异黄酮类化合物及其制备和应用.pdf

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本发明公开了式I所示的异黄酮类新化合物。经动物试验结果表明，该类化合物能显著抑制T细胞与B细胞的增殖，可用于制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病的药物。由于该类化合物SI值(IC50/CC50)均较高，因此，其毒副作用较小，具有较宽的治疗区间。本发明化合物从大红袍中提取分离得到，制备方法简便。。

摘要
申请专利号：	CN200810041753.1	申请日：	2008.08.15
公开号：	CN101648937A	公开日：	2010.02.17
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07D 311/36申请日:20080815\|\|\|公开
IPC分类号：	C07D311/36; A61K31/352; A61K36/185; A61P35/00; A61P37/00	主分类号：	C07D311/36
申请人：	巴塞利亚药业（中国）有限公司
发明人：	沈征武; 寿清耀
地址：	226100江苏省海门市秀山东路638号
优先权：
专利代理机构：	上海新天专利代理有限公司	代理人：	王巍
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内容摘要

本发明公开了式I所示的异黄酮类新化合物。经动物试验结果表明，该类化合物能显著抑制T细胞与B细胞的增殖，可用于制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病的药物。由于该类化合物SI值(IC50/CC50)均较高，因此，其毒副作用较小，具有较宽的治疗区间。本发明化合物从大红袍中提取分离得到，制备方法简便。

权利要求书

1： 1、一种通式I的异黄酮类化合物：式中，当编号2与3的碳原子之间为双键时， R1＝H， R3＝OH，R4＝H或 R1＝OH， R3＝OH，R4＝H或 R1＝H， R3＝OH，R4＝OH或 R1＝H，R2与R3形成如下六元环：当编号2与3的碳原子之间为单键时， R1＝OH， R3＝OH或 R1＝OH， R3＝OH或 R1＝OH， R3＝OH。 2、一种异黄酮类化合物13′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物1 黄色油状物； UVλ max (MeOH)：262.0； HREIMS：m/z 422.1743[M] + (Calc.422.1729 for C 25 H 26 O 6 )； EIMS：m/z(rel.int.)：353(10)，299(38)，128(38)，86(100)，69(79)，59(61)，55 (85)； ESI-MS：m/z 423[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3352，2924，2854，1649，1610，1500，1448，1364，1306，1259， 1200，1167，1150，1094，1051，1038，820； 1 HNMR(CDCI 3 )：7.93(H-2)，6.36(H-6)，6.43(H-8)，6.51(H-5’)，6.89(H-6’)， 3.56(H-1”)，5.31(H-1’)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，
2： 59(H-8”)， 1.84(H-3”Me)，1.67(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：155.5(C-2)，123.9(C-3)，182.3(C-4)，162.7(C-5)，100.5(C-6)， 163.5(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，105.7(C-10)，112.7(C-1’)，154.5(C-2’)， 117.4(C-3’)，157.5(C-4’)，109.5(C-5’)，128.2(C-6’)，26.6(C-1”)，121.9(C-2”)， 139.1(C-3”)，39.6(C-4”)，26.0(C-5”)，124.1(C-6”)，132.3(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.4(C-3”Me)，23.1(C-7”Me)。 3、一种异黄酮类化合物25，7，4′-三羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物2 白色固体状物，mp：179.3-180.9； UVλ max (MeOH)：262.0； HREIMS：m/z 424.1890[M] + (Calc.424.1886for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(3.5)，406(39)，338(16)，337(22)，335(22)，321(33)， 284(100)，283(73)，153(60)； ESI-MS：m/z 407[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3362，2968，2935，1653，1616，1506，1446，1364，1263，1198， 1047，825，669； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.12(H-2)，6.27(H-6)，6.40(H-8)，7.35(H-2’)，6.89(H-5’)， 7.27(H-6’)，3.38(H-1”)，5.40(H-2”)，2.05(H-4”)，1.52(H-5”)，1.41(H-6”)， 1.12(H-8”)，1.73(H-3”Me)，1.12(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，123.7(C-3)，181.0(C-4)，163.3(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.8(C-8)，158.4(C-9)，105.5(C-10)，122.5(C-1’)，130.5(C-2’)， 128.1(C-3’)，155.3(C-4’)，114.9(C-5’)，127.9(C-6’)，28.3(C-1”)，122.7(C-2”)， 136.1(C-3”)，40.34(C-4”)，22.7(C-5”)，43.7(C-6”)，69.5(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.5(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 4、一种异黄酮类化合物3(5，7二羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并 (2″，3″：3′，4′)]异黄酮)，其特征在于具有下列结构式和理化性质：化合物3 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； HREIMS：m/z 404.1635[M] + (Calc.404.1624 for C 25 H 24 O 5 )； EIMS m/z(rel.int.)：404(5)，322(23)，321(100)； ESI-MS：m/z 405[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3339，2924，1652，1618，1578，1491，1448，1360，1306，1261， 1180，1045，831； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.20(H-2)，6.29(H-6)，6.42(H-8)，7.31(H-2’)，6.85(H-5’)， 7.33(H-6’)，6.49(H-4”)，5.75(H-5”)，1.71(H-7”)，2.13(H-8”)，5.13(H-9”)， 1.57(H-1”)，1.40(H-6”Me)，1.64(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.9(C-2)，123.1(C-3)，181.0(C-4)，163.2(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.9(C-8)，158.9(C-9)，105.4(C-10)，123.6(C-1’)，127.4(C-2’)， 121.1(C-3’)，153.6(C-4’)，115.9(C-5’)，130.3(C-6’)，122.7(C-4”)，130.0(C-5”)， 99.0(C-6”)，41.4(C-7”)，22.8(C-8”)，124.3(C-9”)，131.4(C-10”)，17.0(C-11”)， 26.3(C-6”Me)，25.2(C-10”Me)。 5、一种异黄酮类化合物44，5，7，4″，5″四羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3″：3′，4′)]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物4 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0； 1HREIMS：m/z442.1989[M] + (Cal.442.1992 for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z rel.int.：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z：425[M-OH] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.08(H-2)，6.22(H-6)，6.34(H-8)，7.61(H-2’)，6.81(H-5’)， 7.34(H-6’)，4.58(H-4”)，3.65(H-5”)，1.85(H-7”)，2.17(H-8”)，5.16(H-9”)， 1.65(H-1”)，1.19(H-6”Me)，1.69(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.8(C-2)，123.2(C-3)，181.0(C-4)，162.7(C-5)，99.0(C-6)， 164.9(C-7)，93.7(C-8)，158.5(C-9)，105.1(C-10)，123.5(C-1’)，128.7(C-2’)， 124.6(C-3’)，152.9(C-4’)，116.5(C-5’)，129.7(C-6’)，69.1(C-4”)，73.2(C-5”)， 80.3(C-6”)，38.7(C-7”)，21.1(C-8”)，124.3(C-9”)，131.2(C-10”)，16.5(C-11”)， 17.1(C-6”Me)，24.7(C-10”Me)。 6、一种异黄酮类化合物55，7，2′，4′-四羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物5 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； IR ν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； HREIMS m/z 442.1989[M + ](Cal.442.1992for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z(rel.int.)：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z 425[M-OH] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.60(H-2α)，4.70(H-2β)，4.17(H-3)，5.97(H-6)，5.97(H-8)， 6.43(H-5’)，6.93(H-6’)，3.43(H-1”)，5.25(H-2”)，1.93(H-4”)，1.46(H-5”)，1.36(H-6”)， 1.13(H-8”)，1.77(H-3”Me)，1.13(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.4(C-2)，46.1(C-3)，197.9(C-4)，164.9(C-5)，96.2(C-6)， 167.0(C-7)，95.1(C-8)，163.8(C-9)，102.2(C-10)，114.6(C-1’)，154.1(C-2’)， 116.3(C-3’)，155.8(C-4’)，107.7(C-5’)，126.5(C-6’)，22.7(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.3(C-3”)，40.4(C-4”)，22.5(C-5”)，43.7(C-6”)，69.4(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.6(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 7、一种异黄酮类化合物63′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮醇，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物6 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0，230.0； IRν max cm -1 (KBr)：3304，2926，1639，1614，1450，1379，1263，1614，1450，1379， 1263，1182，1163，1091，835； HREIMS m/z 424.1882[M] + (Calc.424.1886 for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(12)，301(46)，201(26)，187(36)，179(31)，153(100)， 123(60)，91(35)，69(80)； ESI-MS m/z 425[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.0(C-2)，45.6(C-3)，197.5(C-4)，165.1(C-5)，97.2(C-6)， 166.6(C-7)，95.8(C-8)，163.4(C-9)，102.0(C-10)，115.1(C-1’)，154.2(C-2’)， 115.8(C-3’)，155.5(C-4’)，108.9(C-5’)，126.1(C-6’)，23.0(C-1”)，121.7(C-2”)， 139.4(C-3”)，39.9(C-4”)，26.6(C-5”)，124.0(C-6”)，132.3(C-7”)，18.0(C-8”)， 16.5(C-3”Me)，26.0(C-7”Me)。 8、一种异黄酮类化合物73′-香叶基-4′-甲氧基-5，7，2′-三羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物7 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：288.0，226.0； IRν max cm -1 (KBr)：3342，2966，2925，1643，1634，1495，1454，1385，1315，1275， 1227，1182，1163，1094，835，756； HREIMS m/z 438.2057[M] + (Calc.438.2042for C 26 H 30 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：438(28)，353(25)，327(15)，316(29)，315(100)，286(14)， 215(22)，204(11)，203(31)，201(26)，189(30)，153(48)； ESI-MS m/z 439[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.2(C-2)，46.1(C-3)，197.8(C-4)，164.9(C-5)，97.1(C-6)， 166.5(C-7)，95.8(C-8)，163.6(C-9)，102.5(C-10)，115.3(C-1’)，154.2(C-2’)， 117.2(C-3’)，158.1(C-4’)，103.9(C-5’)，126.8(C-6’)，22.8(C-1”)，122.0(C-2”)， 138.3(C-3”)，40.0(C-4”)，26.7(C-5”)，124.2(C-6”)，132.0(C-7”)，17.9(C-8”)， 16.4(C-3”Me)，25.9(C-7”Me)，56.0(C-4’OMe)。 9、一种异黄酮类化合物83′-香叶基-5，7，4′，5′-四羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物8 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：262.0； IRν max cm -1 (KBr)：3371，2964，2922，2854，1650，1614，1574，1514，1441，1367， 1306，1283，1177，1051，839，822，793； HREIMS m/z 422.1719[M] + (Calc.422.1729for C 25 H 26 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：422(16)，353(27)，337(14)，300(67)，153(93)，123(49)， 69(100)； ESI-MS m/z 423[M+1] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：7.96(H-2)，6.20(H-6)，6.32(H-8)，6.32(H-2’)，6.86(H-6’)， 3.34(H-1”)，5.32(H-2”)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.55(H-8”)， 1.71(H-3”Me)，1.58(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，124.0(C-3)，181.1(C-4)，162.7(C-5)，98.9(C-6)， 165.0(C-7)，93.6(C-8)，158.5(C-9)，105.2(C-10)，121.7(C-1’)，121.0(C-2’)， 128.5(C-3’)，143.5(C-4’)，144.6(C-5’)，113.6(C-6’)，28.3(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.6(C-3”)，39.7(C-4”)，27.9(C-5”)，124.2(C-6”)，131.0(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.0(C-3”Me)，24.7(C-7”Me)。 10.如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤： (1)大红袍药材粉碎，用药材5-10倍量W/V60％-90％乙醇溶剂在50-90 ℃下进行加热提取1-3次，每次0.5-2h，得到提取液； (2)提取液在压力98Kpa，温度50-90℃下减压浓缩，把浓缩液分散在相同重量的水中制成混悬液； (3)用与混悬液等体积的氯仿萃取三次，合并萃取液，氯仿萃取液在压力 98Kpa，30-50℃温度下减压浓缩后得氯仿萃取物； (4)分离化合物 i氯仿萃取物用等量得硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶ 乙酸乙酯5∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1，馏分2，馏分3，馏分4，馏分5；馏分1用反相C18柱分离，甲醇∶水8∶2V/V洗脱，得化合物3；用甲醇∶ 水7∶3V/V洗脱得化合物7；馏分2用葡聚糖凝胶LH-20分离，用甲醇洗脱得化合物1；馏分3用反相C18柱分离，甲醇∶水7∶3V/V，得化合物2；馏分4 用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物5；馏分5用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4-7∶3V/V洗脱，得化合物8； ii氯仿萃取物用等量硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶丙酮4∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1与馏分2，馏分1再用葡聚糖凝胶LH-20 分离得到化合物6；馏分2用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物4。 11、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病药物中的应用。 12、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备B细胞型慢性淋巴细胞白血病药物中的应用。
3： 0； HREIMS：m/z 422.1743[M] + (Calc.422.1729 for C 25 H 26 O 6 )； EIMS：m/z(rel.int.)：353(10)，299(38)，128(38)，86(100)，69(79)，59(61)，55 (85)； ESI-MS：m/z 423[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3352，2924，2854，1649，1610，1500，1448，1364，1306，1259， 1200，1167，1150，1094，1051，1038，820； 1 HNMR(CDCI 3 )：7.93(H-2)，6.36(H-6)，6.43(H-8)，6.51(H-5’)，6.89(H-6’)，
4： 56(H-1”)，5.31(H-1’)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.59(H-8”)， 1.84(H-3”Me)，1.67(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：155.5(C-2)，123.9(C-3)，182.3(C-4)，162.7(C-5)，100.5(C-6)， 163.5(C-7)，9
5： 5(C-8)，158.2(C-9)，105.7(C-10)，112.7(C-1’)，154.5(C-2’)， 117.4(C-3’)，157.5(C-4’)，109.5(C-5’)，128.2(C-6’)，26.6(C-1”)，121.9(C-2”)， 139.1(C-3”)，39.6(C-4”)，26.0(C-5”)，124.1(C-6”)，132.3(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.4(C-3”Me)，23.1(C-7”Me)。 3、一种异黄酮类化合物25，7，4′-三羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物2 白色固体状物，mp：179.3-180.9； UVλ max (MeOH)：262.0； HREIMS：m/z 424.1890[M] + (Calc.424.1886for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(3.5)，406(39)，338(16)，337(22)，335(22)，321(33)， 284(100)，283(73)，153(60)； ESI-MS：m/z 407[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3362，2968，2935，1653，1616，1506，1446，1364，1263，1198， 1047，825，669； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.12(H-2)，6.27(H-6)，6.40(H-8)，7.35(H-2’)，6.89(H-5’)， 7.27(H-6’)，3.38(H-1”)，5.40(H-2”)，2.05(H-4”)，1.52(H-5”)，1.41(H-6”)， 1.12(H-8”)，1.73(H-3”Me)，1.12(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，123.7(C-3)，181.0(C-4)，163.3(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.8(C-8)，158.4(C-9)，105.5(C-10)，122.5(C-1’)，130.5(C-2’)， 128.1(C-3’)，155.3(C-4’)，114.9(C-5’)，127.9(C-6’)，28.3(C-1”)，122.7(C-2”)， 136.1(C-3”)，40.34(C-4”)，22.7(C-5”)，43.7(C-6”)，69.5(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.5(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 4、一种异黄酮类化合物3(5，7二羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并 (2″，3″：3′，4′)]异黄酮)，其特征在于具有下列结构式和理化性质：化合物3 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； HREIMS：m/z 404.1635[M] + (Calc.404.1624 for C 25 H 24 O 5 )； EIMS m/z(rel.int.)：404(5)，322(23)，321(100)； ESI-MS：m/z 405[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3339，2924，1652，1618，1578，1491，1448，1360，1306，1261， 1180，1045，831； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.20(H-2)，6.29(H-6)，6.42(H-8)，7.31(H-2’)，6.85(H-5’)， 7.33(H-6’)，6.49(H-4”)，5.75(H-5”)，1.71(H-7”)，2.13(H-8”)，5.13(H-9”)， 1.57(H-1”)，1.40(H-6”Me)，1.64(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.9(C-2)，123.1(C-3)，181.0(C-4)，163.2(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.9(C-8)，158.9(C-9)，105.4(C-10)，123.6(C-1’)，127.4(C-2’)， 121.1(C-3’)，153.6(C-4’)，115.9(C-5’)，130.3(C-6’)，122.7(C-4”)，130.0(C-5”)， 99.0(C-6”)，41.4(C-7”)，22.8(C-8”)，124.3(C-9”)，131.4(C-10”)，17.0(C-11”)， 26.3(C-6”Me)，25.2(C-10”Me)。 5、一种异黄酮类化合物44，5，7，4″，5″四羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3″：3′，4′)]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物4 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0； 1HREIMS：m/z442.1989[M] + (Cal.442.1992 for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z rel.int.：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z：425[M-OH] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.08(H-2)，6.22(H-6)，6.34(H-8)，7.61(H-2’)，6.81(H-5’)， 7.34(H-6’)，4.58(H-4”)，3.65(H-5”)，1.85(H-7”)，2.17(H-8”)，5.16(H-9”)， 1.65(H-1”)，1.19(H-6”Me)，1.69(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.8(C-2)，123.2(C-3)，181.0(C-4)，162.7(C-5)，99.0(C-6)， 164.9(C-7)，93.7(C-8)，158.5(C-9)，105.1(C-10)，123.5(C-1’)，128.7(C-2’)， 124.6(C-3’)，152.9(C-4’)，116.5(C-5’)，129.7(C-6’)，69.1(C-4”)，73.2(C-5”)， 80.3(C-6”)，38.7(C-7”)，21.1(C-8”)，124.3(C-9”)，131.2(C-10”)，16.5(C-11”)， 17.1(C-6”Me)，24.7(C-10”Me)。 6、一种异黄酮类化合物55，7，2′，4′-四羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物5 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； IR ν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； HREIMS m/z 442.1989[M + ](Cal.442.1992for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z(rel.int.)：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z 425[M-OH] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.60(H-2α)，4.70(H-2β)，4.17(H-3)，5.97(H-6)，5.97(H-8)， 6.43(H-5’)，6.93(H-6’)，3.43(H-1”)，5.25(H-2”)，1.93(H-4”)，1.46(H-5”)，1.36(H-6”)， 1.13(H-8”)，1.77(H-3”Me)，1.13(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.4(C-2)，46.1(C-3)，197.9(C-4)，164.9(C-5)，96.2(C-6)， 167.0(C-7)，95.1(C-8)，163.8(C-9)，102.2(C-10)，114.6(C-1’)，154.1(C-2’)， 116.3(C-3’)，155.8(C-4’)，107.7(C-5’)，126.5(C-6’)，22.7(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.3(C-3”)，40.4(C-4”)，22.5(C-5”)，43.7(C-6”)，69.4(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.6(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 7、一种异黄酮类化合物63′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮醇，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物6 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0，230.0； IRν max cm -1 (KBr)：3304，2926，1639，1614，1450，1379，1263，1614，1450，1379， 1263，1182，1163，1091，835； HREIMS m/z 424.1882[M] + (Calc.424.1886 for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(12)，301(46)，201(26)，187(36)，179(31)，153(100)， 123(60)，91(35)，69(80)； ESI-MS m/z 425[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.0(C-2)，45.6(C-3)，197.5(C-4)，165.1(C-5)，97.2(C-6)， 166.6(C-7)，95.8(C-8)，163.4(C-9)，102.0(C-10)，115.1(C-1’)，154.2(C-2’)， 115.8(C-3’)，155.5(C-4’)，108.9(C-5’)，126.1(C-6’)，23.0(C-1”)，121.7(C-2”)， 139.4(C-3”)，39.9(C-4”)，26.6(C-5”)，124.0(C-6”)，132.3(C-7”)，18.0(C-8”)， 16.5(C-3”Me)，26.0(C-7”Me)。 8、一种异黄酮类化合物73′-香叶基-4′-甲氧基-5，7，2′-三羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物7 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：288.0，226.0； IRν max cm -1 (KBr)：3342，2966，2925，1643，1634，1495，1454，1385，1315，1275， 1227，1182，1163，1094，835，756； HREIMS m/z 438.2057[M] + (Calc.438.2042for C 26 H 30 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：438(28)，353(25)，327(15)，316(29)，315(100)，286(14)， 215(22)，204(11)，203(31)，201(26)，189(30)，153(48)； ESI-MS m/z 439[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.2(C-2)，46.1(C-3)，197.8(C-4)，164.9(C-5)，97.1(C-6)， 166.5(C-7)，95.8(C-8)，163.6(C-9)，102.5(C-10)，115.3(C-1’)，154.2(C-2’)， 117.2(C-3’)，158.1(C-4’)，103.9(C-5’)，126.8(C-6’)，22.8(C-1”)，122.0(C-2”)， 138.3(C-3”)，40.0(C-4”)，26.7(C-5”)，124.2(C-6”)，132.0(C-7”)，17.9(C-8”)， 16.4(C-3”Me)，25.9(C-7”Me)，56.0(C-4’OMe)。 9、一种异黄酮类化合物83′-香叶基-5，7，4′，5′-四羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物8 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：262.0； IRν max cm -1 (KBr)：3371，2964，2922，2854，1650，1614，1574，1514，1441，1367， 1306，1283，1177，1051，839，822，793； HREIMS m/z 422.1719[M] + (Calc.422.1729for C 25 H 26 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：422(16)，353(27)，337(14)，300(67)，153(93)，123(49)， 69(100)； ESI-MS m/z 423[M+1] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：7.96(H-2)，6.20(H-6)，6.32(H-8)，6.32(H-2’)，6.86(H-6’)， 3.34(H-1”)，5.32(H-2”)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.55(H-8”)， 1.71(H-3”Me)，1.58(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，124.0(C-3)，181.1(C-4)，162.7(C-5)，98.9(C-6)， 165.0(C-7)，93.6(C-8)，158.5(C-9)，105.2(C-10)，121.7(C-1’)，121.0(C-2’)， 128.5(C-3’)，143.5(C-4’)，144.6(C-5’)，113.6(C-6’)，28.3(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.6(C-3”)，39.7(C-4”)，27.9(C-5”)，124.2(C-6”)，131.0(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.0(C-3”Me)，24.7(C-7”Me)。 10.如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤： (1)大红袍药材粉碎，用药材5-10倍量W/V60％-90％乙醇溶剂在50-90 ℃下进行加热提取1-3次，每次0.5-2h，得到提取液； (2)提取液在压力98Kpa，温度50-90℃下减压浓缩，把浓缩液分散在相同重量的水中制成混悬液； (3)用与混悬液等体积的氯仿萃取三次，合并萃取液，氯仿萃取液在压力 98Kpa，30-50℃温度下减压浓缩后得氯仿萃取物； (4)分离化合物 i氯仿萃取物用等量得硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶ 乙酸乙酯5∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1，馏分2，馏分3，馏分4，馏分5；馏分1用反相C18柱分离，甲醇∶水8∶2V/V洗脱，得化合物3；用甲醇∶ 水7∶3V/V洗脱得化合物7；馏分2用葡聚糖凝胶LH-20分离，用甲醇洗脱得化合物1；馏分3用反相C18柱分离，甲醇∶水7∶3V/V，得化合物2；馏分4 用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物5；馏分5用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4-7∶3V/V洗脱，得化合物8； ii氯仿萃取物用等量硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶丙酮4∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1与馏分2，馏分1再用葡聚糖凝胶LH-20 分离得到化合物6；馏分2用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物4。 11、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病药物中的应用。 12、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备B细胞型慢性淋巴细胞白血病药物中的应用。
6： 31(H-1’)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.59(H-8”)， 1.84(H-3”Me)，1.67(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：155.5(C-2)，123.9(C-3)，182.3(C-4)，162.7(C-5)，100.5(C-6)， 163.5(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，105.7(C-10)，112.7(C-1’)，154.5(C-2’)， 117.4(C-3’)，157.5(C-4’)，109.5(C-5’)，128.2(C-6’)，26.6(C-1”)，121.9(C-2”)， 139.1(C-3”)，39.6(C-4”)，26.0(C-5”)，124.1(C-6”)，132.3(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.4(C-3”Me)，23.1(C-7”Me)。 3、一种异黄酮类化合物25，7，4′-三羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物2 白色固体状物，mp：179.3-180.9； UVλ max (MeOH)：262.0； HREIMS：m/z 424.1890[M] + (Calc.424.1886for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(3.5)，406(39)，338(16)，337(22)，335(22)，321(33)， 284(100)，283(73)，153(60)； ESI-MS：m/z 407[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3362，2968，2935，1653，1616，1506，1446，1364，1263，1198， 1047，825，669； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.12(H-2)，6.27(H-6)，6.40(H-8)，7.35(H-2’)，6.89(H-5’)， 7.27(H-6’)，3.38(H-1”)，5.40(H-2”)，2.05(H-4”)，1.52(H-5”)，1.41(H-6”)， 1.12(H-8”)，1.73(H-3”Me)，1.12(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，123.7(C-3)，181.0(C-4)，163.3(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.8(C-8)，158.4(C-9)，105.5(C-10)，122.5(C-1’)，130.5(C-2’)， 128.1(C-3’)，155.3(C-4’)，114.9(C-5’)，127.9(C-6’)，28.3(C-1”)，122.7(C-2”)， 136.1(C-3”)，40.34(C-4”)，22.7(C-5”)，43.7(C-6”)，69.5(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.5(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 4、一种异黄酮类化合物3(5，7二羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并 (2″，3″：3′，4′)]异黄酮)，其特征在于具有下列结构式和理化性质：化合物3 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； HREIMS：m/z 404.1635[M] + (Calc.404.1624 for C 25 H 24 O 5 )； EIMS m/z(rel.int.)：404(5)，322(23)，321(100)； ESI-MS：m/z 405[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3339，2924，1652，1618，1578，1491，1448，1360，1306，1261， 1180，1045，831； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.20(H-2)，6.29(H-6)，6.42(H-8)，7.31(H-2’)，6.85(H-5’)， 7.33(H-6’)，6.49(H-4”)，5.75(H-5”)，1.71(H-7”)，2.13(H-8”)，5.13(H-9”)， 1.57(H-1”)，1.40(H-6”Me)，1.64(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.9(C-2)，123.1(C-3)，181.0(C-4)，163.2(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.9(C-8)，158.9(C-9)，105.4(C-10)，123.6(C-1’)，127.4(C-2’)， 121.1(C-3’)，153.6(C-4’)，115.9(C-5’)，130.3(C-6’)，122.7(C-4”)，130.0(C-5”)， 99.0(C-6”)，41.4(C-7”)，22.8(C-8”)，124.3(C-9”)，131.4(C-10”)，17.0(C-11”)， 26.3(C-6”Me)，25.2(C-10”Me)。 5、一种异黄酮类化合物44，5，7，4″，5″四羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3″：3′，4′)]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物4 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0； 1HREIMS：m/z442.1989[M] + (Cal.442.1992 for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z rel.int.：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z：425[M-OH] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.08(H-2)，6.22(H-6)，6.34(H-8)，7.61(H-2’)，6.81(H-5’)， 7.34(H-6’)，4.58(H-4”)，3.65(H-5”)，1.85(H-7”)，2.17(H-8”)，5.16(H-9”)， 1.65(H-1”)，1.19(H-6”Me)，1.69(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.8(C-2)，123.2(C-3)，181.0(C-4)，162.7(C-5)，99.0(C-6)， 164.9(C-7)，93.7(C-8)，158.5(C-9)，105.1(C-10)，123.5(C-1’)，128.7(C-2’)， 124.6(C-3’)，152.9(C-4’)，116.5(C-5’)，129.7(C-6’)，69.1(C-4”)，73.2(C-5”)， 80.3(C-6”)，38.7(C-7”)，21.1(C-8”)，124.3(C-9”)，131.2(C-10”)，16.5(C-11”)， 17.1(C-6”Me)，24.7(C-10”Me)。 6、一种异黄酮类化合物55，7，2′，4′-四羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物5 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； IR ν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； HREIMS m/z 442.1989[M + ](Cal.442.1992for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z(rel.int.)：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z 425[M-OH] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.60(H-2α)，4.70(H-2β)，4.17(H-3)，5.97(H-6)，5.97(H-8)， 6.43(H-5’)，6.93(H-6’)，3.43(H-1”)，5.25(H-2”)，1.93(H-4”)，1.46(H-5”)，1.36(H-6”)， 1.13(H-8”)，1.77(H-3”Me)，1.13(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.4(C-2)，46.1(C-3)，197.9(C-4)，164.9(C-5)，96.2(C-6)， 167.0(C-7)，95.1(C-8)，163.8(C-9)，102.2(C-10)，114.6(C-1’)，154.1(C-2’)， 116.3(C-3’)，155.8(C-4’)，107.7(C-5’)，126.5(C-6’)，22.7(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.3(C-3”)，40.4(C-4”)，22.5(C-5”)，43.7(C-6”)，69.4(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.6(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 7、一种异黄酮类化合物63′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮醇，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物6 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0，230.0； IRν max cm -1 (KBr)：3304，2926，1639，1614，1450，1379，1263，1614，1450，1379， 1263，1182，1163，1091，835； HREIMS m/z 424.1882[M] + (Calc.424.1886 for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(12)，301(46)，201(26)，187(36)，179(31)，153(100)， 123(60)，91(35)，69(80)； ESI-MS m/z 425[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.0(C-2)，45.6(C-3)，197.5(C-4)，165.1(C-5)，97.2(C-6)， 166.6(C-7)，95.8(C-8)，163.4(C-9)，102.0(C-10)，115.1(C-1’)，154.2(C-2’)， 115.8(C-3’)，155.5(C-4’)，108.9(C-5’)，126.1(C-6’)，23.0(C-1”)，121.7(C-2”)， 139.4(C-3”)，39.9(C-4”)，26.6(C-5”)，124.0(C-6”)，132.3(C-7”)，18.0(C-8”)， 16.5(C-3”Me)，26.0(C-7”Me)。 8、一种异黄酮类化合物73′-香叶基-4′-甲氧基-5，7，2′-三羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物7 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：288.0，226.0； IRν max cm -1 (KBr)：3342，2966，2925，1643，1634，1495，1454，1385，1315，1275， 1227，1182，1163，1094，835，756； HREIMS m/z 438.2057[M] + (Calc.438.2042for C 26 H 30 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：438(28)，353(25)，327(15)，316(29)，315(100)，286(14)， 215(22)，204(11)，203(31)，201(26)，189(30)，153(48)； ESI-MS m/z 439[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.2(C-2)，46.1(C-3)，197.8(C-4)，164.9(C-5)，97.1(C-6)， 166.5(C-7)，95.8(C-8)，163.6(C-9)，102.5(C-10)，115.3(C-1’)，154.2(C-2’)， 117.2(C-3’)，158.1(C-4’)，103.9(C-5’)，126.8(C-6’)，22.8(C-1”)，122.0(C-2”)， 138.3(C-3”)，40.0(C-4”)，26.7(C-5”)，124.2(C-6”)，132.0(C-7”)，17.9(C-8”)， 16.4(C-3”Me)，25.9(C-7”Me)，56.0(C-4’OMe)。 9、一种异黄酮类化合物83′-香叶基-5，7，4′，5′-四羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物8 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：262.0； IRν max cm -1 (KBr)：3371，2964，2922，2854，1650，1614，1574，1514，1441，1367， 1306，1283，1177，1051，839，822，793； HREIMS m/z 422.1719[M] + (Calc.422.1729for C 25 H 26 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：422(16)，353(27)，337(14)，300(67)，153(93)，123(49)， 69(100)； ESI-MS m/z 423[M+1] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：7.96(H-2)，6.20(H-6)，6.32(H-8)，6.32(H-2’)，6.86(H-6’)， 3.34(H-1”)，5.32(H-2”)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.55(H-8”)， 1.71(H-3”Me)，1.58(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，124.0(C-3)，181.1(C-4)，162.7(C-5)，98.9(C-6)， 165.0(C-7)，93.6(C-8)，158.5(C-9)，105.2(C-10)，121.7(C-1’)，121.0(C-2’)， 128.5(C-3’)，143.5(C-4’)，144.6(C-5’)，113.6(C-6’)，28.3(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.6(C-3”)，39.7(C-4”)，27.9(C-5”)，124.2(C-6”)，131.0(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.0(C-3”Me)，24.7(C-7”Me)。 10.如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤： (1)大红袍药材粉碎，用药材5-10倍量W/V60％-90％乙醇溶剂在50-90 ℃下进行加热提取1-3次，每次0.5-2h，得到提取液； (2)提取液在压力98Kpa，温度50-90℃下减压浓缩，把浓缩液分散在相同重量的水中制成混悬液； (3)用与混悬液等体积的氯仿萃取三次，合并萃取液，氯仿萃取液在压力 98Kpa，30-50℃温度下减压浓缩后得氯仿萃取物； (4)分离化合物 i氯仿萃取物用等量得硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶ 乙酸乙酯5∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1，馏分2，馏分3，馏分4，馏分5；馏分1用反相C18柱分离，甲醇∶水8∶2V/V洗脱，得化合物3；用甲醇∶ 水7∶3V/V洗脱得化合物7；馏分2用葡聚糖凝胶LH-20分离，用甲醇洗脱得化合物1；馏分3用反相C18柱分离，甲醇∶水7∶3V/V，得化合物2；馏分4 用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物5；馏分5用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4-7∶3V/V洗脱，得化合物8； ii氯仿萃取物用等量硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶丙酮4∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1与馏分2，馏分1再用葡聚糖凝胶LH-20 分离得到化合物6；馏分2用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物4。 11、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病药物中的应用。 12、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备B细胞型慢性淋巴细胞白血病药物中的应用。
7： 36(H-6)，6.43(H-8)，6.51(H-5’)，6.89(H-6’)， 3.56(H-1”)，5.31(H-1’)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.59(H-8”)， 1.84(H-3”Me)，1.67(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：155.5(C-2)，123.9(C-3)，182.3(C-4)，162.7(C-5)，100.5(C-6)， 163.5(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，105.7(C-10)，112.7(C-1’)，154.5(C-2’)， 117.4(C-3’)，157.5(C-4’)，109.5(C-5’)，128.2(C-6’)，26.6(C-1”)，121.9(C-2”)， 139.1(C-3”)，39.6(C-4”)，26.0(C-5”)，124.1(C-6”)，132.3(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.4(C-3”Me)，23.1(C-7”Me)。 3、一种异黄酮类化合物25，7，4′-三羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物2 白色固体状物，mp：179.3-180.9； UVλ max (MeOH)：262.0； HREIMS：m/z 424.1890[M] + (Calc.424.1886for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(3.5)，406(39)，338(16)，337(22)，335(22)，321(33)， 284(100)，283(73)，153(60)； ESI-MS：m/z 407[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3362，2968，2935，1653，1616，1506，1446，1364，1263，1198， 1047，825，669； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.12(H-2)，6.27(H-6)，6.40(H-8)，7.35(H-2’)，6.89(H-5’)， 7.27(H-6’)，3.38(H-1”)，5.40(H-2”)，2.05(H-4”)，1.52(H-5”)，1.41(H-6”)， 1.12(H-8”)，1.73(H-3”Me)，1.12(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，123.7(C-3)，181.0(C-4)，163.3(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.8(C-8)，158.4(C-9)，105.5(C-10)，122.5(C-1’)，130.5(C-2’)， 128.1(C-3’)，155.3(C-4’)，114.9(C-5’)，127.9(C-6’)，28.3(C-1”)，122.7(C-2”)， 136.1(C-3”)，40.34(C-4”)，22.7(C-5”)，43.7(C-6”)，69.5(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.5(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 4、一种异黄酮类化合物3(5，7二羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并 (2″，3″：3′，4′)]异黄酮)，其特征在于具有下列结构式和理化性质：化合物3 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； HREIMS：m/z 404.1635[M] + (Calc.404.1624 for C 25 H 24 O 5 )； EIMS m/z(rel.int.)：404(5)，322(23)，321(100)； ESI-MS：m/z 405[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3339，2924，1652，1618，1578，1491，1448，1360，1306，1261， 1180，1045，831； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.20(H-2)，6.29(H-6)，6.42(H-8)，7.31(H-2’)，6.85(H-5’)， 7.33(H-6’)，6.49(H-4”)，5.75(H-5”)，1.71(H-7”)，2.13(H-8”)，5.13(H-9”)， 1.57(H-1”)，1.40(H-6”Me)，1.64(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.9(C-2)，123.1(C-3)，181.0(C-4)，163.2(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.9(C-8)，158.9(C-9)，105.4(C-10)，123.6(C-1’)，127.4(C-2’)， 121.1(C-3’)，153.6(C-4’)，115.9(C-5’)，130.3(C-6’)，122.7(C-4”)，130.0(C-5”)， 99.0(C-6”)，41.4(C-7”)，22.8(C-8”)，124.3(C-9”)，131.4(C-10”)，17.0(C-11”)， 26.3(C-6”Me)，25.2(C-10”Me)。 5、一种异黄酮类化合物44，5，7，4″，5″四羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3″：3′，4′)]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物4 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0； 1HREIMS：m/z442.1989[M] + (Cal.442.1992 for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z rel.int.：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z：425[M-OH] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.08(H-2)，6.22(H-6)，6.34(H-8)，7.61(H-2’)，6.81(H-5’)， 7.34(H-6’)，4.58(H-4”)，3.65(H-5”)，1.85(H-7”)，2.17(H-8”)，5.16(H-9”)， 1.65(H-1”)，1.19(H-6”Me)，1.69(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.8(C-2)，123.2(C-3)，181.0(C-4)，162.7(C-5)，99.0(C-6)， 164.9(C-7)，93.7(C-8)，158.5(C-9)，105.1(C-10)，123.5(C-1’)，128.7(C-2’)， 124.6(C-3’)，152.9(C-4’)，116.5(C-5’)，129.7(C-6’)，69.1(C-4”)，73.2(C-5”)， 80.3(C-6”)，38.7(C-7”)，21.1(C-8”)，124.3(C-9”)，131.2(C-10”)，16.5(C-11”)， 17.1(C-6”Me)，24.7(C-10”Me)。 6、一种异黄酮类化合物55，7，2′，4′-四羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物5 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； IR ν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； HREIMS m/z 442.1989[M + ](Cal.442.1992for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z(rel.int.)：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z 425[M-OH] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.60(H-2α)，4.70(H-2β)，4.17(H-3)，5.97(H-6)，5.97(H-8)， 6.43(H-5’)，6.93(H-6’)，3.43(H-1”)，5.25(H-2”)，1.93(H-4”)，1.46(H-5”)，1.36(H-6”)， 1.13(H-8”)，1.77(H-3”Me)，1.13(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.4(C-2)，46.1(C-3)，197.9(C-4)，164.9(C-5)，96.2(C-6)， 167.0(C-7)，95.1(C-8)，163.8(C-9)，102.2(C-10)，114.6(C-1’)，154.1(C-2’)， 116.3(C-3’)，155.8(C-4’)，107.7(C-5’)，126.5(C-6’)，22.7(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.3(C-3”)，40.4(C-4”)，22.5(C-5”)，43.7(C-6”)，69.4(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.6(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 7、一种异黄酮类化合物63′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮醇，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物6 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0，230.0； IRν max cm -1 (KBr)：3304，2926，1639，1614，1450，1379，1263，1614，1450，1379， 1263，1182，1163，1091，835； HREIMS m/z 424.1882[M] + (Calc.424.1886 for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(12)，301(46)，201(26)，187(36)，179(31)，153(100)， 123(60)，91(35)，69(80)； ESI-MS m/z 425[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.0(C-2)，45.6(C-3)，197.5(C-4)，165.1(C-5)，97.2(C-6)， 166.6(C-7)，95.8(C-8)，163.4(C-9)，102.0(C-10)，115.1(C-1’)，154.2(C-2’)， 115.8(C-3’)，155.5(C-4’)，108.9(C-5’)，126.1(C-6’)，23.0(C-1”)，121.7(C-2”)， 139.4(C-3”)，39.9(C-4”)，26.6(C-5”)，124.0(C-6”)，132.3(C-7”)，18.0(C-8”)， 16.5(C-3”Me)，26.0(C-7”Me)。 8、一种异黄酮类化合物73′-香叶基-4′-甲氧基-5，7，2′-三羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物7 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：288.0，226.0； IRν max cm -1 (KBr)：3342，2966，2925，1643，1634，1495，1454，1385，1315，1275， 1227，1182，1163，1094，835，756； HREIMS m/z 438.2057[M] + (Calc.438.2042for C 26 H 30 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：438(28)，353(25)，327(15)，316(29)，315(100)，286(14)， 215(22)，204(11)，203(31)，201(26)，189(30)，153(48)； ESI-MS m/z 439[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.2(C-2)，46.1(C-3)，197.8(C-4)，164.9(C-5)，97.1(C-6)， 166.5(C-7)，95.8(C-8)，163.6(C-9)，102.5(C-10)，115.3(C-1’)，154.2(C-2’)， 117.2(C-3’)，158.1(C-4’)，103.9(C-5’)，126.8(C-6’)，22.8(C-1”)，122.0(C-2”)， 138.3(C-3”)，40.0(C-4”)，26.7(C-5”)，124.2(C-6”)，132.0(C-7”)，17.9(C-8”)， 16.4(C-3”Me)，25.9(C-7”Me)，56.0(C-4’OMe)。 9、一种异黄酮类化合物83′-香叶基-5，7，4′，5′-四羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物8 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：262.0； IRν max cm -1 (KBr)：3371，2964，2922，2854，1650，1614，1574，1514，1441，1367， 1306，1283，1177，1051，839，822，793； HREIMS m/z 422.1719[M] + (Calc.422.1729for C 25 H 26 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：422(16)，353(27)，337(14)，300(67)，153(93)，123(49)， 69(100)； ESI-MS m/z 423[M+1] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：7.96(H-2)，6.20(H-6)，6.32(H-8)，6.32(H-2’)，6.86(H-6’)， 3.34(H-1”)，5.32(H-2”)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.55(H-8”)， 1.71(H-3”Me)，1.58(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，124.0(C-3)，181.1(C-4)，162.7(C-5)，98.9(C-6)， 165.0(C-7)，93.6(C-8)，158.5(C-9)，105.2(C-10)，121.7(C-1’)，121.0(C-2’)， 128.5(C-3’)，143.5(C-4’)，144.6(C-5’)，113.6(C-6’)，28.3(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.6(C-3”)，39.7(C-4”)，27.9(C-5”)，124.2(C-6”)，131.0(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.0(C-3”Me)，24.7(C-7”Me)。 10.如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤： (1)大红袍药材粉碎，用药材5-10倍量W/V60％-90％乙醇溶剂在50-90 ℃下进行加热提取1-3次，每次0.5-2h，得到提取液； (2)提取液在压力98Kpa，温度50-90℃下减压浓缩，把浓缩液分散在相同重量的水中制成混悬液； (3)用与混悬液等体积的氯仿萃取三次，合并萃取液，氯仿萃取液在压力 98Kpa，30-50℃温度下减压浓缩后得氯仿萃取物； (4)分离化合物 i氯仿萃取物用等量得硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶ 乙酸乙酯5∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1，馏分2，馏分3，馏分4，馏分5；馏分1用反相C18柱分离，甲醇∶水8∶2V/V洗脱，得化合物3；用甲醇∶ 水7∶3V/V洗脱得化合物7；馏分2用葡聚糖凝胶LH-20分离，用甲醇洗脱得化合物1；馏分3用反相C18柱分离，甲醇∶水7∶3V/V，得化合物2；馏分4 用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物5；馏分5用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4-7∶3V/V洗脱，得化合物8； ii氯仿萃取物用等量硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶丙酮4∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1与馏分2，馏分1再用葡聚糖凝胶LH-20 分离得到化合物6；馏分2用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物4。 11、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病药物中的应用。 12、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备B细胞型慢性淋巴细胞白血病药物中的应用。
8： 93(H-2)，6.36(H-6)，6.43(H-8)，6.51(H-5’)，6.89(H-6’)， 3.56(H-1”)，5.31(H-1’)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.59(H-8”)， 1.84(H-3”Me)，1.67(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：155.5(C-2)，123.9(C-3)，182.3(C-4)，162.7(C-5)，100.5(C-6)， 163.5(C-7)，94.5(C-8)，15
9： 2(C-9)，105.7(C-10)，112.7(C-1’)，154.5(C-2’)， 117.4(C-3’)，157.5(C-4’)，10
10： 5(C-5’)，128.2(C-6’)，26.6(C-1”)，121.9(C-2”)， 139.1(C-3”)，39.6(C-4”)，26.0(C-5”)，124.1(C-6”)，132.3(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.4(C-3”Me)，23.1(C-7”Me)。 3、一种异黄酮类化合物25，7，4′-三羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物2 白色固体状物，mp：179.3-180.9； UVλ max (MeOH)：262.0； HREIMS：m/z 424.1890[M] + (Calc.424.1886for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(3.5)，406(39)，338(16)，337(22)，335(22)，321(33)， 284(100)，283(73)，153(60)； ESI-MS：m/z 407[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3362，2968，2935，1653，1616，1506，1446，1364，1263，1198， 1047，825，669； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.12(H-2)，6.27(H-6)，6.40(H-8)，7.35(H-2’)，6.89(H-5’)， 7.27(H-6’)，3.38(H-1”)，5.40(H-2”)，2.05(H-4”)，1.52(H-5”)，1.41(H-6”)， 1.12(H-8”)，1.73(H-3”Me)，1.12(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，123.7(C-3)，181.0(C-4)，163.3(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.8(C-8)，158.4(C-9)，105.5(C-10)，122.5(C-1’)，130.5(C-2’)， 128.1(C-3’)，155.3(C-4’)，114.9(C-5’)，127.9(C-6’)，28.3(C-1”)，122.7(C-2”)， 136.1(C-3”)，40.34(C-4”)，22.7(C-5”)，43.7(C-6”)，69.5(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.5(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 4、一种异黄酮类化合物3(5，7二羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并 (2″，3″：3′，4′)]异黄酮)，其特征在于具有下列结构式和理化性质：化合物3 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； HREIMS：m/z 404.1635[M] + (Calc.404.1624 for C 25 H 24 O 5 )； EIMS m/z(rel.int.)：404(5)，322(23)，321(100)； ESI-MS：m/z 405[M+H] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3339，2924，1652，1618，1578，1491，1448，1360，1306，1261， 1180，1045，831； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.20(H-2)，6.29(H-6)，6.42(H-8)，7.31(H-2’)，6.85(H-5’)， 7.33(H-6’)，6.49(H-4”)，5.75(H-5”)，1.71(H-7”)，2.13(H-8”)，5.13(H-9”)， 1.57(H-1”)，1.40(H-6”Me)，1.64(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.9(C-2)，123.1(C-3)，181.0(C-4)，163.2(C-5)，99.2(C-6)， 164.4(C-7)，93.9(C-8)，158.9(C-9)，105.4(C-10)，123.6(C-1’)，127.4(C-2’)， 121.1(C-3’)，153.6(C-4’)，115.9(C-5’)，130.3(C-6’)，122.7(C-4”)，130.0(C-5”)， 99.0(C-6”)，41.4(C-7”)，22.8(C-8”)，124.3(C-9”)，131.4(C-10”)，17.0(C-11”)， 26.3(C-6”Me)，25.2(C-10”Me)。 5、一种异黄酮类化合物44，5，7，4″，5″四羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3″：3′，4′)]异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物4 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0； 1HREIMS：m/z442.1989[M] + (Cal.442.1992 for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z rel.int.：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z：425[M-OH] + ； IRν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； 1 HNMR(CDCI 3 )：8.08(H-2)，6.22(H-6)，6.34(H-8)，7.61(H-2’)，6.81(H-5’)， 7.34(H-6’)，4.58(H-4”)，3.65(H-5”)，1.85(H-7”)，2.17(H-8”)，5.16(H-9”)， 1.65(H-1”)，1.19(H-6”Me)，1.69(H-10”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.8(C-2)，123.2(C-3)，181.0(C-4)，162.7(C-5)，99.0(C-6)， 164.9(C-7)，93.7(C-8)，158.5(C-9)，105.1(C-10)，123.5(C-1’)，128.7(C-2’)， 124.6(C-3’)，152.9(C-4’)，116.5(C-5’)，129.7(C-6’)，69.1(C-4”)，73.2(C-5”)， 80.3(C-6”)，38.7(C-7”)，21.1(C-8”)，124.3(C-9”)，131.2(C-10”)，16.5(C-11”)， 17.1(C-6”Me)，24.7(C-10”Me)。 6、一种异黄酮类化合物55，7，2′，4′-四羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物5 黄色油状物； UVλ max (MeOH)nm：290.0； IR ν max cm -1 (KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269， 1184，1465，835，800； HREIMS m/z 442.1989[M + ](Cal.442.1992for C 25 H 30 O 7 )； EIMS m/z(rel.int.)：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)； ESI-MS m/z 425[M-OH] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.60(H-2α)，4.70(H-2β)，4.17(H-3)，5.97(H-6)，5.97(H-8)， 6.43(H-5’)，6.93(H-6’)，3.43(H-1”)，5.25(H-2”)，1.93(H-4”)，1.46(H-5”)，1.36(H-6”)， 1.13(H-8”)，1.77(H-3”Me)，1.13(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.4(C-2)，46.1(C-3)，197.9(C-4)，164.9(C-5)，96.2(C-6)， 167.0(C-7)，95.1(C-8)，163.8(C-9)，102.2(C-10)，114.6(C-1’)，154.1(C-2’)， 116.3(C-3’)，155.8(C-4’)，107.7(C-5’)，126.5(C-6’)，22.7(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.3(C-3”)，40.4(C-4”)，22.5(C-5”)，43.7(C-6”)，69.4(C-7”)，29.0(C-8”)， 15.6(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。 7、一种异黄酮类化合物63′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮醇，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物6 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：290.0，230.0； IRν max cm -1 (KBr)：3304，2926，1639，1614，1450，1379，1263，1614，1450，1379， 1263，1182，1163，1091，835； HREIMS m/z 424.1882[M] + (Calc.424.1886 for C 25 H 28 O 6 )； EIMSm/z(rel.int.)：424(12)，301(46)，201(26)，187(36)，179(31)，153(100)， 123(60)，91(35)，69(80)； ESI-MS m/z 425[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.0(C-2)，45.6(C-3)，197.5(C-4)，165.1(C-5)，97.2(C-6)， 166.6(C-7)，95.8(C-8)，163.4(C-9)，102.0(C-10)，115.1(C-1’)，154.2(C-2’)， 115.8(C-3’)，155.5(C-4’)，108.9(C-5’)，126.1(C-6’)，23.0(C-1”)，121.7(C-2”)， 139.4(C-3”)，39.9(C-4”)，26.6(C-5”)，124.0(C-6”)，132.3(C-7”)，18.0(C-8”)， 16.5(C-3”Me)，26.0(C-7”Me)。 8、一种异黄酮类化合物73′-香叶基-4′-甲氧基-5，7，2′-三羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物7 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：288.0，226.0； IRν max cm -1 (KBr)：3342，2966，2925，1643，1634，1495，1454，1385，1315，1275， 1227，1182，1163，1094，835，756； HREIMS m/z 438.2057[M] + (Calc.438.2042for C 26 H 30 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：438(28)，353(25)，327(15)，316(29)，315(100)，286(14)， 215(22)，204(11)，203(31)，201(26)，189(30)，153(48)； ESI-MS m/z 439[M+H] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)， 6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)， 1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：70.2(C-2)，46.1(C-3)，197.8(C-4)，164.9(C-5)，97.1(C-6)， 166.5(C-7)，95.8(C-8)，163.6(C-9)，102.5(C-10)，115.3(C-1’)，154.2(C-2’)， 117.2(C-3’)，158.1(C-4’)，103.9(C-5’)，126.8(C-6’)，22.8(C-1”)，122.0(C-2”)， 138.3(C-3”)，40.0(C-4”)，26.7(C-5”)，124.2(C-6”)，132.0(C-7”)，17.9(C-8”)， 16.4(C-3”Me)，25.9(C-7”Me)，56.0(C-4’OMe)。 9、一种异黄酮类化合物83′-香叶基-5，7，4′，5′-四羟基二氢异黄酮，其特征在于它具有下列结构式和理化性质：化合物8 黄色油状物 UVλ max (MeOH)nm：262.0； IRν max cm -1 (KBr)：3371，2964，2922，2854，1650，1614，1574，1514，1441，1367， 1306，1283，1177，1051，839，822，793； HREIMS m/z 422.1719[M] + (Calc.422.1729for C 25 H 26 O 6 )； EIMS m/z(rel.int.)：422(16)，353(27)，337(14)，300(67)，153(93)，123(49)， 69(100)； ESI-MS m/z 423[M+1] + ； 1 HNMR(CDCI 3 )：7.96(H-2)，6.20(H-6)，6.32(H-8)，6.32(H-2’)，6.86(H-6’)， 3.34(H-1”)，5.32(H-2”)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.55(H-8”)， 1.71(H-3”Me)，1.58(H-7”Me)； 13 CNMR(CDCI 3 )：153.5(C-2)，124.0(C-3)，181.1(C-4)，162.7(C-5)，98.9(C-6)， 165.0(C-7)，93.6(C-8)，158.5(C-9)，105.2(C-10)，121.7(C-1’)，121.0(C-2’)， 128.5(C-3’)，143.5(C-4’)，144.6(C-5’)，113.6(C-6’)，28.3(C-1”)，122.8(C-2”)， 135.6(C-3”)，39.7(C-4”)，27.9(C-5”)，124.2(C-6”)，131.0(C-7”)，16.6(C-8”)， 15.0(C-3”Me)，24.7(C-7”Me)。
11：如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤： (1)大红袍药材粉碎，用药材5-10倍量W/V60％-90％乙醇溶剂在50-90 ℃下进行加热提取1-3次，每次0.5-2h，得到提取液； (2)提取液在压力98Kpa，温度50-90℃下减压浓缩，把浓缩液分散在相同重量的水中制成混悬液； (3)用与混悬液等体积的氯仿萃取三次，合并萃取液，氯仿萃取液在压力 98Kpa，30-50℃温度下减压浓缩后得氯仿萃取物； (4)分离化合物 i氯仿萃取物用等量得硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶ 乙酸乙酯5∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1，馏分2，馏分3，馏分4，馏分5；馏分1用反相C18柱分离，甲醇∶水8∶2V/V洗脱，得化合物3；用甲醇∶ 水7∶3V/V洗脱得化合物7；馏分2用葡聚糖凝胶LH-20分离，用甲醇洗脱得化合物1；馏分3用反相C18柱分离，甲醇∶水7∶3V/V，得化合物2；馏分4 用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物5；馏分5用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4-7∶3V/V洗脱，得化合物8； ii氯仿萃取物用等量硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶丙酮4∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1与馏分2，馏分1再用葡聚糖凝胶LH-20 分离得到化合物6；馏分2用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物4。 11、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病药物中的应用。 12、如权利要求1-9任一项所述的异黄酮类化合物在制备B细胞型慢性淋巴细胞白血病药物中的应用。

说明书

异黄酮类化合物及其制备和应用
    技术领域：

    本发明涉及天然药物化学，具体涉及从大红袍(Myrsine Africana L.)的茎中提取分离的异黄酮类化合物及其制备方法与在制备免疫抑制剂或治疗各种免疫性疾病药物方面的应用。

    背景技术：

    已知天然存在的植物异黄酮表现广泛的生物活性，包括抗氧化，对信号传导及酶活性的调节；对人癌细胞的有丝分裂的抑制和细胞毒性；增加毛细管的渗透性；增加细胞粘着；增加血管平滑肌对血管松弛剂的反应；兴奋雌激素受体等。

    这些生物活性产生了一定的治疗作用，包括治疗和预防子宫内膜异位、子宫纤维瘤、高脂血症、心血管疾病、月经前综合症、绝精症状如骨质疏松和老年痴呆、良性前列腺肥大和癌症如前列腺、乳腺和大肠癌等。

    但异黄酮类化合物还具有其它活性，需要进一步深入研究。

    大红袍为紫金牛科铁仔属植物铁仔(Myrsine Africana L.)的根与茎叶，《贵州民间药物》记载：“祛风湿，活血。治痢疾。”《云南中草药》记载：消炎，止痛，止痢。治牙痛，肠炎，痢疾。中华本草中记载其功能主治为：祛风止痛，清热利湿，收敛止血。主治：风湿痹痛，牙痛，泄泻，痢疾，血崩，便血，肺结核咯血。

    大红袍含有多种异黄酮类化合物，但对它的化学成分研究较少，尤其未见报道大红袍中的化学成分在制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病方面的研究。

    发明内容：

    本发明要解决的技术问题在于研究大红袍多种异黄酮类化合物及其制备和应用。

    本发明从中药大红袍(Myrsine Africana L.)中提取分离得到8个新的异黄酮类化合物，并发现它们具有免疫抑制活性。

    本发明提供了一种异黄酮类化合物，结构通式如式I所示

    式中，当编号2与3的碳原子之间为双键时，

    R1＝H，R3＝OH，R4＝H或

    R1＝OH，R3＝OH，R4＝H或

    R1＝H，R3＝OH，R4＝OH或

    R1＝H，R2与R3形成如下六元环：

    或

    编号2与3的碳原子之间为单键时，

    R1＝OH，R3＝OH，R4＝H或

    R1＝OH，R3＝OH，R4＝H或

    R1＝OH，R3＝OH，R4＝H

    具体的异黄酮类化合物如下表示：

    化合物1(3′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮)，黄色油状物。

    UVλmax(MeOH)：262.0；

    HREIMS：m/z 422.1743[M]+(Calc.422.1729 for C25H26O6)；

    EIMS：m/z(rel.int.)：353(10)，299(38)，128(38)，86(100)，69(79)，59(61)，55(85)；

    ESI-MS：m/z 423[M+H]+；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3352，2924，2854，1649，1610，1500，1448，1364，1306，1259，1200，1167，1150，1094，1051，1038，820；

    1HNMR(CDCI3)：7.93(H-2)，6.36(H-6)，6.43(H-8)，6.51(H-5’)，6.89(H-6’)，3.56(H-1”)，5.31(H-1’)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.59(H-8”)，1.84(H-3”Me)，1.67(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：155.5(C-2)，123.9(C-3)，182.3(C-4)，162.7(C-5)，100.5(C-6)，163.5(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，105.7(C-10)，112.7(C-1’)，154.5(C-2’)，117.4(C-3’)，157.5(C-4’)，109.5(C-5’)，128.2(C-6’)，26.6(C-1”)，121.9(C-2”)，139.1(C-3”)，39.6(C-4”)，26.0(C-5”)，124.1(C-6”)，132.3(C-7”)，16.6(C-8”)，15.4(C-3”Me)，23.1(C-7”Me)。

    化合物1

    化合物2(5，7，4′-三羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]异黄酮)白色固体状物，mp：179.3-180.9

    UVλmax(MeOH)：262.0；

    HREIMS：m/z 424.1890[M]+(Calc.424.1886 for C25H28O6)；

    EIMSm/z(rel.int.)：424(3.5)，406(39)，338(16)，337(22)，335(22)，321(33)，284(100)，283(73)，153(60)；

    ESI-MS：m/z 407[M-OH]+；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3362，2968，2935，1653，1616，1506，1446，1364，1263，1198，1047，825，669；

    1HNMR(CDCI3)：8.12(H-2)，6.27(H-6)，6.40(H-8)，7.35(H-2’)，6.89(H-5’)，7.27(H-6’)，3.38(H-1”)，5.40(H-2”)，2.05(H-4”)，1.52(H-5”)，1.41(H-6”)，1.12(H-8”)，1.73(H-3”Me)，1.12(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.5(C-2)，123.7(C-3)，181.0(C-4)，163.3(C-5)，99.2(C-6)，164.4(C-7)，93.8(C-8)，158.4(C-9)，105.5(C-10)，122.5(C-1’)，130.5(C-2’)，128.1(C-3’)，155.3(C-4’)，114.9(C-5’)，127.9(C-6’)，28.3(C-1”)，122.7(C-2”)，136.1(C-3”)，40.34(C-4”)，22.7(C-5”)，43.7(C-6”)，69.5(C-7”)，29.0(C-8”)，15.5(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。

    化合物2

    化合物3(5，7-二羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3″：3′，4′)]异黄酮)，黄色油状物

    UVλmax(MeOH)nm：290.0；

    HREIMS：m/z 404.1635[M]+(Calc.404.1624 for C25H24O5)；

    EIMS m/z(rel.int.)：404(5)，322(23)，321(100)；

    ESI-MS：m/z 405[M+H]+；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3339，2924，1652，1618，1578，1491，1448，1360，1306，1261，1180，1045，831；

    1HNMR(CDCI3)：8.20(H-2)，6.29(H-6)，6.42(H-8)，7.31(H-2’)，6.85(H-5’)，7.33(H-6’)，6.49(H-4”)，5.75(H-5”)，1.71(H-7”)，2.13(H-8”)，5.13(H-9”)，1.57(H-1”)，1.40(H-6”Me)，1.64(H-10”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.9(C-2)，123.1(C-3)，181.0(C-4)，163.2(C-5)，99.2(C-6)，164.4(C-7)，93.9(C-8)，158.9(C-9)，105.4(C-10)，123.6(C-1’)，127.4(C-2’)，121.1(C-3’)，153.6(C-4’)，115.9(C-5’)，130.3(C-6’)，122.7(C-4”)，130.0(C-5”)，99.0(C-6”)，41.4(C-7”)，22.8(C-8”)，124.3(C-9”)，131.4(C-10”)，17.0(C-11”)，26.3(C-6”Me)，25.2(C-10”Me)。

    化合物3

    化合物4(5，7，4″，5″四羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3″：3′，4′)]异黄酮)，黄色油状物

    UVλmax(MeOH)nm：290.0；

    HREIMS：m/z 442.1989[M]+(Cal.442.1992 for C25H30O7)；

    EIMS m/z rel.int.：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)；

    ESI-MS m/z：425[M-OH]+；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，  1379，1269，1184，1465，835，800；

    1HNMR(CDCI3)：8.08(H-2)，6.22(H-6)，6.34(H-8)，7.61(H-2’)，6.81(H-5’)，7.34(H-6’)，4.58(H-4”)，3.65(H-5”)，1.85(H-7”)，2.17(H-8”)，5.16(H-9”)，1.65(H-1”)，1.19(H-6”Me)，1.69(H-10”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.8(C-2)，123.2(C-3)，181.0(C-4)，162.7(C-5)，99.0(C-6)，164.9(C-7)，93.7(C-8)，158.5(C-9)，105.1(C-10)，123.5(C-1’)，128.7(C-2’)，124.6(C-3’)，152.9(C-4’)，116.5(C-5’)，129.7(C-6’)，69.1(C-4”)，73.2(C-5”)，80.3(C-6”)，38.7(C-7”)，21.1(C-8”)，124.3(C-9”)，131.2(C-10”)，16.5(C-11”)，17.1(C-6”Me)，24.7(C-10”Me)。

    化合物4

    化合物5(5，7，2′，4′-四羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]二氢异黄酮)黄色油状物；

    UVλmax(MeOH)nm：290.0；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269，1184，1465，835，800；

    HREIMS m/z 442.1989[M+](Cal.442.1992 for C25H30O7)；

    EIMS m/z(rel.int.)：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)；

    ESI-MS m/z 425[M-OH]+；

    1HNMR(CDCI3)：4.60(H-2α)，4.70(H-2β)，4.17(H-3)，5.97(H-6)，5.97(H-8)，6.43(H-5’)，6.93(H-6’)，3.43(H-1”)，5.25(H-2”)，1.93(H-4”)，1.46(H-5”)，1.36(H-6”)，1.13(H-8”)，1.77(H-3”Me)，1.13(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：70.4(C-2)，46.1(C-3)，197.9(C-4)，164.9(C-5)，96.2(C-6)，167.0(C-7)，95.1(C-8)，163.8(C-9)，102.2(C-10)，114.6(C-1’)，154.1(C-2’)，116.3(C-3’)，155.8(C-4’)，107.7(C-5’)，126.5(C-6’)，22.7(C-1”)，122.8(C-2”)，135.3(C-3”)，40.4(C-4”)，22.5(C-5”)，43.7(C-6”)，69.4(C-7”)，29.0(C-8”)，15.6(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。

    化合物5

    化合物6(3′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基二氢异黄酮.)，黄色油状物

    UVλmax(MeOH)nm：290.0，230.0；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3304，2926，1639，1614，1450，1379，1263，1614，1450，1379，1263，1182，1163，1091，835；

    HREIMS m/z 424.1882[M+](Calc.424.1886 for C25H28O6)；

    EIMSm/z(rel.int.)：424(12)，301(46)，201(26)，187(36)，179(31)，153(100)，123(60)，91(35)，69(80)；

    ESI-MS m/z 425[M+H]+；

    1HNMR(CDCI3)：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)，6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)，1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：70.0(C-2)，45.6(C-3)，197.5(C-4)，165.1(C-5)，97.2(C-6)，166.6(C-7)，95.8(C-8)，163.4(C-9)，102.0(C-10)，115.1(C-1’)，154.2(C-2’)，115.8(C-3’)，155.5(C-4’)，108.9(C-5’)，126.1(C-6’)，23.0(C-1”)，121.7(C-2”)，139.4(C-3”)，39.9(C-4”)，26.6(C-5”)，124.0(C-6”)，132.3(C-7”)，18.0(C-8”)，16.5(C-3”Me)，26.0(C-7”Me)。

    化合物6

    化合物7(3′-香叶基-4′-甲氧基-5，7，2′-三羟基二氢异黄酮)，黄色油状物

    UVλmax(MeOH)nm：288，226；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3342，2966，2925，1643，1634，1495，1454，1385，1315，1275，1227，1182，1163，1094，835，756；

    HREIMS m/z 438.2057[M+](Calc.438.2042 for C26H30O6)；

    EIMS m/z(rel.int.)：438(28)，353(25)，327(15)，316(29)，315(100)，286(14)，215(22)，204(11)，203(31)，201(26)，189(30)，153(48)；

    ESI-MS m/z 439[M+H]+；

    1HNMR(CDCI3)：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)，6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)，1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：70.2(C-2)，46.1(C-3)，197.8(C-4)，164.9(C-5)，97.1(C-6)，166.5(C-7)，95.8(C-8)，163.6(C-9)，102.5(C-10)，115.3(C-1’)，154.2(C-2’)，117.2(C-3’)，158.1(C-4’)，103.9(C-5’)，126.8(C-6’)，22.8(C-1”)，122.0(C-2”)，138.3(C-3”)，40.0(C-4”)，26.7(C-5”)，124.2(C-6”)，132.0(C-7”)，17.9(C-8”)，16.4(C-3”Me)，25.9(C-7”Me)，56.0(C-4’OMe)。

    化合物7

    化合物8(3′-香叶基-5，7，4′，5′-四羟基二氢异黄酮)，黄色油状物；

    UVλmax(MeOH)nm：262.0；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3371，2964，2922，2854，1650，1614，1574，1514，1441，1367，1306，1283，1177，1051，839，822，793；

    HREIMS m/z 422.1719[M]+(Calc.422.1729 for C25H26O6)；

    EIMS m/z(rel.int.)：422(16)，353(27)，337(14)，300(67)，153(93)，123(49)，69(100)；

    ESI-MS m/z 423[M+1]+；

    1HNMR(CDCI3)：7.96(H-2)，6.20(H-6)，6.32(H-8)，6.32(H-2’)，6.86(H-6’)，3.34(H-1”)，5.32(H-2”)，2.08(H-4”)， 2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.55(H-8”)，1.71(H-3”Me)，1.58(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.5(C-2)，124.0(C-3)，181.1(C-4)，162.7(C-5)，98.9(C-6)，165.0(C-7)，93.6(C-8)，158.5(C-9)，105.2(C-10)，121.7(C-1’)，121.0(C-2’)，128.5(C-3’)，143.5(C-4’)，144.6(C-5’)，113.6(C-6’)，28.3(C-1”)，122.8(C-2”)，135.6(C-3”)，39.7(C-4”)，27.9(C-5”)，124.2(C-6”)，131.0(C-7”)，16.6(C-8”)，15.0(C-3”Me)，24.7(C-7”Me)。

    化合物8

    本发明的另一目的是提供了异黄酮类化合物式I的制备方法，该方法包括下列步骤：

    (1)大红袍药材粉碎，用药材5-10倍量W/V 60％-90％乙醇溶剂在50-90℃下进行加热提取1-3次，每次0.5-2h，得到提取液；

    (2)提取液在压力98Kpa，温度50-90℃下减压浓缩，把浓缩液分散在相同重量的水中制成混悬液；

    (3)用与混悬液等体积的氯仿萃取三次，合并萃取液，氯仿萃取液在压力98Kpa，30-50℃温度下减压浓缩后得氯仿萃取物；

    (4)分离化合物

    i氯仿萃取物用等量得硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶乙酸乙酯5∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1，馏分2，馏分3，馏分4，馏分5；馏分1用反相C18柱分离，甲醇∶水8∶2V/V洗脱，得化合物3；用甲醇∶水7∶3V/V洗脱得化合物7；馏分2用葡聚糖凝胶LH-20分离，用甲醇洗脱得化合物1；馏分3用反相C18柱分离，甲醇∶水7∶3V/V，得化合物2；馏分4用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物5；馏分5用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4-7∶3V/V洗脱，得化合物8；

    ii氯仿萃取物用等量硅胶拌样，用硅胶柱层析进行分离，依次用石油醚∶丙酮4∶1-2∶1V/V梯度洗脱，得到馏分1与馏分2，馏分1再用葡聚糖凝胶LH-20分离得到化合物6；馏分2用反相C18柱分离，甲醇∶水6∶4V/V得化合物4。

    本发明所述大红袍采集于云南省的紫金牛科铁仔属植物铁仔(MyrsineAfricana L.)的茎。本发明制备方法简便。

    本发明的另一目的是提供了异黄酮类化合物式I在制备免疫抑制剂或治疗免疫性疾病的药物。

    本发明免疫抑制活性实验：

    本发明人对上述八种新黄酮类化合物的免疫抑制活性进行了研究，测试了其对LPS诱导的B淋巴细胞增殖功能的影响及ConA诱导的T淋巴细胞增殖功能的影响。并同时对其细胞毒性进行了测试。发现该类化合物对B淋巴细胞与T淋巴细胞的增殖具有显著的抑制作用，可用于制备免疫抑制剂或治疗各种免疫性疾病的药物，如类风湿关节炎，红斑狼疮等，及用于制备B细胞型慢性淋巴细胞白血病药物。

    【具体实施方式】

    实施例1：化合物1的制备

    首先用大红袍药材2kg，加16L(首次多加2L)80％乙醇在80℃加热提取3次，每次1小时。然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物91.3g。

    取氯仿萃取物15g用等量硅胶拌样，用硅胶柱色谱(300-400目)分离，石油醚∶乙酸乙酯(3∶1)洗脱，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物上葡聚糖凝胶LH-20(甲醇等度洗脱)，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱浓缩得化

    化合物1

    化合物1的理化性质与波谱特征

    化合物1(3′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基异黄酮)，黄色油状物。

    UVλmax(MeOH)：262.0；

    HREIMS：m/z 422.1743[M]+(Calc.422.1729 for C25H26O6)；

    EIMS：m/z(rel.int.)：353(10)，299(38)，128(38)，86(100)，69(79)，59(61)，55(85)；

    ESI-MS：m/z 423[M+H]+；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3352，2924，2854，1649，1610，1500，1448，1364，1306，1259，1200，1167，1150，1094，1051，1038，820；

    1HNMR(CDCI3)：7.93(H-2)，6.36(H-6)，6.43(H-8)，6.51(H-5’)，6.89(H-6’)，3.56(H-1”)，5.31(H-1’)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.59(H-8”)，1.84(H-3”Me)，1.67(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：155.5(C-2)，123.9(C-3)，182.3(C-4)，162.7(C-5)，100.5(C-6)，163.5(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，105.7(C-10)，112.7(C-1’)，154.5(C-2’)，117.4(C-3’)，157.5(C-4’)，109.5(C-5’)，128.2(C-6’)，26.6(C-1”)，121.9(C-2”)，139.1(C-3”)，39.6(C-4”)，26.0(C-5”)，124.1(C-6”)，132.3(C-7”)，16.6(C-8”)，15.4(C-3”Me)，23.1(C-7”Me)。

    化合物1

    实施例2：化合物2的制备

    首先用大红袍药材2kg，加12L(首次多加2L)70％乙醇在90℃加热提取2次，每次1小时，然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物82.5g。

    取氯仿萃取物20g，用等量硅胶拌样，用硅胶柱色谱(300-400目)分离，石油醚∶乙酸乙酯(2∶1)洗脱，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物再用反相C18柱分离，甲醇∶水(7∶3)洗脱，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱液浓缩得化合物2。

    化合物2的理化性质与波谱特征

    化合物2(5，7，4′-三羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]异黄酮)白色固体状物，mp：179.3-180.9；

    UVλmax(MeOH)：262.0；

    HREIMS：m/z 424.1890[M]+(Calc.424.1886 for C25H28O6)；

    EIMSm/z(rel.int.)：424(3.5)，406(39)，338(16)，337(22)，335(22)，321(33)，284(100)，283(73)，153(60)；

    ESI-MS：m/z 407[M-OH]+；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3362，2968，2935，1653，1616，1506，1446，1364，1263，1198，1047，825，669；

    1HNMR(CDCI3)：8.12(H-2)，6.27(H-6)，6.40(H-8)，7.35(H-2’)，6.89(H-5’)，7.27(H-6’)，3.38(H-1”)，5.40(H-2”)，2.05(H-4”)，1.52(H-5”)，1.41(H-6”)，1.12(H-8”)，1.73(H-3”Me)，1.12(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.5(C-2)，123.7(C-3)，181.0(C-4)，163.3(C-5)，99.2(C-6)，164.4(C-7)，93.8(C-8)，158.4(C-9)，105.5(C-10)，122.5(C-1’)，130.5(C-2’)，128.1(C-3’)，155.3(C-4’)，114.9(C-5’)，127.9(C-6’)，28.3(C-1”)，122.7(C-2”)，136.1(C-3”)，40.34(C-4”)，22.7(C-5”)，43.7(C-6”)，69.5(C-7”)，29.0(C-8”)，15.5(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)。

    化合物2

    实施例3：化合物3的制备

    首先用大红袍药材2kg，加16L(首次多加2L)80％乙醇在80℃加热提取3次，每次1小时。然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物91.3g。

    取氯仿萃取物15g，用等量硅胶拌样，用硅胶柱(200-300目)色谱分离，石油醚∶乙酸乙酯(5∶1)洗脱，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物再用反相C18柱分离，甲醇∶水(8∶2)洗脱，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱液浓缩得化合物3。

    化合物3的理化性质与波谱特征

    化合物3(5，7-二羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3 ″：3′，4′)]异黄酮)，黄色油状物；

    UVλmax(MeOH)nm：290.0；

    HREIMS：m/z 404.1635[M+](Calc.404.1624 for C25H24O5)；

    EIMS m/z(rel.int.)：404(5)，322(23)，321(100)；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3339，2924，1652，1618，1578，1491，1448，1360，1306，1261，1180，1045，831；

    1HNMR(CDCI3)：8.20(H-2)，6.29(H-6)，6.42(H-8)，7.31(H-2’)，6.85(H-5’)，7.33(H-6’)，6.49(H-4”)，5.75(H-5”)，1.71(H-7”)，2.13(H-8”)，5.13(H-9”)，1.57(H-1”)，1.40(H-6”Me)，1.64(H-10”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.9(C-2)，123.1(C-3)，181.0(C-4)，163.2(C-5)，99.2(C-6)，164.4(C-7)，93.9(C-8)，158.9(C-9)，105.4(C-10)，123.6(C-1’)，127.4(C-2’)，121.1(C-3’)，153.6(C-4’)，115.9(C-5’)，130.3(C-6’)，122.7(C-4”)，130.0(C-5”)，99.0(C-6”)，41.4(C-7”)，22.8(C-8”)，124.3(C-9”)，131.4(C-10”)，17.0(C-11”)，26.3(C-6”Me)，25.2(C-10”Me)。

    化合物3

    实施例4：化合物4的制备

    首先用大红袍药材2kg，加12L(首次多加2L)70％乙醇在90℃加热提取2次，每次1小时，然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物82.5g。

    取氯仿萃取物20g用硅胶拌样，用硅胶柱色谱分离，石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物再用反相C18柱分离，甲醇∶水(6∶4)，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱液浓缩得化合物4。

    化合物4的理化性质与波谱特征

    化合物4(4，5，7，4″，5″四羟基-[6″-甲基-6″-(4-甲基-3-戊烯基)吡喃并(2″，3 ″：3′，4′)]异黄酮)，黄色油状物；

    UVλmax(MeOH)nm：290.0；

    HREIMS：m/z 442.1989[M]+(Cal.442.1992 for C25H30O7)；

    EIMS m/z rel.int.：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)；

    ESI-MS m/z：425[M-OH]+；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269，1184，1465，835，800；

    1HNMR(CDCI3)：8.08(H-2)，6.22(H-6)，6.34(H-8)，7.61(H-2’)，6.81(H-5’)，7.34(H-6’)，4.58(H-4”)，3.65(H-5”)，1.85(H-7”)，2.17(H-8”)，5.16(H-9”)，1.65(H-1”)，1.19(H-6”Me)，1.69(H-10”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.8(C-2)，123.2(C-3)，181.0(C-4)，162.7(C-5)，99.0(C-6)，164.9(C-7)，93.7(C-8)，158.5(C-9)，105.1(C-10)，123.5(C-1’)，128.7(C-2’)，124.6(C-3’)，152.9(C-4’)，116.5(C-5’)，129.7(C-6’)，69.1(C-4”)，73.2(C-5”)，80.3(C-6”)，38.7(C-7”)，21.1(C-8”)，124.3(C-9”)，131.2(C-10”)，16.5(C-11”)，17.1(C-6”Me)，24.7(C-10”Me)。

    化合物4

    实施例5：化合物5的制备

    首先用大红袍药材2kg，加16L(首次多加2L)80％乙醇在80℃加热提取3次，每次1小时。然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物91.3g。

    取氯仿萃取物20g用等量硅胶拌样，用硅胶柱色谱分离，石油醚∶乙酸乙酯(2∶1)洗脱，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物再用反相C18柱分离，甲醇∶水(6∶4)洗脱，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱液浓缩得化合物5。

    化合物5的理化性质与波谱特征

    化合物5(5，7，2′，4′-四羟基-3′-[7-羟基-3，7-二甲基-2(E)-辛烯]二氢异黄酮)黄色油状物

    UVλmax(MeOH)nm：290.0；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3367，2966，2931，1699，1684，1635，1452，1379，1269，1184，1465，835，800；

    HREIMS m/z 442.1989[M]+(Cal.442.1992 for C25H30O7)；

    EIMS m/z(rel.int.)：442(5)，424(49)，300(42)，299(45)，153(100)；

    ESI-MS m/z 425[M-OH]+；

    1HNMR(CDCI3)：4.60(H-2α)，4.70(H-2β)，4.17(H-3)，5.97(H-6)，5.97(H-8)，6.43(H-5’)，6.93(H-6’)，3.43(H-1”)，5.25(H-2”)，1.93(H-4”)，1.46(H-5”)，1.36(H-6”)，1.13(H-8”)，1.77(H-3”Me)，1.13(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：70.4(C-2)，46.1(C-3)，197.9(C-4)，164.9(C-5)，96.2(C-6)，167.0(C-7)，95.1(C-8)，163.8(C-9)，102.2(C-10)，114.6(C-1’)，154.1(C-2’)，116.3(C-3’)，155.8(C-4’)，107.7(C-5’)，126.5(C-6’)，22.7(C-1”)，122.8(C-2”)，135.3(C-3”)，40.4(C-4”)，22.5(C-5”)，43.7(C-6”)，69.4(C-7”)，29.0(C-8”)，15.6(C-3”Me)，29.0(C-7”Me)；

    化合物5

    实施例6：化合物6的分离制备

    首先用大红袍药材2kg，加16L(首次多加2L)80％乙醇在80℃加热提取3次，每次1小时。然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物91.3g。

    取氯仿萃取物20g用等量硅胶拌样，用硅胶柱色谱分离，石油醚∶丙酮(4∶1-2∶1梯度洗脱)，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物再用葡聚糖凝胶LH-20(甲醇洗脱)，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱液浓缩得化合物6。

    化合物6的理化性质与波谱特征

    化合物6(3′-香叶基-5，7，2′，4′-四羟基二氢异黄酮)，黄色油状物

    UVλmax(MeOH)nm：290.0，230.0；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3304，2926，1639，1614，1450，1379，1263，1614，1450，1379，1263，1182，1163，1091，835；

    HREIMS m/z 424.1882[M]+(Calc.424.1886 for C25H28O6)；

    EIMSm/z(rel.int.)：424(12)，301(46)，201(26)，187(36)，179(31)，153(100)，123(60)，91(35)，69(80)；

    ESI-MS m/z 425[M+H]+；

    1HNMR(CDCI3)：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)，6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)，1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：70.0(C-2)，45.6(C-3)，197.5(C-4)，165.1(C-5)，97.2(C-6)，166.6(C-7)，95.8(C-8)，163.4(C-9)，102.0(C-10)，115.1(C-1’)，154.2(C-2’)，115.8(C-3’)，155.5(C-4’)，108.9(C-5’)，126.1(C-6’)，23.0(C-1”)，121.7(C-2”)，139.4(C-3”)，39.9(C-4”)，26.6(C-5”)，124.0(C-6”)，132.3(C-7”)，18.0(C-8”)，16.5(C-3”Me)，26.0(C-7”Me)。

    化合物6

    实施例7：化合物7的制备

    首先用大红袍药材2kg，加16L(首次多加2L)80％乙醇在80℃加热提取3次，每次1小时。然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物91.3g。

    取氯仿萃取物15g用等量硅胶拌样，用硅胶柱色谱分离，石油醚∶乙酸乙酯(4∶1)洗脱，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物再用反相C18柱分离，甲醇∶水(7∶3)洗脱，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱液浓缩得化合物7。化合物7的理化性质与波谱特征

    化合物7(3′-香叶基-4′-甲氧基-5，7，2′-三羟基二氢异黄酮)，黄色油状物

    UVλmax(MeOH)nm：288.0，226.0；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3342，2966，2925，1643，1634，1495，1454，1385，1315，1275，1227，1182，1163，1094，835，756；

    HREIMS m/z 438.2057[M]+(Calc.438.2042 for C26H30O6)；

    EIMS m/z(rel.int.)：438(28)，353(25)，327(15)，316(29)，315(100)，286(14)，215(22)，204(11)，203(31)，201(26)，189(30)，153(48)；

    ESI-MS m/z 439[M+H]+；

    1HNMR(CDCI3)：4.66(H-2α)，4.76(H-2β)，4.00(H-3)，5.95(H-6)，5.95(H-8)，6.39(H-5’)，7.12(H-6’)，3.45(H-1”)，5.24(H-2”)，2.08(H-4”)，2.09(H-5”)，5.03(H-6”)，1.57(H-8”)，1.80(H-3”Me)，1.65(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：70.2(C-2)，46.1(C-3)，197.8(C-4)，164.9(C-5)，97.1(C-6)，166.5(C-7)，95.8(C-8)，163.6(C-9)，102.5(C-10)，115.3(C-1’)，154.2(C-2’)，117.2(C-3’)，158.1(C-4’)，103.9(C-5’)，126.8(C-6’)，22.8(C-1”)，122.0(C-2”)，138.3(C-3”)，40.0(C-4”)，26.7(C-5”)，124.2(C-6”)，132.0(C-7”)，17.9(C-8”)，16.4(C-3”Me)，25.9(C-7”Me)，56.0(C-4’OMe)。

    化合物7

    实施例8：化合物8的制备

    首先用大红袍药材2kg，加12L(首次多加2L)70％乙醇在90℃加热提取2次，每次1小时，然后提取液在减压(压力98Kpa)，温度在50℃浓缩后，把浓缩液分散在2L水中制成混悬液。加氯仿萃取三次，每次2L，得氯仿萃取液，氯仿萃取液在40℃下减压浓缩(压力98Kpa)，得氯仿萃取物82.5g。

    取氯仿萃取物20g用等量硅胶拌样，用硅胶柱色谱分离，石油醚∶乙酸乙酯(2∶1-1∶1)梯度洗脱，用TLC进行检视，合并洗脱液，浓缩，洗脱物再用反相C18柱分离，甲醇∶水(6∶4-7∶3)，根据TLC检视收集洗脱液，洗脱液浓缩得化合物8。

    化合物8的理化性质与波谱特征

    化合物8(3′-香叶基-5，7，4′，5′-四羟基二氢异黄酮)，黄色油状物；

    UVλmax(MeOH)nm：262.0；

    IRνmaxcm-1(KBr)：3371，2964，2922，2854，1650，1614，1574，1514，1441，1367，1306，1283，1177，1051，839，822，793；

    HREIMS m/z 422.1719[M]+(Calc.422.1729 for C25H26O6)；

    EIMS m/z(rel.int.)：422(16)，353(27)，337(14)，300(67)，153(93)，123(49)，69(100)；

    ESI-MS m/z 423[M+1]+；

    1HNMR(CDCI3)：7.96(H-2)，6.20(H-6)，6.32(H-8)，6.32(H-2’)，6.86(H-6’)，3.34(H-1”)，5.32(H-2”)，2.08(H-4”)，2.10(H-5”)，5.06(H-6”)，1.55(H-8”)，1.71(H-3”Me)，1.58(H-7”Me)；

    13CNMR(CDCI3)：153.5(C-2)，124.0(C-3)，181.1(C-4)，162.7(C-5)，98.9(C-6)，165.0(C-7)，93.6(C-8)，158.5(C-9)，105.2(C-10)，121.7(C-1’)，121.0(C-2’)，128.5(C-3’)，143.5(C-4’)，144.6(C-5’)，113.6(C-6’)，28.3(C-1”)，122.8(C-2”)，135.6(C-3”)，39.7(C-4”)，27.9(C-5”)，124.2(C-6”)，131.0(C-7”)，16.6(C-8”)，15.0(C-3”Me)，24.7(C-7”Me)。

    化合物8

    实施例9：免疫抑制活性试验：

    (1)试验方法：

    ①试验动物

    BALB/c纯系小鼠，雌性，18-20克，购自中国科学院上海实验动物中心，动物生产许可证号：SYXK(沪)2002-0033号。

    ②小鼠脾脏淋巴细胞的制备：

    小鼠脱脊椎处死，无菌取其脾脏制备单个细胞悬液，红细胞裂解液去除红细胞，用含2％FBS洗3此后，用含10％FBS的RPMI-1640培养液洗1此并将细胞浓度调至4×106/ml。

    ③MTT法检测化合物对小鼠脾脏淋巴细胞活性的影响：

    小鼠脾脏淋巴细胞悬液100μl(4×105/孔)接种于96孔板，同时加入不同浓度的化合物，另设相应的溶媒对照及培养液本底对照，总体积为200μl。37℃，5％CO2培养箱中培养上清，再加入150μlDMSO溶解细胞，用酶标仪于570nm处测定OD值。

    ④3H-TdR掺入法检测化合物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖功能地影响：

    小鼠脾脏淋巴细胞悬液100μl(4×105/孔)接种于96孔板，加入50μl ConA(终浓度5μg/ml)，或加入50μl LPS(终浓度10μg/ml)，不同浓度化合物50μl，总体积为200μl。每个浓度三复孔，并设相应的无ConA或无LPS对照孔以及无药物对照孔。37℃，5％CO2培养箱中培养48h。培养结束前8小时，每孔加入25μl3H-胸腺嘧啶核苷酸(10μCi/ml)。继续培养至实验结束。将细胞用细胞收集仪收集至玻璃纤维膜上，加入闪烁液后于Beta记数仪(MicroBeta Trilux，PerkinElmer)读取掺入细胞DNA的3H-TdR量，以cpm值代表细胞增殖的情况。

    (2)试验用样品

    化合物1，化合物2，化合物3，化合物4，化合物5，化合物6，化合物7，化合物8

    (3)试验结果

    Table1化合物1-8对小鼠脾脏淋巴细胞活性的影响

    化合物    浓度(μg/ml)     细胞死亡(％)  CC50(μg/ml)

              100              85.27

              10               15.66

                                             35.94

    化合物1   1                -9.19

              0.1              -2.18

              100              88.69

              10               56.53

                                             14.50

    化合物2   1                2.36

              0.1              -1.61

              100              65.69

              10               16.06

    化合物3   1                -17.07        49.05

              0.1              -2.38

              100              86.92

              10               28.85

    化合物4   1                3.96          19.42

              0.1              1.58

              100              76.86

    化合物5   10               11.70         40.27

              1                5.19

               0.1           2.61

               100           7.58

               10            15.87

                                          6.81

    化合物6    1             5.71

               0.1           5.31

               100           72.48

               10            8.22

                                          49.9

    化合物7    1             -17.18

               0.1           -11.68

               100           64.02

               10            16.46

    化合物8    1             19.48        31.7

               0.1           -0.82

    Table2化合物1-8对LPS诱导的B淋巴细胞增殖功能的影响

               浓度(μg/ml)  B细胞抑制    IC50       SI

                             (％)         (μg/ml)   (IC50/CC50)

               100           98.92

    化合物1    10            54.11

                                          1.61       22.32

               1             25.15

               0.1           20.16

               100           99.97

    化合物2    10            99.03

                                          0.60       24.2

               1             43.93

               0.1           10.34

               100           99.97

    化合物3    10            95.55

                                          1.22       40.2

               1             15.73

               0.1           11.39

                100            99.78

    化合物4     10             90.90                     16.2

                                            1.20

                1              26.56

                0.1            14.62

                100            99.92

    化合物5     10             44.38

                1              20.92        1.63         24.7

                0.1            9.77

                100            99.19

    化合物6     10             86.56

                1              33.77        1.11         6.13

                0.1            13.30

                100            98.77

    化合物7     10             77.15

                15.03          3.31

                1              -2.31

                0.1            -17.80

                100            97.18

    化合物8     10             21.47

                24.86          1.27

                1              11.58

                0.1            -2.23

    Table3化合物1-8对ConA诱导的T淋巴细胞增殖功能的影响

                浓度(μg/ml)   T细胞抑制    IC50          SI

                (％)           (μg/ml)     (IC50/CC50)

                100            98.91

    化合物1     10             58.59

                1              26.53        3.44          10.5

                0.1            21.94

                100            99.96

    化合物2     10             99.03        0.70          20.7

               1      43.93

               0.1    10.34

               100    99.97

    化合物3    10     95.55

               1      15.73    1.22      40.2

               0.1    11.39

               100    99.78

    化合物4    10     90.90

               1      26.56    2.17      9.0

               0.1    14.62

               100    99.22

    化合物5    10     40.63

               3.55   11.3

               1      15.00

               0.1    3.72

               100    99.29

    化合物6    10     86.71

               0.63   10.8

               1      48.54

               0.1    24.85

               100    99.60

    化合物7    10     82.74

               3.83   13.0

               1      9.62

               0.1    2.08

               100    98.53

    化合物8    10     39.99

               6.74   4.71

               1      10.31

               0.1    -12.52

    (4)试验结论

    试验结果表明，该类黄酮类化合物能显著的抑制T细胞与B细胞的增殖，表明该类化合物能够用于制备免疫抑制剂，并对自身免疫性疾病(如类风湿关节炎，红斑狼疮)具有治疗作用，同时由于该类化合物SI值(IC50/CC50)均较高，因此，其毒副作用较小，具有较宽的的治疗区间。