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1、10申请公布号CN102334681A43申请公布日20120201CN102334681ACN102334681A21申请号201110239120322申请日20110819A23L1/2920060171申请人广东轻工职业技术学院地址510300广东省广州市新港西路152号申请人李静顾宗珠王瑶邓毛程72发明人李静顾宗珠王瑶邓毛程梁鹏志吴兰珍魏瑞忠黄俊峰劳乔秀周燕霞74专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人林丽明54发明名称一种红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的方法57摘要本发明公开了一种红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法。本发明红曲霉菌体的浸提滤渣经超声波破。
2、碎、酶解、浓缩和干燥后制备得到可溶性降脂营养粉，所述可溶性降脂营养粉的总氮含量为668691，水分含量为265284，莫纳可林K含量为530537G/G。本发明成功对红曲霉菌体滤渣进行再利用，改变了浸提后的菌丝体滤渣的简单低值利用状态，利用红曲霉菌体滤渣制备得到的产品可应用于制备治疗或预防高血脂病症的药物或保健食品方面。有利于提高红曲霉菌体滤渣的综合利用价值，从而提高红曲色素发酵工厂的经济效益。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图2页CN102334688A1/1页21一种红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤。
3、（1）将滤渣进行细胞破碎取浸提红曲霉菌体产生的滤渣，经干燥、粉碎，加水配制成菌体悬液，将菌体悬液采用超声波进行细胞破碎，得到细胞破碎后的悬液；（2）酶解处理将步骤（1）所得细胞破碎后的悬液冷却，调节PH值为6075，加入内切蛋白酶和外切蛋白酶，酶解得到红曲霉菌体滤渣的酶解液；（3）后处理将步骤（2）所得酶解液离心所得清液浓缩后采用喷雾干燥法干燥，得到可溶性降脂营养粉。2根据权利要求1所述红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于步骤（1）所述的菌体悬液的浓度为10100G/L。3根据权利要求1所述红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于步骤（1）所述细胞破碎的时间。
4、为45180MIN。4根据权利要求1所述红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于步骤（2）所述内切蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶。5根据权利要求1所述红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于步骤（2）所述内切蛋白酶的加入量为2000080000U/G；所述外切蛋白酶的加入量为2000080000U/G。6根据权利要求1所述红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于步骤（2）所述酶解温度为4060，酶解时间为1248小时。7根据权利要求1所述红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于步骤（3）所述浓缩采用减压蒸发法，浓缩至至干物质含量为。
5、150250G/L；所述减压蒸发法的真空度为006008MPA。8根据权利要求1所述红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，其特征在于步骤（3）所述喷雾干燥法的热空气的进口温度为160180，出口温度为7580。9一种权利要求18任一项所述制备方法制备得到的可溶性降脂营养粉。10根据权利要求9所述的可溶性降脂营养粉，其特征在于所述可溶性降脂营养粉的总氮含量为668691，水分含量为265284，莫纳可林K含量为530537G/G。权利要求书CN102334681ACN102334688A1/5页3一种红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的方法技术领域0001本发明属于生物技术领域，具体涉及。
6、一种红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的方法。背景技术0002红曲霉（MONONSCUS）是典型的小型丝状腐生真菌，属真菌界（EUMYCOPHYTA）、子囊菌门（ASCOMYCETES）、真子囊菌纲（EUASCOMYCETES）、不整子囊菌目（EUROTIALES）、红曲菌科（MONASCACEAE）、红曲霉属（MONASCUS）。红曲是红曲霉的培养物，自古以来红曲在酿酒、酿醋、酿造腐乳、腌制肉制品、食品着色以及制备中药材等技术领域具有广泛的应用，其功效在元朝的日用本草、明朝的天工开物和本草纲目均有记载。0003采用红曲霉制备红曲已有悠久历史，1979年，日本学者远藤章首先发现红曲霉能产生莫纳。
7、可林K（MONACOLINK），该物质是胆固醇合成关键酶HMGCOA还原酶的抑制剂，从而可以降低胆固醇的合成；随后，在红曲霉菌中还发现MONACOLINL、X、J的存在，对HMGCOA还原酶均有抑制作用。MONACOLIN类化合物的发现，引起了国内外研究者关注红曲霉的生理活性物质，人们先后发现了红曲霉还能够产生多种具有生理活性的次级代谢产物，如氨基丁酸、乙酰胆碱、麦角固醇等。这些生理活性物质的发现，证实了红曲具有防腐、降低血脂、降血压、降血糖、抑瘤抗癌、提高人体免疫力等功效。0004红曲霉以其能产生天然色素而得名，目前已经通过深层液体发酵法进行工业化生产红曲色素。实践证明，红曲霉所产生的红曲色。
8、素2030分泌到基质中，而7080存在于菌丝体内，需采用乙醇浸提菌丝体，再经压滤、减压蒸发、干燥等步骤得到红曲色素粉。然而，浸提后的菌丝体滤渣仍富含蛋白质以及一些活性物质，因为技术限制，浸提后的菌丝体滤渣目前主要直接用于蛋白饲料，其综合利用仍属于简单的、低值的状态。发明内容0005本发明的一个目的在于克服现有应用红曲霉制备红曲的技术不足，尤其是对制备过程中产生的红曲霉菌丝体滤渣再利用的技术不足，提供一种采用红曲霉菌体滤渣制备可溶性降脂营养粉的方法。0006本发明另一目的在于提供采用所述制备方法制备得到的可溶性降脂营养粉的综合应用。0007本发明的目的通过下述技术方案予以实现提供一种红曲霉菌体滤。
9、渣制备可溶性降脂营养粉的制备方法，包括以下步骤（1）将滤渣进行细胞破碎将红曲霉菌体按照现有常规技术浸提，优选采用体积比浓度为7080的乙醇浸提红曲霉菌体，浸提后过滤，滤液按照现有常规技术加以利用；取菌体滤渣，经气流干燥、粉碎，取100目以下的粉粒，加水配制成菌体悬液，将菌体悬液采用超声波进行细胞破碎，得到细胞破碎后的悬液；说明书CN102334681ACN102334688A2/5页4（2）酶解处理将步骤（1）所得细胞破碎后的悬液冷却，优选冷却至40以下；调节PH值为6075，同时加入内切蛋白酶和外切蛋白酶，酶解1248H，得到红曲霉菌体滤渣的酶解液；（3）后处理将步骤（2）所述酶解液离心处理。
10、所得清液浓缩，干燥，得到所述可溶性降脂营养粉。0008步骤（1）中所述的红曲霉菌体采用红曲霉菌种经深层液体培养得到，红曲霉菌种可采用常规的市购菌种。0009步骤（1）中所述气流干燥的热空气温度优选140160，所述加水配制成的菌体悬液的浓度优选为10100G/L；步骤（1）中所述的细胞破碎的时间优选为45180MIN；步骤（2）中所述酶解温度为4060，所述内切蛋白酶优选中性蛋白酶或碱性蛋白酶，其加入量优选为2000080000U/G（按干菌体质量计）；步骤（2）中所述的外切蛋白酶的加入量优选为2000080000U/G（按干菌体质量计）；步骤（3）所述离心处理是将所述酶解液置于8000R/M。
11、IN下进行离心2030MIN，获取清液，清液经121125灭菌5MIN。0010步骤（3）所述浓缩优选采用减压蒸发法，浓缩至干物质含量为150250G/L。所述减压蒸发法的真空度控制优选为006008MPA。0011步骤（3）中所述的喷雾干燥法的热空气进口温度控制优选为160180，出口温度优选为7580。0012以红曲霉菌体滤渣为原料，采用本发明方法制备得到产品粉末，经检测，所述营养粉含有肽类、氨基酸及莫纳可林K（MONACOLINK）等，所得可溶性降脂营养粉的总氮含量为668691，水分含量为265284，莫纳可林K（MONACOLINK）含量为530537G/G，含丰富的营养和降脂的有效。
12、成分，因此本发明制备得到的产品粉末为可溶性降脂营养粉，且因其可溶性使具有食用方便的优点。0013本发明相对于现有技术具有如下的有益效果本发明提供了一种适宜的处理技术方案，成功对红曲霉菌体滤渣进行再利用，改变了浸提后的菌丝体滤渣的简单低值利用状态，有利于提高红曲霉菌体滤渣的综合利用价值，从而提高红曲色素发酵工厂的经济效益；本发明利用红曲霉菌丝体滤渣制取备含有氨基酸、肽类以及降脂活性物质的可溶性营养粉，具兼备营养和降脂的成分、食用方便的优点，基于本发明可开发具有药食同源功能的方便食品，帮助人们在日常饮食中防治高血脂症状；本发明进一步采用了超声波技术和酶解技术对红曲霉菌体滤渣进行处理，使可溶物得率达。
13、45以上，有利于提高红曲霉菌体滤渣的综合利用价值；本发明制备方法简单易行，成本较低，具有广阔的工业推广应用价值。附图说明0014图1为本发明的制备方法流程示意图；图2标准品的色谱图；图3实施例1制备所得产品的色谱图；说明书CN102334681ACN102334688A3/5页5图4实施例2制备所得产品的色谱图；图5实施例3制备所得产品的色谱图。具体实施方式0015下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，为了帮助说明本发明思想，下述实施例中具体描述了采用的红曲菌种购买来源，但本发明不仅限于此。除非特别说明，实施例中采用的试剂和方法均为本技术领域常规方法。0016实施例1（1）超声波处理。
14、滤渣，进行细胞破碎本实施例采用的红曲霉菌种为紫红曲霉（MONASCUSPURPUREUS）CICC5038（购于中国工业微生物菌种保藏管理中心），将CICC5038经深层液体通风培养（培养温度3235、搅拌转速120R/MIN、通风比10306）、过滤，得到红曲霉菌体（或者参考现有常规技术制备），经体积比浓度为70的乙醇浸提，浸提温度60、料液比120、浸提时间120MIN，浸提后过滤，得到菌体滤渣；滤渣经热空气温度140150气流干燥至水分含量5，粉碎，取100目以下的粉粒4KG，加水配制成10G/L的菌体悬液，然后采用超声波在频率20KHZ下进行细胞破碎，超声波处理时间为45MIN，得到细。
15、胞破碎后的悬液；（2）酶解处理将上述步骤（1）所得的悬液冷却至38，调节PH值为60，加入中性蛋白酶（广西庞博生物工程有限公司，100000U/G）和外切蛋白酶（无锡杰能科生物工程有限公司，400000U/G），中性蛋白酶加入量为20000U/G（按干菌体质量计），外切蛋白酶加入量为20000U/G（按干菌体质量计），置于45下酶解12H，得到红曲霉菌体滤渣的酶解液；（3）后处理将上述酶解液置于8000R/MIN下进行离心20MIN，获取清液，清液再经121125灭菌5MIN，然后采用减压蒸发法进行浓缩，控制真空度为006007MPA，浓缩至干物质含量为150G/L，再采用喷雾干燥法进行干燥，。
16、控制热空气的进口温度为160165、出口温度为7580，得到194KG可溶性降脂营养粉；所得可溶性降脂营养粉的水分含量为284（质量百分比），采用凯氏定氮法测得总氮含量为668（质量百分比），采用高效液相色谱法测得莫纳可林K（MONACOLINK）含量为536G/G，兼备营养和降脂的成分。0017高效液相色谱条件为色谱柱为INERTSILODSSP（5M，46250MM）；以水甲醇乙腈（38260）为流动相；流速为100ML/MIN；检测波长为2375NM；柱温为35；进样量为50L。0018称取标准品13MG，定容50ML，再吸100ML定容100ML，即为标准溶液（26G/ML），标准溶液。
17、的色谱图如附图2所示。0019根据标准溶液的色谱图，以峰面积为纵坐标Y，含量为横坐标X，绘制标准曲线，回归方程为Y45351X93014，R09997。0020检测本实施例制备所得产品时，称取所得产品05200G作为样品，定容至10ML，按前述条件进行高效液相色谱检测，其色谱图如附图3所示。通过上述回归方程计算，得到说明书CN102334681ACN102334688A4/5页6样品的MONACOLINK含量为536G/G。0021实施例2（1）超声波处理滤渣，进行细胞破碎本实施例采用红曲霉菌种为紫红曲霉（MONASCUSPURPUREUS）CGMCC3991（购于中国普通微生物菌种保藏管理中。
18、心），CGMCC3991经深层液体培养（温度3235、搅拌转速120R/MIN、通风比102506）、过滤，得到红曲霉菌体，经体积比浓度为80乙醇浸提（浸提温度50、料液比125、浸提时间150MIN）、过滤后，获取菌体滤渣，滤渣经热空气温度150160的气流干燥至水分含量5，粉碎，取100目以下的粉粒10KG，加水配制成100G/L的菌体悬液，然后采用超声波在频率20KHZ下进行细胞破碎，超声波处理时间为180MIN，得到细胞破碎后的悬液；（2）酶解处理将上述所得的悬液冷却至35，调节PH65，加入中性蛋白酶（广西庞博生物工程有限公司，100000U/G）和外切蛋白酶（无锡杰能科生物工程有限。
19、公司，400000U/G），中性蛋白酶加入量为80000U/G（按干菌体质量计），外切蛋白酶加入量为80000U/G（按干菌体质量计），置于40下酶解48H，得到红曲霉菌体滤渣的酶解液；（3）后处理将上述酶解液置于8000R/MIN下进行离心30MIN，获取清液，清液再经121125灭菌5MIN，然后采用减压蒸发法进行浓缩，控制真空度为007008MPA，浓缩至干物质含量为250G/L，再采用喷雾干燥法进行干燥，控制热空气的进口温度为165170，出口温度为7580，得到463KG可溶性降脂营养粉；所得可溶性降脂营养粉的水分含量为272（质量百分比），采用凯氏定氮法测得总氮含量为675（质量百。
20、分比），采用高效液相色谱法测得莫纳可林K（MONACOLINK）含量为537G/G，兼备营养和降脂的成分。0022高效液相色谱条件为色谱柱为INERTSILODSSP（5M，46250MM）；以水甲醇乙腈（38260）为流动相；流速为100ML/MIN；检测波长为2375NM；柱温为35；进样量为50L。0023称取标准品13MG，定容50ML，再吸100ML定容100ML，即为标准溶液（26G/ML），标准溶液的色谱图如附图2所示。0024根据标准溶液的色谱图，以峰面积为纵坐标Y，含量为横坐标X，绘制标准曲线，回归方程为Y45351X93014，R09997。0025检测本实施例制备所得产品。
21、，称取05334G所得产品作为样品，定容至10ML，按上述条件进行高效液相色谱检测，其色谱图如附图4所示。通过上述回归方程计算，得到样品的MONACOLINK含量为537G/G。0026实施例3（1）超声波处理滤渣，进行细胞破碎本实施例采用红曲霉菌种CGMCC3991（购于中国普通微生物菌种保藏管理中心），经深层液体培养（温度3135、搅拌转速120R/MIN、通风比10306）、过滤，得到红曲霉菌体，经体积比浓度为75的乙醇浸提（浸提温度45、料液比130、浸提时间180MIN）、过滤后，获取菌体滤渣，再经干燥、粉碎，取100目以下的粉粒2KG，加水配制成50G/L的菌体悬说明书CN1023。
22、34681ACN102334688A5/5页7液，然后采用超声波在频率20KHZ下进行细胞破碎，超声波处理时间为90MIN，得到细胞破碎后的悬液；（2）酶解处理将上述所得的悬液冷却至32，调节PH75，加入碱性蛋白酶（广西庞博生物工程有限公司，200000U/G）和外切蛋白酶（无锡杰能科生物工程有限公司，400000U/G），碱性蛋白酶加入量为60000U/G（按干菌体质量计），外切蛋白酶加入量为50000U/G（按干菌体质量计），置于60下酶解24H，得到红曲霉菌体滤渣的酶解液；（3）后处理将上述酶解液置于8000R/MIN下进行离心20MIN，获取清液，清液再经121125（温度范围值）灭。
23、菌5MIN，然后采用减压蒸发法进行浓缩，控制真空度为007008MPA，浓缩至干物质含量为200G/L，再采用喷雾干燥法进行干燥，控制热空气的进口温度为175180，出口温度为7580，得到0992KG可溶性降脂营养粉；所得可溶性降脂营养粉的水分含量为265（质量百分比），采用凯氏定氮法测得总氮含量为691（质量百分比），采用高效液相色谱法测得莫纳可林K（MONACOLINK）含量为530G/G，兼备营养和降脂的成分。0027高效液相色谱条件为色谱柱为INERTSILODSSP（5M，46250MM）；以水甲醇乙腈（38260）为流动相；流速为100ML/MIN；检测波长为2375NM；柱温为。
24、35；进样量为50L。0028称取标准品13MG，定容50ML，再吸100ML定容100ML，即为标准溶液（26G/ML），标准溶液的色谱图如附图2所示。0029根据标准溶液的色谱图，以峰面积为纵坐标Y，含量为横坐标X，绘制标准曲线，回归方程为Y45351X93014，R09997。0030检测本实施例所得产品时，称取04910G所得产品作为样品，定容至10ML，按上述条件进行高效液相色谱检测，其色谱图如图5所示。通过上述回归方程计算，得到样品的MONACOLINK含量为530G/G。说明书CN102334681ACN102334688A1/2页8图1图2说明书附图CN102334681ACN102334688A2/2页9图3图4图5说明书附图CN102334681A。