生成合成胆固醇合成抑制剂莫那可林K的相关基因.pdf

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本发明涉及生成合成胆固醇合成抑制剂莫那可林K的相关基因，红曲菌生成的胆固醇合成抑制剂莫那可林k为聚缩酮的二次代谢产物。本发明提供一种专一于莫那可林K生合成基因群的探针，由BAC基因库筛选出具有推定莫那可林K基因群的BAC转殖株，并经定序与批注，得到相关于莫那可林K生合成的2个聚缩酮合成酶基因，以及7个调控基因。经RTPCR得到上述基因的全长cDNA，并转化到表达载体上以表达上述基因。本发明还提供了。

摘要
申请专利号：	CN200410102583.5	申请日：	2004.12.24
公开号：	CN1637143A	公开日：	2005.07.13
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回\|\|\|实质审查的生效\|\|\|公开
IPC分类号：	C12N15/11; C12N15/52; C12N9/00; C12N15/63; C12P7/26	主分类号：	C12N15/11; C12N15/52; C12N9/00; C12N15/63; C12P7/26
申请人：	食品工业发展研究所;
发明人：	陈煜沛; 廖丽玲; 王俊霖; 李钟财; 黄英娥; 曾庆平; 袁国芳
地址：	台湾省新竹市食品路331号
优先权：	2003.12.24 US 60/532,643
专利代理机构：	北京林达刘知识产权代理事务所	代理人：	刘新宇;池吉庆
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内容摘要

本发明涉及生成合成胆固醇合成抑制剂莫那可林K的相关基因，红曲菌生成的胆固醇合成抑制剂莫那可林k为聚缩酮的二次代谢产物。本发明提供一种专一于莫那可林K生合成基因群的探针，由BAC基因库筛选出具有推定莫那可林K基因群的BAC转殖株，并经定序与批注，得到相关于莫那可林K生合成的2个聚缩酮合成酶基因，以及7个调控基因。经RT－PCR得到上述基因的全长cDNA，并转化到表达载体上以表达上述基因。本发明还提供了增加莫那可林k生成的方法，提高了生产效率。

权利要求书

1：一种分离的DNA分子，其特征在于包括一序列识别号： 1的核苷酸序列，或于严苛条件下可与序列识别号：1杂交的的核苷酸序列。
2：一种分离的DNA分子，包括择自以下一个或多个所列物所组成的族群的聚核苷酸： a)mkA的聚核苷酸，其包括序列识别号：2的核苷酸序列； b)mkB的聚核苷酸，其包括序列识别号：3的核苷酸序列； c)mkC的聚核苷酸，其包括序列识别号：4的核苷酸序列； d)mkD的聚核苷酸，其包括序列识别号：5的核苷酸序列； e)mkE的聚核苷酸，其包括序列识别号：6的核苷酸序列； f)mkF的聚核苷酸，其包括序列识别号：7的核苷酸序列； g)mkG的聚核苷酸，其包括序列识别号：8的核苷酸序列； h)mkH的聚核苷酸，其包括序列识别号：9的核苷酸序列； i)mkI的聚核苷酸，其包括序列识别号：10的核苷酸序列；以及 j)于严苛条件下可与a)，b)，c)，d)，e)，f)，g)，h)，或 i)杂交的核苷酸序列。
3：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是a)。
4：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是b)。
5：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是c)。
6：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是d)。
7：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是e)。
8：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是f)。
9：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是g)。
10：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是h)。
11：根据权利要求2所述的分离的DNA分子，其是i)。
12：根据权利要求3所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶，乙酰转移酶，脱水酶，甲基转移酶，酮还原酶，及酰基携带蛋白。
13：根据权利要求12所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有九缩酮合成酶的活性。
14：根据权利要求4所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶，乙酰转移酶，脱水酶，甲基转移酶，酮还原酶，酰基携带蛋白，以及酰脂基还原酶。
15：根据权利要求14所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有二缩酮合成酶的活性。
16：根据权利要求5所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有单加氧酶活性。
17：根据权利要求6所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有氧化还原酶活性。
18：根据权利要求7所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有去氢酶活性。
19：根据权利要求8所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有转酯酶活性。
20：根据权利要求9所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有HMG-CoA还原酶活性。
21：根据权利要求10所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有转录因子活性。
22：根据权利要求11所述的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有外排泵活性。
23：一种穿梭载体，其包括如权利要求2所述的分离的DNA 分子。
24：一种分离的DNA分子，包括择自以下一个或多个所列物所组成的族群的聚核苷酸： a)mkA的聚核苷酸，其包括序列识别号：19的核苷酸序列； b)mkB的聚核苷酸，其包括序列识别号：20的核苷酸序列； c)mkC的聚核苷酸，其包括序列识别号：21的核苷酸序列； d)mkD的聚核苷酸，其包括序列识别号：22的核苷酸序列； e)mkE的聚核苷酸，其包括序列识别号：23的核苷酸序列； f)mkF的聚核苷酸，其包括序列识别号：24的核苷酸序列； g)mkG的聚核苷酸，其包括序列识别号：27的核苷酸序列； h)mkH的聚核苷酸，其包括序列识别号：25的核苷酸序列； i)mkI的聚核苷酸，其包括序列识别号：26的核苷酸序列；以及 j)于严苛条件下可与a)，b)，c)，d)，e)，f)，g)，h)，或 i)杂交的核苷酸序列。
25：根据权利要求24所述的分离的D NA分子，其是a)，且编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶，乙酰转移酶，脱水酶，甲基转移酶，酮还原酶，及酰基携带蛋白。
26：根据权利要求25所述的分离的DNA分子，其中该多肽具有九缩酮合成酶的活性。
27：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是b)，且编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶，乙酰转移酶，脱水酶，甲基转移酶，酮还原酶，酰基携带蛋白，以及酰脂基还原酶。
28：根据权利要求27所述的分离的DNA分子，其中该多肽具有二缩酮合成酶的活性。
29：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是c)，且编码一多肽，该多肽具有单加氧酶活性。
30：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是d)，且编码一多肽，该多肽具有氧化还原酶活性。
31：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是e)，且编码一多肽，该多肽具有去氢酶活性。
32：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是f)，且编码一多肽，该多肽具有转酯酶活性。
33：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是g)，且编码一多肽，该多肽具有HMG-CoA还原酶活性。
34：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是h)，且编码一多肽，该多肽具有转录因子活性。
35：根据权利要求24所述的分离的DNA分子，其是i)，且编码一多肽，该多肽具有外排泵活性。
36：一种表达载体，其包括如权利要求24所述的分离的 DNA分子。
37：一种细胞，其转化有一聚核苷酸，该聚核苷酸是择自以下一个或多个所列物所组成的族群： a)mkA的聚核苷酸，其包括序列识别号：2或19的核苷酸序列； b)mkB的聚核苷酸，其包括序列识别号：3或20的核苷酸序列； c)mkC的聚核苷酸，其包括序列识别号：4或21的核苷酸序列； d)mkD的聚核苷酸，其包括序列识别号：5或22的核苷酸序列； e)mkE的聚核苷酸，其包括序列识别号：6或23的核苷酸序列； f)mkF的聚核苷酸，其包括序列识别号：7或24的核苷酸序列； g)mkG的聚核苷酸，其包括序列识别号：8或27的核苷酸序列； h)mkH的聚核苷酸，其包括序列识别号：9或25的核苷酸序列； i)mkI的聚核苷酸，其包括序列识别号：10或26的核苷酸序列；以及 j)上述的组合。
38：根据权利要求37所述的细胞，其中该细胞为细菌，酵母菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或丝状真菌。
39：根据权利要求37所述的细胞，其中该细胞为红曲霉菌属。
40：根据权利要求37所述的细胞，其中该细胞是择自以下一个或多个所列物所组成的族群：红曲霉pilosus，红曲霉 ruber，以及红曲霉purpureus。
41：根据权利要求37所述的细胞，其中该细胞为红曲霉菌 BCRC 38072。
42：一种增加莫那可林K生成的方法，其包括： I)培养一可生产莫那可林K的细胞，该细胞转化有一择自以下所组成的族群的聚核苷酸： a)mkA的聚核苷酸，其包括序列识别号：2或19的核苷酸序列； b)mkB的聚核苷酸，其包括序列识别号：3或20的核苷酸序列； c)mkC的聚核苷酸，其包括序列识别号：4或21的核苷酸序列； d)mkD的聚核苷酸，其包括序列识别号：5或22的核苷酸序列； e)mkE的聚核苷酸，其包括序列识别号：6或23的核苷酸序列； f)mkF的聚核苷酸，其包括序列识别号：7或24的核苷酸序列； g)mkH的聚核苷酸，其包括序列识别号：9或25的核苷酸序列；以及 j)上述的组合；以及 II)由该细胞收集莫那可林K。
43：根据权利要求42所述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是真菌细胞。
44：根据权利要求42所述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是红曲霉菌属。
45：根据权利要求42所述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是择自以下一个或多个所列物所组成的族群：红曲霉 pilosus，红曲霉ruber，以及红曲霉purpureus。
46：根据权利要求42所述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是红曲霉菌BCRC 38072。
47：根据权利要求42所述的增加莫那可林K生成的方法，其中该聚核苷酸为g)。
48：一种生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，包括： I)培养一可生成HMG-CoA还原酶抑制剂的细胞，该细胞转化有一聚核苷酸，包括： a)mkA的聚核苷酸，其包括序列识别号：2或19的核苷酸序列； b)mkB的聚核苷酸，其包括序列识别号：3或20的核苷酸序列； c)mkE的聚核苷酸，其包括序列识别号：6或23的核苷酸序列； d)mkF的聚核苷酸，其包括序列识别号：7或24的核苷酸序列；以及 II)由该细胞收集HMG-CoA还原酶抑制剂。
49：根据权利要求48所述的生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其中该HMG-CoA还原酶抑制剂为莫那可林K。
50：根据权利要求48所述的生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其中该细胞为细菌，酵母菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或丝状真菌。
51：根据权利要求48所述的生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其中该细胞为红曲霉菌属。
52：根据权利要求48所述的生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其中该细胞是择自以下一个或多个所列物所组成的族群：红曲霉pilosus，红曲霉ruber，以及红曲霉purpureus。
53：根据权利要求48所述的生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其中该细胞为红曲霉菌BCRC 38072。
54：根据权利要求48所述的生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其中该细胞更转化有一择自所组成的聚核苷酸： a)mkC的聚核苷酸，其包括序列识别号：4或21的核苷酸序列； b)mkD的聚核苷酸，其包括序列识别号：5或22的核苷酸序列； c)mkH的聚核苷酸，其包括序列识别号：9或25的核苷酸序列；以及 d)以上的组合。
55：一种分离的DNA分子，包括一聚核苷酸，其编码择自以下一个或多个所列物所组成的族群的多肽： a)一包括序列识别号：11的氨基酸序列的多肽； b)一包括序列识别号：12的氨基酸序列的多肽； c)一包括序列识别号：13的氨基酸序列的多肽； d)一包括序列识别号：14的氨基酸序列的多肽； e)一包括序列识别号：15的氨基酸序列的多肽； f)一包括序列识别号：16的氨基酸序列的多肽； g)一包括序列识别号：28的氨基酸序列的多肽； h)一包括序列识别号：17的氨基酸序列的多肽； i)一包括序列识别号：18的氨基酸序列的多肽；；以及 j)于严苛条件下可与编码a)，b)，c)，d)，e)，f)，g)，h)，或i)的聚核苷酸杂交的核苷酸序列。
56：根据权利要求55所述的分离的DNA分子，其中该多肽为a)，且具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性： β-酮酰基合成酶，乙酰转移酶，脱水酶，甲基转移酶，酮还原酶，及酰基携带蛋白。
57：根据权利要求56所述的分离的DNA分子，其中该多肽具有九缩酮合成酶的活性。
58：根据权利要求55所述的分离的DNA分子，其中该多肽为b)，且具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性： β-酮酰基合成酶，乙酰转移酶，脱水酶，甲基转移酶，酮还原酶，酰基携带蛋白，以及酰脂基还原酶。
59：根据权利要求58所述的分离的DNA分子，其中该多肽为c)，且具有二缩酮合成酶的活性。
60：根据权利要求55所述的分离的DNA分子，其中该多肽为c)，且具有单加氧酶活性。
61：根据权利要求55所述的分离的DNA分子，其中该多肽为d)，且具有氧化还原酶活性。
62：根据权利要求55所述的分离的DNA分子，其中该多肽为e)，且具有去氢酶活性。
63：根据权利要求55所述的分离的DNA分子，其中该多肽为f)，且具有转酯酶活性。
64：根据权利要求55所述的分离的DNA分子，其中该多肽为g)，且具有HMG-CoA还原酶活性。
65：根据权利要求55项所述的分离的DNA分子，其中该多肽为h)，且具有转录因子活性。
66：根据权利要求55所述的分离的D NA分子，其中该多肽为i)，且具有外排泵活性。
67：一种表达载体，其包括如权利要求55所述的分离的 DNA分子。

说明书

生成合成胆固醇合成抑制剂莫那可林K的相关基因
    【技术领域】

    本发明是关于分子生物与微生物学领域，更特别地，本发明是关于胆固醇合成抑制剂莫那可林K(monacolin K)生合成相关基因。

    背景技术

    在中国，红曲霉菌(Monascus)在食品的应用上已有千年的历史，更因其能产生多项生理活性物质而日渐被重视。这些生理活性物质主要为红曲霉的二次代谢产物，包括降血压物质、抗腐败菌物质(例如：monascidin)、防癌物质、降血糖物质、麦角固醇(ergosterol)、抗氧化物质、长链脂肪酸及胆固醇合成抑制剂(例如：monacolin)。因此，红曲霉成为近年来相当被重视的机能性健康保健食品。

    红曲霉菌所产生的胆固醇抑制剂最早是由日本三共制药公司自红曲霉菌(Monascus rubber)的培养液中找到monacolin k。之后美国莫克(Merck)药厂也从土曲霉菌(Aspergillus terreus)的培养液中发现同一种化合物，命名为洛伐他汀(音译lovastatin)，此胆固醇合成抑制剂是作为一HMG-CoA还原酶抑制剂(HMG-CoAReductase Inhibitors)。Monacolin K属于一聚缩酮类(polyketide)产物，其在结构上与HMG-CoA具有相似性，所以在胆固醇合成的过程中，monacolin k会与HMG-CoA进行竞争性抑制，使HMG-CoA还原酶无法进一步催化HMG-CoA形成mevolonate，降低胆固醇的合成。

    真菌所产生的聚缩酮类(polyketide)二次代谢产物会表现出结构多样性，及其它各种在细菌中所没有的特征(O’Hagan，1995)，这些特征也表现在形成聚缩酮类(polyketide)物质的酶多样性上。红曲霉所产生的monacolin k亦为聚缩酮类的一种，根据其它对于真菌聚缩酮类的研究发现，聚缩酮类的组成是由多功能的聚缩酮类生合成酶(polyketide synthase，PKS)催化乙酰辅酶A(acetyl CoA)进行缩合反应(condensation)而形成各种不同地产物(Kennedy et al.，1999 and Abe et al.，2002)。经由真菌聚缩酮类生合成酶(polyketide synthase，PKS)的研究，并通过配合组合生合成(combinatorial biosynthesis)方法，未来对于开创新颖的聚缩酮类物质(novel polyketide)将具有相当大的潜力(McDaniel et al.，1999)，其所产生的新颖的聚缩酮类则可做为将来筛选有效药物的另一种新途径。

    【发明内容】

    因此，本发明的一实施型态为提供一种分离的DNA分子，包括序列识别号：1的核苷酸序列，或于严苛条件下可与其杂交的核苷酸序列。该严苛条件可以参见说明书所附的文献。

    本发明的另一实施形态提供一种分离的DNA分子，其包括择自以下一个或多个所列物组成的族群的聚核苷酸：a)一mkA聚核苷酸，包括序列识别号：2的核苷酸序列，b)一mkB聚核苷酸，包括序列识别号：3的核苷酸序列，c)一mkC聚核苷酸，包括序列识别号：4的核苷酸序列，d)一mkD聚核苷酸，包括序列识别号：5的核苷酸序列，e)一mkE聚核苷酸，包括序列识别号：6的核苷酸序列，f)一mkF聚核苷酸，包括序列识别号：7的核苷酸序列，g)一mkG聚核苷酸，包括序列识别号：8的核苷酸序列，h)一mkH聚核苷酸，包括序列识别号：9的核苷酸序列，i)一mkI聚核苷酸，包括序列识别号：10的核苷酸序列，以及j)一在严苛条件下可与a)、b)、c)、d)、e)、f)、g)、h)、或i)杂交的聚核苷酸。

    本发明的又一实施形态是提供一种穿梭载体(shuttlevector)，其包括上述定义的分离的DNA分子。

    上述定义的分离的DNA分子，其是a)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是b)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是c)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是d)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是e)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是f)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是g)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是h)。

    上述定义的分离的DNA分子，其是i)。

    上述定义的分离的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶(β-ketoacyl synthase)，乙酰转移酶(acetyltransferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)，及酰基携带蛋白(acyl carrier protein)。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有九缩酮合成酶的活性。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶(β-ketoacyl synthase)，乙酰转移酶(acetyl transferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)，酰基携带蛋白(acyl carrier protein)，以及酰脂基还原酶(enoyl reductase)。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有二缩酮合成酶的活性。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有单加氧酶(monooxygenase)活性。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有氧化还原酶(oxidoreductase)活性。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有去氢酶(dehydrogenase)活性。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有转酯酶(transesterase)活性。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有HMG-CoA还原酶活性。

    上述的DNA分子，其中该聚核苷酸编码一多肽，该多肽具有转录因子活性。

    本发明的再一实施形态是提供一种分离的DNA分子，其包括一择自以下组成的族群的聚核苷酸：a)一mkA聚核苷酸，包括序列识别号：19的核苷酸序列，b)一mkB聚核苷酸，包括序列识别号：20的核苷酸序列，c)一mkC聚核苷酸，包括序列识别号：21的核苷酸序列，d)一mkD聚核苷酸，包括序列识别号：22的核苷酸序列，e)一mkE聚核苷酸，包括序列识别号：23的核苷酸序列，f)一mkF聚核苷酸，包括序列识别号：24的核苷酸序列，g)一mkG聚核苷酸，包括序列识别号：27的核苷酸序列，h)一mkH聚核苷酸，包括序列识别号：25的核苷酸序列，i)一mkI聚核苷酸，包括序列识别号：26的核苷酸序列，以及j)一在严苛条件下可与a)、b)、c)、d)、e)、f)、g)、h)、或i)杂交的聚核苷酸。

    本发明的又一实施形态是提供一种表达载体，其包括上述定义的分离的DNA分子。

    上述定义的分离的DNA分子，其是a)，且编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶(β-ketoacyl synthase)，乙酰转移酶(acetyltransferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)，及酰基携带蛋白(acyl carrier protein)。

    上述的DNA分子，其中该多肽具有九缩酮合成酶的活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是b)，且编码一多肽，该多肽具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶(β-ketoacyl synthase)，乙酰转移酶(acetyltransferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)，酰基携带蛋白(acyl carrier protein)，以及酰脂基还原酶(enoyl reductase)。

    上述的DNA分子，其中该多肽具有二缩酮合成酶的活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是c)，且编码一多肽，该多肽具有单加氧酶(monooxygenase)活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是d)，且编码一多肽，该多肽具有氧化还原酶(oxidoreductase)活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是e)，且编码一多肽，该多肽具有去氢酶(dehydrogenase)活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是f)，且编码一多肽，该多肽具有转酯酶(transesterase)活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是g)，且编码一多肽，该多肽具有HMG-CoA还原酶活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是h)，且编码一多肽，该多肽具有转录因子活性。

    上述定义的分离的DNA分子，其是i)，且编码一多肽，该多肽具有外排泵(efflux pump)活性。

    此外，本发明的一实施形态提供一细胞，其转化有一择自以下组成的族群的聚核苷酸：a)一mkA聚核苷酸，包括序列识别号：2或19的核苷酸序列，b)一mkB聚核苷酸，包括序列识别号：3或20的核苷酸序列，c)一mkC聚核苷酸，包括序列识别号：4或21的核苷酸序列，d)一mkD聚核苷酸，包括序列识别号：5或22的核苷酸序列，e)一mkE聚核苷酸，包括序列识别号：6或23的核苷酸序列，f)一mkF聚核苷酸，包括序列识别号：7或24的核苷酸序列，g)一mkG聚核苷酸，包括序列识别号：8或27的核苷酸序列，h)一mkH聚核苷酸，包括序列识别号：9或25的核苷酸序列，i)一mkI聚核苷酸，包括序列识别号：10或26的核苷酸序列，以及j)上述聚核苷酸的组合。

    上述的细胞为细菌，酵母菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或丝状真菌。

    上述的细胞为红曲霉菌属。

    上述的细胞是择自以下一个或多个所列物所组成的族群：红曲霉pilosus，红曲霉ruber，以及红曲霉purpureus。

    上述的细胞为红曲霉菌BCRC 38072。

    尚且，本发明的一实施形态是提供一种增加HMG-CoA还原酶抑制剂生成的方法。上述细胞转化有一择自以下组成的族群的聚核苷酸：a)一mkA聚核苷酸，包括序列识别号：2或19的核苷酸序列，b)一mkB聚核苷酸，包括序列识别号：3或20的核苷酸序列，c)一mkC聚核苷酸，包括序列识别号：4或21的核苷酸序列，d)一mkD聚核苷酸，包括序列识别号：5或22的核苷酸序列，e)一mkE聚核苷酸，包括序列识别号：6或23的核苷酸序列，f)一mkF聚核苷酸，包括序列识别号：7或24的核苷酸序列，g)一mkH聚核苷酸，包括序列识别号：9或25的核苷酸序列，以及h)上述聚核苷酸的组合，以及由上述细胞收集HMG-CoA还原酶抑制剂。

    上述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是真菌细胞。

    上述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是红曲霉菌属。

    上述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是择自以下一个或多个所列物所组成的族群：红曲霉pilosus，红曲霉ruber，以及红曲霉purpureus。

    上述的增加莫那可林K生成的方法，其中该细胞是红曲霉菌BCRC 38072。

    上述的增加莫那可林K生成的方法，其中该聚核苷酸为g)。

    再者，本发明的一实施形态是提供一种增加monacolin K生成的方法。上述方法包括培养一可增加monacolin K生成的细胞。该细胞是转化有一择自上述组成的族群的聚核苷酸，以及由上述细胞收集monacolin K。

    另外，本发明的一实施形态是提供一种生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法。上述方法包括培养一可生成HMG-CoA还原酶抑制剂的细胞，上述细胞转化有一聚核苷酸，以及由上述细胞收集HMG-CoA还原酶抑制剂。上述聚核苷酸包括：a)一mkA聚核苷酸，包括序列识别号：2或19的核苷酸序列，b)一mkB聚核苷酸，包括序列识别号：3或20的核苷酸序列，c)一mkE聚核苷酸，包括序列识别号：6或23的核苷酸序列，以及d)一mkF聚核苷酸，包括序列识别号：7或24的核苷酸序列。于另一实施形态中，上述HMG-CoA还原酶抑制剂为monacolin K。

    上述的方法中该HMG-CoA还原酶抑制剂为莫那可林K。

    上述的方法中该细胞为细菌，酵母菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或丝状真菌。

    上述的方法中该细胞为红曲霉菌属。

    上述的方法中该细胞是择自以下一个或多个所列物所组成的族群：红曲霉pilosus，红曲霉ruber，以及红曲霉purpureus。

    上述的方法中该细胞为红曲霉菌BCRC 38072。

    上述的方法中该细胞更转化有一择自所组成的聚核苷酸：

    a)mkC的聚核苷酸，其包括序列识别号：4或21的核苷酸序列；

    b)mkD的聚核苷酸，其包括序列识别号：5或22的核苷酸序列；

    c)mkH的聚核苷酸，其包括序列识别号：9或25的核苷酸序列；以及

    d)以上的组合。

    而且，本发明的一实施形态又是提供一种分离的DNA分子，其包括一编码择自以下组成的族群的多肽的聚核苷酸：a)一包括序列识别号：11的氨基酸序列的多肽，b)一包括序列识别号：12的氨基酸序列的多肽，c)一包括序列识别号：13的氨基酸序列的多肽，d)一包括序列识别号：14的氨基酸序列的多肽，e)一包括序列识别号：15的氨基酸序列的多肽，f)一包括序列识别号：16的氨基酸序列的多肽，g)一包括序列识别号：28的氨基酸序列的多肽，h)一包括序列识别号：17的氨基酸序列的多肽，i)一包括序列识别号：18的氨基酸序列的多肽，以及j)一在严苛条件下可与编码a)、b)、c)、d)、e)、f)、g)、h)、或i)的聚核苷酸杂交的聚核苷酸。

    上述的DNA分子中该多肽为a)，且具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶(β-ketoacylsynthase)，乙酰转移酶(acetyl transferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)，及酰基携带蛋白(acyl carrier protein)。

    上述的DNA分子中该多肽具有九缩酮合成酶的活性。

    上述的DNA分子中该多肽为b)，且具有择自以下一个或多个所列物所组成族群的活性：β-酮酰基合成酶(β-ketoacylsynthase)，乙酰转移酶(acetyl transferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)，酰基携带蛋白(acyl carrier protein)，以及酰脂基还原酶(enoyl reductase)。

    上述的DNA分子中该多肽为c)，且具有二缩酮合成酶的活性。

    上述的DNA分子中该多肽为c)，且具有单加氧酶(monooxygenase)活性。

    上述的DNA分子中该多肽为d)，且具有氧化还原酶(oxidoreductase)活性。

    上述的DNA分子中该多肽为e)，且具有去氢酶(dehydrogenase)活性。

    上述的DNA分子中该多肽为f)，且具有转酯酶(transesterase)活性。

    上述的DNA分子中该多肽为g)，且具有HMG-CoA还原酶活性。

    上述的DNA分子中该多肽为h)，且具有转录因子活性。

    上述的DNA分子中该多肽为i)，且具有外排泵(efflux pump)活性。

    一种表达载体，其包括如上述的分离的DNA分子。

    本发明于红曲霉中寻找到产生monacolin k的相关基因，并提供了增加monacolin k生成的方法，提高了生产效率。

    【附图说明】

    图1A至1G显示红曲霉菌与其它霉菌的聚缩酮合成酶，及大鼠脂肪酸功能部位的序列比对。图1A显示酮酰基合成酶的比对，图1B显示酰基转移酶的比对，图1C显示脱水酶的比对，图1D显示甲基转移酶的比对，图1E显示酰脂基还原酶的比对，图1F显示酮酰基还原酶的比对，图1G显示酰基携带蛋白的比对。

    图2显示红曲霉菌mk基因群在第3天的表达情形。

    图3A与3B分别显示pPICZamkA与pPICZamkB的图谱。

    图4显示以VectorNTI分析MKH氨基酸序列与推定的Zn(II)Cys6二核功能区域。方框中的氨基酸序列代表Zn(II)Cys6二合功能区域，6个半胱胺酸标示为灰色。

    图5显示构筑含有聚缩酮合成酶mkA基因的大肠杆菌表达载体的构筑流程。设计一组寡核苷酸引物(p3与p4)，以RT-PCR方式增幅mkA基因的部分cDNA(6.5kb)。另设计p1与p2引物，以RT-PCR方式增幅mkA基因的部分cDNA(3.0kb)。

    图6显示构筑含有枯草杆菌的4’-磷酸泛酰巯乙胺转移酶sfp基因的大肠杆菌表达载体的流程。

    图7显示于大肠杆菌表达mkA与sfp基因的SDS-PAGE结果照片。第1栏代表含有对照组质粒pCDF-1b与pET30的大肠杆菌的总蛋白质，第2栏代表将表达载体pCDFsfp(含sfp基因)与pETmkA(含mkA基因)与加样缓冲液(loading buffer)在滚水中煮过的混合物。蛋白质是以胶体考马斯蓝染色。箭头代表Sfp与MKA的位置。溶解的蛋白质是以ProBondTM纯化系统(Invitrogen)纯化。第3栏代表将溶胞产物于3000×g离心60分钟的沉淀物，以及第4栏代表以Ni-管柱纯化的蛋白质。

    菌种保藏情况：大肠杆菌EP1300：pMPF 001、大肠杆菌EP1300：pMPF 002、大肠杆菌DH5α：pMS-acuF、大肠杆菌DH5α：pMS-Hsp已于公元2003年12月5日被寄存于美国典型培养物保藏中心(ATCC，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20110-2209，USA)，寄存编号分别为PTA-5685、PTA-5686、PTA-5687、PTA-5688。

    【具体实施方式】

    根据Nicholson(2001)等人针对土曲霉菌(Aspergillusterreus)的洛伐他汀(lovastatin)生合成基因所设计的简并引物(degenerate primers)，进一步设计出针对红曲霉的专一性探针，利用菌落杂交(colony hybridization)方式，自红曲霉BAC基因库中筛选并定序及批注分析出包括有monacolin k生合成基因。利用RT-PCR得到两个完整的PKS全长cDNA，并将此cDNA选殖至表达质粒中，以做为PKS的表达。

    自从1980年代红曲霉菌被发现可产生胆固醇抑制剂后，红曲霉菌在降血压、血糖与胆固醇的功效上即备受瞩目。红曲霉菌除了可产生monacolin k之外，亦能从中分离出与monacolin k具有相同基本结构的降胆固醇物质，例如：monacolin J，L，M，及X等(Endo et al.，1979，1985，1986 and Komagata et al.，1989)，monacolin J与L为形成monacolin k的前驱物。Monacolin k之所以可以抑制胆固醇的合成在于其结构与HMG-CoA具有的相似性，因此monacolin k会与HMG-CoA还原酶进行键结，使得HMG-CoA无法通过HMG-CoA还原酶的催化形成Mevolonate，降低胆固醇的合成。所以目前在市面上除了monacolin k之外，也有其它经由生物转换或化学修饰等方法而产生的胆固醇抑制剂，其在结构上都具有HMG-CoA的相似性，例如普伐他汀(音译Pravastatin)，辛伐他汀(音译Simvastatin)，氟伐他汀(音译Fluvastatin)与阿托伐他汀(音译Atorvastatin)等。

    本发明的目的是于红曲霉中寻找产生monacolin k的相关基因。本发明所分析的标的为红曲霉菌Monascus sp.BCRC 38072，将之依照Hawksworth & Pitt(1983)的分类系统进行观察及鉴定，其型态特征如下：

    宏观特征：

    CYA，25℃，7天。菌落直径25-26mm，菌丝体开始为白色，渐渐变成淡红橘色，复转为深红橘色。

    MEA，25℃，7天。菌落直径48mm，亮红橘色，复转为鲜红橘色。

    G25N，25℃，7天。菌落直径28-29mm，深红橘色，中央为深黄橘色。

    微观特征：

    分生粉孢子(aleuriocondia)通常为单生或成短链，为倒梨状(obpyriform)至球状(globose)，大小为10-13×8-10μm。其有性世代闭囊壳(Cleistothecia)为球状(globose)，直径37-72μm。子囊孢子(ascospore)为透明，椭圆形，大小为4.6-6.3(-6.6)×3.3-4.2μm。

    根据以上观察，BCRC 38072的特征分析如下：

    形态特征：BCRC 38072介于M.pilosus与M.ruber之间。

    1.依据菌落颜色与生长速度以及分生粉孢子的着生方式，BCRC 38072与M.pilosus较接近。

    2.依据子囊孢子形态大小，BCRC 38072与M.ruber较接近。

    序列分析：BCRC 38072、M.pilosus与M.ruber的rDNAITS片段及β-微管蛋白(β-tubulin)基因部分序列100％相同。

    综合形态特征与序列分析：BCRC 38072的学名暂定为Monascus pilosus K.Sato ex D Hawksw. & Pitt。

    从Monascus sp.BCRC 38072分析得知酮合成酶(ketosynthase)保留区域的DNA序列，再设计长度约226bp(序列识别号：1)专一性高的探针，做为以后菌落印迹杂交、DNA印迹杂交与PCR反应等，此探针也可做为其它红曲霉的筛选。利用BLAST与VectorNTI进行BAC DNA的完整序列的批注及预测。在此BAC序列中获得9个与已知土曲霉菌(Aspergillus terreus)所产生洛伐他汀(lovastatin)的基因群具有很高相似度的基因，其相似度分别约达54％以上。此外亦发现monacolin k基因群与橘青霉菌(Penicillium citrinum)合成compactin(后也称美伐他汀，mevastatin)的基因群也具有很高的相似度，达49％以上。相似度比较如下表1。

    表1：红曲霉菌的mk基因群，土曲霉菌的lov基因群，以及橘青霉菌的mlc基因群的相似度比较表mk基因氨基酸分子量(kDa)推测功能同构型的lov基因蛋白质相似度(％)同构型的mlc基因蛋白质相似度(％)mkA3075338聚缩酮类合成酶(polyketide syntase)lovB76mlcA66mkB2547276聚缩酮类合成酶(polyketide synthase)lovF73mlcB61mkC52460.6P450单加氧酶(monooxygenase)lovA85mlcC67mkD26328.9氧化还原酶(oxidoreductase)lovG67mlcF53mkE36038.9去氢酶(dehydrogenase)lovC81mlcG70mkF41346.8转酯酶(transesterase)lovD74mlcH63mkG1052113HMG-CoA还原酶(HMG-CoAreductase)lvrA69mlcD39mkH45549.4转录因子(transcription factor)lovE54mlcR49mkI54357.5外排泵(Efflux pump)lovI81mlcE68

    这9个基因包括两个聚缩酮合成酶(polyketide synthase)基因，其中的一为合成九缩酮(nonaketide)的基因，另一个为合成二缩酮(diketide)的基因，此外包括有一个单加氧酶(monooxygenase)基因、一个氧化还原酶(oxidoreductase)基因、一个去氢酶(dehydrogenase)基因、一个转酯酶(transesterase)基因、一个HMG-CoA还原酶基因、一个转录因子基因与一个外排泵(efflux pump)基因。本发明亦构筑红曲霉的fosmid基因库，并从fosmid end序列比对分析，筛选出2个转化株分别为pMPF001(包括mkB，mkD，mkE，mkF，mkG，mkH及mkI)与pMPF002(包括mkA，mkC，mkD，mkE，mkF，mkG，mkH及mkI)，寄存于财团法人食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心，编号前者为BCRC 940470，后者为BCRC 940471。其中进一步针对九缩酮(nonaketide)聚缩酮合成酶基因、二缩酮(diketide)聚缩酮合成酶与转录因子基因，分别就其功能性区域与各种已知曲菌(Aspergillus)，青霉菌(Penicillium)，叶斑菌(Cochliobolus)，赤霉菌(Gibberella)微生物的聚缩酮类生合成基因与大鼠的脂肪生合成基因(FAS)作比对，结果显示上述三个基因的各功能性区域的氨基酸序列，与土曲霉菌(Aspergillusterreus)中合成洛伐他汀(lovastatin)以及橘青霉菌(Penicilliumcitrinum)中合成compactin(后也称美伐他汀，mevastatin)的各功能性区域的氨基酸序列具很高的相似性，请参见图1。本发明并萃取红曲霉总RNA进行RNA印迹杂交(Northern blot)的分析，各基因在转录程度的表达情形可参见图2。

    本发明获得的两个聚缩酮类合成酶基因为多功能的酶：mkA基因具有β-酮酰基合成酶(β-ketoacyl synthase)，乙酰转移酶(acetyl transferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)及酰基携带蛋白(acyl carrier protein)等功能；mkB基因除了以上6个功能外，尚有酰脂基还原酶(enoyl reductase)的酶功能，参见图1。本发明利用RT-PCR的方式获得此两个基因的全长cDNA，并将此全长cDNA选殖入巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)的表达系统，以表达出聚缩酮类的产物。由于聚缩酮合成酶基因属于多功能的酶，而本发明又获得完整的全长cDNA，因此可通过改组(shuffling)等技术进行DNA的重组，进而产生多样性的聚缩酮类产物，此技术是做为筛选新药物的另一新途径。目前也有相关的专利发展出这样的技术，例如美国专利第6221641号、第6391594号，但此都局限于细菌的表达，相较之下，真菌所产生的聚缩酮类二次代谢产物表现出结构的多样性及复杂性，因此利用本发明所得到的pPICZamkA(图3A)与pPICZamkB(图3B)可进一步的进行改组(shuffling)技术，以做为表达聚缩酮类多样性的表达质粒。

    由此，本发明提供以下DNA分子、载体以及方法。

    (I)用来筛选monacolin K生合成相关基因的探针

    本发明是有关一种可用来筛选monacolin K生合成相关基因的探针，其包括序列识别号：1的核苷酸序列。该探针是根据Nicoholson(2001)等人针对土曲霉菌(Aspergillus terreus)的洛伐他汀(lovastatin)生合成基因所设计的简并引物(degenerateprimers)，进一步针对红曲霉菌BCRC 38072设计出来的专一性探针。熟悉此项技术人士应可轻易地利用本发明的探针，经由已知的技术，例如杂交反应等，于其它有机体中分离和纯化与monacolin K相似的基因序列。

    (II)九缩酮(Nonaketide)聚缩酮合成酶(mkA基因体DNA)

    本发明有关一种分离的DNA分子，其包括序列识别号：2(mkA基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：2的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号2：杂交，且编码具有九缩酮(nonaketide)聚缩酮合成酶活性的核苷酸序列。该DNA分子是由红曲霉菌BCRC 38072分离而来。此外熟悉此项技艺人士亦可依据本发明所揭示的DNA分子，经由已知的PCR、杂交等技术获得本发明所请求的序列。高度严苛杂交条件请参考EP 1325959 A1 P7
    节。九缩酮合成酶主要是催化1个乙酸(acetate)及8个丙二酸(malonate)形成九缩酮(nonaketide)，此基因具有多功能区域，包括β-酮酰基合成酶(β-ketoacyl synthase)，乙酰转移酶(acetyl transferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)及酰基携带蛋白(acyl carrier protein)。在与其它物种进行功能性区域的比对结果亦发现红曲霉菌BCRC38072中mkA各功能区域的氨基酸序列与土曲霉菌(Aspergillusterreus)的lovB基因及橘青霉菌(Penicillium citrinum)的mlcA基因具有较高的相似度。

    本发明亦有关一种载体，其包括序列识别号：2(mkA基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：2的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：2杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列。用于建构本发明载体的工具是指在适当的宿主细胞中可自行复制或可整合入宿主细胞的染色体的分子序列，其等诸如质粒、噬菌体与病毒等。较佳地，本发明使用的载体工具是为一表达载体。本发明的载体可进一步经由改组(shuffling)技术，产生多样性的聚缩酮类产物。有关改组技术可参考美国专利第6,221,641号及第6,391,594号。

    本发明亦有关一种经转化的细胞，其包括一载体，上述载体包括序列识别号：2的核苷酸序列，或与序列识别号：2的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：2杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列。上述转化细胞可为原核细胞与真核细胞，包括，但不限于，细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascuspilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC 38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959 A1 P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种增加monacolin K生成的方法，其包括(a)将序列识别号：2(mkA基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：2的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：2杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞。较佳地，上述细胞是指原本就可产生monacolin K的细胞。

    本发明亦有关一种增加HMG-CoA还原酶抑制剂生成的方法，其包括(a)将序列识别号：2(mkA基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：2的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：2杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收HMG-CoA还原酶抑制剂。上述细胞可为原本就可产生monacolin K的细胞。其特别是真菌细胞，特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascuspurpureus，更特别是BCRC 38072。

    (III)二缩酮合成酶(mkB基因体DNA)

    本发明有关一种分离的DNA分子，其包括序列识别号：3(mkB基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：3的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：3杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列。该DNA分子是由红曲霉菌BCRC 38072分离而来。此外熟悉此项技艺人士亦可依据本发明所揭示的DNA分子，经由已知的PCR、杂交等获得本发明所请求的序列。高度严苛杂交条件请参考EP 1325959 A1 P7
    节。二缩酮合成酶主要是生合成monacolin k的二缩酮支链，即2-丁酸甲酯(2-methylbyutyrate)。此基因具有多功能区域，包括β-酮酰基合成酶(β-ketoacylsynthase)，乙酰转移酶(acetyl transferase)，脱水酶(dehydratase)，甲基转移酶(methyltransferase)，酮还原酶(ketoreductase)，酰基携带蛋白(acyl carrier protein)，与酰脂基还原酶(enoyl reductase)。在与其它物种进行功能性区域的比对亦发现红曲霉菌BCRC 38072中mkB各功能区域与土曲霉菌(Aspergillus terreus)的lovF基因及橘青霉菌(Penicilliumcitrinum)的mlcB基因具有较高的相似度。

    本发明亦有关一种载体，其包括序列识别号：3的核苷酸序列，或与序列识别号：3的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：3杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列。用于建构本发明载体的工具是指在适当的宿主细胞中可自行复制或可整合入宿主细胞的染色体的分子序列，其等诸如质粒、噬菌体与病毒等。本发明的载体可进一步利用改组(shuffling)技术，产生多样性的聚缩酮。有关的改组技术可参考美国专利第6,221,641号及第6,391,594号。

    本发明亦有关一种经转化的细胞，其包括一载体，上述载体包括序列识别号3：的核苷酸序列，或与序列识别号：3的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：3杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列。上述转化细胞可为原核细胞或真核细胞，包括，但不限于，细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌，特别是Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC 38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959 A1 P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种增加monacolin K生成的方法，其包括(a)将序列识别号：3(mkB基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：3的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：3杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞。较佳地，上述细胞是指原本就可产生monacolin K的细胞。

    本发明亦有关一种增加HMG-CoA还原酶抑制剂生成的方法，其包括(a)将序列识别号：3(mkB基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：3的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：3杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收HMG-CoA还原酶抑制剂。上述细胞可为原本就可产生monacolin K的细胞。其特别是真菌细胞，特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascuspurpureus，更特别是BCRC 38072。

    (IV)转录因子(mkH基因体DNA)

    本发明有关一种分离的DNA分子，其包括序列识别号：9(mkH基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：9的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：9杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列。该DNA分子是由红曲霉菌BCRC 38072分离而来。此外熟悉此项技艺人士亦可依据本发明所揭示的DNA分子，经由已知的PCR、杂交等获得本发明所请求的序列。高度严苛杂交条件请参考EP1325959 A1 P7
    节。mkH基因经由Vector NTI比对发现此基因为二价锌6半胱胺酸二核功能部位(Zn(II)Cys6 binuclearmotif)，其保守序列为Cys-X2-Cys-X6-Cys-X11-Cys-X2-Cys-X6-Cys(请参考图4)。

    本发明亦有关一种载体，其包括序列识别号：9的核苷酸序列，或与序列识别号：9的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：9杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列。用于建构本发明载体的工具是指在适当的宿主细胞中可自行复制或可整合入宿主细胞的染色体的分子序列，其等诸如质粒、噬菌体与病毒等。较佳地，本发明使用的载体工具是为一表达载体。

    本发明亦有关一种经转化的细胞，其包括一载体，上述载体包括一序列识别号：9的核苷酸序列，或与序列识别号：9的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：9杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列。上述转化细胞可为原核细胞或真核细胞，包括，但不限于，细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌(Monascus sp.)，特别是Monascus pilosus，Monascusruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC 38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959 A1P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种表达系统，其包括一载体，上述载体包括一序列识别号：9的核苷酸序列，或与序列识别号：9的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或严苛杂交条件下可与序列识别号：9杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列，以及一可表达上述核苷酸序列的宿主细胞，其中上述载体是经由一转化方法被转化进入上述宿主细胞中。适合的宿主细胞包括细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌(Monascus sp.)，特别是Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC 38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959 A1 P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种增加monacolin K生成的方法，其包括(a)将序列识别号：9的核苷酸序列，或与序列识别号：9的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：9杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞。较佳地，上述细胞是指原本就可产生monacolin K的细胞。

    本发明亦有关一种增加HMG-CoA还原酶抑制剂生成的方法，其包括(a)将序列识别号：9(mkH基因体DNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：9的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：9杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收HMG-CoA还原酶抑制剂。上述细胞可为原本就可产生monacolin K的细胞。其特别是真菌细胞，特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascuspurpureus，更特别是BCRC 38072。

    (V)HMG-CoA还原酶抑制剂及Monacolin K的生产

    本发明亦有关一种生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其包括(a)将序列识别号：2(mkA基因体DNA)、序列识别号：3(mkB基因体DNA)、序列识别号：6(mkE基因体DNA)及序列识别号：7(mkF基因体DNA)的核苷酸序列，或者是在高度严苛杂交条件下可与上述序列分别杂交，且分别编码具有九缩酮合成酶、二缩酮合成酶、去氢酶与转酯酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收monacolin K。上述细胞可为原本就可产生monacolin K的细胞。其特别是真菌细胞，特别是红曲霉菌(Monascus sp.)，特别是Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascuspurpureus，更特别是BCRC 38072。根据Hutchinson(2000)及其团队针对洛伐他汀(lovastatin)生合成基因的研究推论，欲将洛伐他汀生合成基因于异源表达(heterologous expression)可能只需要九缩酮合成酶、二缩酮合成、去氢酶与转酯酶四种基因。其中九缩酮合成酶与去氢酶共同表达产生洛伐他汀的前驱物，二缩酮合成酶则形成2-丁酸甲酯，转酯酶则再进一步的将2-丁酸甲酯键结于九缩酮形成完整的洛伐他汀。再者，上述HMG-CoA还原酶抑制剂为monacolin K。

    于上述方法中，可更进一步包括序列识别号：4(mkC基因体DNA)、序列识别号：5(mkD基因体DNA)、序列识别号：8(mkG基因体DNA)、序列识别号：9(mkH基因体DNA)及序列识别号：10(mkI基因体DNA)的核苷酸序列，或者是在高度严苛杂交条件下可与上述序列分别杂交，且分别编码具有细胞色素P450单加氧酶、氧化还原酶、HMG-CoA还原酶、转录因子与外排泵活性的核苷酸序列。

    (VI)九缩酮(Nonaketide)聚缩酮合成酶(mkA cDNA)

    本发明有关一种分离的DNA分子，其包括序列识别号：19(mkA cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：19的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：19杂交，且编码具有九缩酮(nonaketide)聚缩酮合成酶活性的核苷酸序列。上述DNA分子是由红曲霉菌BCRC 38072分离而来。此外熟悉此项技艺人士亦可依据本发明所揭示的DNA分子，经由已知的PCR、杂交等技术获得本发明所请求的序列。高度严苛杂交条件请参考EP 1325959 A1 P7
    节。

    本发明亦有关一种载体，其包括序列识别号：19(mkA cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：19的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：19杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列。用于建构本发明载体的工具是指在适当的宿主细胞中可自行复制或可整合入宿主细胞的染色体的分子序列，其等诸如质粒、噬菌体与病毒等。较佳地，本发明使用的载体工具是为一表达载体，更佳地，本发明使用的载体工具是pPICZαA(Invitrogen)。本发明建构完成的载体是pPICZamkA，其包括本发明的序列识别号：19。pPICZamkA是依据Molecular Cloning中的分子操作方法，将完整mkA基因的全长cDNA转化至pPICZαA上而得。本发明的载体可进一步经由改组(shuffling)技术，产生多样性的聚缩酮类产物。有关改组技术可参考美国专利第6,221,641号及第6,391,594号。

    本发明亦有关一种经转化的细胞，其包括一载体，上述载体包括序列识别号：19，或与序列识别号：19的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：19杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列。上述转化细胞可为原核细胞与真核细胞，包括，但不限于，细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959A1 P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种增加monacolin K生成的方法，其包括(a)将序列识别号19(mkA cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：19的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：19杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞。较佳地，上述细胞是指原本就可产生monacolin K的细胞。

    本发明亦有关一种增加HMG-CoA还原酶抑制剂生成的方法，其包括(a)将序列识别号：19(mkA cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：19的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：19杂交，且编码具有九缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收HMG-CoA还原酶抑制剂。上述细胞可为原本就可产生monacolin K的细胞。其特别是真菌细胞，特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascuspurpureus，更特别是BCRC 38072。

    (VII)二缩酮合成酶(mkB cDNA)

    本发明有关一种分离的DNA分子，其包括序列识别号：20(mkB cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：20的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：20杂交且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列。上述DNA分子是由BCRC 38072分离而来。此外熟悉此项技艺人士亦可依据本发明所揭示的DNA分子，经由已知的PCR、杂交等获得本发明所请求的序列。

    本发明亦有关一种载体，其包括序列识别号：20的核苷酸序列，或与序列识别号：20的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：20杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列。用于建构本发明载体的工具是指在适当的宿主细胞中可自行复制或可整合入宿主细胞的染色体的分子序列，其等诸如质粒、噬菌体与病毒等。较佳地，本发明使用的载体工具是为一表达载体。更佳地，本发明使用的载体工具是pPICZαC。本发明建构完成的载体是pPICZamkB，其包括本发明的序列识别号20。pPICZamkB是根据Molecular Cloning中分子操作方法将完整mkB基因的全长cDNA转化至pPICZαC上而得。本发明的载体可进一步利用改组技术，产生多样性的聚缩酮。有关改组技术可参考美国专利第6,221,641号及第6,391,594号。

    本发明亦有关一种经转化的细胞，其包括一载体，上述载体包括一序列识别号：20的核苷酸序列，或与序列识别号：20的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：20杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列。上述转化细胞可为原核细胞或真核细胞，包括，但不限于，细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascuspilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC 38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959 A1 P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种增加monacolin K生成的方法，其包括(a)将序列识别号：20(mkB cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：20的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：20杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞。较佳地，上述细胞是指原本就可产生monacolin K的细胞。

    本发明亦有关一种增加HMG-CoA还原酶抑制剂生成的方法，其包括(a)将序列识别号：20(mkB cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：20的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：20杂交，且编码具有二缩酮合成酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收HMG-CoA还原酶抑制剂。上述细胞可为原本就可产生monacolin K的细胞。其特别是真菌细胞，特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascuspurpureus，更特别是BCRC 38072。

    (VIII)转录因子(mkH cDNA)

    本发明有关一种分离的DNA分子，其包括序列识别号：25(mkH cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：25的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：25杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列。该DNA分子是由红曲霉菌BCRC 38072分离而来。此外熟悉此项技艺人士亦可依据本发明所揭示的DNA分子，经由已知的PCR、杂交等获得本发明所请求的序列。高度严苛杂交条件请参考EP1325959 A1 P7
    节。

    本发明亦有关一种载体，其包括序列识别号：25的核苷酸序列，或与序列识别号：25的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：25杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列。用于建构本发明载体的工具是指在适当的宿主细胞中可自行复制或可整合入宿主细胞的染色体的分子序列，其等诸如质粒、噬菌体与病毒等。较佳地，本发明使用的载体工具是为一表达载体。更佳地，本发明使用的载体工具是pMS。本发明建构完成的载体是pMSmkH，其包括本发明的序列识别号25。pMSmkH是根据Molecular Cloning中分子操作方法将mkH基因转化至pMS上而得。

    本发明亦有关一种经转化的细胞，其包括一载体，上述载体包括一序列识别号：25的核苷酸序列，或与序列识别号：25的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：25杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列。上述转化细胞可为原核细胞或真核细胞，包括，但不限于，细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌(Monascus sp.)，特别是Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959A1 P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种表达系统，其包括一载体，上述载体包括一序列识别号：25的核苷酸序列，或与序列识别号：25的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或严苛杂交条件下可与序列识别号：25杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列，以及一可表达上述核苷酸序列的宿主细胞，其中上述载体是经由一转化方法被转化进入上述宿主细胞中。适合的宿主细胞包括细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌(Monascus sp.)，特别是Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC 38072。转化的方法可以采用已知的宿主-载体系统，对属于曲菌属(Aspergillus)的丝状真菌进行转化，例如欧洲专利第1325959 A1 P5号
    节所述。

    本发明亦有关一种增加monacolin K生成的方法，其包括(a)将序列识别号：25的核苷酸序列，或与序列识别号：25的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：25杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞。较佳地，上述细胞是指原本就可产生monacolin K的细胞。

    本发明亦有关一种增加HMG-CoA还原酶抑制剂生成的方法，其包括(a)将序列识别号：25(mkH cDNA)的核苷酸序列，或与序列识别号：25的序列分享95％相似性的核苷酸序列，或在高度严苛杂交条件下可与序列识别号：25杂交，且编码具有转录因子活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收HMG-CoA还原酶抑制剂。上述细胞可为原本就可产生monacolin K的细胞。其特别是真菌细胞，特别是红曲霉菌属(Monascus sp.)，特别是红曲霉菌属Monascus pilosus，Monascus ruber，或Monascuspurpureus，更特别是BCRC 38072。

    (IX)HMG-CoA还原酶抑制剂及Monacolin K的生产

    本发明亦有关一种生成HMG-CoA还原酶抑制剂的方法，其包括(a)将序列识别号：19(mkA cDNA)、序列识别号：20(mkBcDNA)、序列识别号：23(mkE cDNA)及序列识别号：24(mkFcDNA)的核苷酸序列，或者是在高度严苛杂交条件下可与上述序列分别杂交，且分别编码具有九缩酮合成酶、二缩酮合成酶、去氢酶与转酯酶活性的核苷酸序列，转化入一细胞中；(b)于允许该核苷酸序列表达的条件下，培养该转化细胞；以及(c)回收monacolin K。上述细胞可为原核细胞或真核细胞，包括，但不限于，细菌、酵母菌、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞以及丝状真菌，其特别是红曲霉菌(Monascus sp.)，特别是Monascuspilosus，Monascus ruber，或Monascus purpureus，更特别是BCRC 38072。根据Hutchinson(2000)及其团队针对洛伐他汀(lovastatin)生合成基因的研究推论，欲将洛伐他汀生合成基因于异源表达(heterologous expression)可能只需要九缩酮合成酶、二缩酮合成酶、去氢酶与转酯酶四种基因。其中九缩酮合成酶与去氢酶共同表达产生洛伐他汀的前驱物，二缩酮合成酶则形成2-丁酸甲酯，转酯酶则再进一步的将2-丁酸甲酯键结于九缩酮形成完整的洛伐他汀。再者，上述HMG-CoA还原酶抑制剂为monacolinK。

    于上述方法中，可更进一步包括序列识别号：21(mkCcDNA)、序列识别号：22(mkD cDNA)、序列识别号：25(mkHcDNA)及序列识别号：26(mkI cDNA)的核苷酸序列，或者是在高度严苛杂交条件下可与上述序列分别杂交，且分别编码具有细胞色素P450单加氧酶、氧化还原酶、转录因子与外排泵活性的核苷酸序列。

    以下将以具体实施例说明本发明。

    实施例

    实施例1：红曲霉的培养

    将红曲霉真菌接种于PDA(Potato Dextrose Agar)试管斜面，放置于30℃中培养。之后刮取菌丝及孢子，将其接种于50mL培养基(7％ glycerol，3％ glucose，3％ MSG，1.2％ polypetone，0.2％ NaNO3，0.1％ MgSO4·7H2O)中，以200rpm的转速于25℃中培养。

    实施例2：红曲霉BAC文库的建构

    A.红曲霉细胞核的制备

    收集红曲霉菌体，以灭过菌的去离子水冲洗，利用抽气过滤抽干菌体。加入已预冷10倍菌体重的清洗缓冲液(wash buffer：HB buffer+1.5％ β-mercaptoethanol)，放置搅拌器中将菌体打碎。利用Miracloth滤膜过滤可得红曲霉细胞核的部分。

    B.DNA填充物(DNA plugs)与染色体DNA片段的制备

    以HB缓冲液配制1.8％低熔解温度的琼脂糖(low meltingtemperature agarose)并置于50℃水浴中，以等体积的琼脂糖溶液与细胞核溶液均匀混合后，快速加入填充模型(plug mold，Bio-Rad)中，以蛋白酶K(1mg/mL)去除杂质。最后将填充物取出切成小碎片进行Hind III的部份酶切割作用(partialdigestion)，将反应完毕的填充物置于1％琼脂糖凝胶中，进行脉冲式电泳分析。切取约200kb的DNA片段，利用电洗脱(electroelution)的方法进行DNA回收。

    C.红曲霉基因库的构筑

    使用pIndigoBAC-5 HindIII Ready(Epicentre)，使载体与回收的DNA进行接合反应，之后再利用电转化方式，将DNA转化入感受态细胞中(Epicentre，TransforMaxTM EC 100TMelectrocompetent E.coli)，待菌落长出后，点选菌落于384微孔盘中做为保存。

    实施例3：核酸探针引物的设计及核酸探针制备

    利用下示的简并引物(degenerate primer)进行PCR及定序反应后，将所得DNA序列使用VectorNTI设计约226bp长的引物(序列识别号：1)，以做为核酸探针制备。

    Mplov1 5’TCCACTGCCGTTTATGTTG 3’(序列识别号：29)

    Mplov2 5’TCGTCATCTTCACCCCATC 3’(序列识别号30)

    之后利用PCR反应来扩增一段序列上含有DIG-11-dUTP(Roche，PCR DIG Probe Synthesis Kit)的DNA，用此段DNA来做为核酸探针。

    实施例4：菌落杂交的分析与BAC DNA的抽取

    剪裁尼龙膜(nylon membrane，Roche)一角以标示其方向，小心将尼龙膜置于含有菌落的平板上，以沾粘上的菌落朝上，将尼龙膜分别依顺序置于裂解液(lysis solution：2N NaOH，0.1％SDS)5分钟，0.5M NaOH/1.5M NaCl溶液5分钟，1.5MNaCI/0.5M Tris-HCl(pH7.4)5分钟及2X SSC 5分钟，之后使用紫外光固定DNA于尼龙膜上。所得的尼龙膜再进行杂交反应与免疫侦测(Roche)。将反应所得的菌落利用Qiagen的Large-Construct Kit抽取大量的BAC DNA。

    实施例5：基因枪(Shotgun)方式的序列分析

    A.基因枪(Shotgun)基因库的制备

    取3～5μg的BAC DNA，调整适当的超音波震碎条件，将BAC DNA震碎至1～2kb，并以电泳分析确定。使用Bal31核(nuclease)及T4 DNA聚合酶进行DNA钝端(blunt end)的修复，所得的DNA以电泳分析，并回收1～2kb的DNA片段，并进行接合反应(使用载体为pUC18/SmaI/CIAP(50ng/μL)(Pharmacia))并电转至E.coli DH5α中。

    B.DNA定序及分析

    利用96微孔盘进行高速质粒DNA(high throughput)的抽取，所得质粒DNA以ABI Bigdye v3.0套组进行定序反应，并以ABI 3700定序仪进行10倍覆盖率的序列分析。

    实施例6：DNA序列的组装(Assembly)与批注(annotation)

    根据Phil Green实验室发展的Phred-Phrap-Consed系统进行DNA序列的组装，所得的BAC完整序列进一步利用VectorNTI与BLAST进行序列的批注分析。

    实施例7：红曲霉总RNA的萃取与RT-PCR反应

    收集约0.2g红曲霉真菌的菌丝置于研钵中，利用液态氮迅速冷冻菌丝并将其磨成粉末状。之后利用trizol试剂(Invitrogen)与氯仿进行萃取。所得RNA溶于DEPC-H2O中。利用RNA进行反转录反应(Promega，ImProm-IITM Reverse TranscriptionSystem)，得到的全长cDNA再接合于TA载体(promega，pGEM-T vector system)保存。

    实施例8：RNA电泳分析与RNA印迹杂交(Northern blot)分析

    A.RNA电泳分析

    配置含有甲醛凝胶工作缓冲液(formaldehyde gel runningbuffer)与甲醛(formaldehyde)的1.2％琼脂糖凝胶(agarose gel)。取出RNA与甲醛凝胶运作缓冲液，甲醛(37％)，及甲酰胺均匀混合后，进行RNA电泳并以EtBr染色。

    B.RNA印迹

    切割与凝胶大小适当的尼龙膜，并以剪刀剪下一角，以做为记号，进行RNA印迹。之后使用紫外光固定RNA于尼龙膜上，所得的尼龙膜再进行杂交反应与免疫侦测(Roche)。

    实施例9：核酸探针引物的设计及核酸探针制备

    根据BAC DNA序列设计引物，以做为制备RNA印迹杂交分析用的探针。以下所列引物是设计用于制备红曲霉基因群分析所使用的探针：

    mkA基因

    正向引物5’ATA GCT CCG AGA ATG GTC CC 3’(序列识别号：31)

    反向引物5’CCA TCA AGG ATG CTC TGT CG 3’(序列识别号：32)

    探针片段长度为229bp

    mkB基因

    正向引物5’CTA GAC TTT GCT TCC CAC GCC A 3’(序列识别号：33)

    反向引物5’CAT TGT CGA GCG TTG GAG TC 3’(序列识别号：34)

    探针片段长度为167bp

    mkC基因

    正向引物5’GGC CTG AGC CGA AGA AGT AC 3’(序列识别号：35)

    反向引物5’TCA GAG ATC TTC GTC CCG AC 3’(序列识别号：36)

    探针片段长度为304bp

    mkD基因

    正向引物5’TGA TGA CTT TGC CCT GGC GG 3’(序列识别号：37)

    反向引物5’TCA CCC AAT GAC TCT AGC CC 3’(序列识别号：38)

    探针片段长度为175bp

    mkE基因

    正向引物5’TTC TCT CCC GAC AAC TGC CC 3’(序列识别号：39)

    反向引物5’AAT GGT CAC CGC CGA CTG GA 3’(序列识别号：40)

    探针片段长度为246bp

    mkF基因

    正向引物5’GCC CCG AAT CCT ACA TGA AG 3’(序列识别号：41)

    反向引物5’GGC CCA CCG TAG TTG ATG TG 3’(序列识别号：42)

    探针片段长度为166bp

    mkG基因

    正向引物5’CCT CGC TCT GAA TAT GAC CC 3’(序列识别号：43)

    反向引物5’TCG GAT CGG CTT CTC AAA CC 3’(序列识别号：44)

    探针片段长度为217bp

    mkH基因

    正向引物5’ACC TCA TCG CTC CAG ACC AT 3’(序列识别号：45)

    反向引物5’CTG CGA GAG AAT GAG AGT GC 3’(序列识别号：46)

    探针片段长度为179bp

    mkI基因

    正向引物5’CTA GAC TCG TTC ATC GCG GC 3’(序列识别号：47)

    反向引物5’CCA TAC ATT CTA CCT TGC GG 3’(序列识别号：48)

    探针片段长度为127bp

    实施例10：巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)的转化

    将PKS的全长cDNA(mkA与mkB)接合于pPICZαA与C(Invitrogen)，并使用Pichia EasyComp.套组(Invitrogen)进行转化反应。

    实施例11：DNA印迹杂交(Souhern blot)分析

    将凝胶浸泡在0.25M HCl中，放在平板震荡器上轻轻摇晃10分钟，以进行酸脱嘌呤作用(acid depurination)，再以二次水轻轻地洗净。之后转至NaCl/NaOH溶液(1.5M NaCl，0.5NNaOH)中，放在平板震荡器上轻轻摇晃15分钟两次，以进行变性作用，再以二次水轻轻地洗净。最后将凝胶浸泡在NaCl/Tris-HCl溶液(1.5M NaCl，1M Tris-HCl，pH7.4)中，放在平板震荡器上轻轻摇晃15分钟两次，以进行中和反应。切割与凝胶大小适当的尼龙膜，并以剪刀剪下一角以做为记号，进行DNA印迹。之后使用紫外光固定DNA于尼龙膜上，所得的尼龙膜再进行杂交反应与免疫侦测(Roche)。

    以下所列引物是设计用于制备DNA印迹杂交分析所使用的探针：

    mkA基因

    正向引物2 5’TGA ACA GCA CAG CAT AGG GG 3’(序列识别号：49)

    反向引物2 5’GCA GCC ATT GAA GAC GGC AT 3’(序列识别号：50)

    探针片段长度为293bp

    mkB基因

    正向引物5’CTA GAC TTT GCT TCC CAC GCC A 3’(序列识别号：33)

    反向引物5’CAT TGT CGA GCG TTG GAG TC 3’(序列识别号：34)

    探针片段长度为167bp

    实施例12：聚缩酮的生成

    Bedford(1995)，Gokhale(1999)，以及Pfeifer(2001)已研究过应用大肠杆菌与链霉菌作为宿主细胞，进行异源性聚缩酮合成酶的表达。而且，细菌性聚缩酮合成酶也已成功地表达于大肠杆菌与链霉菌中，并侦测到少量聚缩酮的生成。一般来说，大肠杆菌缺乏转译后修饰作用，因此应会限制功能性聚缩酮合成酶的异源表达。因此，可同时表达聚缩酮合成酶(简称PKS)与4’-磷酸泛酰巯基乙胺转移酶(4’-phosphopantetheine transferase，简称PPTase)，以产生聚缩酮合成酶的完整酰基携带蛋白(简称holo-ACP)功能区域，而能进行聚缩酮生成(Mootz等人，2001)。为更进一步研究本发明的表达载体的表达效能，将枯草杆菌(Bacillus subtilis)的sfp基因(编码PPTase)成功转化到表达载体pCDF-1b中(如图6所示)，并与如图5所示的带有PKS(即mkA基因)的载体同时表达于大肠杆菌中。SDS-PAGE的结果，如图7所显示，发现会产生少量的PKS可溶蛋白(342kDa)。而大部分Sfp蛋白亦可溶而造成29kDa蛋白的表达。实验过程如下述。

    1.表达载体的构筑

    将mkA基因的部份cDNA片段(6.5kb cDNA)以正向引物p3：5’-CCATCAAGGATGCTCTGTCG-3’(序列识别号：32)以及反向引物p4：5’-TCAAGCCAACTTCAACGCGG-3’(序列识别号：51)，并以Monascus的第一股cDNA为模板进行RT-PCR增幅。将所得到的6.5kb cDNA片段导入载体pGEM-T，以获得具有EcoRI-NotI切割位的片段。之后将上述片段接合至pET30，得到pETmkA1。再设计一组寡核苷酸引物，正向引物p1：5’-GGAATTCATGTACGTAGGACGCATTGGTGC-3’(序列识别号：52)，其含有23个碱基互补于5’端的mkA基因，且导入EcoRI切割位，以及反向引物p2：5’-TCGCGAGGACGGACAAAGTT-3’(序列识别号：53)，以由RT-PCR增幅部分3.0kb的cDNA。将上述具有EcoRI-EcoRI切割位的3.0kb Cdna片段接到pETmkA1，以得到pETmkA，如图6所示。

    另设计一组寡核苷酸引物，正向引物5’-CGGGATCCCATGAAGATTTACGGAATTTA-3’(序列识别号：54)，其含有20个碱基互补于5’端的sfp基因，并导入BamHI切割位，以及反向引物5’-ATAGTTTAGCGGCCGCTTATAAAAGCTCTTCGTACG-3’(序列识别号：55)，含有20个碱基互补于5’端sfp基因，并导入NotI切割位，以由枯草杆菌168的基因体DNA增幅出sfp基因。将具有BamHI-NotI切割位的sfp基因接合到pCDF-1b，已得到pCDFsfp，如图7所示。

    2.于大肠杆菌同时表达mkA与sfp

    将pETmkA与pCDFsfp同时转化到大肠杆菌BL21(DE3)，并于LB培养基中隔夜培养得到单独菌落。接着，将LB培养基转移到ATCC 765号的培养基，其中含有10％甘油，培养到OD600nm达到0.6～0.8。加入异丙醇-β-D-硫代半乳糖(isopropyl β-D-thiogalactoside，简称IPTG)至1.0mM的最终浓度，以诱导基因表达，并于20℃培养48小时。收集细胞沉淀物并以液态氮冷冻，再于42℃解冻，以进行溶胞作用。为增进溶胞作用，可加入溶菌酶(lysozyme)至细胞沉淀物中。以全细胞蛋白质以及可溶蛋白质的SDS-PAGE(7.5％的凝胶)，以及胶体考马斯蓝染色侦测蛋白质表达。

    参考文献

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    8.Hendrickson L，Davis CR，Roach C，Nguyen DK，Aldrich T，McAda PC & Reeves CD.Lovastatin biosynthesisin Aspergillus terreus：characterization of blocked mutants，enzyme activities and a multifunctional polyketide synthasegene.1999，Chem.Biol.6：429-439.

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    10.Kennedy J，Auclair K，Kendrew SG，Park C，VederasJC，Hutchinson CR.Modulation of polyketide synthaseactivity by accessory proteins during lovastatin biosynthesis.Science 1999，May 21；284(5418)：1368-72.

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    【序列表】

    <110>财团法人食品工业发展研究所

    <120>胆固醇合成抑制剂Monacolin K生合成基因

    <140>

    <141>

    <160>55

    <210>1

    <211>226

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>monacolin K探针

    <400>1

    tccactgccg tttatgttgg catgatgaca cacgactacg agacggtgtc   50

    gacgcgcgac ttggagagca ttcccactta ctcggccacg ggagtcgctg   100

    ttagtgtcgc gtcgaaccgc atctcatact tctttgactg gcatggcccg   150

    agtgtaagtt gctctcatgc cccatattgg taatcttgaa gagttcctaa   200

    cggacttgat ggggtgaaga tgacga                             226

    <210>2

    <211>9818

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkA基因组DNA

    <400>2

    atgtacgtag gacgcattgg tgcgaccaca tacatctctc gtcccgcaga 50

    ctctcgagct acgccaaaag tgatcaaaac tcaagggtcg atcaccacgt 100

    ctaatctaac atcactaaca accatggctc agtcaacata ccccaatgag 150

    cctattgtcg tggtaggaag cggctgccgc tttcccgggg gcgccaacac 200

    gccctccaag ctgtgggagc tccttcggga gcctcgcgac gtccgtagca 250

    aaatcccgaa agagagattt gacgtcgacg cattctatca tccagacgga 300

    aaacaccatg gacgaacaaa cgcaccctat gcctatatgc tacaagaaga 350

    cctgcgcgcc ttcgacggcc ctttcttcaa tatccaggcc ggagaggccg 400

    agagtatgga tccacaacag cggctcttgc tggagaccgt gtacgaggca 450

    gtctcagatg ccggtatgcg gatccaagac ctgcaggggt cttccactgc 500

    cgtttatgtt ggcatgatga cacacgacta cgagacggtg tcgacgcgcg 550

    acttggagag cattcccact tactcggcca cgggagtcgc tgttagtgtc 600

    gcgtcgaacc gcatctcata cttctttgac tggcatggcc cgagtgtaag 650

    ttgctctcat gccccatatt ggtaatcttg aagagttcct aacggacttg 700

    atggggtgaa gatgacgatc gataccgcat gcagctcgtc tttggttgcc 750

    gttcacctgg ctgtacaaca gctacgcagt gggcaaagct ccatggctat 800

    cgccgcgggc gccaacatga tcctcgggcc catgaccttc gttctagaaa 850

    gcaagttgaa catgttatcc ccctcgggcc ggtcccgcat gtgggacgct 900

    ggggccgatg gctatgctag aggcgtgagt gcctcctagt ttgcagacaa 950

    cgcgcaagtt cgctaacggt atgccttgtg catcgatatc tctttaggaa 1000

    gctgtttgtt cggtagtgct taaaacattg agccaagcct tgcgcgatgg 1050

    cgacagcatt gaatgcgtta tccgagaaac cggtgtgaac caagatggtc 1100

    gaacgacagg catcacgatg cccaaccaca gcgctcagga ggcacttatc 1150

    agggctacct actccaaagc cggcctcgac atcacgaacc ccgaggatcg 1200

    atgccagttc ttcgaggctc atggtcagta agcttcctag tatgttctgt 1250

    ctgctcgtgc actgattact ttggactcat ccgcatcata ggaactggta 1300

    caccagcagg agatccacag gaggccgagg ccatcgcaac cgcctttttc 1350

    ggacacaaaa aggaggcctc cgatgctgag aacgcagaga ctcccctctt 1400

    cgtgggcagt gtgaagaccg ttgtcggtca tactgagggc actgccggcc 1450

    tggctggtct catgaaggcg tccttcgccg tccagcacgg agtgatcccg 1500

    cccaacctgc tgtttgagaa tatcagcccc cgcgtggccc cattctactc 1550

    caatttgaag attgcaacag agacaacacc atggcccacc atcaaacctg 1600

    gacagcctcg ccgtgtcagt gtcaactctt ttggtaagca ggccttaacc 1650

    cggatgggaa tgactgtaag gagtccactg ctaatctcta tggcccatga 1700

    aaaggtttcg gtggcacgaa tgcacatgca attattgagg aatacataaa 1750

    gtctgaccaa aaggtgccag cgagccgaca gccggtggag tactcagaca 1800

    gtcccagtac attgaatctg cccttggttc tctcggccaa gtctcagcgc 1850

    tccatgaaga caacgttgga gagcatggta cagttccttc agtccaaccc 1900

    tgaagttaac ttgcgggatc tttcatggac tctactgcgg aagcggtcga 1950

    ttctaccctt ccgtcgggct attgtcggcc atagccacga agcaatccgt 2000

    gccgctctcg aggcagccat tgaagacggc atcgttgtga gcgacttcag 2050

    cgcggatgtc aaaggcaagc cgtctgtgct gggagtcttc accggacagg 2100

    gtgcccaatg gcctgggatg ttgaaggaac tgattgtggg atcatcctat 2150

    gtgcggtcga tagcggagga gctggatcac tcactgcaga ctttgccgga 2200

    gaagtaccgc ccctcctgga ccattctcga gcagctaatg ctagaagatg 2250

    aggcttccaa cgtccgacac gccagcttct cccagcccct atgctgtgct 2300

    gttcagattg ttctggtgcg tctcctgaaa gcagcaggaa tccagtttgc 2350

    tgctgtggtc ggacacagtt ccggagagat cgcctgtgca tttgccaccg 2400

    gtcttatcag tgcatccttg gcaattcgta ttgcccacct gcgtggagtc 2450

    gtttcggcgg agcacgctgc ctccgcgagc ggaggacgcg gatctatgtt 2500

    ggcagcaggt atgtcctatg aggaagcgaa agagctctgt gagttggatg 2550

    cctttgaaag ccgcatctgt gttgctgcta gcaattcccc agacagcgtt 2600

    accttctcgg gagatgcgga tgcaattgag cacttgcagg gcgttctgga 2650

    ggacgaggct acgttcgcca gactgctcag ggtggataca gcataccact 2700

    ctcaccatat gcttccttgt gcagcgccgt atatgcaagc tttggaggaa 2750

    tgcggctgtg ctgttgctga tggagacggt caggtggaag agggatcatg 2800

    gtattcctct gtcaaggaca gcaacgaacc aatgggcctt gccgacgtga 2850

    ctgctgagta ctggaaagat aacctggtat ccccggtgct tttctctcag 2900

    gccgtccagc gggcagccat catgcaccgg cccctggatg tcgggattga 2950

    agtcggttgc caccctgctc tcaagggccc gtgtctggct accatcaagg 3000

    atgctctgtc ggacgttgac ctggcataca caggatgttt ggagcgcgga 3050

    aagaatgata tgaatgcatt ttcccaggcc ctggcctatc tttgggagca 3100

    gttcggaatt ccaagcctgg atgctgaccg ctttataagt accattgctc 3150

    ccgagcgctc ctgcgtgagc ctttcgaagc agctgccgac gtactcatgg 3200

    gaccattctc ggagctattg gacggaatct cgtgccactc gtcagcacct 3250

    gcgaggaccg aagccgcatc ttctgctggg taagctctct gaatatagca 3300

    ctccgttgac cttccagtgg ctgaactttg tccgtcctcg cgacattgaa 3350

    tggctggatg ggcatgcatt gcagggccaa gtggtcttcc ctgccgcggg 3400

    ttatattgtc atggcgatgg aggcggccat ggaaattgcc aactctcatc 3450

    aggtgcaagt ccagctactt gagatcctgg atatgagcat tgacaaagcg 3500

    gtggttttcg atgatgaaga cagtctggta gaacttaact tgaccgcgga 3550

    agtaaccagc ggcatcggta aaggtgaccg gatgatcctc agcttcataa 3600

    ttgattcctg tctatccagg gaaggtgacc tctccacctc agccaagggt 3650

    cagctagtcg tcacattgga tgaaggccat ctccaggtga ccccagataa 3700

    cgagaagcag ctcctacccc cgccagaaga agagcatcct cacatgaacc 3750

    gagtgaatat caattcattc taccacgagc tggatctgat gggctacgac 3800

    tacagcaaag acttccggcg cctgcatagc atgcgacgag ccgatgcacg 3850

    agccagtgga attttggaat ttattcctct gaacgacgag gtccacggcc 3900

    gtcctctcct gctgcatccc gctcccttgg acattgcctt ccagacagtc 3950

    atcggcgcat actcctcccc cggagatcga cgtctacgct gcctgtatgt 4000

    gccgacgcac attgatcgca ttgctcttgt gccctctctc tgtcttgcga 4050

    cagctgcgtc cggttgtgac aagattgcct tcaatactat caacacctat 4100

    gacaagggtg atttcctcag cggtgacatc gtggcgtttg acgcggagca 4150

    gaccagtctg ttccatgtcg agaatattgt ttttaagccc ttctcgcccc 4200

    cgactgcgtc tactgatcat ccgatcttcg ccaaatggag ctggggtcca 4250

    ctgaccccgg aaaccctgct ggacaacccc aaccattggg ccacggcgca 4300

    ggataaggaa gcgatcccca tcattgaacg cattgtctac ttttacatca 4350

    aattgttcct gcagcagctg acccgagaag atcgcgaaca agcggcattc 4400

    cacctgcaga ggcagattgt gtggtgtgaa caagtcgtgg ccgacgctca 4450

    cgaaggtcgt caccaatggt acgatgcagc ttgggagaat gataccgaag 4500

    cccagataga gcagttatgt gccagaagct cctaccaccc tcacgttcgc 4550

    ttggtacagc gagttggtca aaacctgctc gcaaccatcc gttcgaatgg 4600

    caacccgttc gatctcatgg accatgatgg cctgttgacc gagttctata 4650

    ccaacacgct cagttttggc ccagcgttgc actatgccca agaccttgtg 4700

    ggtcaaattg cccatcgcta tcaatctatg gatatcctgg agatcggagc 4750

    tggaaccggt ggcgccacca aatacgtgct ggcaacgcct caactcgggt 4800

    tcaacagcta cacgtacacc gacatctcga ccggcttctt cgaaaaggca 4850

    cgcgaacagt ttgctgcctt cgaggaccgc atggagtttg agcccctcga 4900

    tatccgccgc agcccagcag agcaaggttt cacggagcac gtgtacgacc 4950

    taatcatcgc gtccaacgtg ctacacgcaa cgcccgactt ggagaagacc 5000

    atggcccatg cacgctccct gctgaagccc gggggccaga tggtgattct 5050

    ggagatcacc caccggaacc acaccagact agggtttatc ttcggcctgt 5100

    tcgccgattg gtgggcaggt atcgacgatg ggcggaccat ggagccattt 5150

    gtgtcgtttg accgctggga tgagatcttg aagcacgtcg ggttttccgg 5200

    catcgacagt cgcaccaagg accgcgatgc ggatctgttc cccacatcgg 5250

    tcttcagcac gcatgccgtt aactcgacaa tcgactacct gcacaagcct 5300

    cttgacgctc cagtgaagga ctcgtacccc ccgttggtgg tggtcggtgg 5350

    ccagacgcca aagacccagc gcatcttgga tgagatcaaa gccgttatgc 5400

    ctaatcgcca gatccagtta caccagcgtc tcgttgattt gttggatgca 5450

    gaggacatgc aggccaagtt cacctttgtt gtcctcacgg agctggacga 5500

    ggagctattc gctggtctca ccgaagacag ctttgaagca gtcaagctac 5550

    tgctcatgta cgccgggaac atgctgtggc tgaccgagaa tgcctgggtc 5600

    aagcgccctc atcaggcgag taccatcgga atgctgcgct ccatcagacg 5650

    cgagcacccc gacattggtg tccatattat ggatgtcgac tctgccgaga 5700

    acctggacgc acacttcctg gtcgaacagg tccttcggct ggaggaggat 5750

    atcgacgaat tggcagccac gacaacgtgg actcaggagc cagaagtctt 5800

    ctggtgcaat ggccgcgcct ggattcctcg tctgaagcat gataaatcga 5850

    ggaataaccg tatgaactcc tcacgtcgtc agatctttga gaccctcaat 5900

    ccatccaaga tccccgttgc attgaagaag gcggcagcct cctcttctta 5950

    ctacctggag tcagctgaga cctggcccgt gccaggtgcc gttactgcag 6000

    gggataggaa aacggtccat gttcggctca gccatcccca cgcccttcgg 6050

    gttggacatc ttgggttttt ctacctcgtt cagggccacg tcctgaaggg 6100

    tgatcaagca cttcctgtgg tggctttggc tgagcgcaac gcatcgattg 6150

    tccacgttcg ttcagactat gtccatgttc tagaagatac cgcggtgtct 6200

    gcgaacaatg gaagtttcat cttggccgct gcagcggccg tgttggccga 6250

    gacggtgatt cacagtgcca agagcctggg agctgatgcc tcggtcctgg 6300

    tcttgaatgc cccgggcttc tgtgcccaga cattgctccg cgctgcaaga 6350

    gattctggac ttcgggtcca tctggccacc acatcgtcca gtaccgaccc 6400

    gtctcctggg gccgaccgtt gcgtccgact gcatccccgc gacacggata 6450

    ggcgcctcaa acagcttctg ccccgtggca ctcaggcatt cttcgatctg 6500

    tccaccgatc cgagcagtga aggtctcaca cagcgattgc caaacgtcct 6550

    tatacccagc tgtgttcggc acagtactga atacttgctc agagataccg 6600

    cttccgctgg tgggaaagct acgctgcccg cggcatactg ggagcgtgta 6650

    gcctccttgg ctaatcacag cctcagtact cactttaagg agaatgataa 6700

    tgccagcaat ggatgccagg tcttgtcttg cacagacatt gtcgcgcgta 6750

    ataacaagag ccgtctgaac gcatcgactg tcatctcctg gccagatgac 6800

    gcggccctcc cggccagaat ccgtcccatc gataccgaga ccctgtttgc 6850

    agcggaaaag acgtacctct tagtcggact cactggagat ctcggccggt 6900

    ccttgggccg ctggatggtc ttacacggtg cccgccgcat cgtcctcacc 6950

    agccgcaacc cgcaagtgag cccgaattgg gtggcgcatg ttgaagagtt 7000

    gggcggccag gttaccgttc tgtccatgta agattatctc caatctcctt 7050

    ccttcgcttt gtgactcact aacacacaat gcagggatgt gacgagcgaa 7100

    gactcggtgg attctggctt ggccaaactc caggatttga agttgccccc 7150

    tatcggcggc attgcctttg gccctttggt gctgcaggat gtaatgctga 7200

    agaacatgga cctgcaaatg atggagatgg tgctgaaacc caaggtcgag 7250

    ggagcccgca tcctgcacga gaagttctcc gaccctgcca gcagcaaccc 7300

    actcgacttc ttcgtcatgt tctcctcgat tgtagcggta atgggtaacc 7350

    cgggccaggc caactacagc gcggcaaact gctacctgca ggctttggcg 7400

    cagcggcgat gcgcctctgg attggcggta agcttttttt ccccccaacc 7450

    atcccttccc ttctgcatgt gtctgtgcta aagataaacg caacgcaggc 7500

    ttcgactatc gacatcggtg cagtctatgg tgtcgggttc gtgacccggg 7550

    cggaactgga ggaggatttc aatgctattc ggttcatgtt tgactcggtc 7600

    gaagaacatg agctgcactc tctgtttgcc gaggcggtgg tgtccggtcg 7650

    acgggccatg caccagcagc agcagttcaa gacggtgctc gacatggccg 7700

    atatcgaatt gacgaccggt atacccccgc tggatccgac tctcaaggat 7750

    cgcattacgt tcttcgacga cgctcgggtc ggtaacttca agattcccga 7800

    acggcgcggc aaggcgggcg ataacgcagc aggatccaag ggctctgtca 7850

    aggaacagct cttgcaagct acaagcttgg accaggtccg tcaaatagtc 7900

    attggtaagt cttggcaaca tatcctttct ttcacgcgct agtcagcaat 7950

    gcgattaaca ttttctgggg cagatggtct atccgaaaag cttcgggtga 8000

    cccttcagat tcccgatggg gagagcgtgc accccactat cccgctcatc 8050

    gaccagggag tagactccct gggcgcggtt accgtgggta cctggttctc 8100

    gaagcagctg tacctagacc tgccgcttct cagagtgctt ggaggcgcct 8150

    ccgtggccga tctggcggac gacgctgctg cccggctgcc gcccagctcc 8200

    attccactcg tggcagcaag cgaagggggc gcggagacct cggacaatga 8250

    cacttcaggg cctgagggga ctgatctcag cgcctcgacc acaatcaccg 8300

    agccctcatc tgcagacgaa gaggacgaaa agcaggagga cgacaacgac 8350

    aactccgtcc tcgcccttca tccactctcc ctcggccagg agtacgcttg 8400

    gagactgcaa aaggccgccg atgattcgac catcttcaac aacacgatcg 8450

    gcatgttcat gacgggctcc atcgacgcca aacggctgtc caaggctctc 8500

    cgagcggtct tgcgccggca cgaaatcttc cgcaccggct ttgcggctgt 8550

    cggtaacaat gcagatgcca cgagtctagc gcaaattgtc tttggtcgaa 8600

    ccaagaacaa ggtccaagtc atccaggtgg ctgaccgggc cggcgcggaa 8650

    gaaggctacc ggcagctggt gcagacacag tacgacatca ccgctggaga 8700

    cactctgaga ctggtcgact tcttctgggg caaggacgag catctgttcg 8750

    ttgtggccta ccatcgattt gtcggcgatg gttccaccac ggagaatatc 8800

    tttgtcgaag cgagccagtt atacggcggc gtgaccctcg acaagcacgt 8850

    ccctcaattt gcagacctcg cgacgcggca gcgagaagcg ctcgagtccg 8900

    gccagatgga tgcggacctc gcgtactggg aatcgatgca ccaccagccc 8950

    acgggcgtgg tgtccccggt cctcccgcgg atgcttctgg gcgaagatgg 9000

    ccttaatagc ccgaaccacg cccgccagcc caactcgtgg aagcaacacg 9050

    aagcgatcgc gcgtctcgac cccatggtcg ctttccgcat ccgcgagcgc 9100

    agtcgcaagc acaaagccac gcccatgcaa ttctacctgg ctgcgtacca 9150

    cgtgctcctg gcacgattga cgggcagcag cgacttcagc ataggcctgg 9200

    ccgacaccaa tcgcacgaac gtggatgaac tggcgggcat gggctttttc 9250

    gccaacctgc tcccgctgcg cttccgcaac ttcgtcccgc acatcacctt 9300

    tggcgagcac ctggtcgcca ccaaggacaa ggtgcgcgag gccatgcagc 9350

    acgcccgcgt gccctacggg gtgctgctcg agcgcctcgg attcgaggtc 9400

    ccgggggcca ccgccgaaac agcggaaccg gcccccttgt tccaagcggt 9450

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    agatgaccga ggtcatcgcg actcgcgaac gcacccccta cgatgtcgtg 9550

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    <210>3

    <211>8081

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkB基因组DNA

    <400>3

    atgaaagcga cggcagcctc gggcacacct actcccatag ctgtagtggg 50

    catgggatgc agatttgccg ggggagcaac agatccacag gcactgtgga 100

    aattgctgga gcaaggaggg agcacttggt ccaagactcc atcctcgaga 150

    ttcaacgtca gcggagtcta ccaccctaac ggccaacgag taggatcggt 200

    aagtcagggg atgattctga ggctcggttc tatgtgctca agtataggca 250

    ttgactgctg gcagatgcac gttcggggtg gtcattttct agaccaagac 300

    ccggctcttt tcgatgcctc atttttcaat atgaccagtg aagttgccag 350

    tgtatgtgca atgctcgttc ccggttttct cgaccgatga gtgaatgatg 400

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    gcggagcaat gtatcacgac taccaggatt cgctccatcg caacccggaa 650

    actctgccgc gatacttcat cacgggtaat gctggcacga tgatgtcgag 700

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    tccgatgttg attgttccgt gcccgaggcc agctttctct ccccggatgg 1000

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    catctcagct gcattccaag gccagcctct gcagatcggc tccgtaaaag 1350

    ccaacctcgg gcacaccgaa gctgccagcg ggctggcaag cgtaatgaag 1400

    gtggctctgg cactggaaaa agggattgtg ccacctagtg caagattcct 1450

    gcagccgagc aagaagttgc tggaagagag aaaattccag gtgacgttgc 1500

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    accactaatg cctgccagga tgtggtttac gcatccccca aaaccgggaa 2800

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    tgcacttgtg gcaaaatgtg cttcggatct cggatgtgcc gtggatacgc 3350

    gatcacgtcg tgggctcacg aatccttttc cccggtgctg ggttcatcag 3400

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    gcggtttaag ctacatctta cgcgacgtgg acctggcgca ggcgctgatc 3500

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    attccatcgc cggtgataag gacgactgga cggagcattg tacagggctg 3650

    attcgcgcgc aggtcgatca tcctgtctcc agctcgtcga tccaacaaaa 3700

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    cttcgctgca tgcgacggga atctgtcacg ggcccttatt ccagaatatt 3800

    gagcgcattg aaagcgatgg ccaggcctcg tggtgcactc tgaccgttgc 3850

    cgacacagtg gcgactatgc cgcacgccta cgagagccag cacattgtgc 3900

    atccaaccac attagactcg gctatccagg cggcctatac agtgcttcca 3950

    tttatgggaa cactgatgaa gacagcgatg gtccccagtc gaatcggcgg 4000

    catgaagata cccgccagct tcgcgagctt ggaaccgggt gatatgctgt 4050

    gcgcacaagc aaaaataaag aaccaaggcc tctctgcctt tacaaccgat 4100

    gtagctgtgt tcaacgagtc agatatggat gaagaggcag gtatcgagct 4150

    cgaagggctt accttccagt cgcttggtgc tgttattagc gactctaggc 4200

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    gacatcactc tgaccaattc cacatggctt gagaggatac taagcactgg 4300

    gacccagtct caggagatcg gggtgatgtt ggagcttcga cggtgtactg 4350

    tccactttat ccaggaagca atagaaaacc taacaacgga agatgttgag 4400

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    gagacagtga gcaggagaga caaagcttgc ggtccagagt agtcgctgcc 4550

    accaacaatg gcgagatgat ctgtcgtctg ggccccaagc tatccgctat 4600

    cttgcgtggc gagctcgacc ctcttgagct gatgatggac ggccaactgt 4650

    tgtctcgata ctacatcagg gcaatcaaat ggagccggtc caatacgcag 4700

    gcaagcgaac tcgtgcgcct ctgctgccac aagaatccac gtgcccgcat 4750

    ccttgagatt ggcggtggaa ctggggggtg cacacagctc atcgtaaacg 4800

    ctttggggcc cacgaagccg gtaggccgct acgacttcac cgacgtgtct 4850

    gctggcttct tcgaagcggc tcgaaagcgg ttttcggggt ggcaggatgt 4900

    gatggacttc cgcaagttgg atatcgaggg cgatcccgaa gtgcaggggt 4950

    ttgactgcgg atcctacgac gtggtgttgg cctgtcaagt tcttcatgct 5000

    acaagcaaca tgcagcggac attaaacaat gtgcgcaagc tgttgaagcc 5050

    gggaggtaaa ctcattcttg ttgaaaccac gagggaccag ctcgatttgt 5100

    ttttcacatt cgggctcctg cccggctggt ggctcagtga agagccggaa 5150

    cggcagctta ccccatcact gtctcctgag ttatggcgca gtgtactgag 5200

    cgctactggt ttcagtggcg tggacctaga ggtccgcgac tgcgacagtg 5250

    atgagtttta catgatcagc accatgatgt ccacagctac acctgggact 5300

    cctgcaacta ccttgaatgg accagccgag gtgctcctgg tccatgccgg 5350

    ctcgcctccg cccatggatt ggctgcagaa tctgcaggta gccctcggcg 5400

    ggaaaaacag ttctataact tcactcaagg cgctccaggg cgtttctgat 5450

    ctcaagggga agatgtgtgt attcctgggg gagatggacc gcaccctact 5500

    tgaaagcgtg gtcagtgatg acttcacatc cttaacctct atgctacagt 5550

    atagccaagg tactctttgg gttactcgag gagcggcgat ggcgtcggat 5600

    gacccaagaa aggccctgca cctaggattg ctacgcacgc tccgcaatga 5650

    gaatcacggc cgtcgatttg tttcattgga cctcgacccc ttgcgtgatc 5700

    catggacggc ccagtcctgt gacgccattg tcaatgtact gaatgcagtc 5750

    ggtgcgtctc atgagaagga gtttgagtat gcagaacgcg atggcactat 5800

    tcatgtgcca cgaacgttca gcgactcaag ctccagcgag aaggaagact 5850

    tggttgtctt ggagccattc cagaatgaaa cgcgcttggt gcgactagac 5900

    gtacagactc cagggcttct ggattctttg cactttaagc tgtgttctgc 5950

    ggacgaagct tggagtagtg agctgccaga ggactgggtg gagattgagc 6000

    cgagggcgtt cggtctaaac tttcgcgata tcatggttgc catgggccag 6050

    ttggagtcaa atcgagtcat gggctttgag tgcgctggtg tggtaactag 6100

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    cgcaccaatg tcatctgcat cccagggacc ctgagtttcg aacaagcggc 6250

    ttccatccca ctggccttca cgacagctta cacctccctc tacactgttg 6300

    ctcgccttca acggggtgaa aaagtgctaa tccatggcgg cgctggagga 6350

    gtcggacagg cggccatcat ccttgctcaa ctggtcggag cggaggtctt 6400

    taccactgct ggaactcact ctaagcgcaa cttcttgatc gataagttca 6450

    agctggcccc cgaccatgtc ttctcgagca gagactccgg ttttatcgag 6500

    ggtatcaggg cttgtaccaa tggcaagggg gttgatgtgg tgctcaattc 6550

    tcttgctggg cctttgcttc aatatagctt cgactgtctg gtcaattttg 6600

    gtcgcttcgt ggaaataggc aaaaaggatc tcgagcaaaa tagccgactc 6650

    aacatggcga cttttgcgcg gaacgtctcc ttttcctcga ttgatatcct 6700

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    gagtatccca tgtcggctat tgagaaggca ttccgtacga tgcagagcgg 6850

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    ccgttcgccg gggaaccatg ccagtcgcgt tgaagcttga cgcgtcttac 6950

    ctgattgtcg gtggactggg gggtattggc agacgcattt gcgagtggat 7000

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    atctgaggtg gactttttca tcatgctctc atctctggtg ggtgtcatgg 7350

    gtggcgcggg tcaagccaac tatgcggctg caggcgcgtt ccaggacgcg 7400

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    cggagcgatt ggcccggatt ggctatcaac cgatgcacga ggaagaggtc 7550

    ctcgccgtgc tcgagcgagc catgtcgccc tcctcttctt cggcaccacc 7600

    gtcctctaac cctactatac ccgcctcgcc cgctgtcatc gttaccggca 7650

    tcaacacagg ccctggccct cacttcacaa acgccgactg gatgcaggag 7700

    gcacgtttcg cgggaatcaa gtatcgtgat cccctgaagg atgaccgtgg 7750

    tggggccttg tcctcttcac agcccgctga cgaggatagt gtacgcgctc 7800

    ggctaagtcg ggcatctacc gaggaggagg ccactgccct agtggtgcag 7850

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    gaagaagtat ggcgtgggaa gcaaagtcta g                     8081

    <210>4

    <211>1717

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkC基因组DNA

    <400>4

    atgacagttc cgacagatac ggtctcgcgt cgcctccagt ctctcgcttg 50

    gagcgacata aagcagcatg ccccatggct gccgtcttct cgcactcttg 100

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    caccatgagg gccaagcggg agttcgatgc gaatgcgccc gcatggattg 250

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    gaaggagctt tgcatgtaca agtttttggg cacggtcagt ttatctctga 400

    gttctttcca tcttcccgct attttcgtgt ctgggttact gatgatcatc 450

    ttgactgtca ggacttccac tctcatcttc ccggattcga cggcttcaaa 500

    gaagtcacca gagacgcaca tctcatcacc aaggtggtca tgaatcagtt 550

    ccaaacccaa gctgcgaaat acaccaagcc tcttgccgat gaggccagcg 600

    cgacaattgc agatatcttt ggggacaaca agggcaagtc aagcatccta 650

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    ggttcttcgc ctccaaggag atcaagatca tgttggcgtt tctgctgatt 1600

    cggtacgact ggaagctggt gccaaacgag ccgttgcagt attaccgtca 1650

    ttccttcagc gtgcgcatcc atcctgccac caagcttatg atgcgccgtc 1700

    gggacgaaga tctctga                                     1717

    <210>5

    <211>792

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkD基因组DNA

    <400>5

    atgcgtatcc aacgcacccc cgcgcccccc aaagcgcccc gggccctcct 50

    ctgcgtgcac ggcgccggct gctcccccgc catcttccgc gtgcagctct 100

    ccaaactccg cgccgcttta cgggaagact ttgaattcgt ctacgcaacg 150

    gcacccttcc cttccgcccc tggacccggg atcctgccca cgttcgaagg 200

    cctcgggccc tattacacct ggttcgaggg ttctccgtct ggtgctgctg 250

    ccaaagggga taacagcaac agcaacgaca gcaactcttc tcccaccgta 300

    cacgaccgcc tcgccgccgt ccacgaaccc gtccgccgcg ccatcgccga 350

    atggcagacc cagaacccca gcatccccat cgtgggaacc gtcagtttct 400

    ccgagggcgc tcttgtgacc gccctgctgc tctggcagca gcagatgggt 450

    aggataccct ggctcccggt catgcaggtt gcgatgttca tctgctgctg 500

    gtatcagcat gaggcgactc agtatatgcg ggaggaggta ggctgcggcg 550

    gtgatggtgg cattgacggt gagaagttgg tgatccgggg ggtgctgtcg 600

    ctgcacctgc agggtcgtga tgactttgcc ctggcgggtt cgaagatggt 650

    ggtggcgcag cattttgtgc ccggggaggc gcaggtgttg gagtttgcgg 700

    gccggcatca tttcccgaat cggccgcgcg atgtgttgga gacggttaag 750

    cggtttaggc agctgtgtgt gagggctaga gtcattgggt ga         792

    <210>6

    <211>1228

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkE基因组DNA

    <400>6

    atgaccatca ccttcaccct accacctcac cagactgcgc tgacagtgga 50

    cgagcatgac aaagtcacca tctgggacgt cgccccctgt ccaagcctcc 100

    cccccgatca ggtctgcgtg cgcgtcgagg ccgtagccct caaccccagc 150

    gacacgaaga tgcgcggcca attcgccacc ccctacgcct tcctgggcac 200

    cgactacgcc ggcaccgtcg tcgccgtggg atcgcaggtc acgcacatcc 250

    aagtcgggga ccgggtctac ggcgcccaga acgagatgtg tccgcgcacc 300

    ccccgaccag ggcccttctc gcagtacacg gtcacccgcg gccgcatctg 350

    ggccacggtc cctgagggct ggtccttcga gcaggccgcg tcgttgcccg 400

    cgggcatcag cacggccggc ctggcgatga agctgctcgg gctgccttta 450

    ccggatccca atgctacgac ggcaccggcc cttccgaagc ccgtgtatgt 500

    tttggtgtat gggggtagca ccgctactgc gacgattgtg atgcagatgc 550

    tacgcttgta ctgttgcctt cctctgcctg ccagcccaag cttgatatat 600

    gtcgtgctaa ccggcgggat tggatcaatc tcgtgtaggt ccggatacat 650

    ccccatagcc acatgctccc cgcacaattt cgacctcgcc aaaaagcacg 700

    gcgcagaaga tgtctttgac tatcgtgatg ccggtctcgc gcagacgatt 750

    gtgagttcat cccctctccc caccaagtta agccacgcgg ttgacgattg 800

    ctaacctgct tcagcgcaca tacaccaaaa acaacctccg ctacgccctc 850

    gattgcatca ccaacgtcga gtccaccacc ctctgcttcg ccgccatcgg 900

    ccgcgccggc ggccgctatg tctccctgaa cccgttcccg gaacacgcgg 950

    cgacccggaa aatggtcacc gccgactgga ccctggggcc gaccattttc 1000

    ggggaagggt cgacttggcc ggcgccgtat gggcggccgg ggagcgagaa 1050

    ggaccgcgca ttcggcgagg agttgtggcg cgttgcggca aggctcgtgg 1100

    aggatgggaa gatcgtgcac catcctctgc gggtgattcc tggcgggttc 1150

    gaggccatta agcaggggat ggagttggtt aggactgggc agttgtcggg 1200

    agagaaggtt gtggtgaagt tggggtaa                         1228

    <210>7

    <211>1425

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkF基因组DNA

    <400>7

    atgcgtcaat ttctctcctc tgatcgcatc aactctgaaa tcccccagga 50

    gaaaagcgaa atggtaggat tcagtgatat cgacaatagc agccgccaga 100

    tcaaagaaat ggaagccgct ttccgatcgg ccgtgaaaac agggcagatc 150

    ccgggggcag tcatcatggc tcgagatcat agtggtaagc aaacccgcat 200

    tattctgtct tcttctcttt ctatctcgac gtgtaataac cgggggagtg 250

    ggccgaaggc cgactgaact atacgcgctg cttcggggcg cggacggtgg 300

    tgcgcgatga gtgtaaccga ctccctccga tgcaggtcga caccccctgc 350

    cggctggcga gtgccaccaa gctgcttacg acgatcatgg cgctgcaatg 400

    cgtggagcgg gggctcgtga ggttggatga gacggtggat cgactgctgc 450

    cggatttgag tgcgatgaag gtgctggagg ggtttgatgc cgcgggggag 500

    ccgaagatga gagagcggaa ggggaagatt actttgaagt aagtgaatct 550

    agctcgttgc attctatttg atacacttgt gtatgtagag aaaaggagaa 600

    aaagagaaaa agagagagag actaattcac gtgctgttca cgcccagaca 650

    tctcctaaca cacacctccg gcctgtccta cgtcttcctc caccccctcc 700

    tccgagaata catggccaaa ggccacctcc agacggctga gaaattcggg 750

    atccagagtc ggctggcgcc cccggccgtc aacgacccgg gcgccgagtg 800

    gatctacggc gccaacctcg actggacggg gaagctggtc gagcgcgcca 850

    cgggcctgga cctggagcag tacctccaag agaacatctg cgcgccgctg 900

    aacatcaccg acatgacctt caagctgcag cagcgacccg atctgctggc 950

    gcggcgcgcc gaccagacgc accgcaacaa ggcggacggc cgcctgcgct 1000

    acgacgactc ggtgtacttc cggtccgacg gcgacgagtg ctttgggggc 1050

    cagggggtct tctcgggccc cgaatcctac atgaaggtcg tgcactccct 1100

    gctgcagcgc gacgggcgcc tgctgcggcc cgagaccgtg gacttgatgt 1150

    tccagcccgc gctcgatgcg caaacggaga agcagatgaa ccagcatatg 1200

    gacgcgagcc cgcacatcaa ctacggtggg ccgatgccca tggtgttgcg 1250

    gcggagtttt gggcttggtg ggatgattgc cttggaggat ctggatgggc 1300

    agaagtggcg ccgaaagggc tgtttaacct ttggcggcgg gccgaatatt 1350

    gtatgggtaa tgttactctc agccctacgc ttcgttttct tcttcttctt 1400

    cttcttcttc ttctgctcta gctga                            1425

    <210>8

    <211>3356

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkG基因组DNA

    <400>8

    atggcatcgg cagccgtgac gccaaagctt ggctgggtgc agcaccaggt 50

    aaccaacgga ttacatgccg tggtcggcca agtgtgtcga catcccatcc 100

    acacgttgct ggtgactgct ctgatcgccg caacgactta tctccatgtt 150

    ttggaaggca cctttcgcgc agccaaccta ggtcccggtt ccaagactga 200

    cgcagccccc ttcgacgtcc agtcgttcct ctggggcagc cgaagtcttc 250

    gcctgggcga gacaagctcg tggagatggc aggtgggcga cttgtctgag 300

    gcgactggcg atggccaagt atgataaacc cttttttttt tttttttttt 350

    tctgttttgc ttctgtcgat cccaaaactt gcgcgctgac tgcgaccgca 400

    ttgttattgc tttctctcta atcaggtcaa tcaccactgg gctcttgtca 450

    ctctcagctt ccccggcgcc tcggtcgatg atcgcagccc tgcctttctg 500

    tggaacgcac tgcccgactc tgtgggcgca gagccgatca cgccaacctc 550

    caacttcttc acctcgatct ccaatgaatt ctcgctggcc tttcgagtcc 600

    catacaccca attgagcgat tttctggagg cggtggagtt tgttgcctcg 650

    gataaggagg atcgtagctg ggccatcagg tttcctcacg gagagggcaa 700

    gcccatttcg ctgggccgct ggctcgggaa ctcgtggctg tcgttccttc 750

    accgggctaa acacgccgag acggtagaca tggctatcat cggtttaggc 800

    tacctcgctc tgaatatgac cctggtctct ctcttccgag cgatgcgtca 850

    gttgggctcg cgtttctggc tggcagcctc cgtgctgctc tctggggcgt 900

    ttgcctttgt attcgggctc ggtgtcacga ctgcctgcgg cgtgccagtc 950

    gacatgcttc ttctgtcgga agggattccc ttcctggttt tgaccgtggg 1000

    gtttgagaag ccgatccgat ttacccgtgc tgttctctac gcatcgaatc 1050

    agctccggcg cgggttgcag cagcgggacg ttgccgacaa gcatgacagc 1100

    cggcagcgcc atatgatccc caacgccatg ctattcgcca tcaacagaga 1150

    aggatggtcc attgtccagt cgtaccttct tgagatcggg gctctcgcat 1200

    tgggtgcggt cttccggcca cgggaacgat tcggccagtt ctgcttcctg 1250

    gccgcatgga tggtgctctt cgacgccatc cttcttttca ccttctacgc 1300

    caccattctc tgcgtcaaac tggaggtgac ccggatgcaa aaccccggca 1350

    ccctggatct ggcagacgac caacatgggc cgcgcatctt cgggtacaag 1400

    gtcaatccga ccagcctggc ccggtggaag ctaatcatgg taggcgggtt 1450

    cgtgctcttc aacgtcctcc aactgtcatc gttcttttat cgcatcatgg 1500

    gaggcttcat gaccaatgcc gctctgaccc cgaccaccgt cagtccgttc 1550

    aaagtggctg ccaacgggct gaacgatatt tatttggccg cccgtgccgg 1600

    cggagttgag acgtgggtca cggtgctacc gccgattcga tatgtcatgg 1650

    aagcatctgg gttggaaatg tcggccggca gacgtcctgt atttgatggc 1700

    gtgctggccg gactggagag ccccctgggt cggctctgtc tcatgggcgc 1750

    tttggttttc agtctttacc tcaataacca cctgatcccg gccgcccgct 1800

    ggcatttttc ccccggcgca ccgaaagaat ccgctgcgcc tgcaccccct 1850

    tcatcgcccg catcggtccc cagcgctgta ccggtccctg cgccctcctc 1900

    tcgcagcttc gaggaaatcg aggccctatt caaagcgaac caggcggaat 1950

    ctctgaccga tgacgagctg gcggagctct gtctccgtgg taagattgcc 2000

    ggatacagct tagagaagac cttggaaagc attgcctccg caggttcttc 2050

    aagcacagca acaactaggc tggaggcttt cacgcgcgcg gttcgcatcc 2100

    gccgggccgc cgtgtcgcgg acgccttcga ctcgggacct cagcggcggc 2150

    atccaggagt cgctgctccc ctaccgcaac tacaactacg agctggtgca 2200

    cggcgcctgc tgcgagaatg tgatcggata cctgcccctg cccctgggtc 2250

    tcgcaggacc catggtgatc gacggccagg cgtatttcat cccgatggcc 2300

    accaccgagg gtgtcctagt cgccagcgcc agccggggct gcaaggcgat 2350

    caacaccggg ggcggcgccg taacgatgct caagggcgac ggcatgacgc 2400

    ggggcccctg tctgggattc ccttcggcga aacgcgccgc cgaagcccaa 2450

    cgctgggttg agtcccccgt cggccatcaa gtcctcaccg acgccttcaa 2500

    cgccaccagc cgctttgccc gtctgcagac cctgactgtg gcccaggccg 2550

    gcacctacct ctacatccgg ttccgcacca cgaccggcga cgcaatgggc 2600

    atgaacatga tctccaaggg ggtcgagaag gccctacagg cgatgaccgc 2650

    ccacgggttc cccgatatga acaccatcac cctgtcgggc aatttctgcg 2700

    ccgataagaa atccgccgct atcaactgga tcggtggccg cggcaagtcg 2750

    gtcatcgcgg aggccaccat ccccgccgat accgtccgga aggtcctgaa 2800

    gactgacatc gatgcactgg tcgagctcaa cacggctaag aacctggtgg 2850

    gtagcgccat ggctggtagt atgggggggt tcaacgccca tgcgtccaat 2900

    ctggttcagg cggtgttcct ggccactggg caggatcccg ctcagaatgt 2950

    ggagagtagt agctgtatca caacgatgaa gaagtatgtg tttttttttt 3000

    ttttttccct ttatagtttc cccagattcc ctccccctta atctcaactt 3050

    gtactaacag cgaaacaccc caggatcgac ggaaacctgc acattgccgt 3100

    ctccatgccc tcgatggagg tcggcaccat cggtgggggc accatcctcg 3150

    aagcccaggg agccatgttg gacttgctcg gggtccgggg cgcccatccc 3200

    accgatcctg gtgcgaacgc tcgacgcttg gcccggatcg tcgccgcggc 3250

    cgtgctggcg ggtgaactga gtacctgctc tgccctagcg gccggtcatt 3300

    tggtaaatgc ccatatgcgg cacaatcgca gtgcggcgtc gtcggaaaag 3350

    aaataa                                                 3356

    <210>9

    <211>1464

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkH基因组DNA

    <400>9

    atggccctat cgccagtcca ggatccccct tcacacaccg acaaaactat 50

    gccccgccgt gcatttcgcc gatcttgtga ccgatgccat gcacagaaga 100

    ttaagtgtat aggcagcgag ggagctgttg cccgtgcttc atgtcaacgt 150

    tgccagcaag ctggactgcg gtgcgtttac agcgagcgat gccctaagcg 200

    caagctaccc aaacccaacc cagcggaatc ttcccctgca agcagcacgg 250

    ccggcctgca cacctcttct tcagattctt cgccccctgt tccctccgat 300

    ggcttgccgc tagacctgcc agggccggat tcctcaggcg tctccctcca 350

    attcctcgac ccgtctgccg actgcgactg gccttggtcc tcgatcggtg 400

    tggacgaaac cgttgtcaac aattgcttgg acttatctca tggccatggc 450

    catggagacc tcagttgcca gctcgagctg cctatgccag atcttccctc 500

    ccccttcgaa ttctcggccg aaaaatctcc ctcaccgtcg gtgtctggca 550

    gcattgccgg agctgtcagt gcacaacgag aactcttcga tggcttgtcg 600

    acggtgtccc aggaattgga agccatcctt ctggctgtgg cggtggagtg 650

    gccaaaacag gaaatctgga cttgtgcgta actccgtttc ccttaacctc 700

    actccccccc ccctcctaaa gaagaagaag aacatctgga aaagctaatc 750

    tgctttatgc tattgctaga ccccattggg acgttcttca acgcatcacg 800

    aagacttctt gtatatctcc aacaacaatc caacacccgc agcgaccaag 850

    gcatgctgaa tgaatgtcta cgaaccaaga acctcttcat ggcagtgcat 900

    tgttatatgc tgatcgtgaa gattttcacc tctctctcgg aattgctgct 950

    atcccagatc cggcattccc aggctggcca gctgacaccc ttggaagggc 1000

    atcagttcga gccaccaccg agcagcagca gggaccgtag cagcgtcgat 1050

    accatgccca tcttcaaccc gaatctccac atcggcgggt tgttttctta 1100

    tctcaacccc ttcatgcacg ccctatcctc ggcttgcacc accttgcgcg 1150

    tcggcgtaca gttgctgcga gagaatgaga gtgctcttgg gatccccccg 1200

    gcgcaggggg tggcggcctc tgtgagtatg ggcaaggagg agtgggcaga 1250

    cggcgaggat gtagccagtg cagtgacgac ggcggacgag gatctccgcc 1300

    agccggcctc gcggatctta tccatggtct ggagcgatga ggtgggcgac 1350

    cagaaggcca agtctgctga tgctgctggt ccgcgaagcc gaaccctggc 1400

    ggtgctacgg cggtgtaatc gagagatctt ttccctggcc cgccaacaca 1450

    acctggcctc ctaa                                        1464

    <210>10

    <211>2148

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkI基因组DNA

    <400>10

    atggcttccc accagtctga gaaagagaag ccacagagct gcaccactga 50

    agtccaggtc agccatgtca ccggcctaaa gctaggactg gtagtaacct 100

    cggtgaccct ggtggtgttt ttgatgttgt tggacatgtc tatcattgtg 150

    acagtaagca tggctccagc tcgctaggtc cggacgcagc tgatcgcgat 200

    tgcaggctat cccccatatc actgctcagt ttcattccct tggggatgtt 250

    ggatggtatg gaagtgcgta tcttttgtcg aggtgataat ccaaaccccc 300

    tctcttattt tcgtggcaag tgggcgttcc gtttacgctg tagtgtgctc 350

    tagctgtgct ctacagccct tggcagggaa gctctacact ctcttgacat 400

    tgaagtatac cttcctagca ttcctcgggg tgtttgaagt cggatcagct 450

    ctctgtggcg ccgcgcgttg ttcaactatg ttgatcgtgg ggcgcgcagt 500

    ggctggcatg ggaggatcgg ggctcaccaa tggagccatc accatcctcg 550

    cctctgcagc tccaaaacaa cagcaaccac gtaagtgctg gtcacgggtc 600

    gaccgatcgg acttcggtga tggcatactg acaaagctac atagtgttaa 650

    tcgggatcat gatgggtcgt aagcttcctt atgcactaac tcccaaaggc 700

    caaacacgag gtctgatttg aatctagtga gccaaattgc cattgtctgt 750

    ggaccattgc tgggaggtgc ttttacccaa cacgcaagtt ggcggtggtg 800

    tatgtcccaa cgttgttttg tatgttgcca gtcgacgttc ttgctgaaat 850

    ggaaacccac gatcgttctt ccacccaggc ttctatatca atcttcctgt 900

    cggagcgctg gccgccatcc tccttctcgc catccacatt cctaagagtg 950

    tgccaacatc ggattgcaca atgcctgctc ccagagctgt tggggtccgg 1000

    gtcatcctga gtcagctcga tctcctgggg tttgtgctct tcgccgcctt 1050

    tgccgtgatg atctcacttg cgttagaatg gggcgggtcc gattatatgt 1100

    gggatagctc cgtaatcatc ggcttgttct gtggtgccgg catctcgctg 1150

    gtggtgtttg ggttctggga acgctacgta ggcaactcga tggcgatgat 1200

    tcctttctcg gtggccagtc gtcgacaagt ctggtgctcg tgtcttttct 1250

    tgggcttttt ctccggggcc ttgctcacct tctcttacta ccttcctatc 1300

    tacttccagg ccgtgaagga cgtctctccc accatgagtg gggtgtatat 1350

    gcttccaggc atagggggac aaattgtgat ggcgatcgtc tccggcgcaa 1400

    tcagtgagtt cagaatatca ctttgataat ttctgttttg tggggaaacc 1450

    atgcacgact gaccaatcta tataagtcgg caaaacgggg tattacattc 1500

    cctgggcgct tgccagtggg atcatcgtat ctatctccgc aggcctggta 1550

    tcgaccttcc agccgcatac ctcaatcgca gcgtgggtga tgtatcaatt 1600

    catggggggc tttggtcgag gatgtggaat gcagaccgta cgttacccca 1650

    accaacatac gaggtgtttt tgtttctgtt ctgtttctgg tttgttccag 1700

    gttcttttct atttctgtac tcactctagc tcactcgctc tctatctcct 1750

    tctagcccat cattgccatt caacatgccc tgccaccaca aatgagtgcg 1800

    ctcggtatct cgctggccat gttcggccag accttcggcg gctccctctt 1850

    cctcaccttg gccaagctcg tcttcagcgc cggccttgac gccggcttac 1900

    gcgagtatgc gcccgccgtc agcgcagagg cggtgacggc cgcgggcgcc 1950

    acgggcttcc gcgatgtcgt ccccgcaaat ctcctttctc aggttctcct 2000

    ggcatactgt aaagggatag accatacatt ctaccttgcg gtcggggcat 2050

    cgggagccac ttttttgttt gcgtggggaa tgggtcaggt cggtttgatt 2100

    tggtgggggg aggaaaggac ggggttcggc cgcgatgaac gagtctag   2148

    <210>11

    <211>3075

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkA氨基酸序列

    <400>11

    MYVGRIGATT YISRPADSRA TPKVIKTQGS ITTSNLTSLT TMAQSTYPNE 50

    PIVVVGSGCR FPGGANTPSK LWELLREPRD VRSKIPKERF DVDAFYHPDG 100

    KHHGRTNAPY AYMLQEDLRA FDGPFFNIQA GEAESMDPQQ RLLLETVYEA 150

    VSDAGMRIQD LQGSSTAVYV GMMTHDYETV STRDLESIPT YSATGVAVSV 200

    ASNRISYFFD WHGPSMTIDT ACSSSLVAVH LAVQQLRSGQ SSMAIAAGAN 250

    MILGPMTFVL ESKLNMLSPS GRSRMWDAGA DGYARGEAVC SVVLKTLSQA 300

    LRDGDSIECV IRETGVNQDG RTTGITMPNH SAQEALIRAT YSKAGLDITN 350

    PEDRCQFFEA HGTGTPAGDP QEAEAIATAF FGHKKEASDA ENAETPLFVG 400

    SVKTVVGHTE GTAGLAGLMK ASFAVQHGVI PPNLLFENIS PRVAPFYSNL 450

    KIATETTPWP TIKPGQPRRV SVNSFGFGGT NAHAIIEEYI KSDQKVPASR 500

    QPVEYSDSPS TLNLPLVLSA KSQRSMKTTL ESMVQFLQSN PEVNLRDLSW 550

    TLLRKRSILP FRRAIVGHSH EAIRAALEAA IEDGIVVSDF SADVKGKPSV 600

    LGVFTGQGAQ WPGMLKELIV GSSYVRSIAE ELDHSLQTLP EKYRPSWTIL 650

    EQLMLEDEAS NVRHASFSQP LCCAVQIVLV RLLKAAGIQF AAVVGHSSGE 700

    IACAFATGLI SASLAIRIAH LRGVVSAEHA ASASGGRGSM LAAGMSYEEA 750

    KELCELDAFE SRICVAASNS PDSVTFSGDA DAIEHLQGVL EDEATFARLL 800

    RVDTAYHSHH MLPCAAPYMQ ALEECGCAVA DGDGQVEEGS WYSSVKDSNE 850

    PMGLADVTAE YWKDNLVSPV LFSQAVQRAA IMHRPLDVGI EVGCHPALKG 900

    PCLATIKDAL SDVDLAYTGC LERGKNDMNA FSQALAYLWE QFGIPSLDAD 950

    RFISTIAPER SCVSLSKQLP TYSWDHSRSY WTESRATRQH LRGPKPHLLL 1000

    GKLSEYSTPL TFQWLNFVRP RDIEWLDGHA LQGQVVFPAA GYIVMAMEAA 1050

    MEIANSHQVQ VQLLEILDMS IDKAVVFDDE DSLVELNLTA EVTSGIGKGD 1100

    RMILSFIIDS CLSREGDLST SAKGQLVVTL DEGHLQVTPD NEKQLLPPPE 1150

    EEHPHMNRVN INSFYHELDL MGYDYSKDFR RLHSMRRADA RASGILEFIP 1200

    LNDEVHGRPL LLHPAPLDIA FQTVIGAYSS PGDRRLRCLY VPTHIDRIAL 1250

    VPSLCLATAA SGCDKIAFNT INTYDKGDFL SGDIVAFDAE QTSLFHVENI 1300

    VFKPFSPPTA STDHPIFAKW SWGPLTPETL LDNPNHWATA QDKEAIPIIE 1350

    RIVYFYIKLF LQQLTREDRE QAAFHLQRQI VWCEQVVADA HEGRHQWYDA 1400

    AWENDTEAQI EQLCARSSYH PHVRLVQRVG QNLLATIRSN GNPFDLMDHD 1450

    GLLTEFYTNT LSFGPALHYA QDLVGQIAHR YQSMDILEIG AGTGGATKYV  1500

    LATPQLGFNS YTYTDISTGF FEKAREQFAA FEDRMEFEPL DIRRSPAEQG  1550

    FTEHVYDLII ASNVLHATPD LEKTMAHARS LLKPGGQMVI LEITHRNHTR  1600

    LGFIFGLFAD WWAGIDDGRT MEPFVSFDRW DEILKHVGFS GIDSRTKDRD  1650

    ADLFPTSVFS THAVNSTIDY LHKPLDAPVK DSYPPLVVVG GQTPKTQRIL  1700

    DEIKAVMPNR QIQLHQRLVD LLDAEDMQAK FTFVVLTELD EELFAGLTED  1750

    SFEAVKLLLM YAGNMLWLTE NAWVKRPHQA STIGMLRSIR REHPDIGVHI  1800

    MDVDSAENLD AHFLVEQVLR LEEDIDELAA TTTWTQEPEV FWCNGRAWIP  1850

    RLKHDKSRNN RMNSSRRQIF ETLNPSKIPV ALKKAAASSS YYLESAETWP  1900

    VPGAVTAGDR KTVHVRLSHP HALRVGHLGF FYLVQGHVLK GDQALPVVAL  1950

    AERNASIVHV RSDYVHVLED TAVSANNGSF ILAAAAAVLA ETVIHSAKSL  2000

    GADASVLVLN APGFCAQTLL RAARDSGLRV HLATTSSSTD PSPGADRCVR  2050

    LHPRDTDRRL KQLLPRGTQA FFDLSTDPSS EGLTQRLPNV LIPSCVRHST  2100

    EYLLRDTASA GGKATLPAAY WERVASLANH SLSTHFKEND NASNGCQVLS  2150

    CTDIVARNNK SRLNASTVIS WPDDAALPAR IRPIDTETLF AAEKTYLLVG  2200

    LTGDLGRSLG RWMVLHGARR IVLTSRNPQV SPNWVAHVEE LGGQVTVLSM  2250

    DVTSEDSVDS GLAKLQDLKL PPIGGIAFGP LVLQDVMLKN MDLQMMEMVL  2300

    KPKVEGARIL HEKFSDPASS NPLDFFVMFS SIVAVMGNPG QANYSAANCY  2350

    LQALAQRRCA SGLAASTIDI GAVYGVGFVT RAELEEDFNA IRFMFDSVEE  2400

    HELHSLFAEA VVSGRRAMHQ QQQFKTVLDM ADIELTTGIP PLDPTLKDRI  2450

    TFFDDARVGN FKIPERRGKA GDNAAGSKGS VKEQLLQATS LDQVRQIVID 2500

    GLSEKLRVTL QIPDGESVHP TIPLIDQGVD SLGAVTVGTW FSKQLYLDLP 2550

    LLRVLGGASV ADLADDAAAR LPPSSIPLVA ASEGGAETSD NDTSGPEGTD 2600

    LSASTTITEP SSADEEDEKQ EDDNDNSVLA LHPLSLGQEY AWRLQKAADD 2650

    STIFNNTIGM FMTGSIDAKR LSKALRAVLR RHEIFRTGFA AVGNNADATS 2700

    LAQIVFGRTK NKVQVIQVAD RAGAEEGYRQ LVQTQYDITA GDTLRLVDFF 2750

    WGKDEHLFVV AYHRFVGDGS TTENIFVEAS QLYGGVTLDK HVPQFADLAT 2800

    RQREALESGQ MDADLAYWES MHHQPTGVVS PVLPRMLLGE DGLNSPNHAR 2850

    QPNSWKQHEA IARLDPMVAF RIRERSRKHK ATPMQFYLAA YHVLLARLTG 2900

    SSDFSIGLAD TNRTNVDELA GMGFFANLLP LRFRNFVPHI TFGEHLVATK 2950

    DKVREAMQHA RVPYGVLLER LGFEVPGATA ETAEPAPLFQ AVFDYKQGQA 3000

    ESGSIGSAKM TEVIATRERT PYDVVLEMSD DPTKDPLLTV KLQSSVYEVH 3050

    HPRAFLESYI SILSMFSMNP ALKLA                            3075

    <210>12

    <211>2547

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkB基因氨基酸序列

    <400>12

    MKATAASGTP TPIAVVGMGC RFAGGATDPQ ALWKLLEQGG STWSKTPSSR 50

    FNVSGVYHPN GQRVGSMHVR GGHFLDQDPA LFDASFFNMT SEVASCMDPQ 100

    QRLILEVVYE ALEAAGIPLE SVAGSNTAVF SGAMYHDYQD SLHRNPETLP 150

    RYFITGNAGT MMSSRVSHFY DLRGPSVTVD TACSTTLTAL HLAIQSIRAG 200

    EADMAIVAGS NLLLNSDVFV TMSNLGFLSP DGISYSFDPR ANGYGRGEGV 250

    AAIILKALPR ALRDGDPIRL VVRETALNQD GRTPAITGPS PEAQACLIRE 300

    CYQKAGLDPR QTSYVEAHGT GTPTGDPLEL AAISAAFQGQ PLQIGSVKAN 350

    LGHTEAASGL ASVMKVALAL EKGIVPPSAR FLQPSKKLLE ERKFQIPLSS 400

    QLWLPIDGIC RASINNFGFG GANAHAIVER YDPAARISTS KPNGHIRPHD 450

    SHVEADRGKI YVLSAKDEHS CQEMISRLRD YLNRANPTDE RQFLANMAYT 500

    LASRRSNLRW KAACRAHSLA SLLSVLVSDG TRPRRSAEKA RLGWVFTGQG 550

    AQWFAMGREL IEAYPVFKEA LIECDGYIKG MGANWSIIDE LRRGEAESRV 600

    NEAEFSLPLS TAIQVALVRL LWSWGIRPAA ITSHSSGEVA AAYAVGAFSA 650

    RSAIGISYIR GALIAKTQPA PTTKGGMLAV GLSRSEVGEY ITRVQQQGEE 700

    YLVVGCINSP SNVTVSGDLS AVVRLEELLH ADQIFARRLK VTQAFHSHHM 750

    QPLSGEFREA LVEVFNADIT DTTNACQDVV YASPKTGKRL DDCNHLRDPM 800

    HWVESMLFPV EFESSFREMC FDRKDQAQEV DKIIEIGPHG VLSGAIKQIL 850

    QLPELAAFDI SYLSCLSRGK SAVDTIQLLA MDLLQGGYPV DLNAVNFPYG 900

    CEAAEVQVLS DLPTYPWNHK TRYWKEPRIS RAARQRKIPV HDLIGVQEPL  950

    CPPLLHLWQN VLRISDVPWI RDHVVGSRIL FPGAGFISMV IDGLSQICNH  1000

    DPETCGLSYI LRDVDLAQAL ILPTDGDEGV DLRLTIRAAD QKSLGMRDWQ  1050

    RFSVYSIAGD KDDWTEHCTG LIRAQVDHPV SSSSIQQKTN PPQWSRKMAP  1100

    QDLWASLHAT GICHGPLFQN IERIESDGQA SWCTLTVADT VATMPHAYES  1150

    QHIVHPTTLD SAIQAAYTVL PFMGTLMKTA MVPSRIGGMK IPASFASLEP  1200

    GDMLCAQAKI KNQGLSAFTT DVAVFNESDM DEEAGIELEG LTFQSLGAVI  1250

    SDSRRDLTEN ESTYSSWHWA PDITLTNSTW LERILSTGTQ SQEIGVMLEL  1300

    RRCTVHFIQE AIENLTTEDV ERLSGHLVKF YCWMQAQLAC ATNGELGQDS  1350

    ADWLRDSEQE RQSLRSRVVA ATNNGEMICR LGPKLSAILR GELDPLELMM  1400

    DGQLLSRYYI RAIKWSRSNT QASELVRLCC HKNPRARILE IGGGTGGCTQ  1450

    LIVNALGPTK PVGRYDFTDV SAGFFEAARK RFSGWQDVMD FRKLDIEGDP  1500

    EVQGFDCGSY DVVLACQVLH ATSNMQRTLN NVRKLLKPGG KLILVETTRD  1550

    QLDLFFTFGL LPGWWLSEEP ERQLTPSLSP ELWRSVLSAT GFSGVDLEVR  1600

    DCDSDEFYMI STMMSTATPG TPATTLNGPA EVLLVHAGSP PPMDWLQNLQ  1650

    VALGGKNSSI TSLKALQGVS DLKGKMCVFL GEMDRTLLES VVSDDFTSLT  1700

    SMLQYSQGTL WVTRGAAMAS DDPRKALHLG LLRTLRNENH GRRFVSLDLD  1750

    PLRDPWTAQS CDAIVNVLNA VGASHEKEFE YAERDGTIHV PRTFSDSSSS  1800

    EKEDLVVLEP FQNETRLVRL DVQTPGLLDS LHFKLCSADE AWSSELPEDW  1850

    VEIEPRAFGL NFRDIMVAMG QLESNRVMGF ECAGVVTRLS KAATTGAGGL  1900

    AIGDRVCALM KGHWASRVRT ARTNVICIPG TLSFEQAASI PLAFTTAYTS 1950

    LYTVARLQRG EKVLIHGGAG GVGQAAIILA QLVGAEVFTT AGTHSKRNFL 2000

    IDKFKLAPDH VFSSRDSGFI EGIRACTNGK GVDVVLNSLA GPLLQYSFDC 2050

    LVNFGRFVEI GKKDLEQNSR LNMATFARNV SFSSIDILYW EEAKSAEIFR 2100

    ALTEIMRLLE QKTIDLIGPI SEYPMSAIEK AFRTMQSGQH VGKLVVATAE 2150

    TDMIPVRRGT MPVALKLDAS YLIVGGLGGI GRRICEWMVD HGARHLLILS 2200

    RSGRTDPFVT GLQKRGCVVR IHSCDVADES QLHAVLQQCH EDNMPPIRGI 2250

    IQAAMVLKDA LVSQMTADDF HVALRPKVQG SWNLHKIASE VDFFIMLSSL 2300

    VGVMGGAGQA NYAAAGAFQD ALAQHRVAQG KPAVTIDLGM VKSIGYVAET 2350

    DPAVAERLAR IGYQPMHEEE VLAVLERAMS PSSSSAPPSS NPTIPASPAV 2400

    IVTGINTGPG PHFTNADWMQ EARFAGIKYR DPLKDDRGGA LSSSQPADED 2450

    SVRARLSRAS TEEEATALVV QVMGHRLVTM FGLTESEMSA TQTLSSVGVD 2500

    SLVAIELRNW ITAQLNVDIS VFELMEGRTI AEVAEVVVKK YGVGSKV    2547

    <210>13

    <211>524

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkC基因氨基酸序列

    <400>13

    MTVPTDTVSR RLQSLAWSDI KQHAPWLPSS RTLVSGFLCL ILLQILYSRG 50

    RKSDLRVYNP KKWWELTTMR AKREFDANAP AWIEAWFSKN DQPLRFIVDS 100

    GYCTILPSSM ADEFRKMKEL CMYKFLGTDF HSHLPGFDGF KEVTRDAHLI 150

    TKVVMNQFQT QAAKYTKPLA DEASATIADI FGDNKEWHTA PVYNECLDLV 200

    TRTVTFIMVG DKLAHNEEWL DIAKHHAVTM AIQARQLRLW PVILRPIVHW 250

    LEPQGAKLRA QVRRARQLLE PIIQERRAEK AKCLAQGIEP PRYVDSIQWF 300

    EDTAKGQWYD AAGAQLAMDF AGIYGTSDLM IGGLVDIVRH PHLIEPLRNE 350

    IRTVIGEEGW TPASLYKLKL LDSCLKESQR VKPVECATMR SYALQNVTFS 400

    NGTFVPKGEL VAVAADRMSN PEVWPEPKKY DPYRYMRLRE DPDKAFSAQL 450

    ENTNGNHIGF GWHPRACPGR FFASKEIKIM LAFLLIRYDW KLVPNEPLQY 500

    YRHSFSVRIH PATKLMMRRR DEDL                             524

    <210>14

    <211>263

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkD基因氨基酸序列

    <400>14

    MRIQRTPAPP KAPRALLCVH GAGCSPAIFR VQLSKLRAAL REDFEFVYAT 50

    APFPSAPGPG ILPTFEGLGP YYTWFEGSPS GAAAKGDNSN SNDSNSSPTV 100

    HDRLAAVHEP VRRAIAEWQT QNPSIPIVGT VSFSEGALVT ALLLWQQQMG 150

    RIPWLPVMQV AMFICCWYQH EATQYMREEV GCGGDGGIDG EKLVIRGVLS 200

    LHLQGRDDFA LAGSKMVVAQ HFVPGEAQVL EFAGRHHFPN RPRDVLETVK 250

    RFRQLCVRAR VIG                                         263

    <210>15

    <211>360

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkE基因氨基酸序列

    <400>15

    MTITFTLPPH QTALTVDEHD KVTIWDVAPC PSLPPDQVCV RVEAVALNPS 50

    DTKMRGQFAT PYAFLGTDYA GTVVAVGSQV THIQVGDRVY GAQNEMCPRT 100

    PRPGPFSQYT VTRGRIWATV PEGWSFEQAA SLPAGISTAG LAMKLLGLPL 150

    PDPNATTAPA LPKPVYVLVY GGSTATATIV MQMLRLSGYI PIATCSPHNF 200

    DLAKKHGAED VFDYRDAGLA QTIRTYTKNN LRYALDCITN VESTTLCFAA 250

    IGRAGGRYVS LNPFPEHAAT RKMVTADWTL GPTIFGEGST WPAPYGRPGS 300

    EKDRAFGEEL WRVAARLVED GKIVHHPLRV IPGGFEAIKQ GMELVRTGQL 350

    SGEKVVVKLG                                             360

    <210>16

    <211>413

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkF基因氨基酸序列

    <400>16

    MRQFLSSDRI NSEIPQEKSE MVGFSDIDNS SRQIKEMEAA FRSAVKTGQI 50

    PGAVIMARDH SGRLNYTRCF GARTVVRDEC NRLPPMQVDT PCRLASATKL 100

    LTTIMALQCV ERGLVRLDET VDRLLPDLSA MKVLEGFDAA GEPKMRERKG 150

    KITLKHLLTH TSGLSYVFLH PLLREYMAKG HLQTAEKFGI QSRLAPPAVN 200

    DPGAEWIYGA NLDWTGKLVE RATGLDLEQY LQENICAPLN ITDMTFKLQQ 250

    RPDLLARRAD QTHRNKADGR LRYDDSVYFR SDGDECFGGQ GVFSGPESYM 300

    KVVHSLLQRD GRLLRPETVD LMFQPALDAQ TEKQMNQHMD ASPHINYGGP 350

    MPMVLRRSFG LGGMIALEDL DGQKWRRKGC LTFGGGPNIV WVMLLSALRF 400

    VFFFFFFFFF CSS                                         413

    <210>17

    <211>455

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkH基因氨基酸序列

    <400>17

    MALSPVQDPP SHTDKTMPRR AFRRSCDRCH AQKIKCIGSE GAVARASCQR 50

    CQQAGLRCVY SERCPKRKLP KPNPAESSPA SSTAGLHTSS SDSSPPVPSD 100

    GLPLDLPGPD SSGVSLQFLD PSADCDWPWS SIGVDETVVN NCLDLSHGHG 150

    HGDLSCQLEL PMPDLPSPFE FSAEKSPSPS VSGSIAGAVS AQRELFDGLS 200

    TVSQELEAIL LAVAVEWPKQ EIWTYPIGTF FNASRRLLVY LQQQSNTRSD 250

    QGMLNECLRT KNLFMAVHCY MLIVKIFTSL SELLLSQIRH SQAGQLTPLE 300

    GHQFEPPPSS SRDRSSVDTM PIFNPNLHIG GLFSYLNPFM HALSSACTTL 350

    RVGVQLLREN ESALGIPPAQ GVAASVSMGK EEWADGEDVA SAVTTADEDL 400

    RQPASRILSM VWSDEVGDQK AKSADAAGPR SRTLAVLRRC NREIFSLARQ 450

    HNLAS                                                  455

    <210>18

    <211>543

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkI基因氨基酸序列

    <400>18

    MASHQSEKEK PQSCTTEVQV SHVTGLKLGL VVTSVTLVVF LMLLDMSIIV 50

    TAIPHITAQF HSLGDVGWYG SAYLLSSCAL QPLAGKLYTL LTLKYTFLAF 100

    LGVFEVGSAL CGAARCSTML IVGRAVAGMG GSGLTNGAIT ILASAAPKQQ 150

    QPLLIGIMMG LSQIAIVCGP LLGGAFTQHA SWRWCFYINL PVGALAAILL 200

    LAIHIPKSVP TSDCTMPAPR AVGVRVILSQ LDLLGFVLFA AFAVMISLAL 250

    EWGGSDYMWD SSVIIGLFCG AGISLVVFGF WERYVGNSMA MIPFSVASRR 300

    QVWCSCLFLG FFSGALLTFS YYLPIYFQAV KDVSPTMSGV YMLPGIGGQI 350

    VMAIVSGAII GKTGYYIPWA LASGIIVSIS AGLVSTFQPH TSIAAWVMYQ 400

    FMGGFGRGCG MQTPIIAIQH ALPPQMSALG ISLAMFGQTF GGSLFLTLAK 450

    LVFSAGLDAG LREYAPAVSA EAVTAAGATG FRDVVPANLL SQVLLAYCKG 500

    IDHTFYLAVG ASGATFLFAW GMGQVGLIWW GEERTGFGRD ERV        543

    <210>19

    <211>9228

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkA cDNA

    <400>19

    atgtacgtag gacgcattgg tgcgaccaca tacatctctc gtcccgcaga 50

    ctctcgagct acgccaaaag tgatcaaaac tcaagggtcg atcaccacgt 100

    ctaatctaac atcactaaca accatggctc agtcaacata ccccaatgag 150

    cctattgtcg tggtaggaag cggctgccgc tttcccgggg gcgccaacac 200

    gccctccaag ctgtgggagc tccttcggga gcctcgcgac gtccgtagca 250

    aaatcccgaa agagagattt gacgtcgacg cattctatca tccagacgga 300

    aaacaccatg gacgaacaaa cgcaccctat gcctatatgc tacaagaaga 350

    cctgcgcgcc ttcgacggcc ctttcttcaa tatccaggcc ggagaggccg 400

    agagtatgga tccacaacag cggctcttgc tggagaccgt gtacgaggca 450

    gtctcagatg ccggtatgcg gatccaagac ctgcaggggt cttccactgc 500

    cgtttatgtt ggcatgatga cacacgacta cgagacggtg tcgacgcgcg 550

    acttggagag cattcccact tactcggcca cgggagtcgc tgttagtgtc 600

    gcgtcgaacc gcatctcata cttctttgac tggcatggcc cgagtatgac 650

    gatcgatacc gcatgcagct cgtctttggt tgccgttcac ctggctgtac 700

    aacagctacg cagtgggcaa agctccatgg ctatcgccgc gggcgccaac 750

    atgatcctcg ggcccatgac cttcgttcta gaaagcaagt tgaacatgtt 800

    atccccctcg ggccggtccc gcatgtggga cgctggggcc gatggctatg 850

    ctagaggcga agctgtttgt tcggtagtgc ttaaaacatt gagccaagcc 900

    ttgcgcgatg gcgacagcat tgaatgcgtt atccgagaaa ccggtgtgaa 950

    ccaagatggt cgaacgacag gcatcacgat gcccaaccac agcgctcagg 1000

    aggcacttat cagggctacc tactccaaag ccggcctcga catcacgaac 1050

    cccgaggatc gatgccagtt cttcgaggct catggaactg gtacaccagc 1100

    aggagatcca caggaggccg aggccatcgc aaccgccttt ttcggacaca 1150

    aaaaggaggc ctccgatgct gagaacgcag agactcccct cttcgtgggc 1200

    agtgtgaaga ccgttgtcgg tcatactgag ggcactgccg gcctggctgg 1250

    tctcatgaag gcgtccttcg ccgtccagca cggagtgatc ccgcccaacc 1300

    tgctgtttga gaatatcagc ccccgcgtgg ccccattcta ctccaatttg 1350

    aagattgcaa cagagacaac accatggccc accatcaaac ctggacagcc 1400

    tcgccgtgtc agtgtcaact cttttggttt cggtggcacg aatgcacatg 1450

    caattattga ggaatacata aagtctgacc aaaaggtgcc agcgagccga 1500

    cagccggtgg agtactcaga cagtcccagt acattgaatc tgcccttggt 1550

    tctctcggcc aagtctcagc gctccatgaa gacaacgttg gagagcatgg 1600

    tacagttcct tcagtccaac cctgaagtta acttgcggga tctttcatgg 1650

    actctactgc ggaagcggtc gattctaccc ttccgtcggg ctattgtcgg 1700

    ccatagccac gaagcaatcc gtgccgctct cgaggcagcc attgaagacg 1750

    gcatcgttgt gagcgacttc agcgcggatg tcaaaggcaa gccgtctgtg 1800

    ctgggagtct tcaccggaca gggtgcccaa tggcctggga tgttgaagga 1850

    actgattgtg ggatcatcct atgtgcggtc gatagcggag gagctggatc 1900

    actcactgca gactttgccg gagaagtacc gcccctcctg gaccattctc 1950

    gagcagctaa tgctagaaga tgaggcttcc aacgtccgac acgccagctt 2000

    ctcccagccc ctatgctgtg ctgttcagat tgttctggtg cgtctcctga 2050

    aagcagcagg aatccagttt gctgctgtgg tcggacacag ttccggagag 2100

    atcgcctgtg catttgccac cggtcttatc agtgcatcct tggcaattcg 2150

    tattgcccac ctgcgtggag tcgtttcggc ggagcacgct gcctccgcga 2200

    gcggaggacg cggatctatg ttggcagcag gtatgtccta tgaggaagcg 2250

    aaagagctct gtgagttgga tgcctttgaa agccgcatct gtgttgctgc 2300

    tagcaattcc ccagacagcg ttaccttctc gggagatgcg gatgcaattg 2350

    agcacttgca gggcgttctg gaggacgagg ctacgttcgc cagactgctc 2400

    agggtggata cagcatacca ctctcaccat atgcttcctt gtgcagcgcc 2450

    gtatatgcaa gctttggagg aatgcggctg tgctgttgct gatggagacg 2500

    gtcaggtgga agagggatca tggtattcct ctgtcaagga cagcaacgaa 2550

    ccaatgggcc ttgccgacgt gactgctgag tactggaaag ataacctggt 2600

    atccccggtg cttttctctc aggccgtcca gcgggcagcc atcatgcacc 2650

    ggcccctgga tgtcgggatt gaagtcggtt gccaccctgc tctcaagggc 2700

    ccgtgtctgg ctaccatcaa ggatgctctg tcggacgttg acctggcata 2750

    cacaggatgt ttggagcgcg gaaagaatga tatgaatgca ttttcccagg 2800

    ccctggccta tctttgggag cagttcggaa ttccaagcct ggatgctgac 2850

    cgctttataa gtaccattgc tcccgagcgc tcctgcgtga gcctttcgaa 2900

    gcagctgccg acgtactcat gggaccattc tcggagctat tggacggaat 2950

    ctcgtgccac tcgtcagcac ctgcgaggac cgaagccgca tcttctgctg 3000

    ggtaagctct ctgaatatag cactccgttg accttccagt ggctgaactt 3050

    tgtccgtcct cgcgacattg aatggctgga tgggcatgca ttgcagggcc 3100

    aagtggtctt ccctgccgcg ggttatattg tcatggcgat ggaggcggcc 3150

    atggaaattg ccaactctca tcaggtgcaa gtccagctac ttgagatcct 3200

    ggatatgagc attgacaaag cggtggtttt cgatgatgaa gacagtctgg 3250

    tagaacttaa cttgaccgcg gaagtaacca gcggcatcgg taaaggtgac 3300

    cggatgatcc tcagcttcat aattgattcc tgtctatcca gggaaggtga 3350

    cctctccacc tcagccaagg gtcagctagt cgtcacattg gatgaaggcc 3400

    atctccaggt gaccccagat aacgagaagc agctcctacc cccgccagaa 3450

    gaagagcatc ctcacatgaa ccgagtgaat atcaattcat tctaccacga 3500

    gctggatctg atgggctacg actacagcaa agacttccgg cgcctgcata 3550

    gcatgcgacg agccgatgca cgagccagtg gaattttgga atttattcct 3600

    ctgaacgacg aggtccacgg ccgtcctctc ctgctgcatc ccgctccctt 3650

    ggacattgcc ttccagacag tcatcggcgc atactcctcc cccggagatc 3700

    gacgtctacg ctgcctgtat gtgccgacgc acattgatcg cattgctctt 3750

    gtgccctctc tctgtcttgc gacagctgcg tccggttgtg acaagattgc 3800

    cttcaatact atcaacacct atgacaaggg tgatttcctc agcggtgaca 3850

    tcgtggcgtt tgacgcggag cagaccagtc tgttccatgt cgagaatatt 3900

    gtttttaagc ccttctcgcc cccgactgcg tctactgatc atccgatctt 3950

    cgccaaatgg agctggggtc cactgacccc ggaaaccctg ctggacaacc 4000

    ccaaccattg ggccacggcg caggataagg aagcgatccc catcattgaa 4050

    cgcattgtct acttttacat caaattgttc ctgcagcagc tgacccgaga 4100

    agatcgcgaa caagcggcat tccacctgca gaggcagatt gtgtggtgtg 4150

    aacaagtcgt ggccgacgct cacgaaggtc gtcaccaatg gtacgatgca 4200

    gcttgggaga atgataccga agcccagata gagcagttat gtgccagaag 4250

    ctcctaccac cctcacgttc gcttggtaca gcgagttggt caaaacctgc 4300

    tcgcaaccat ccgttcgaat ggcaacccgt tcgatctcat ggaccatgat 4350

    ggcctgttga ccgagttcta taccaacacg ctcagttttg gcccagcgtt 4400

    gcactatgcc caagaccttg tgggtcaaat tgcccatcgc tatcaatcta 4450

    tggatatcct ggagatcgga gctggaaccg gtggcgccac caaatacgtg 4500

    ctggcaacgc ctcaactcgg gttcaacagc tacacgtaca ccgacatctc 4550

    gaccggcttc ttcgaaaagg cacgcgaaca gtttgctgcc ttcgaggacc 4600

    gcatggagtt tgagcccctc gatatccgcc gcagcccagc agagcaaggt 4650

    ttcacggagc acgtgtacga cctaatcatc gcgtccaacg tgctacacgc 4700

    aacgcccgac ttggagaaga ccatggccca tgcacgctcc ctgctgaagc 4750

    ccgggggcca gatggtgatt ctggagatca cccaccggaa ccacaccaga 4800

    ctagggttta tcttcggcct gttcgccgat tggtgggcag gtatcgacga 4850

    tgggcggacc atggagccat ttgtgtcgtt tgaccgctgg gatgagatct 4900

    tgaagcacgt cgggttttcc ggcatcgaca gtcgcaccaa ggaccgcgat 4950

    gcggatctgt tccccacatc ggtcttcagc acgcatgccg ttaactcgac 5000

    aatcgactac ctgcacaagc ctcttgacgc tccagtgaag gactcgtacc 5050

    ccccgttggt ggtggtcggt ggccagacgc caaagaccca gcgcatcttg 5100

    gatgagatca aagccgttat gcctaatcgc cagatccagt tacaccagcg 5150

    tctcgttgat ttgttggatg cagaggacat gcaggccaag ttcacctttg 5200

    ttgtcctcac ggagctggac gaggagctat tcgctggtct caccgaagac 5250

    agctttgaag cagtcaagct actgctcatg tacgccggga acatgctgtg 5300

    gctgaccgag aatgcctggg tcaagcgccc tcatcaggcg agtaccatcg 5350

    gaatgctgcg ctccatcaga cgcgagcacc ccgacattgg tgtccatatt 5400

    atggatgtcg actctgccga gaacctggac gcacacttcc tggtcgaaca 5450

    ggtccttcgg ctggaggagg atatcgacga attggcagcc acgacaacgt 5500

    ggactcagga gccagaagtc ttctggtgca atggccgcgc ctggattcct 5550

    cgtctgaagc atgataaatc gaggaataac cgtatgaact cctcacgtcg 5600

    tcagatcttt gagaccctca atccatccaa gatccccgtt gcattgaaga 5650

    aggcggcagc ctcctcttct tactacctgg agtcagctga gacctggccc 5700

    gtgccaggtg ccgttactgc aggggatagg aaaacggtcc atgttcggct 5750

    cagccatccc cacgcccttc gggttggaca tcttgggttt ttctacctcg 5800

    ttcagggcca cgtcctgaag ggtgatcaag cacttcctgt ggtggctttg 5850

    gctgagcgca acgcatcgat tgtccacgtt cgttcagact atgtccatgt 5900

    tctagaagat accgcggtgt ctgcgaacaa tggaagtttc atcttggccg 5950

    ctgcagcggc cgtgttggcc gagacggtga ttcacagtgc caagagcctg 6000

    ggagctgatg cctcggtcct ggtcttgaat gccccgggct tctgtgccca 6050

    gacattgctc cgcgctgcaa gagattctgg acttcgggtc catctggcca 6100

    ccacatcgtc cagtaccgac ccgtctcctg gggccgaccg ttgcgtccga 6150

    ctgcatcccc gcgacacgga taggcgcctc aaacagcttc tgccccgtgg 6200

    cactcaggca ttcttcgatc tgtccaccga tccgagcagt gaaggtctca 6250

    cacagcgatt gccaaacgtc cttataccca gctgtgttcg gcacagtact 6300

    gaatacttgc tcagagatac cgcttccgct ggtgggaaag ctacgctgcc 6350

    cgcggcatac tgggagcgtg tagcctcctt ggctaatcac agcctcagta 6400

    ctcactttaa ggagaatgat aatgccagca atggatgcca ggtcttgtct 6450

    tgcacagaca ttgtcgcgcg taataacaag agccgtctga acgcatcgac 6500

    tgtcatctcc tggccagatg acgcggccct cccggccaga atccgtccca 6550

    tcgataccga gaccctgttt gcagcggaaa agacgtacct cttagtcgga 6600

    ctcactggag atctcggccg gtccttgggc cgctggatgg tcttacacgg 6650

    tgcccgccgc atcgtcctca ccagccgcaa cccgcaagtg agcccgaatt 6700

    gggtggcgca tgttgaagag ttgggcggcc aggttaccgt tctgtccatg 6750

    gatgtgacga gcgaagactc ggtggattct ggcttggcca aactccagga 6800

    tttgaagttg ccccctatcg gcggcattgc ctttggccct ttggtgctgc 6850

    aggatgtaat gctgaagaac atggacctgc aaatgatgga gatggtgctg 6900

    aaacccaagg tcgagggagc ccgcatcctg cacgagaagt tctccgaccc 6950

    tgccagcagc aacccactcg acttcttcgt catgttctcc tcgattgtag 7000

    cggtaatggg taacccgggc caggccaact acagcgcggc aaactgctac 7050

    ctgcaggctt tggcgcagcg gcgatgcgcc tctggattgg cggcttcgac 7100

    tatcgacatc ggtgcagtct atggtgtcgg gttcgtgacc cgggcggaac 7150

    tggaggagga tttcaatgct attcggttca tgtttgactc ggtcgaagaa 7200

    catgagctgc actctctgtt tgccgaggcg gtggtgtccg gtcgacgggc 7250

    catgcaccag cagcagcagt tcaagacggt gctcgacatg gccgatatcg 7300

    aattgacgac cggtataccc ccgctggatc cgactctcaa ggatcgcatt 7350

    acgttcttcg acgacgctcg ggtcggtaac ttcaagattc ccgaacggcg 7400

    cggcaaggcg ggcgataacg cagcaggatc caagggctct gtcaaggaac 7450

    agctcttgca agctacaagc ttggaccagg tccgtcaaat agtcattgat 7500

    ggtctatccg aaaagcttcg ggtgaccctt cagattcccg atggggagag 7550

    cgtgcacccc actatcccgc tcatcgacca gggagtagac tccctgggcg 7600

    cggttaccgt gggtacctgg ttctcgaagc agctgtacct agacctgccg 7650

    cttctcagag tgcttggagg cgcctccgtg gccgatctgg cggacgacgc 7700

    tgctgcccgg ctgccgccca gctccattcc actcgtggca gcaagcgaag 7750

    ggggcgcgga gacctcggac aatgacactt cagggcctga ggggactgat 7800

    ctcagcgcct cgaccacaat caccgagccc tcatctgcag acgaagagga 7850

    cgaaaagcag gaggacgaca acgacaactc cgtcctcgcc cttcatccac 7900

    tctccctcgg ccaggagtac gcttggagac tgcaaaaggc cgccgatgat 7950

    tcgaccatct tcaacaacac gatcggcatg ttcatgacgg gctccatcga 8000

    cgccaaacgg ctgtccaagg ctctccgagc ggtcttgcgc cggcacgaaa 8050

    tcttccgcac cggctttgcg gctgtcggta acaatgcaga tgccacgagt 8100

    ctagcgcaaa ttgtctttgg tcgaaccaag aacaaggtcc aagtcatcca 8150

    ggtggctgac cgggccggcg cggaagaagg ctaccggcag ctggtgcaga 8200

    cacagtacga catcaccgct ggagacactc tgagactggt cgacttcttc 8250

    tggggcaagg acgagcatct gttcgttgtg gcctaccatc gatttgtcgg 8300

    cgatggttcc accacggaga atatctttgt cgaagcgagc cagttatacg 8350

    gcggcgtgac cctcgacaag cacgtccctc aatttgcaga cctcgcgacg 8400

    cggcagcgag aagcgctcga gtccggccag atggatgcgg acctcgcgta 8450

    ctgggaatcg atgcaccacc agcccacggg cgtggtgtcc ccggtcctcc 8500

    cgcggatgct tctgggcgaa gatggcctta atagcccgaa ccacgcccgc 8550

    cagcccaact cgtggaagca acacgaagcg atcgcgcgtc tcgaccccat 8600

    ggtcgctttc cgcatccgcg agcgcagtcg caagcacaaa gccacgccca 8650

    tgcaattcta cctggctgcg taccacgtgc tcctggcacg attgacgggc 8700

    agcagcgact tcagcatagg cctggccgac accaatcgca cgaacgtgga 8750

    tgaactggcg ggcatgggct ttttcgccaa cctgctcccg ctgcgcttcc 8800

    gcaacttcgt cccgcacatc acctttggcg agcacctggt cgccaccaag 8850

    gacaaggtgc gcgaggccat gcagcacgcc cgcgtgccct acggggtgct 8900

    gctcgagcgc ctcggattcg aggtcccggg ggccaccgcc gaaacagcgg 8950

    aaccggcccc cttgttccaa gcggtcttcg attacaagca gggccaggcg 9000

    gagagtggtt cgattggcag cgccaagatg accgaggtca tcgcgactcg 9050

    cgaacgcacc ccctacgatg tcgtgctgga gatgtcggat gatcccacca 9100

    aggatccgct gctcaccgtc aagttgcaga gctcggtgta cgaggtgcat 9150

    catcccaggg cgttcttgga gagttatatc tccatattgt cgatgttttc 9200

    gatgaatccc gcgttgaagt tggcttga                         9228

    <210>20

    <211>7644

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkB cDNA

    <400>20

    atgaaagcga cggcagcctc gggcacacct actcccatag ctgtagtggg 50

    catgggatgc agatttgccg ggggagcaac agatccacag gcactgtgga 100

    aattgctgga gcaaggaggg agcacttggt ccaagactcc atcctcgaga 150

    ttcaacgtca gcggagtcta ccaccctaac ggccaacgag taggatcgat 200

    gcacgttcgg ggtggtcatt ttctagacca agacccggct cttttcgatg 250

    cctcattttt caatatgacc agtgaagttg ccagttgtat ggacccccaa 300

    cagagactca tactcgaagt cgtctatgaa gcgctagagg ccgcgggaat 350

    tccccttgaa agtgtggccg gctcgaatac cgcggtcttt agcggagcaa 400

    tgtatcacga ctaccaggat tcgctccatc gcaacccgga aactctgccg 450

    cgatacttca tcacgggtaa tgctggcacg atgatgtcga gtcgcgtctc 500

    ccacttctat gacctccgcg gtcccagcgt cacagttgac actgcatgtt 550

    ccaccacctt gactgccttg cacctcgcaa tccaaagcat acgagcggga 600

    gaggctgaca tggccattgt ggccgggtcg aatctgctct tgaactcgga 650

    tgtttttgtc accatgtcca atttaggctt tctctccccg gatgggattt 700

    cctactcatt tgatccgaga gctaatgggt atggacgtgg agaaggggta 750

    gccgccatca tcttgaaggc tctcccccgc gcgctgcgag acggggaccc 800

    aattcgcctt gttgtccgcg agacggcgct caaccaagac ggtcggaccc 850

    ccgccatcac cgggccgagc cccgaagcgc aggcgtgcct gatccgggaa 900

    tgctatcaga aggccggtct ggacccgagg cagacatcgt acgtggaagc 950

    acatggaaca ggaactccga caggtgatcc gctggagctg gcggccatct 1000

    cagctgcatt ccaaggccag cctctgcaga tcggctccgt aaaagccaac 1050

    ctcgggcaca ccgaagctgc cagcgggctg gcaagcgtaa tgaaggtggc 1100

    tctggcactg gaaaaaggga ttgtgccacc tagtgcaaga ttcctgcagc 1150

    cgagcaagaa gttgctggaa gagagaaaat tccagattcc cctatctagc 1200

    caattgtggc ttccgattga cggaatttgt cgcgcatcga tcaacaactt 1250

    cggcttcgga ggcgcgaatg ctcatgcaat cgtggagcgg tatgaccccg 1300

    ctgcgagaat atcgacgagc aagccaaacg gtcatatccg gcctcacgac 1350

    agccatgtgg aagcagatcg agggaaaatc tatgttttga gtgccaagga 1400

    cgagcacagt tgccaggaaa tgatttcaag gttgcgcgac tacctcaacc 1450

    gcgctaatcc gactgatgaa cggcaattcc tcgctaacat ggcgtacact 1500

    ttagcttctc gtcgctcgaa tctccgatgg aaggcagcct gcagggcaca 1550

    tagcctggcg agccttctct ctgttctcgt aagcgatggg acgcgacctc 1600

    ggagatcggc cgagaaagcg aggctgggat gggtcttcac tggccaagga 1650

    gcacaatggt ttgcaatggg ccgcgagtta atcgaggcgt atcccgtttt 1700

    caaggaggca ctcatcgagt gcgatggcta tatcaagggc atgggagcga 1750

    actggtccat tatagatgaa cttcgtcgcg gtgaagcaga aagtcgcgtg 1800

    aacgaggcag aatttagcct accgttgtca acggctatcc aggttgcact 1850

    cgttcgtcta ctctggtcgt gggggatccg accagcggca attaccagcc 1900

    actctagcgg agaggtagct gcagcttacg ctgtcggggc attttcagcc 1950

    cgatcagcca ttggaatcag ctatatacgt ggtgccttga tagcaaaaac 2000

    ccagccggca ccgacaacga aggggggcat gctagctgtg ggattgagtc 2050

    gcagtgaggt tggtgaatac ataacacgag tacaacaaca aggcgaggaa 2100

    tacttggttg taggatgcat aaacagcccc tccaacgtga cggtatcagg 2150

    agatttgtct gcggttgtca gattggagga gttgttgcat gctgaccaaa 2200

    tatttgcgag acgactcaag gtcacccagg cgtttcactc ccaccacatg 2250

    caacctttgt caggtgaatt tcgggaggct ctggtagagg tcttcaatgc 2300

    agacatcact gacaccacta atgcctgcca ggatgtggtt tacgcatccc 2350

    ccaaaaccgg gaaacgccta gacgattgta accacctgcg cgatcccatg 2400

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    tcgagattgg gccacatggg gtcctgagcg gcgcaatcaa gcaaatccta 2550

    cagctgccgg agctcgctgc atttgatata tcctacctat cctgtctgtc 2600

    tcgagggaaa agcgcggtgg acaccattca gcttctcgcc atggaccttc 2650

    tccaaggggg ttatcccgta gacttaaacg cagtcaactt cccatacggg 2700

    tgcgaagcag ccgaagtcca ggtgctgtcc gatttgccga cctatccctg 2750

    gaatcacaag acgagatact ggaaggagcc acgcatcagt cgagctgcac 2800

    ggcaacgaaa gatccccgtg catgatctga tcggagttca agagcctttg 2850

    tgccctccgc ttttgcactt gtggcaaaat gtgcttcgga tctcggatgt 2900

    gccgtggata cgcgatcacg tcgtgggctc acgaatcctt ttccccggtg 2950

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    ttgtacaggg ctgattcgcg cgcaggtcga tcatcctgtc tccagctcgt 3250

    cgatccaaca aaagaccaat ccaccgcaat ggagccggaa gatggcacca 3300

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    attccagaat attgagcgca ttgaaagcga tggccaggcc tcgtggtgca 3400

    ctctgaccgt tgccgacaca gtggcgacta tgccgcacgc ctacgagagc 3450

    cagcacattg tgcatccaac cacattagac tcggctatcc aggcggccta 3500

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    gtcgaatcgg cggcatgaag atacccgcca gcttcgcgag cttggaaccg 3600

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    ctttacaacc gatgtagctg tgttcaacga gtcagatatg gatgaagagg 3700

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    agcgactcta ggcgagattt gaccgagaac gagagcacct acagttcctg 3800

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    tactaagcac tgggacccag tctcaggaga tcggggtgat gttggagctt 3900

    cgacggtgta ctgtccactt tatccaggaa gcaatagaaa acctaacaac 3950

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    agttcttcat gctacaagca acatgcagcg gacattaaac aatgtgcgca 4600

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    cagctcgatt tgtttttcac attcgggctc ctgcccggct ggtggctcag 4700

    tgaagagccg gaacggcagc ttaccccatc actgtctcct gagttatggc 4750

    gcagtgtact gagcgctact ggtttcagtg gcgtggacct agaggtccgc 4800

    gactgcgaca gtgatgagtt ttacatgatc agcaccatga tgtccacagc 4850

    tacacctggg actcctgcaa ctaccttgaa tggaccagcc gaggtgctcc 4900

    tggtccatgc cggctcgcct ccgcccatgg attggctgca gaatctgcag 4950

    gtagccctcg gcgggaaaaa cagttctata acttcactca aggcgctcca 5000

    gggcgtttct gatctcaagg ggaagatgtg tgtattcctg ggggagatgg 5050

    accgcaccct acttgaaagc gtggtcagtg atgacttcac atccttaacc 5100

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    gatggcgtcg gatgacccaa gaaaggccct gcacctagga ttgctacgca 5200

    cgctccgcaa tgagaatcac ggccgtcgat ttgtttcatt ggacctcgac 5250

    cccttgcgtg atccatggac ggcccagtcc tgtgacgcca ttgtcaatgt 5300

    actgaatgca gtcggtgcgt ctcatgagaa ggagtttgag tatgcagaac 5350

    gcgatggcac tattcatgtg ccacgaacgt tcagcgactc aagctccagc 5400

    gagaaggaag acttggttgt cttggagcca ttccagaatg aaacgcgctt 5450

    ggtgcgacta gacgtacaga ctccagggct tctggattct ttgcacttta 5500

    agctgtgttc tgcggacgaa gcttggagta gtgagctgcc agaggactgg 5550

    gtggagattg agccgagggc gttcggtcta aactttcgcg atatcatggt 5600

    tgccatgggc cagttggagt caaatcgagt catgggcttt gagtgcgctg 5650

    gtgtggtaac taggttgagc aaagcagcaa caacaggcgc aggagggctt 5700

    gcaatcggag accgtgtatg tgcactcatg aaagggcatt gggcatcgag 5750

    ggtgcggaca gcccgcacca atgtcatctg catcccaggg accctgagtt 5800

    tcgaacaagc ggcttccatc ccactggcct tcacgacagc ttacacctcc 5850

    ctctacactg ttgctcgcct tcaacggggt gaaaaagtgc taatccatgg 5900

    cggcgctgga ggagtcggac aggcggccat catccttgct caactggtcg 5950

    gagcggaggt ctttaccact gctggaactc actctaagcg caacttcttg 6000

    atcgataagt tcaagctggc ccccgaccat gtcttctcga gcagagactc 6050

    cggttttatc gagggtatca gggcttgtac caatggcaag ggggttgatg 6100

    tggtgctcaa ttctcttgct gggcctttgc ttcaatatag cttcgactgt 6150

    ctggtcaatt ttggtcgctt cgtggaaata ggcaaaaagg atctcgagca 6200

    aaatagccga ctcaacatgg cgacttttgc gcggaacgtc tccttttcct 6250

    cgattgatat cctgtactgg gaagaagcca agtccgccga aatcttccga 6300

    gcattgacgg agattatgcg gctcttggaa caaaagacaa tcgatttgat 6350

    tgggccgata tcagagtatc ccatgtcggc tattgagaag gcattccgta 6400

    cgatgcagag cggccagcac gtcggtaagc ttgtggtggc tacggctgag 6450

    acggacatga tccccgttcg ccggggaacc atgccagtcg cgttgaagct 6500

    tgacgcgtct tacctgattg tcggtggact ggggggtatt ggcagacgca 6550

    tttgcgagtg gatggtggac catggggcac gacatctgct catcctgtcc 6600

    cgaagcggtc gtacggatcc ctttgtgact ggcctccaga agcggggctg 6650

    tgtcgtacgt atacattcat gtgatgtggc agatgagagt caacttcatg 6700

    cagttcttca acagtgccat gaggataaca tgcccccgat ccggggtatc 6750

    attcaagcgg ccatggtcct caaggacgct cttgtctcgc aaatgacggc 6800

    ggacgacttc catgttgctc ttcgtccaaa ggtccagggc agttggaatc 6850

    ttcacaagat cgcatctgag gtggactttt tcatcatgct ctcatctctg 6900

    gtgggtgtca tgggtggcgc gggtcaagcc aactatgcgg ctgcaggcgc 6950

    gttccaggac gcgctcgcac agcaccgggt cgctcaaggg aagcccgctg 7000

    tcaccatcga cctgggcatg gtcaagtcaa tcggctatgt ggcagagact 7050

    gaccccgcag ttgcggagcg attggcccgg attggctatc aaccgatgca 7100

    cgaggaagag gtcctcgccg tgctcgagcg agccatgtcg ccctcctctt 7150

    cttcggcacc accgtcctct aaccctacta tacccgcctc gcccgctgtc 7200

    atcgttaccg gcatcaacac aggccctggc cctcacttca caaacgccga 7250

    ctggatgcag gaggcacgtt tcgcgggaat caagtatcgt gatcccctga 7300

    aggatgaccg tggtggggcc ttgtcctctt cacagcccgc tgacgaggat 7350

    agtgtacgcg ctcggctaag tcgggcatct accgaggagg aggccactgc 7400

    cctagtggtg caggtgatgg gtcacagact ggtgacgatg tttggtctca 7450

    ctgaaagtga gatgtcggcc acacagacat tgtcgagcgt tggagtcgac 7500

    tcgctcgtcg ccatcgagct gcgtaactgg attaccgccc aacttaatgt 7550

    ggatatctcg gtctttgagt tgatggaggg tcggaccatt gctgaggtgg 7600

    cggaggtggt agtgaagaag tatggcgtgg gaagcaaagt ctag       7644

    <210>21

    <211>1575

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkC cDNA

    <400>21

    atgacagttc cgacagatac ggtctcgcgt cgcctccagt ctctcgcttg 50

    gagcgacata aagcagcatg ccccatggct gccgtcttct cgcactcttg 100

    tctcgggatt tctctgtttg atccttcttc agattctgta ctctcgtgga 150

    cgcaaatccg acctgcgggt gtataacccg aagaaatggt gggaactcac 200

    caccatgagg gccaagcggg agttcgatgc gaatgcgccc gcatggattg 250

    aggcctggtt ctccaagaac gaccaaccgc tccgtttcat tgtcgactct 300

    ggctattgta ccattttgcc ctcatcgatg gccgacgaat tccggaagat 350

    gaaggagctt tgcatgtaca agtttttggg cacggacttc cactctcatc 400

    ttcccggatt cgacggcttc aaagaagtca ccagagacgc acatctcatc 450

    accaaggtgg tcatgaatca gttccaaacc caagctgcga aatacaccaa 500

    gcctcttgcc gatgaggcca gcgcgacaat tgcagatatc tttggggaca 550

    acaaggaatg gcacacggct cctgtctata acgagtgttt agatttggtg 600

    acacgcactg tcactttcat catggtcggg gataaactgg cgcacaacga 650

    ggaatggttg gatatcgcca agcaccacgc ggtgactatg gcgattcagg 700

    ctcgccaact ccgcctctgg cccgtcattc tgcgccctat agtccactgg 750

    ctcgagcccc agggagccaa actgcgggcg caagtccgac gagcccggca 800

    gcttctcgag cccatcatcc aggagcgacg cgccgagaag gccaaatgcc 850

    tcgcccaagg gatcgagccg ccgcgctacg tcgattccat tcagtggttt 900

    gaagacaccg ccaagggcca atggtacgat gcggcggggg cgcagttggc 950

    catggacttt gccggcatct acggcacctc tgacctgatg atcggcgggc 1000

    tggtcgacat cgtccgccac ccgcatctca tcgagcccct tcgcaacgag 1050

    atccggaccg tcatcggcga ggaaggctgg acgccggcct cgttgtacaa 1100

    actcaagctt ctggacagct gtctcaagga atcgcagcgc gtcaagcccg 1150

    tagaatgcgc cacgatgcgc agctacgcgc tccagaacgt gaccttctcc 1200

    aatggaacct ttgtcccgaa aggcgagctg gtagctgtgg cggccgaccg 1250

    catgagcaac cctgaagtct ggcctgagcc gaagaagtac gacccgtacc 1300

    gatacatgcg cctgcgagag gatcccgaca aggcgttcag tgcccagctg 1350

    gagaacacca acggtaacca tatcggcttt gggtggcatc ctcgggcgtg 1400

    tcccggacgg ttcttcgcct ccaaggagat caagatcatg ttggcgtttc 1450

    tgctgattcg gtacgactgg aagctggtgc caaacgagcc gttgcagtat 1500

    taccgtcatt ccttcagcgt gcgcatccat cctgccacca agcttatgat 1550

    gcgccgtcgg gacgaagatc tctga                            1575

    <210>22

    <211>792

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkD cDNA

    <400>22

    atgcgtatcc aacgcacccc cgcgcccccc aaagcgcccc gggccctcct 50

    ctgcgtgcac ggcgccggct gctcccccgc catcttccgc gtgcagctct 100

    ccaaactccg cgccgcttta cgggaagact ttgaattcgt ctacgcaacg 150

    gcacccttcc cttccgcccc tggacccggg atcctgccca cgttcgaagg 200

    cctcgggccc tattacacct ggttcgaggg ttctccgtct ggtgctgctg 250

    ccaaagggga taacagcaac agcaacgaca gcaactcttc tcccaccgta 300

    cacgaccgcc tcgccgccgt ccacgaaccc gtccgccgcg ccatcgccga 350

    atggcagacc cagaacccca gcatccccat cgtgggaacc gtcagtttct 400

    ccgagggcgc tcttgtgacc gccctgctgc tctggcagca gcagatgggt 450

    aggataccct ggctcccggt catgcaggtt gcgatgttca tctgctgctg 500

    gtatcagcat gaggcgactc agtatatgcg ggaggaggta ggctgcggcg 550

    gtgatggtgg cattgacggt gagaagttgg tgatccgggg ggtgctgtcg 600

    ctgcacctgc agggtcgtga tgactttgcc ctggcgggtt cgaagatggt 650

    ggtggcgcag cattttgtgc ccggggaggc gcaggtgttg gagtttgcgg 700

    gccggcatca tttcccgaat cggccgcgcg atgtgttgga gacggttaag 750

    cggtttaggc agctgtgtgt gagggctaga gtcattgggt ga         792

    <210>23

    <211>1083

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkE cDNA

    <400>23

    atgaccatca ccttcaccct accacctcac cagactgcgc tgacagtgga 50

    cgagcatgac aaagtcacca tctgggacgt cgccccctgt ccaagcctcc 100

    cccccgatca ggtctgcgtg cgcgtcgagg ccgtagccct caaccccagc 150

    gacacgaaga tgcgcggcca attcgccacc ccctacgcct tcctgggcac 200

    cgactacgcc ggcaccgtcg tcgccgtggg atcgcaggtc acgcacatcc 250

    aagtcgggga ccgggtctac ggcgcccaga acgagatgtg tccgcgcacc 300

    ccccaccagg gcgccttctc gcagtacacg gtcacccgcg gccgcatctg 350

    ggccacggtc cctgagggct ggtccttcga gcaggccgcg tcgttgcccg 400

    cgggcatcag cacggccggc ctggcgatga agctgctcgg gctgccttta 450

    ccggatccca atgctacgac ggcaccggcc cttccgaagc ccgtgtatgt 500

    tttggtgtat gggggtagca ccgctactgc gacgattgtg atgcagatgc 550

    tacgcttgtc cggatacatc cccatagcca catgctcccc gcacaatttc 600

    gacctcgcca aaaagcacgg cgcagaagat gtctttgact atcgtgatgc 650

    cggtctcgcg cagacgattc gcacatacac caaaaacaac ctccgctacg 700

    ccctcgattg catcaccaac gtcgagtcca ccaccctctg cttcgccgcc 750

    atcggccgcg ccggcggccg ctatgtctcc ctgaacccgt tcccggaaca 800

    cgcggcgacc cggaaaatgg tcaccgccga ctggaccctg gggccgacca 850

    ttttcgggga agggtcgact tggccggcgc cgtatgggcg gccggggagc 900

    gagaaggacc gcgcattcgg cgaggagttg tggcgcgttg cggcaaggct 950

    cgtggaggat gggaagatcg tgcaccatcc tctgcgggtg attcctggcg 1000

    ggttcgaggc cattaagcag gggatggagt tggttaggac tgggcagttg 1050

    tcgggagaga aggttgtggt gaagttgggg taa                   1083

    <210>24

    <211>1242

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkF cDNA

    <400>24

    atgcgtcaat ttctctcctc tgatcgcatc aactctgaaa tcccccagga 50

    gaaaagcgaa atggtaggat tcagtgatat cgacaatagc agccgccaga 100

    tcaaagaaat ggaagccgct ttccgatcgg ccgtgaaaac agggcagatc 150

    ccgggggcag tcatcatggc tcgagatcat agtggccgac tgaactatac 200

    gcgctgcttc ggggcgcgga cggtggtgcg cgatgagtgt aaccgactcc 250

    ctccgatgca ggtcgacacc ccctgccggc tggcgagtgc caccaagctg 300

    cttacgacga tcatggcgct gcaatgcgtg gagcgggggc tcgtgaggtt 350

    ggatgagacg gtggatcgac tgctgccgga tttgagtgcg atgaaggtgc 400

    tggaggggtt tgatgccgcg ggggagccga agatgagaga gcggaagggg 450

    aagattactt tgaaacatct cctaacacac acctccggcc tgtcctacgt 500

    cttcctccac cccctcctcc gagaatacat ggccaaaggc cacctccaga 550

    cggctgagaa attcgggatc cagagtcggc tggcgccccc ggccgtcaac 600

    gacccgggcg ccgagtggat ctacggcgcc aacctcgact ggacggggaa 650

    gctggtcgag cgcgccacgg gcctggacct ggagcagtac ctccaagaga 700

    acatctgcgc gccgctgaac atcaccgaca tgaccttcaa gctgcagcag 750

    cgacccgatc tgctggcgcg gcgcgccgac cagacgcacc gcaacaaggc 800

    ggacggccgc ctgcgctacg acgactcggt gtacttccgg tccgacggcg 850

    acgagtgctt tgggggccag ggggtcttct cgggccccga atcctacatg 900

    aaggtcgtgc actccctgct gcagcgcgac gggcgcctgc tgcggcccga 950

    gaccgtggac ttgatgttcc agcccgcgct cgatgcgcaa acggagaagc 1000

    agatgaacca gcatatggac gcgagcccgc acatcaacta cggtgggccg 1050

    atgcccatgg tgttgcggcg gagttttggg cttggtggga tgattgcctt 1100

    ggaggatctg gatgggcaga agtggcgccg aaagggctgt ttaacctttg 1150

    gcggcgggcc gaatattgta tgggtaatgt tactctcagc cctacgcttc 1200

    gttttcttct tcttcttctt cttcttcttc tgctctagct ga         1242

    <210>25

    <211>1368

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkH cDNA

    <400>25

    atggccctat cgccagtcca ggatccccct tcacacaccg acaaaactat 50

    gccccgccgt gcatttcgcc gatcttgtga ccgatgccat gcacagaaga 100

    ttaagtgtat aggcagcgag ggagctgttg cccgtgcttc atgtcaacgt 150

    tgccagcaag ctggactgcg gtgcgtttac agcgagcgat gccctaagcg 200

    caagctaccc aaacccaacc cagcggaatc ttcccctgca agcagcacgg 250

    ccggcctgca cacctcttct tcagattctt cgccccctgt tccctccgat 300

    ggcttgccgc tagacctgcc agggccggat tcctcaggcg tctccctcca 350

    attcctcgac ccgtctgccg actgcgactg gccttggtcc tcgatcggtg 400

    tggacgaaac cgttgtcaac aattgcttgg acttatctca tggccatggc 450

    catggagacc tcagttgcca gctcgagctg cctatgccag atcttccctc 500

    ccccttcgaa ttctcggccg aaaaatctcc ctcaccgtcg gtgtctggca 550

    gcattgccgg agctgtcagt gcacaacgag aactcttcga tggcttgtcg 600

    acggtgtccc aggaattgga agccatcctt ctggctgtgg cggtggagtg 650

    gccaaaacag gaaatctgga cttaccccat tgggacgttc ttcaacgcat 700

    cacgaagact tcttgtatat ctccaacaac aatccaacac ccgcagcgac 750

    caaggcatgc tgaatgaatg tctacgaacc aagaacctct tcatggcagt 800

    gcattgttat atgctgatcg tgaagatttt cacctctctc tcggaattgc 850

    tgctatccca gatccggcat tcccaggctg gccagctgac acccttggaa 900

    gggcatcagt tcgagccacc accgagcagc agcagggacc gtagcagcgt 950

    cgataccatg cccatcttca acccgaatct ccacatcggc gggttgtttt 1000

    cttatctcaa ccccttcatg cacgccctat cctcggcttg caccaccttg 1050

    cgcgtcggcg tacagttgct gcgagagaat gagagtgctc ttgggatccc 1100

    cccggcgcag ggggtggcgg cctctgtgag tatgggcaag gaggagtggg 1150

    cagacggcga ggatgtagcc agtgcagtga cgacggcgga cgaggatctc 1200

    cgccagccgg cctcgcggat cttatccatg gtctggagcg atgaggtggg 1250

    cgaccagaag gccaagtctg ctgatgctgc tggtccgcga agccgaaccc 1300

    tggcggtgct acggcggtgt aatcgagaga tcttttccct ggcccgccaa 1350

    cacaacctgg cctcctaa                                    1368

    <210>26

    <211>1632

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkI cDNA

    <400>26

    atggcttccc accagtctga gaaagagaag ccacagagct gcaccactga 50

    agtccaggtc agccatgtca ccggcctaaa gctaggactg gtagtaacct 100

    cggtgaccct ggtggtgttt ttgatgttgt tggacatgtc tatcattgtg 150

    acagctatcc cccatatcac tgctcagttt cattcccttg gggatgttgg 200

    atggtatgga agtgcgtatc ttttgtcgag ctgtgctcta cagcccttgg 250

    cagggaagct ctacactctc ttgacattga agtatacctt cctagcattc 300

    ctcggggtgt ttgaagtcgg atcagctctc tgtggcgccg cgcgttgttc 350

    aactatgttg atcgtggggc gcgcagtggc tggcatggga ggatcggggc 400

    tcaccaatgg agccatcacc atcctcgcct ctgcagctcc aaaacaacag 450

    caaccactgt taatcgggat catgatgggt ctgagccaaa ttgccattgt 500

    ctgtggacca ttgctgggag gtgcttttac ccaacacgca agttggcggt 550

    ggtgcttcta tatcaatctt cctgtcggag cgctggccgc catcctcctt 600

    ctcgccatcc acattcctaa gagtgtgcca acatcggatt gcacaatgcc 650

    tgctcccaga gctgttgggg tccgggtcat cctgagtcag ctcgatctcc 700

    tggggtttgt gctcttcgcc gcctttgccg tgatgatctc acttgcgtta 750

    gaatggggcg ggtccgatta tatgtgggat agctccgtaa tcatcggctt 800

    gttctgtggt gccggcatct cgctggtggt gtttgggttc tgggaacgct 850

    acgtaggcaa ctcgatggcg atgattcctt tctcggtggc cagtcgtcga 900

    caagtctggt gctcgtgtct tttcttgggc tttttctccg gggccttgct 950

    caccttctct tactaccttc ctatctactt ccaggccgtg aaggacgtct 1000

    ctcccaccat gagtggggtg tatatgcttc caggcatagg gggacaaatt 1050

    gtgatggcga tcgtctccgg cgcaatcatc ggcaaaacgg ggtattacat 1100

    tccctgggcg cttgccagtg ggatcatcgt atctatctcc gcaggcctgg 1150

    tatcgacctt ccagccgcat acctcaatcg cagcgtgggt gatgtatcaa 1200

    ttcatggggg gctttggtcg aggatgtgga atgcagaccc ccatcattgc 1250

    cattcaacat gccctgccac cacaaatgag tgcgctcggt atctcgctgg 1300

    ccatgttcgg ccagaccttc ggcggctccc tcttcctcac cttggccaag 1350

    ctcgtcttca gcgccggcct tgacgccggc ttacgcgagt atgcgcccgc 1400

    cgtcagcgca gaggcggtga cggccgcggg cgccacgggc ttccgcgatg 1450

    tcgtccccgc aaatctcctt tctcaggttc tcctggcata ctgtaaaggg 1500

    atagaccata cattctacct tgcggtcggg gcatcgggag ccactttttt 1550

    gtttgcgtgg ggaatgggtc aggtcggttt gatttggtgg ggggaggaaa 1600

    ggacggggtt cggccgcgat gaacgagtct ag                    1632

    <210>27

    <211>2046

    <212>DNA

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkG cDNA

    <400>27

    atggcatcgg cagccgtgac gccaaagctt ggctgggtgc agcaccaggt 50

    aaccaacgga ttacatgccg tggtcggcca agtgtgtcga catcccatcc 100

    acacgttgct ggtgactgct ctgatcgccg caacgactta tctccatgtt 150

    ttggaaggca cctttcgcgc agccaaccta ggtcccggtt ccaagactga 200

    cgcagccccc ttcgacgtcc agtcgttcct ctggggcagc cgaagtcttc 250

    gcctgggcga gacaagctcg tggagatggc aggtgggcga cttgtctgag 300

    gcgactggcg atggccaagt caatcaccac tgggctcttg tcactctcag 350

    cttccccggc gcctcggtcg atgatcgcag ccctgccttt ctgtggaacg 400

    cactgcccga ctctgtgggc gcagagccga tcacgccaac ctccaacttc 450

    ttcacctcga tctccaatga attctcgctg gcctttcgag tcccatacac 500

    ccaattgagc gattttctgg aggcggtgga gtttgttgcc tcggataagg 550

    aggatcgtag ctgggccatc aggtttcctc acggagaggg caagcccatt 600

    tcgctgggcc gctggctcgg gaactcgtgg ctgtcgttcc ttcaccgggc 650

    taaacacgcc gagacggtag acatggctat catcggttta ggctacctcg 700

    ctctgaatat gaccctggtc tctctcttcc gagcgatgcg tcagttgggc 750

    tcgcgtttct ggctggcagc ctccgtgctg ctctctgggg cgtttgcctt 800

    tgtattcggg ctcggtgtca cgactgcctg cggcgtgcca gtcgacatgc 850

    ttcttctgtc ggaagggatt cccttcctgg ttttgaccgt ggggtttgag 900

    aagccgatcc gatttacccg tgctgttctc tacgcatcga atcagctccg 950

    gcgcgggttg cagcagcggg acgttgccga caagcatgac agccggcagc 1000

    gccatatgat ccccaacgcc atgctattcg ccatcaacag agaaggatgg 1050

    tccattgtcc agtcgtacct tcttgagatc ggggctctcg cattgggtgc 1100

    ggtcttccgg ccacgggaac gattcggcca gttctgcttc ctggccgcat 1150

    ggatggtgct cttcgacgcc atccttcttt tcaccttcta cgccaccatt 1200

    ctctgcgtca aactggaggt gacccggatg caaaaccccg gcaccctgga 1250

    tctggcagac gaccaacatg ggccgcgcat cttcgggtac aaggtcaatc 1300

    cgaccagcct ggcccggtgg aagctaatca tggtaggcgg gttcgtgctc 1350

    ttcaacgtcc tccaactgtc atcgttcttt tatcgcatca tgggaggctt 1400

    catgaccaat gccgctctga ccccgaccac cgtcagtccg ttcaaagtgg 1450

    ctgccaacgg gctgaacgat atttatttgg ccgcccgtgc cggcggagtt 1500

    gagacgtggg tcacggtgct accgccgatt cgatatgtca tggaagcatc 1550

    tgggttggaa atgtcggccg gcagacgtcc tgtatttgat ggcgtgctgg 1600

    ccggactgga gagccccctg ggtcggctct gtctcatggg cgctttggtt 1650

    ttcagtcttt acctcaataa ccacctgatc ccggccgccc gctggcattt 1700

    ttcccccggc gcaccgaaag aatccgctgc gcctgcaccc ccttcatcgc 1750

    ccgcatcggt ccccagcgct gtaccggtcc ctgcgccctc ctctcgcagc 1800

    ttcgaggaaa tcgaggccct attcaaagcg aaccaggcgg aatctctgac 1850

    cgatgacgag ctggcggagc tctgtctccg tggtaagatt gccggataca 1900

    gcttagagaa gaccttggaa agcattgcct ccgcaggttc ttcaagcaca 1950

    gcaacaacta ggctggaggc tttcacgcgc gcggttcgca tccgccgggc 2000

    cgccgtgtcg cggacgcctt cgactcggga cctcagcggc ggcatc     2046

    <210>28

    <211>1052

    <212>PRT

    <213>Monascus BCRC 38072

    <220>

    <221>

    <222>

    <223>mkG氨基酸序列

    <400>28

    MASAAVTPKL GWVQHQVTNG LHAVVGQVCR HPIHTLLVTA LIAATTYLHV  50

    LEGTFRAANL GPGSKTDAAP FDVQSFLWGS RSLRLGETSS WRWQVGDLSE  100

    ATGDGQVNHH WALVTLSFPG ASVDDRSPAF LWNALPDSVG AEPITPTSNF  150

    FTSISNEFSL AFRVPYTQLS DFLEAVEFVA SDKEDRSWAI RFPHGEGKPI  200

    SLGRWLGNSW LSFLHRAKHA ETVDMAIIGL GYLALNMTLV SLFRAMRQLG  250

    SRFWLAASVL LSGAFAFVFG LGVTTACGVP VDMLLLSEGI PFLVLTVGFE  300

    KPIRFTRAVL YASNQLRRGL QQRDVADKHD SRQRHMIPNA MLFAINREGW  350

    SIVQSYLLEI GALALGAVFR PRERFGQFCF LAAWMVLFDA ILLFTFYATI  400

    LCVKLEVTRM QNPGTLDLAD DQHGPRIFGY KVNPTSLARW KLIMVGGFVL  450

    FNVLQLSSFF YRIMGGFMTN AALTPTTVSP FKVAANGLND IYLAARAGGV  500

    ETWVTVLPPI RYVMEASGLE MSAGRRPVFD GVLAGLESPL GRLCLMGALV  550

    FSLYLNNHLI PAARWHFSPG APKESAAPAP PSSPASVPSA VPVPAPSSRS  600

    FEEIEALFKA NQAESLTDDE LAELCLRGKI AGYSLEKTLE SIASAGSSST  650

    ATTRLEAFTR AVRIRRAAVS RTPSTRDLSG GIQESLLPYR NYNYELVHGA  700

    CCENVIGYLP LPLGLAGPMV IDGQAYFIPM ATTEGVLVAS ASRGCKAINT  750

    GGGAVTMLKG DGMTRGPCLG FPSAKRAAEA QRWVESPVGH QVLTDAFNAT  800

    SRFARLQTLT VAQAGTYLYI RFRTTTGDAM GMNMISKGVE KALQAMTAHG  850

    FPDMNTITLS GNFCADKKSA AINWIGGRGK SVIAEATIPA DTVRKVLKTD  900

    IDALVELNTA KNLVGSAMAG SMGGFNAHAS NLVQAVFLAT GQDPAQNVES  950

    SSCITTMKKI DGNLHIAVSM PSMEVGTIGG GTILEAQGAM LDLLGVRGAH  1000

    PTDPGANARR LARIVAAAVL AGELSTCSAL AAGHLVNAHM RHNRSAASSE  1050

    KK                                                      1052

    <210>29

    <211>19

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>Monascus monacolin K探针Mplov1正向引物

    <400>29

    tccactgccg tttatgttg                                    19

    <210>30

    <211>19

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>Monascus monacolin K探针Mplov2反向引物

    <400>30

    tcgtcatctt caccccatc                                    19

    <210>31

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkA基因的正向引物

    <400>31

    atagctccga gaatggtccc                                   20

    <210>32

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkA基因(p3)反向引物

    <400>32

    ccatcaagga tgctctgtcg                                   20

    <210>33

    <211>22

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkB基因正向引物

    <400>33

    ctagactttg cttcccacgc ca                                22

    <210>34

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkB基因反向引物

    <400>34

    cattgtcgag cgttggagtc                            20

    <210>35

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkC基因正向引物

    <400>35

    ggcctgagcc gaagaagtac                            20

    <210>36

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkC基因反向引物

    <400>36

    tcagagatct tcgtcccgac                        20

    <210>37

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkD基因正向引物

    <400>37

    tgatgacttt gccctggcgg                        20

    <210>38

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkD基因反向引物

    <400>38

    tcacccaatg actctagccc                           20

    <210>39

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkE基因正向引物

    <400>39

    ttctctcccg acaactgccc                           20

    <210>40

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkE基因反向引物

    <400>40

    aatggtcacc gccgactgga                          20

    <210>41

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkF基因的正向引物

    <400>41

    gccccgaatc ctacatgaag                          20

    <210>42

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkF基因反向引物

    <400>42

    ggcccaccgt agttgatgtg                      20

    <210>43

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkG基因的正向引物

    <400>43

    cctcgctctg aatatgaccc                      20

    <210>44

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkG基因反向引物

    <400>44

    tcggatcggc ttctcaaacc                      20

    <210>45

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkH基因的正向引物

    <400>45

    acctcatcgc tccagaccat                         20

    <210>46

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkH基因反向引物

    <400>46

    ctgcgagaga atgagagtgc                         20

    <210>47

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkI基因的正向引物

    <400>47

    ctagactcgt tcatcgcggc                      20

    <210>48

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkI基因反向引物

    <400>48

    ccatacattc taccttgcgg                      20

    <210>49

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkA基因(2)的正向引物

    <400>49

    tgaacagcac agcatagggg                      20

    <210>50

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>mkA基因(2)反向引物

    <400>50

    gcagccattg aagacggcat                      20

    <210>51

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>反向引物p4

    <400>51

    tcaagccaac ttcaacgcgg                                  20

    <210>52

    <211>30

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>正向引物p1

    <400>52

    ggaattcatg tacgtaggac gcattggtgc                       30

    <210>53

    <211>20

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>反向引物p2

    <400>53

    tcgcgaggac ggacaaagtt                                  20

    <210>54

    <211>29

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>sfp基因的正向引物BamHI位点

    <400>54

    cgggatccca tgaagattta cggaattta                        29

    <210>55

    <211>36

    <212>DNA

    <213>人工序列

    <220>

    <221>引物-结合

    <222>

    <223>sfp基因反向引物NotI位点

    <400>55

    atagtttagc ggccgcttat aaaagctctt cgtacg                   36