - 羧酸乙酯 (136mg， 0.359mmol) 和 1MNaOH 水溶液 (1.4mL) 在 EtOH(1.4mL) 中的混合物回流搅拌 5 小时。 真空浓 缩该反应混合物， 将残留物溶解于水， 添加 2M HCl 水溶液至 pH ＜ 3。真空过滤收集所得的 沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为黄色固体的标题化合物 (110mg， 87％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.53-1.61(1H， m)， 1.77-1.85(1H， m)， 1.97-2.05(1H， m)， 2.28-2.40(3H， m)， 2.52-2.58(1H， m)， 2.60(3H， s)， 2.76-2.84(1H， m)， 4.38(1H， td， J-12.2， 4.3Hz)， 4.62(1H， dd， J ＝ 12.2， 6.7Hz)， 7.27(2H， brs)， 15.18(1H， brs)。
     94E)9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡 啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂 卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -8′ - 氧螺环 -[ 环 丁 烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯 并 氧 氮 杂 卓 ]-7 ′ - 羧 酸 (100mg， 0.285mmol)、 N-(2- 吡 啶 基 )-1， 2- 乙 二 胺 (58.7mg， 0.428mmol) 和 三 乙 胺 (0.0597mL， 0.428mmol) 在 DMSO(3mL) 中的溶液在 100℃下搅拌 5 小时。在反应混合物注入饱和 NH4Cl 水溶液之后， 用 CH2Cl2 萃取该粗产物， 用盐水洗涤， 用 MgSO4 干燥并真空去除该溶剂。通过 薄层层析 (EtOAc ∶ MeOH 20 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成为黄色固体的标题化合物 (70.3mg， 53 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.49-1.59(1H， m)， 1.72-1.79(1H， m)， 1.85-1.92(1H， m)， 2.23-2.32(2H， m)， 2.37-2.45(2H， m)， 2.57(3H， s)， 2.66-2.75(1H， m)， 3.40-3.47(2H， m)， 3.51-3.62(2H， m)， 4.19(1H， td， J ＝ 12.2， 3.7Hz)， 4.49(1H， dd， J ＝ 12.2， 6.7Hz)， 6.10-6.16(1H， m)， 6.43-6.49(2H， m)， 6.64-6.70(1H， m)， 6.88(2H， brs)， 7.34(1H， t， J＝ 6.7Hz)， 7.95-7.96(1H， m)， 16.08(1H， brs).HRESIMS(+) ： 468.20454( 计算得到 C24H26FN5O4，
     468.2047)。
     实施例 95 ：
     9′ - 氨基 -10′ - 氯 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙 氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸
     95A)10 ′ - 氨基 -11 ′ - 氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁 烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。将 10 ′， 11 ′ - 二氟 -2 ′， 3 ′ - 二氢 -9 ′ - 硝基 -8 ′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (5.00g， 12.7mmol) 和 (NH4)2CO3(11.0g， 114mmol) 在 DMF(50mL) 中的混合物在 90℃下搅拌 21 小时。 将反应混合 物注入冰水， 真空过滤收集所得的沉淀物， 依次用热 AcOEt 和热 EtOH 洗涤并干燥得到成为 1 黄色固体的标题化合物 (2.51g， 50％ )。H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.24(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.65-1.76(1H， m)， 1.88-2.00(1H， m)， 2.41-2.46(4H， m)， 2.60-2.63(2H， m)， 4.19(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.47-4.50(2H， m)， 6.07(2H， brs)， 8.26(1H， s)。
     95B)10′ - 氯 -11′ - 氟 -2′， 3， - 二氢 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′ - 氨基 -11′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (2.51g， 6.41mmol) 加入到亚硝酸叔丁酯 (1.14mL， 9.62mmol) 和氯化铜 (II)(1.81g， 12.8mmol) 在 CH3CN(64mL) 中的混合物中， 将该混合物在室温下搅拌 20 小时。将反应混合物注入水 (300mL) 中， 添加 浓 HCl(50mL) 至 pH ＜ 1， 过滤收集所得的沉淀物， 用热 EtOH 洗涤并干燥得到成为淡黄色 1 固体的标题化合物 (2.17g， 82 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.25(3H， t， J ＝ 7.3Hz)， 1.67-1.75(1H， m)， 1.92-1.99(1H， m)， 2.41-2.53(4H， m)， 2.66-2.69(2H， m)， 4.22(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.60-4.63(2H， m)， 8.42(1H， s)。
     95C)9′ - 氨基 -10′ - 氯 -11′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯的制备。
     将 10′ - 氯 -11′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -9′ - 硝基 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1，4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (2.17g， 5.28mmol) 和铁 (1.97g， 31.7mmol) 在 AcOH(50mL) 中的混合物在 90℃下搅拌 5 小时。真空浓缩该反应 混合物， 将残留物溶解于 AcOEt 并搅拌 30 分钟。 以 Celite 过滤除去所得沉淀物。 依次用水、 饱和 NaHCO3 水溶液和盐水洗涤滤出液， 用 MgSO4 干燥并真空去除溶剂。用热 EtOH 洗涤粗产 1 物得到成为淡黄色固体的标题化合物 (1.03g， 51％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.25(3H， t， J-7.3Hz)， 1.65-1.75(1H， m)， 1.89-1.96(1H， m)， 2.38-2.47(4H， m)， 2.52-2.59(2H， m)， 4.20(2H， q， J ＝ 7.3Hz)， 4.30-4.41(2H， m)， 7.33-7.55(2H， m)， 8.23(1H， s)。
     95D)9′ - 氨基 -10′ - 氯 -11′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸的制备。
     将 9′ - 氨基 -10′ - 氯 -11′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸乙酯 (1.03g， 2.70mmol) 在 AcOH-H2O-H2SO4(2 ∶ 1 ∶ 0.3v/v， 6.6mL) 混合物中的溶液在 100 ℃下加热 2 小时。添 加冰水， 并将混合物搅拌 30 分钟。真空过滤收集所得的沉淀物， 用水洗涤， 并干燥得到 1 成 为 无 色 固 体 的 标 题 化 合 物 (908mg， 95 ％ )。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)81.65-1.74(2H， m)， 1.88-1.99(2H， m)， 2.40-2.69(4H， m)， 4.25-4.51(2H， m)， 7.73(2H， brs)， 8.49(1H， s)， 14.56(1H， s)。
     95E)9′ - 氨基 -10′ - 氯 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧 酸的制备。
     将 9′ - 氨基 -10′ - 氯 -11′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 [ 环丁烷 -1， 4 ′ -[4H， 8H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯 并 氧 氮 杂 卓 ]-7 ′ - 羧 酸 (900mg， 2.55mmol)、 N-2- 吡啶基 -1， 2- 乙二胺 (525mg， 3.83mmol) 和三乙胺 (0.534mL， 3.83mmol) 在 DMSO(10mL) 中的溶液在 100℃下搅拌 7 小时。向该反应混合物添加饱和 NH4Cl 水溶液至 pH ＜ 3， 真空过 滤收集所得的沉淀物并用水洗涤。通过薄层层析 (CH2Cl2 ∶ MeOH 50 ∶ 1) 纯化该粗产物得 到成为黄色固体的标题化合物 (565mg， 47％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.64-1.72(1H， m) ， 1.86-1.98(1H ，m) ， 2.32-2.66(6H ，m) ， 3.40-3.44(2H ，m) ， 3.62-3.66(2H ，m) ， 3.94-4.53(2H， m)， 6.00(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 6.44-6.47(2H， m)， 6.66(1H， t， J ＝ 5.5Hz)，
     7.07-7.63(3H， m)， 7.94(1H， dd， J ＝ 5.5， 1.2Hz)， 8.29(1H， s)， 15.15(1H， s).HRESIMS(+) ： 470.15831( 计算得到 C23H24ClN5O4， 470.1595)。
     实施例 96-98 ：
     化合物 96-98 可采用与上文实施例中所述类似的合成步骤由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢 螺 环 [[1， 4] 噁 嗪 [2， 3， 4-ij]- 喹 啉 -3， 1 ′ - 环 戊 烷 ]-6- 羧 酸 或 9′ - 氨基 -10′， 11′ - 二氟 -2′， 3′ - 二氢 -8′ - 氧螺环 -[ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 4] 苯并氧氮杂卓 ]-7′ - 羧酸制备得到。
     实施例 96 ： 10-(3-(1H- 咪唑 -1- 基 ) 丙基氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二 氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 羧酸。
     MS(EP)m/z ： 442.0(M+1)。( 计算得到 C22H24FN5O4， 441.18)。
     实施例 97 ： 9- 氨基 -10- 氟 -8- 氧 -11-(3-( 吡啶 -2- 基氨基 )- 吡咯烷 -1- 基 )-3， 8- 二氢 -2H- 螺环 [[1， 4] 氧氮杂卓 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -4， 1′ - 环丁烷 ]-7- 羧酸。
     H-NMR(400MHz， DMSO-d6)61.59-1.73(1H， m)， 1.81-1.97(2H， m)， 2.05-2.19(1H， m) ， 2.47-2.51(6H ，m) ， 3.42-3.53(1H ，m) ， 3.85-3.97(3H ，m) ， 4.11-4.29(3H ，m) ， 6.44-6.51(2H， m)， 6.75(1H， d， J ＝ 6.1Hz)， 6.94(2H， brs)， 7.32-7.39(1H， m)， 7.96(1H， dd， J ＝ 6.1， 1.2Hz)， 8.26(1H， s)， 15.13(1H， brs).HRESIMS(+) ： 480.20547( 计 算 得 到 C25H27FN5O4， 480.20471)。
     实 施 例 98 ： 8 ′ - 氨 基 -9 ′ - 氟 -7 ′ - 氧 -10 ′ -(3-( 吡 啶 -2- 基 氨 基 ) 吡 咯 烷 -1- 基 )-2 ′， 7 ′ - 二 氢 -1 ′ H- 螺 环 [ 环 戊 烷 -1， 3 ′ - 吡 啶 并 [3， 2， 1-ij] 喹 啉 ]-6′ - 羧酸。
     1
     1H-NMR(400MHz， DMSO-de)δ1.72-2.04(9H， m)， 2.08-2.19(1H， m)， 3.50-3.58(1H，m)， 3.71-3.80(1H， m)， 3.81-3.90(1H， m)， 3.95-4.02(1H， m)， 4.08(2H， s)， 4.33-4.42(1H， m).6.44-6.51(2H， m)， 6.76(1H， d， J ＝ 6.1Hz)， 6.88(2H， brs)， 7.32-7.38(1H， m)， 7.97(2H， dd， J ＝ 4.9， 1.2Hz)， 8.38(1H， s)， 15.19(1H， s).HRESIMS(+) ： 480.20378( 计 算 得 到 C25H27FN5O4， 480.20471)。
     实施例 99 ： 9- 氨基 -10- 氟 -6- 甲基 -11-(2-( 吡啶 -2- 基氨基 )- 乙氨基 )-2H- 螺 环 [[1， 4] 氧氮杂卓 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -4， 1′ - 环丁烷 ]-8(3H)- 酮。
     将 9′ - 氨基 -10′ - 氟 -2′， 3′ - 二氢 -6′ - 甲基 -8′ - 氧 -11′ -[2-(2- 吡 啶基氨基 ) 乙氨基 ] 螺环 [ 环丁烷 -1， 4′ -[4H， 8H] 吡啶并 [1， 2， 3-ef][1， 5] 苯并氧氮杂 卓 ]-7 ′ - 羧酸 (42.7mg， 0.0913mmol) 和氰化钠 (46.1mg， 0.913mmol) 在无水 DMSO(2mL) 中的混合物在 150℃下搅拌 8 小时。冷却后， 将反应混合物注入 NaHCO3 饱和水溶液， 并以 EtOAc 萃取。用盐水洗涤萃取混合物， 用 MgSO4 干燥， 并真空浓缩。通过制备 TLC(Silicagel 60(Merck Co.， Ltd.)EtOAc ∶ MeOH 10 ∶ 1) 纯化该残留物以得到成为黄色固体的标题 化 合 物 (20.8mg， 54 ％ )。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.52-1.60(1H， m)， 1.73-1.79(1H， m)， 2.10(3H， s)， 3.27-3.33(6H， m)， 3.37-3.41(2H， m)， 3.43-3.51(2H， m)， 3.96-4.53(2H， m)， 5.41-5.47(1H， m)， 5.57(1H， s)， 6.42-6.47(2H， m)， 6.60(1H， t， J ＝ 5.5Hz)， 6.84(2H， brs)， 7.33(1H， dd， J ＝ 6.7， 1.8Hz)， 7.93-7.95(1H， m).HRESIMS(+) ： 424.21446( 计算得到 C23H26FN5O2， 424.21488)。
     实施例 100 ：
     8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-(4， 6- 双三氟吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 ] 螺环 [ 草脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈。
     100A)3-(4， 6- 双三氟甲基吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基甲酸叔丁酯的制备。
     向搅拌中的烯丙基氨基甲酸叔丁酯 (1.95g， 12.4mmol) 的 THF(12mL) 溶液在氩气 气氛和室温下添加 0.5mol/L 9- 硼双环 [3.3.1] 壬烷 (29.8mL， 14.9mmol)。室温下搅拌 4 小时后， 向该反应混合物添加 2- 溴 -4， 6- 双三氟甲基吡啶 (3.65g， 12.4mmol) 的 DMF(12mL) 溶液、 Pd(OAc)2(278mg， 1.24mmol)、 DPPF(859mg， 1.55mmol) 和 K2CO3(2.92g， 21.1mmol)， 并在 室温下搅拌 7 小时。 向 该反应混合物添加水， 并用 EtOAc 萃取粗产物， 用盐水洗涤， 用 NaSO4 干燥并真空去除溶剂。通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 10 ∶ 1 → 2 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成 为无色固体的叔丁基 3-(4， 6- 双三氟甲基吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基甲酸酯 (3.41g， 74％ )。 1
     H NMR(CDCl 3， 400MHz) δ 1.44(9H ， s) ， 1.96-2.03(2H5m) ， 2.98-3.02(2H ， m) ，
     3.20-3.25(2H， m)， 4.71(1H， brs)， 7.59(1H， s)， 7.72(1H， s).CIMS(+)373[M+H]+。
     100B)3-(4， 6- 双三氟吡啶 -2- 基 ) 丙胺的制备。

    [1000] 将 3-(4， 6- 双三氟甲基吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基甲酸叔丁酯 (3.10g， 8.33mmol) 在 含于 EtOAc(20mL) 的 4mol/L 氯化氢的溶液中室温搅拌 30 分钟。真空去除溶剂形成沉淀 物， 添加 1mol/L NaOH 水溶液碱化， 并用 EtOAc 萃取该粗产物， 用盐水洗涤， 用 NaSO4 干燥并 真空去除溶剂。干燥沉淀物得到成为黄色油的 3-(4， 6- 双三氟吡啶 -2- 基 ) 丙胺 (2.26g， 定量 )。 1

    [1002] H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ1.54(2H， brs)， 1.73-1.80(2H， m)， 2.56(2H， t， J ＝ + 6.7Hz)， 2.96(2H， t， J ＝ 7.9Hz)， 8.06(1H， s)， 8.09(1H， s).CIMS(+)273[M+H] 。

    [1003] 100C)8′ - 氨基 -9′， 10- 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 氨甲酰的制备。

    [1001] 将 8 ′ - 氨 基 -9 ′ - 氟 -7 ′ - 氧 -10 ′ -[3-( 吡 啶 -2- 基 ) 丙 基 氨 基 ] 螺 环 [ 草脲胺 -1， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6 ′ - 羧酸 (1.00g， 2.96mmol)、 氯甲酸乙酯 (0.312mL， 3.26mmol) 和三乙胺 (0.495mL， 3.55mmol) 在 DMF(15mL) 中的溶液在氩气气氛下冰冷搅拌 2 小时。 向反应混合物添加 25％ NH3(1mL) 水溶液并室温搅 拌 2 小时。 向该反应混合物添加水并用 EtOAc 萃取该粗产物， 用盐水洗涤， 用 NaSO4 干燥并真 空去除溶剂。 将沉淀物干燥得到成为淡黄色固体的 8′ - 氨基 -9′， 10- 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 氨甲酰 (186mg， 81％ )。

    [1005] H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ2.25-2.32(1H， m)， 2.35-2.42(1H， m)， 3.74(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 3.91-3.97(1H， m)， 4.06-4.12(1H， m)， 4.16(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 4.34(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 4.45(1H， d， J-11.6Hz)， 7.41(2H， brs)， 7.54(1H， d， J ＝ 4.3Hz)， 8.63(1H， s)， 8.98(1H， d， J ＝ 4.3Hz)。

    [1007] 100D)8′ - 氨基 -9′， 10- 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈的制备。

    [1006] 1向搅拌中的 8′ - 氨基 -9′， 10- 二氟 -7′ - 氧螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 氨甲酰 (860mg， 2.55mmol) 和三乙胺 (1.78mL， 12.8mmol) 的 CH2Cl2(26mL) 溶液在冰冷下添加磷酰氯 (1.17g， 7.65mmol)， 并在室温下搅拌 5 小时。真空去除溶剂并向粗产物添加 MeOH-H2O(1 ∶ 2， 50mL)。搅拌 30 分钟后， 过滤收集 所得的沉淀物， 用水洗涤并干燥得到成为淡黄色固体的 8′ - 氨基 -9′， 10- 二氟 -7′ - 氧 螺环 [ 草脲胺 -3， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈 (683mg， 84％ )。 1

    [1010] H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ2.22-2.29(1H， m)， 2.42-2.46(1H， m)， 3.72(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 3.88(1H， td， J ＝ 8.6， 6.1Hz)， 4.05(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 4.16-4.22(1H， m)， 4.37(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 4.38(1H， d， J ＝ 11.6Hz)， 7.40(2H， brs)， 8.46(1H， s)。

    [1009] 100E)8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-(4， 6- 双三氟吡啶 -2- 基 ) 丙基氨 基 ] 螺环 [ 草脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈的制 备。

    [1011] 将 8 ′ - 氨 基 -9 ′， 10- 二 氟 -7 ′ - 氧 螺 环 [ 草 脲 胺 -3， 3 ′ (2 ′ H)-[7H] 吡 啶 并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯 并 噁 嗪 ]-6 ′ - 腈 (320mg， 1.00mmol)、 3-(4， 6- 双 三 氟 甲 基 吡 啶 -2- 基 ) 丙胺 (408mg， 1.50mmol) 和三乙胺 (0.210mL， 1.50mmol) 在 DMSO(5mL) 中的溶 液在 100 ℃下搅拌 6 小时， 然后在 120 ℃下搅拌 2 小时。向反应混合物添加饱和 NH4Cl 水 溶液至中和， 用 EtOAc 萃取粗产物， 用盐水洗涤， 用 NaSO4 干燥， 并真空去除溶剂。通过柱层析 ( 己烷∶ EtOAc 5 ∶ 1 → 1 ∶ 1) 纯化该粗产物得到成为淡黄色固体的 8 ′ - 氨 基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-(4， 6- 双三氟吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 ] 螺环 [ 草脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈 (387mg， 68％ )。 1

    [1014] H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ1.95-2.02(2H， m)， 2.17-2.24(1H， m)， 2.35-2.42(1H， m)， 2.99(2H， t， J ＝ 7.6Hz)， 3.40-3.49(2H， m)， 3.69(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 3.88(1H， td， J ＝ 9.2， 5.5Hz)， 3.96(1H， d， J ＝ 10.4Hz)， 4.14-4.20(1H， m)， 4.21(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 4.24(1H， d， J ＝ 11.0Hz)， 5.71-5.81(1H， m)， 6.97(2H， brs)， 8.07(1H， s)， 8.10(1H， s)， 8.24(1H， s)。

    [1015] HRESIMS(+)572.15292( 计算得到 C25H21F7N5O3)。实施例 101-108 ： 通过采用上述步骤可制备实施例 101-108 的化合物 ：

    [1019] 实施例 109 和 110 ：

    [1022] (+)-8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 ] 螺环 [ 草 脲胺 -1， 3′ (2′ H)[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈和

    [1023] (-)-8′ - 氨基 -9′ - 氟 -7′ - 氧 -10′ -[3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 ] 螺环 [ 草 脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁嗪 ]-6′ - 腈。

    [1021] 通过采用 Chiralpak IA 柱并以流速为 9mL/min 的 MeCN 作为洗脱液 (1 小时 ) 的制备性 HPLC 分离外消旋 8 ′ - 氨基 -9 ′ - 氟 -7 ′ - 氧 -10 ′ -[3-( 吡 啶 -2- 基 ) 丙基氨基 ] 螺环 [ 草脲胺 -1， 3′ (2′ H)-[7H] 吡啶并 [1， 2， 3-de][1， 4] 苯并噁 嗪 ]-6′ - 腈 (250mg)。UV 检测器设置为 254nm， 注射环体积为 5mL， 注射量为 34-36mg( 含 于 MeCN 溶液 )。

    [1026] 实施例 109 ； 102mg， ＞ 99 ％纯度， 含＞ 99 ％ e.e.(Chiralpak IA 柱 MeCN， 1mL/min， Rt ＝ 13.6min)， [α]D25+10.2(c 1.00， CHCl3) 实施例 110 ； 107mg， MeCN， 1mL/min， Rt ＝＞ 99 ％纯度， 含＞ 99 ％ e.e.(Chiralpak IA 柱2534.35min)， [α]D -7.9(c 1.00， CHCl3)

    [1027] 实施例 111-114 ：

    [1028] a)3-(1-( 羟乙基 ) 环丙基氨基 )-2-(2， 3， 4， 5- 四氟苯甲酰基 )- 丙烯酸乙酯

    [1029] 将搅拌中的 3- 氧 -3-(2， 3， 4， 5- 四氟苯基 ) 丙酸乙酯 (10.0g， 37.8mmol)、 乙酸 酐 (50mL) 和原甲酸三乙酯 (10.0mL， 56.7mmol) 的溶液在 130℃下加热 3 小时。真空浓缩 该混合物并高真空干燥 5 小时。将粗产物溶解于 DCM(50mL)， 然后在室温下逐滴添加 1- 氨 基 -1- 环丙基甲醇 (3.9g， 45.3mmol)。1.5 小时后， 蒸发去除溶剂以得到成为黄色固体的 标题化合物 (9g)， 其可不经进一步纯化用于下一步骤。MS(EP)m/z ： 362(M++1)。( 计算得到 C16H15F4NO4， 361.29)

    [1031] b)9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙 烷 ]-6- 羧酸乙酯

    [1030] 将 3-(1-( 羟甲基 ) 环丙基氨基 )-2-(2， 3， 4， 5- 四氟 - 苯甲酰基 ) 丙烯酸乙酯 (300mg， 0.83mmol)、 K2CO3 粉末 (344mg， 2.49mmol) 和 3ml 无水 DMF 的混合物在 CEM Discover 微波炉中 200 ℃加热 10 分钟。然后将样品快速冷却至室温， 得到深褐色液体。蒸发去除 DMF 得到黑色固体。将该固体溶解于 50ml 乙酸乙酯， 并用 10ml 水洗涤两次。用 Na2SO4 干 燥有机层得到成为浅黄色固体的标题化合物， 其可不经进一步纯化用于下一步骤 (133mg， + 0.415mmol)。MS(EP)m/z ： 322(M +1)。( 计算得到 C16H13F2NO4， 321.28)

    [1034] c)9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 --3， 1′ - 环 丙烷 ]-6- 羧酸

    [1033] 向 9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环丙 烷 ]-6- 羧酸乙酯 (1.3g， 4mmol) 在 EtOH/ 水 (50 ∶ 50v/v， 55mL) 中的溶液中添加 K2CO3 粉 末 (1.65g， 12mmol)， 将混合物回流加热 2 小时。去除溶剂至干燥。用 2N 乙酸将剩余的固体 酸化至 pH6。形成沉淀物并通过过滤收集， 用水洗涤， 然后干燥得到成为浅黄色固体的标题

    [1036] 化合物 (0.656g， 2.24mmol)。1H-NMR(400MHz， DMSOd6)δ1.29(2H， t)， 1.8(2H， t)， 4.56(2H， + s)， 7.84(1H， m)， 8.51(1H， s)， 14.3(1H， b).MS(EP)m/z ： 294(M +1)。( 计算得到 C14H9F2NO4， 293.22)

    [1037] d)9， 10- 二氟 -8- 硝基 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 羧酸

    [1038] 该标题化合物可采用与上文实施例所述类似的合成步骤由 9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环丙烷 ]-6- 羧酸制备得到。MS(EP)m/ + z： 339(M +1)。( 计算得到 Ci4H8F2N2O6， 338.22)

    [1040] e)9， 10- 二氟 -8- 硝基 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 氨甲酰

    [1039] 该标题化合物可采用与上文实施例所述类似的合成步骤由 9， 10- 二氟 -8- 硝 基 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环丙烷 ]-6- 羧酸制备得到。 1 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.32(2H， t)， 1.7(2H， t)， 4.58(2H， s)， 7.66(1H， b)， 8.46(1H， s)， + 8.59(1H， b).MS(EP)m/z ： 338(M +1)。( 计算得到 C14H9F2N3O5， 337.24)。

    [1043] f)8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环丙烷 ]-6- 氨甲酰

    [1042] 该标题化合物可采用与上文实施例所述类似的合成步骤由 9， 10- 二氟 -8- 硝 基 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环丙烷 ]-6- 氨甲酰制备 1 得 到。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.17(2H， t)， 1.55(2H， t)， 4.26(2H， s)， 7.30(2H， b)，8.26(1H， s).MS(EP)m/z ： 308(M++1)。( 计算得到 C14H11F2N3O3， 307.25)。

    [1046] g)8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 腈

    [1047] 该标题化合物可采用与上文实施例所述类似的合成步骤由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环丙烷 ]-6- 氨甲酰制备 1 得 到。 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.18(2H， t)， 1.77(2H， t)， 4.31(2H， s)， 7.41(2H， b)， + 8.51(1H， s).MS(EP)m/z ： 290(M +1)。( 计算得到 C4H9F2N3O2， 289.24)。

    [1049] 实施例 111 ：

    [1050] 10-(3-(1H- 吡唑 -1- 基 ) 丙基氨基 )-8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 腈

    [1048] 该标题化合物可采用与上文实施例所述类似的合成步骤由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 腈和吡唑丙 1 胺制备得到。 H-NMR(400MHz， DMSOd6)δ1.16(2H， t)， 1.58(2H， t)， 1.99(2H， m)， 3.65(2H， m)， 4.16(2H， s)， 4.26(2H， m)， 6.29(1H， s)， 7.49(1H， s)， 7.63(1H， s)， 8.04(1H， s).MS(EP)m/ + z： 395(M +1)。( 计算得到 C20H19FN6O2， 394.40)。

    [1053] 实施例 112 ：

    [1054] 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-( 吡啶 -3- 基 ) 丙基氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 腈

    [1052] 将 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 -[2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1 ′ - 环丙烷 ]-6- 腈 (150mg， 0.52mmol)、 3-( 吡啶 -3- 基 ) 丙 -1- 胺 (176mg， 1.3mmol) 和三乙胺 (108μL， 1.3mmol) 的 DMSO(3mL) 溶液在 120 ℃下搅拌 15 小时。将反应混合物冷 却并浓缩。将粗产物投入乙腈并通过制备性 HPLC 纯化得到成为黄色固体的该标题化合 物 (52.9mg)。MS(EP)m/z ： 406.2(M++1)。( 计算得到 C22H2OFN5O2， 4O5.42).1H NMR(400MHz， D2O)δ1.20(2H， t)， 1.50(2H， t)， 2.00(2H， m， )， 2.94(2H， m， )， 3.51(2H， m)， 4.14(2H， s)， 7.86(1H， m)， 8.03(1H， m)， 8.41(1H， m)， 8.52(1H， m)， 8.58(1H， s)

    [1057] 实施例 113 ：

    [1058] 8- 氨基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙基氨基 )-2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 腈

    [1059] 将 8- 氨基 -9， 10- 二氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [[1， 4] 噁嗪 -[2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环丙烷 ]-6- 腈 (320mg， 1.1mmol)、 3-( 吡啶 -2- 基 ) 丙 -1- 胺 (270mg， 2mmol) 和三乙 胺 (221μL， 2.7mmol) 的 DMSO(8mL) 溶液在 120℃下搅拌 15 小时。将反应混合物分批加入 水中， 并用乙酸乙酯萃取。 使用硫酸钠干燥有机层并真空浓缩。 通过柱层析 ( 乙酸乙酯至乙 酸乙酯 -MeOH 10 ∶ 1) 纯化该干残留物得到成为黄色固体的标题化合物 (76.9mg)。 MS(EP) + 1 405.42). H NMR(400MHz， CD3OD)δ1.15(2H， t)， m/z ： 406.2(M +1)。( 计算得到 C22H2OFN5O2， 1.59(2H， t)， 2.03(2H， t)， 2.88(2H， t)， 3.54(2H， m)， 4.15(2H， s)， 7.23(1H， m)， 7.33(1H， m)， 7.74(1H， m)， 8.04(1H， s)， 8.42(1H， m)

    [1061] 实施例 114 ：

    [1062] 8- 氨 基 -9- 氟 -7- 氧 -10-(3-( 吡 啶 -4- 基 ) 丙 基 氨 基 )-2， 7- 二 氢 螺 环 [[1， 4]- 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1′ - 环戊烷 ]-6- 腈

    [1063] 该标题化合物可采用与上文实施例所述类似的合成步骤由 8- 氨基 -9， 10- 二 氟 -7- 氧 -2， 7- 二氢螺环 [1， 4] 噁嗪 [2， 3， 4-ij] 喹啉 -3， 1’ - 环戊烷 ]-6- 腈制备得到。

    [1060] MS(EP)m/z ： 434.2(M+1)。( 计算得到 C24H24FN5O2， 433.49).1H NMR(400MHz， DMSO) δ8.69(d， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 8.35(s， IH)， 7.74(d， J ＝ 6.2Hz， 2H)， 5.74(s， IH)， 4.03(s， 2H)， 3.42-3.37(m， 2H)， 2.86-2.82(m， 2H)， 1.92-1.90(m， 2H)， 1.88-1.82(m， 4H)， 1.71-1.65(m， 4H)

    [1066] 在 Hep G2 细胞中的糖原合成活性

    [1067] Hep G2 细胞由 Japanese Collection of Research Bioresources 得到， 并在标准

    [1065] 培养基 ( 低糖 Dulbecco 改良的 Eagle 培养基 (DMEM)， 其含有 10％胎牛血清， 添加了 100U/ mL 青霉素和 100μg/mL 链霉素 ) 中， 在潮湿和 5％ CO2 气氛下 37℃生长。该 Hep G2 细胞以 含 1mM EDTA 的 0.25％胰蛋白酶溶液收获， 并以 1×105 细胞 / 微孔接种在 12 孔板上。培养 3 天后， 用磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 洗涤该细胞一次， 并用添加了 100U/mL 青霉素和 100μg/ mL 链霉素的无血清低糖 DMEM 孵育。培养 3 小时后， 向该无血清低糖 DMEM 中添加不同浓度 3 的本发明提供的化合物和 2.5μCi/mL D-[2- H] 葡萄糖 (PerkinElmer， Boston， MA， USA)。 还使用 DMSO(0.3％， 终浓度 ) 溶媒对照。每个微孔中反应介质的总体积为 1.0mL 无血清低 糖 DMEM。37℃下孵育 3 小时后， 吸出该介质， 用 PBS 洗涤细胞两次， 添加含有 0.4mg/mL 载 体糖原的 0.25mL 1N KOH。37℃下孵育 30 分钟后， 向每个微孔添加 0.25mL 48.8％ (w/v) KOH 以溶解细胞。95℃下孵育 30 分钟后， 向细胞溶解物添加 1.5mL 95％ (v/v) 乙醇。总糖 原在 -20℃下沉淀过夜。通过 4℃下 19,000×g 离心 30 分钟回收糖原沉淀物。将沉淀物 用 1mL 70％ (v/v) 乙醇洗涤一次， 并重悬浮于 0.5mL 水中。通过液体闪烁记数器 (Packard Instrument Co.， Meriden， CT， USA) 评估结合在糖原中的 [3H] 葡萄糖。

    [1068] 动物研究 ： 口服葡萄糖耐量试验

    [1069] 雄性 Crlj ： CD1(ICR) 小鼠由 Charles River Laboratries Japan(YokOHama， 日 本 ) 获得。所有的小鼠以标准饮食 (Clea Japan， 日本东京 ) 喂养并任意饮水。在研究中 遵守了所有针对动物管理和使用的制度准则。将测试化合物悬浮于 0.3％羧甲基 - 纤维素 钠盐 (CMC-Na ； Sigma， St.Louis， MO) 中。禁食 15-17 小时后， 向 7 周大的 ICR 小鼠口服施 用所述测试化合物 (3、 10、 30、 100 或 300mg/kg) 或溶媒 (0.3％ CMC-Na)。测试化合物处理 后 30 分钟口服给用葡萄糖溶液 (5g/kg)。在测试化合物处理前以及葡萄糖负荷后 0、 0.5、 1 和 2 小时后采用含 EDTA2K 的毛细管从尾静脉采集血液样本。将血液样本 2,500xg 离心 5 分钟， 将分离的血浆置于冰上， 并在当天进行分析。血浆葡萄糖水平采用葡萄糖 C II- 测试 (Wako Pure Chemical Industries， 日本大阪 ) 进行测定。将葡萄糖负荷后 0.5 和 1 小时 的血浆葡萄糖水平的总和与溶媒处理比较， 其结果以下降百分比表示。

    [1070] 在表 1 和 2 中， 对 GSK3β 的 IC50(nM) 表示如下 ： A ＜ 15 ； B ＝ 16-60 ； C ＝ 61-150 ； D ＞ 150 ； ND ＝无数据。

    [1071] 表 1. 示例性化合物及其活性。

    [1072] 表 2. 示例性化合物及其活性。

    [1089] 犬呕吐研究

    [1091] 雄性比格犬由 Japan Laboratory Animals Inc.( 日本东京 ) 获得。以标准饮食 (Oriental Yeast， 日本东京 ) 喂养。 任意进水。 将测试化合物溶解于二甲亚砜 (100mg/mL)， 然后用 50％聚乙二醇 400 稀释得到 1、 3 和 10mg/mL 的浓度。经头静脉向犬静脉给用该化合 物 (0.1、 0.3 和 1mg/kg， 0.1mL/kg)。在给用后 0.17、 0.5、 1、 2 和 4 小时从相对的头静脉采集 血液样本至含 EDTA-2K 的真空管 (VENOJECT II， Terumo， 日本东京 ) 并置于冰上。通过离 心 (2200xg， 10min， 4℃ ) 分离血浆样本并在 -20℃下贮存。将此血浆样本与 2 体积的含有 内标的甲醇和乙腈 (1 ∶ 1， v/v) 混合物混合， 并 13400×g 离心 3 分钟。用 15％乙腈将上清 液稀释 20 倍， 将 10-μL 等份注入 LC/MS/MS 系统。在 Waters Alliance 2795Separations Module(Waters Corp.， MA) 上进行 HPLC 分离。以采用正离子对在 MRM 模式中具有电喷雾 电离界面的 Micromass Quattro Ultima Pt(Waters Corp.) 测定质谱。

    [1092] 本研究中测试了如下化合物 ：

    [1090] 在一些实施方案中， 所述测试化合物显示了 0.5-1 小时范围内的 T1/2。 在一些实施 方案中， 所述测试化合物显示了 3-7μm 范围内的 C10min。在一些实施方案中， 在用所述测试 化合物处理的犬中检查到了呕吐。

    [1095] 以上所述实施例的目的仅在于进行示范， 本领域的技术人员采用不超出常规的试 验将可以认识到、 或能够确定具体化合物的许多等同物、 材料和方法。 所有这些等同都被认

    [1094] 为涵盖在所主张的主题范围内且包含在所附权利要求书中。149