一种紫叶白桦的微繁方法.pdf

一种紫叶白桦的微繁方法，它涉及一种微繁方法。它解决了紫叶白桦的繁殖周期长、增殖效率低、成本高和成活率低的问题。方法：1.外植体的消毒；2.将外植体切割成茎段，然后诱导培养，获得微枝；3.将微枝切割成茎段，然后增殖培养基；4.将增殖后的微枝进行增壮培养，然后扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁。本发明中紫叶白桦的微繁，繁殖周期短，效率高，遗传稳定性好，其增殖效率为每30～40天增殖30～40倍，操作技术简单，省工省时，成本低，比现有方法节省30％～50％费用，且生根率和移苗成活率均可达100％。

1、  一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于紫叶白桦的微繁方法按以下步骤实现：一、将清洗后的紫叶白桦外植体在超净工作台上用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用无菌水冲洗3～5次；二、将消毒后的外植体切割成带有顶芽或2～3个腋芽、且长度为1.5～3cm的茎段，然后接种于诱导培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h、每20～30天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养4～6个月，获得微枝；三、将微枝的叶片去掉，切割成带有顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～1.5cm的茎段，然后接种于增殖培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h、每20～25天更换新鲜的增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为0.5～1.5cm；四、将增殖后的微枝接种于增壮培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h的条件下培养至微枝生长长度为2.5～4.5cm，再扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁；其中步骤二中诱导培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.2～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤三中增殖培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.5～1.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中增壮培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.1～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中生根基质按体积份数比由5份的草炭、4份的蛭石和4份的珍珠岩组成，生根基质含水量为50％～60％。

2、  根据权利要求1所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤一中用无菌水冲洗4次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒14min，然后用无菌水冲洗4次。

3、  根据权利要求2所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤二中外植体切割成带有顶芽或2个腋芽、且长度为2cm的茎段。

4、  根据权利要求3所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤二中在温度为24℃、湿度为75％、光照强度为160μmol·cm^-2·s^-1、每天光照16h、每25天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养5个月。

5、  根据权利要求4所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤三中切割成带有顶芽或2个腋芽、且长度为1.2cm的茎段。

6、  根据权利要求5所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤三中在温度为25℃、湿度为78％、光照强度为140μmol·cm^-2·s^-1、每天光照18h、每22天更换新鲜的增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为1cm。

7、  根据权利要求6所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤四中在温度为23℃、湿度为76％、光照强度为180μmol·cm^-2·s^-1、每天光照20h的条件下培养至微枝生长长度为3cm。

一种紫叶白桦的微繁方法
技术领域
本发明涉及一种微繁方法。
背景技术
紫叶白桦(Betulapo pulifolia x Whitespire′Royal Frost′)是欧洲白桦和亚洲白桦经过反复杂交并根据叶色特征长期选育出来的新品种，英文名为“BetulaRoyal Frost Penci-2”。紫叶白桦是适合一年四季观赏的优良树种，其叶片在整个春季和夏季保持为葡萄酒红色，秋季则变为黄色、橙黄色或橙红色，冬季叶片脱落后，其肉桂色至白色的片状剥落状的树干同样具有很高的观赏价值。紫叶白桦还具有抗虫性强，喜光照，耐潮湿，适应性广，易种植的特点。由于紫叶白桦常表现为花无育性、不产生种子或产生的种子不能形成具有稳定遗传性状的小植株，所以一直以嫩枝扦插或嫁接的方式进行繁殖。紫叶白桦经由试管内无菌苗的形式引入我国，引进后经过移栽成活，但引进的数量有限，且成本高，难实现规模化生产；如果利用嫩枝扦插或嫁接的方式进行繁殖，存在苗木幼年期长，繁殖周期长，增殖效率低、苗木成活率不高的问题，因此很难在短时间内实现紫叶白桦苗木的大量扩繁和规模化生产，使紫叶白桦的推广栽培和资源利用受到了极大的限制。
发明内容
本发明的目的是为了解决紫叶白桦的繁殖周期长、增殖效率低、成本高、成活率低和遗传稳定性差的问题，而提供的一种紫叶白桦的微繁方法。
紫叶白桦的微繁方法按以下步骤实现：一、将清洗后的紫叶白桦外植体在超净工作台上用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用无菌水冲洗3～5次；二、将消毒后的外植体切割成带有顶芽或2～3个腋芽、且长度为1.5～3cm的茎段，然后接种于诱导培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h、每20～30天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养4～6个月，获得微枝(无根试管苗)；三、将微枝的叶片去掉，切割成带有顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～1.5cm的茎段，然后接种于增殖培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h、每20～25天更换新鲜的增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为0.5～1.5cm；四、将增殖后的微枝接种于增壮培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h的条件下培养至微枝生长长度为2.5～4.5cm，再扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁；其中步骤二中诱导培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.2～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤三中增殖培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.5～1.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中增壮培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.1～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中生根基质按体积份数比由5份的草炭、4份的蛭石和4份的珍珠岩组成，生根基质含水量为50％～60％。
本发明中紫叶白桦的微繁，繁殖周期短，效率高，其增殖效率为每30～40天增殖30～40倍，而且利用母株上原有的顶芽或腋芽直接进行芽的增殖，所产生的后代遗传稳定性好；增壮培养后的微枝在试管外不需要任何化学试剂和植物激素可直接生根成完整的再生植株，生根和驯化同时进行，操作技术简单，省工省时，成本低，比现有方法节省30％～50％费用，且生根率和移苗成活率均可达100％，实现了紫叶白桦的快速、高效繁殖及大规模推广种植的目标。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式紫叶白桦的微繁方法按以下步骤实现：一、将清洗后的紫叶白桦外植体在超净工作台上用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用无菌水冲洗3～5次；二、将消毒后的外植体切割成带有顶芽或2～3个腋芽、且长度为1.5～3cm的茎段，然后接种于诱导培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h、每20～30天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养4～6个月，获得微枝(无根试管苗)；三、将微枝的叶片去掉，切割成带有顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～1.5cm的茎段，然后接种于增殖培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h、每20～25天更换新鲜的增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为0.5～1.5cm；四、将增殖后的微枝接种于增壮培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1、每天光照12～24h的条件下培养至微枝生长长度为2.5～4.5cm，再扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁；其中步骤二中诱导培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.2～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤三中增殖培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.5～1.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中增壮培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.1～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中生根基质按体积份数比由5份的草炭、4份的蛭石和4份的珍珠岩组成，生根基质含水量为50％～60％。
本实施方式中选择生长旺盛的幼嫩植株为采集外植体的母株，以春天新萌发的枝条或人工催发的枝条为外植体。
本实施方式步骤一中清洗是用清水洗净外植体(水中可加入一滴洗涤剂)，清洗时用细毛刷轻轻刷洗枝条表面的灰尘和杂菌，注意不要损伤休眠芽，然后将枝条在自来水下冲洗0.5～1h。
本实施方式步骤三中茎段接种于增殖培养基，是将具顶芽的茎段垂直插入到增殖培养基中，深度为0.5cm；将具腋芽的茎段平放在增殖培养基表面。
本实施方式步骤三中微枝的增殖培养，增殖效率为每30～40天增殖30～40倍，可以转接到新鲜的增殖培养基中继续培养，步骤三可循环进行，直至产生能够满足需求的微枝数量。
本实施方式步骤四中增壮培养使细弱微枝的直径加粗，叶片增大且加厚，能提高微枝生根存活率。
本实施方式步骤四中生根培养室温度为22～26℃，湿度为70％～80％，每天光照12～24h，光照强度为100～200μmol·cm^-2·s^-1。
本实施方式步骤四中生根培养可与驯化培养同时进行，是将微枝周围的生根基质压实并在生根基质表面和微枝叶面上略喷水，然后覆上保鲜膜在培养室内培养；每天以喷洒的方式浇水2次，每天早晚揭膜2～5min通风换气，每隔7天左右喷施1次0.2％的多菌灵溶液预防病虫害，培养2周时生根率可达100％，2周后逐步去掉保鲜膜、增强通风和光照，培养60天时生根后的微枝生长长度可达20cm以上。
本实施方式中紫叶白桦的微繁完成后，可进行苗木移栽，即生根后的微枝生长长度达20cm后移栽到塑料小钵中(小钵中的培养基质为草炭土和沙土的混合物)，然后放到温室或大棚中进行培养，培养温度为15～30℃，湿度为60％以上，注意通风，移栽成活率达100％。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同是步骤一中用无菌水洗净冲洗4次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒14min，然后用无菌水冲洗4次。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
本实施方式中氯化汞溶液可加入一滴吐温-20。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二的不同是步骤二中外植体切割成带有顶芽或2个腋芽、且长度为2cm的茎段。其它步骤及参数与具体实施方式二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三的不同是步骤二中在温度为24℃、湿度为75％、光照强度为160μmol·cm^-2·s^-1、每天光照16h、每25天更换新配制诱导培养基的条件下培养5个月。其它步骤及参数与具体实施方式三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四的不同是步骤三中切割成带有顶芽或2个腋芽、且长度为1.2cm的茎段。其它步骤及参数与具体实施方式四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式五的不同是步骤三中在温度为25℃、湿度为78％、光照强度为140μmol·cm^-2·s^-1、每天光照18h、每22天更换新配制增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为1cm。其它步骤及参数与具体实施方式五相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式六的不同是步骤四中在温度为23℃、湿度为76％、光照强度为180μmol·cm^-2·s^-1、每天光照20h的条件下培养至微枝生长长度为3cm。其它步骤及参数与具体实施方式六相同。