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1、10申请公布号CN102342371A43申请公布日20120208CN102342371ACN102342371A21申请号201110257054222申请日20110901A23K1/16200601C12N1/20200601C12R1/07200601C12R1/1020060171申请人安徽金农惠民生物技术有限公司地址230088安徽省合肥市高新技术开发区红枫路33号72发明人田广斌74专利代理机构安徽合肥华信知识产权代理有限公司34112代理人余成俊54发明名称一种利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺57摘要本发明提供了一种利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合。
2、饲料添加剂的工艺。其固体培养基的各组份重量份为麸皮2638，秸秆1020，豆饼粉2230，尿素0103，硫酸镁0204，氯化钴001005，氯化锌001005，氯化硒001005，CACO30309，草碳7514，K2HPO40106，蔗糖15。将纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌接种于上述固体发酵培养基，经过双菌固态联合发酵、干燥、粉碎后得到复合微生态制剂。本方法采用了独特的培养基和双菌联合固态发酵技术，加快了菌种繁殖速度，缩短了发酵周期，降低了生产成本，提高了产品的芽胞形成率。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页CN102342385A1/1页21。
3、一种利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺，其特征在于，包括以下步骤（1）先利用摇床培养瓶分别培养纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的一级菌种；（2）将两种一级菌种分别接种到种子罐里，发酵生产二级纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种；（3）固体培养基的制备按配方要求配置固体发酵培养基,固体发酵培养基的各组份重量份为麸皮2638，秸秆1020，豆饼粉2230，尿素0103，硫酸镁0204，氯化钴001005，氯化锌001005，氯化硒001005，CACO30309，草碳7514，K2HPO40106，蔗糖15；将各组份混合并搅拌均匀,送入固体发酵池进行灭菌,将固体发酵池密封后,加热到1201。
4、23并保温15分钟,自然冷至3538得到固体发酵培养基；（4）将步骤（2）制得的二级纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种分别接种到固体发酵池内,然后加水,用自动翻料机翻拌使固体培养基与菌种子充分混合,其中纳豆芽孢杆菌接种量为总重量的为1113，地衣芽孢杆菌接种量为总重量的79，搅拌使得固体培养基和菌种充分混匀；（5）加水到固体发酵池，翻拌均匀后密封固体发酵池，保温保湿发酵生长4856H后制得成品。2根据权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺，其特征在于步骤（5）所述的固体发酵条件为，发酵前期在3O40小时以内，发酵温度为2836，通风量为0608M3/MIN，此后的生。
5、长后期温度提升至40，通风量为0204M3/MIN，再发酵1626小时，制得成品饲料添加剂。3根据权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺，其特征在于固体发酵培养基的各组份重量份为麸皮2638，秸秆1020，豆饼粉2230，尿素0103，硫酸镁0204，氯化钴001005，氯化锌001005，氯化硒001005，CACO30309，草碳7514，K2HPO40106，蔗糖15。权利要求书CN102342371ACN102342385A1/5页3一种利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺技术领域0001本发明涉及饲用饲料添加剂领域，具体涉及利用纳豆芽。
6、孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备饲料添加剂的培养基配方和制备工艺。背景技术0002养殖户在养殖家禽家畜时为了达到预防疾病的目的，往往在饲料中添加大量抗生素，其结果是不可避免的造成抗生素滥用，在动物体内产生药物残留，最终通过食物链在人类身体中蓄积，严重威胁人类健康。研究表明纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌均是一类益生菌，利用其制成的制剂添加到饲料中可起到如下作用抑制致病菌的生长，替代抗菌素起防病抗病作用；促进消化和提高饲料利用率，降低饲养成本；提高抗感染能力，增强免疫功能；能显著降低养殖动物粪便中氨等臭气排放及降低粪便中磷的排泄，有益于改善养殖环境和环境保护。由于芽孢杆菌制剂具有上述重要优良特征，因此吸引了众。
7、多国内外学者对其进行深入研究，研究内容主要集中于芽孢杆菌的筛选杨晓斌，谢拥葵，韦燕鹏等，益生菌纳豆芽孢杆菌的筛选广州食品工业科技2003年增刊、制备纤溶酶余功保，郭爱玲，秦巧玲等一株高产纳豆激酶菌株的筛选及其发酵条件的优化，食品科学，2007年第4期、液体深层发酵工艺朱健辉，杜连祥，路福平纳豆激酶液态发酵工艺优化。食品与发酵工业，05年第8期和粉剂制备工艺钟青萍，王发祥，刘家畅等。纳豆菌活菌干燥制剂的研制食品工业科技，2005年第8期等方面。而固体发酵工艺尤其是双菌联合固体发酵尚未见报道。目前的芽孢杆菌制剂的生产工艺和发酵培养基配方所生产的制剂活菌含量不高，制剂有效期短，使得产品难以达到理想的。
8、疾病预防和生长促进效果。发明内容0003本发明的内容在于，针对现有发酵培养基和发酵工艺的不足，提供一种利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备饲料添加剂的固体发酵培养基和工艺方法。0004本发明的技术方案如下0005一种利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺，其特征在于，包括以下步骤00061先利用摇床培养瓶分别培养纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的一级菌种；00072将两种一级菌种分别接种到种子罐里，发酵生产二级纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种；00083固体培养基的制备0009按配方要求配置固体发酵培养基，固体发酵培养基的各组份重量份为麸皮2638，秸秆1020，豆饼粉2230，尿素01。
9、03，硫酸镁0204，氯化钴001005，氯化锌001005，氯化硒001005，CACO30309，草碳7514，K2HPO40106，蔗糖15；0010将各组份混合并搅拌均匀，送入固体发酵池进行灭菌，将固体发酵池密封后，加热说明书CN102342371ACN102342385A2/5页4到120123并保温15分钟，自然冷至3538得到固体发酵培养基；00114将步骤2制得的二级纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种分别接种到固体发酵池内，然后加水，用自动翻料机翻拌使固体培养基与菌种子充分混合，其中纳豆芽孢杆菌接种量为总重量的为1113，地衣芽孢杆菌接种量总重量的为79，搅拌使得固体培养基和菌种充。
10、分混匀；00125加水到固体发酵池，翻拌均匀后密封固体发酵池，保温保湿发酵生长4856H后制得成品。0013所述的利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺，其特征在于步骤5所述的固体发酵条件为，发酵前期在3040小时以内，发酵温度为2836，通风量为0608M3/MIN，此后的生长后期温度提升至40，通风量为0204M3/MIN，再发酵1626小时，制得成品饲料添加剂。0014所述的利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺，其特征在于固体发酵培养基的各组份重量份为麸皮2638，秸秆1020，豆饼粉2230，尿素0103，硫酸镁0204，氯化钴001005，氯化锌00。
11、1005，氯化硒001005，CACO30309，草碳7514，K2HPO40106，蔗糖15。本发明利用了新型的固体发酵培养基配方并采用了双菌联合固体发酵制备技术，由于采用了双菌联合固态发酵，能保证纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制进行联合固体发酵，与现有物理搅拌方式相比具有明显的技术优势0015第一，加快了菌种繁殖速度，缩短了发酵周期，使菌种发酵周期缩短到4854小时，既减小了菌种生长期长易被杂菌污染的概率，又降低了生产成本。而同类菌种的发酵周期普遍需要72100小时。0016第二，本发明利用了独特的培养基配方，基本培养基原材料成本低、普遍易得，其中所含的氯化钴、氯化硒、氯化锌和硫酸镁提供了芽孢。
12、杆菌生长所必须的微量元素，具有促进芽抱菌形成芽抱的作用，提高了产品的芽孢形成率。根据检测，纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种联合固态发酵生长平台期芽胞形成率高达90，而同类菌种仅为50，最高不超过70。0017第三，双菌联合固体发酵设备投资少，工艺简单，生产成本低。具体实施方式0018下面通过实施例作进一步描述。0019实施例1制备二级纳豆芽孢杆菌种子00201通过摇床摇瓶培养制备纳豆芽孢杆菌一级种子。0021出发菌株为纳豆芽孢杆菌菌种从中科院北京微生物研究所菌种保藏中心购买0022一级液体种子培养基配方中各组份的重量百分含量为蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠5，蔗糖015，余量为水，PH7072。0。
13、023培养条件将纳豆芽孢杆菌接种于肉汤培养基斜面，37培养24小时；0024挑取一杯斜面种子接种于液体种子培养基，于旋转式摇床200RPM，37培养16H，得到级种子液。00252在2060L的种子罐内放置种子培养基并进行灭菌处理，种子罐液灭菌温度为说明书CN102342371ACN102342385A3/5页5121灭菌15分钟，冷却至37；然后将一级种子接种到种子罐中，使种子罐内温度控制在3238，罐压为05KG/CM2，种子罐转速180220转/分，通风量10M3/H，生产周期1018小时，得到二级种子液。0026本实施例所述制备过程和所用材料与现有技术大致相同，其中一级培养基配方和二级。
14、培养基配方中的各组份均由市场购得。采用的化工产品为工业级0027实施例2制备二级地衣芽孢杆菌种子0028制备方法同上述纳豆芽孢杆菌0029实施例30030利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌联合固态发酵工艺生产复合饲料添加剂00311按配方要求配置固体发酵培养基，计100公斤，其中麸皮33公斤，秸秆20公斤，豆饼粉28公斤，草碳12公斤，蔗糖5公斤，尿素和硫酸镁各03公斤，氯化钴、氯化锌和氯化硒各003公斤，CACO308公斤，K2HPO405公斤，秸秆为粉碎后过20目筛，其余各组份为粉末状。00322将各组份混合并搅拌均匀，送入固体发酵池进行灭菌，将固体发酵池密封后，加热到121并保温，自然冷至3。
15、7得到固体发酵培养基；00333将实施例1和实施例2种子罐内二级纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌种子分别接种到固体发酵池内，然后加水，用自动翻料机翻拌使固体培养基与菌种子充分混合，其中二级纳豆芽孢杆菌种子的用量为12公斤，二级地衣芽胞杆菌菌种子的用量为8公斤，加水量为18公斤；00344密封固体发酵池，并控制其内温度在2835，通风量07M3/MIN，40小时后使池内温度提升至40，通风量03M3/MIN，50小时得成品。0035经过上述步骤生产复合饲料添加剂活菌含量高，经鉴定活菌总数为121010201010CEF/G。该复合饲料添加剂具有耐高温、耐酸碱、耐胆汁的特点，并具有较好的贮存稳定性。将双。
16、菌联合固态发酵制得的复合饲料添加剂以0，1的量添加于饲料中，用于肉鸡饲养，对肉鸡的日增重相对于普通饲料提高大于6，饲料系数和存活率均有显著改善。0036将本发明方法制备的复合饲料添加剂以45的比例添加到畜禽、水产业饲料中，采用添加有本发明的复合饲料添加剂的饲料来喂养畜禽类、水产类动物，结果如下0037表1002复合饲料添加剂对断奶仔猪增重的影响单位KG/头00380039注进行列比较，肩注表示差并显著P005；肩注表示差异极显著P001。下同0040从表1可以看出断奶仔猪的平均总增重、平均日增重分别提高了1233、说明书CN102342371ACN102342385A4/5页61389，差异显。
17、著P005。同时地衣芽孢杆菌使料肉比降低了1549，差异极显著P001。0041表2002复合饲料添加剂对断奶仔猪采食量及料肉比的影响00420043表3002复合饲料添加剂对断奶仔猪腹泻的影响004400451组为空白对照组，饲喂基础日粮，采用300瘦肉型乳猪配合饲料，由正大康地珠海有限公司提供。2组为试验组，饲喂试验日粮，在基础日粮上按200G/T复合饲料添加剂量添加，。试验仔猪随机分为2个组，每组2个重复，每重复26头公母各半。试验前预试5天，30日龄称重，开始正式试验，试验周期21天。0046地衣芽孢杆菌可使养殖黄鳍鲷的成活率、体长增长率和体重量增长率分别提高182、210和312，见。
18、表4。0047表4黄鳍鲷的成活率、体长增长率和体质量增长率00480049在养殖池塘进水消毒后3D，试验组按15KGHM2的用量施加复合饲料添加剂组菌浓度为109CFUG1以营造良好的池塘生态环境，试验鱼人池后每15D使用1次芽孢杆说明书CN102342371ACN102342385A5/5页7菌，用量为75KGHM2，对照组则整个过程均不使用微生态制剂。0050表5复合饲料添加剂组对异育银鲫增重率与饵料系数的影响N300510052注同一列数据后不同字母表示差异显著P005。0053试验菌种复合饲料添加剂组。试验日粮基础日粮中分别添加0、100、200、300和400MGKG1地衣芽孢杆菌。说明书CN102342371A。