马钱子总生物碱制备的液体外用制剂.pdf

本发明涉及马钱子总生物碱制备的液体外用制剂的制剂处方及其制备，制剂处方由马钱子总生物碱和透皮吸收促进剂、溶剂、保湿剂、防腐剂等辅料按一定的比例组成；本发明的马钱子总生物碱的液体外用制剂包括喷雾剂、湿敷贴、搽剂或涂剂等药剂学所述的所有液体外用制剂，用于治疗跌打损伤、痈疽肿痛、风湿顽痹、类风湿关节痛、麻木瘫痪等病症。本制剂可克服马钱子口服易中毒缺点，研究结果表明本制剂安全有效，且本制剂使用方便舒适、皮肤刺激性小、患者乐于接受，生产成本低，能产生良好的社会效益和经济效益。

1.  马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，由主药马钱子总生物碱及合适的辅料制备而成，其特征在于，主药马钱子总生物碱0.1g≤马钱子总生物碱≤200g；
辅料为：
10ml≤通透促进剂≤2000ml
0≤保湿剂≤3000ml

0.  5g≤防腐剂≤50g或1000ml≤防腐剂≤3500ml
加溶剂至10000ml。

2、  根据权利要求1所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，1000ml≤保湿剂≤3000ml。

3.  根据权利要求1所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，所述的溶剂由下列一种或多种联合组成：水、甘油、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、乙酸乙酯、植物油。

4.  根据权利要求1所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，由主药马钱子总生物碱及合适的辅料制备而成，其特征在于，主药马钱子总生物碱1g≤马钱子总生物碱≤40g；辅料为：
通透促进剂           100ml≤通透促进剂≤2000ml
保湿剂               1500ml≤保湿剂≤3000ml
防腐剂               2000ml≤防腐剂≤3500ml
加水至               10000ml

5、  根据权利要求1或2或3或4所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，马钱子总生物碱中士的宁的含量小于40％，马钱子碱含量大于20％。

6、  根据权利要求1或2或3或4所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，所述的通透促进剂由下列一种或多种联合组成：(1)氮酮；(2)薄荷醇、樟脑、薄荷油、桉叶油、冰片；(3)乙醇、异丙醇、异丁醇、正十二醇、丙二醇、甘油、乙酸乙酯；(4)油酸、月桂酸的甲酯或乙酯、肉豆蔻酸异丙酯。

7、  根据权利要求7所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，所述的通透促进剂为氮酮、丙二醇、桉叶油或薄荷油。

8、  根据权利要求1或2或3或4所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，所述的保湿剂由下列一种或多种联合组成：甘油、丙二醇、聚乙二醇、山梨醇；所述的防腐剂由下列一种或多种联合组成：尼泊金酯、苯甲酸及其盐、山梨酸及其盐；乙醇、甘油；桉叶油、薄荷油。

9.  根据权利要求1所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，所述剂型为喷雾剂、搽剂、涂剂或湿敷贴。

10.  根据权利要求4所述的马钱子总生物碱制备的液体外用制剂，其特征在于，10g≤马钱子总生物碱≤30g，100ml≤氮酮≤500ml，200ml≤丙二醇≤1000ml，2000ml≤甘油≤3000ml，再加水至10000ml。

马钱子总生物碱制备的液体外用制剂
技术领域
本发明涉及一种由马钱子总生物碱制备的液体外用制剂。
背景技术
马钱子为药典2005版一部收载的品种，其性味苦、寒，有大毒，归肝、脾经，有散结消肿、通络止痛之功效，用于跌打损伤、痈疽肿痛、风湿麻痹、类风湿关节痛、麻木瘫痪等病症。马钱子含士的宁、马钱子碱、番木鳖次碱、马钱子新碱、伪番木鳖碱、伪马钱子碱、4—羟基番木鳖次碱、番木鳖碱氮氧化物、马钱子碱氮氧化物、依卡精、4—羟基3—甲基番木鳖碱等多种生物碱，此外尚含有脂肪油、蛋白质、绿原酸、番木鳖苷等。其主要有效成分为士的宁和马钱子碱，药典规定马钱子中士的宁含量为1.2-2.2％，马钱子碱含量不少于0.8％。马钱子不宜生用，不宜多服久服、炮制后入丸散，用量为0.3-0.6g。
按药典规定服用马钱子时士的宁量为3.6-13.2mg，士的宁毒性极强，口服5-10mg即可出现中毒症状，故马钱子口服给药容易中毒，临床用安全性小。士的宁对脊髓有高度的选择性兴奋作用。小剂量即能提高脊髓反射性，缩短反射时间，提高反射强度及增强骨路肌收缩力，同时可兴奋大脑皮层的感觉分析器，使视觉、听觉及嗅觉更为敏锐；剂量稍大，很易过量引起中毒：表现为脊髓反射过强，并且兴奋扩散到整个脊髓，破坏了对抗肌的交互抑制过程，机体呈现全身强直性痉挛即所谓的脊髓惊跃，出现了微小刺激就导致全身强直，最后终因呼吸困难而死亡。内服有健胃作用。马钱子碱具有良好的镇痛、抗炎作用；抑制血小板的凝聚及抗血栓形成；能明显降低NO诱导软骨细胞的早期凋亡；具抗肿瘤作用，可用于治疗癌性疼痛；小鼠腹腔注射马钱子碱350μg/kg，产生兴奋、活动量增加，但腹腔注射马钱子碱14～23mg/kg小鼠出现明显镇静、闭目、活动量减少。
近30年来人们对药物经皮传递产生了极大的兴趣。主要集中在具有商业价值能提供全身血药水平的药物，如东莨菪碱、硝酸甘油、可乐定、雌二醇、睾酮、芬太尼。经皮传递系统的优点可避免胃肠道的局部刺激性，可避免药物的血药浓度剧烈波动以及减少给次数而提高患者的顺应性。近年来大量的文献报道采用经皮给药途径可使药物在全身分布很少而到达用药部位深层组织，用药部位下层的组织的药物浓度远远高于口服或注射途径给药。同时经皮给药时药物以恒定的速率缓慢通过皮肤，血药浓度可保持恒定，可避免一些药性剧烈药物因口服或注射给药出现峰浓度产生的毒副作用，即便出现中毒症状处理方法简便。
马钱子炮制后入丸散口服，外用一般为复方制剂。药品标准收载品种多为传统剂型：将处方药材直接粉碎成药粉如九分散，用时用酒调敷，使用极不方便，且有效成分不易从药粉溶解出来致有效成分浓度低，起效慢；也有将处方药材提取后制备成橡皮膏如跌打镇痛膏，但橡皮膏存在载药量低、皮肤刺激性等诸多缺点。将马钱子的有效部位马钱子总生物碱提取出来，制剂中士的宁和马钱子碱的含量可控制而制剂质量稳定，加入新型的经皮吸收促进剂可提高有效成分透皮量而提高临床疗效。郭立玮等报道将马钱子总生物碱制成涂膜剂，而文中对其制剂稳定性研究仅为两周，在两周内已出现轻微分层，且制剂过程中有诸多操作因素均会影响制剂的质量，不宜于工业化大生产。另有多篇文献报道了马钱子碱、马钱子碱脂质体的体外吸收和镇痛、抗炎的研究，马钱子所含多种生物碱均有较强药理作用，单用马钱子碱不利于保持马钱子药材原有的临床疗效，同时随着马钱子碱浓度增高其毒副作用可能增强。
发明内容
本发明的目的是提供马钱子总生物碱制备成液体外用剂型，可使马钱子总生物碱可被皮肤很好地吸收在局部给药皮肤下形成较高的药物浓度而提高临床疗效，同时本制剂用皮肤上，药物吸收速率恒定且速度较慢，可避免马钱子口服给药时士的宁出现峰浓度而中毒的现象。
本发明的目的是通过下述方式实现的：
马钱子总生物碱液体外用制剂，由主药马钱子总生物碱及合适的辅料制备而成，主药0.1g≤马钱子总生物碱≤200g；辅料为：
10ml≤通透促进剂≤2000ml
0<保湿剂≤3000ml
0.5g≤防腐剂≤50g或1000≤防腐剂≤3500ml
加溶剂至10000ml。
保温剂优选的范围为1000ml≤保湿剂≤3000ml。
所述的溶剂由下列一种或多种联合组成：水、甘油、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、乙酸乙酯、植物油。
本发明优选的配比为：
主药马钱子总生物碱1g≤马钱子总生物碱≤40g；辅料为：
通透促进剂        100ml≤通透促进剂≤2000ml
保湿剂            1500ml≤通透促进剂≤3000ml
防腐剂            2000ml≤防腐剂≤3500ml
加水至           10000ml。
马钱子总生物碱中的士的宁的含量小于40％，马钱子碱含量大于20％。
所述的保湿剂由下列一种或多种联合组成：甘油、丙二醇、聚乙二醇、山梨醇；所述的防腐剂由下列一种或多种联合组成：尼泊金酯、苯甲酸及其盐、山梨酸及其盐；乙醇、甘油；桉叶油、薄荷油。
本发明所述剂型为喷雾剂、搽剂、涂剂或湿敷贴。
本发明最优选的配比为：10g≤马钱子总生物碱≤30g，100ml≤氮酮≤500ml，200ml≤丙二醇≤1000ml，2000ml≤甘油≤3000ml，再加水至10000ml。
由于皮肤被覆于人体全身表面，与外界环境直接接触，有重要的屏障和保护作用，能阻挡异物和微生物侵入和体液外渗，同时也阻止外用药物的吸收。皮肤由表皮、真皮、皮下组织及皮肤附属器官组成。皮肤的最外层是表皮，角质层位于表皮最表层。角质层由扁平角质化细胞紧密排列而成，均为死细胞，为药物经皮吸收的主要的屏障。发明人研究发现将从马钱子提取出的马钱子总生物碱溶于适量溶剂中，再加入一定量的通透促进剂、保湿剂等辅料制成制备成液体外用制剂，可有效地促进马钱子总生物碱经皮肤吸收，在病变局部达到较高药物浓度而达到临床疗效；药物缓慢恒速透过皮肤可能被真皮部位的毛细血管吸收进入血液循环而产生全身治疗作用，也可避免马钱子口服很高血药浓度而出现中毒的现象。另外，本发明加入的通透促进剂是一种能暂时的调节经皮通透性的物质，能可逆的改变皮肤角质层的屏障功能，又不损伤任何活性细胞的化学物质。本发明制剂可以用到的通透促进剂如下：(1)氮酮。(2)薄荷醇、樟脑、薄荷油、桉叶油、冰片等。(3)乙醇、异丙醇、异丁醇、正十二醇、丙二醇、甘油、乙酸乙酯。(4)油酸、月桂酸的甲酯或乙酯、肉豆蔻酸异丙酯。特别优选为氮酮、丙二醇、桉叶油或薄荷油。
本发明制剂优选处方采用水为溶剂，可减少对皮肤有刺激性，避免易污衣物。整个发明具有应用起来方便舒适，原材料及制剂的工艺生产成本低的特点。同时水能促使角质层水化而增加药物经皮的通透性。另外，本发明还特别加入了保湿剂，优选用量为20-30％，本发明通过保湿剂的加入，可防止皮肤上的药液快速挥发，从而使药物较在长时间内经皮吸收而延长药物作用时间。与文献报道的涂膜剂相比，本制剂制备工艺简单，质量易于控制，产品稳定性好，适宜于工业化大生产；同时使用本制剂不会影响皮肤的正常功能，方便舒适，患者顺应性高。
马钱子总生物碱的制备过程为：
方法一：马钱子粗粉用水或0.5％一1％矿酸水液提取。提取液浓缩成适当体积后，再用碱(如氨水、石灰乳等)碱化游离出生物碱，然后用有机溶剂如氯仿、苯等进行萃取，最后浓缩萃取液得亲脂性总生物碱。
方法二：马钱子粉用碱水(石灰乳、氨水等)润湿后，再用有机溶剂如氯仿或苯等直接进行固—液提取。回收有机溶剂后即得亲脂性总生物碱。
对于本发明的马钱子总生物碱液体外用制剂是否对皮肤较大地刺激性，而无法生产出有效的产品，以及本发明在抗炎，镇痛的药效如何，发明人均做了相应的研究，实验方式及结果如下：
1.马钱子总生物碱液体外用制剂对家兔完整皮肤急性毒性实验
1.1 材料
1.1.1 动物：健康成年白色家免12只，由中南大学湘雅医学院实验动物中心提供。
1.1.2 药品和试剂：
马钱子总生物碱液体外用制剂由湘潭大学化学学院药学教研室提供，液体中总生物碱含量分别为2mg/kg，4mg/kg或不含生物碱的液体基质。
1.2 方法
将12只家免随机分为3组，A组：对照组；B组：马钱液体外用用制剂小剂量组(2mg/kg)；c组：马钱液体外用用制剂高剂量组(4mg/kg)。实验开始前24h，将动物脊柱两侧用剪刀剪去初毛，再用电动剃须刀剃毛，脱毛面积大约为每侧5×10cm²。取受试物1ml均匀涂敷于动物左侧背部皮肤去毛区，然后用一层PE薄膜覆盖，无刺激胶布固定，24h后，用生理盐水清除残留受试药物。常规饲养，连续观察1周家兔的体重、皮肤毛发、眼睛和粘膜以及呼吸、循环、自主神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动等的改变。尢其注意动物是否出现震颤、抽搐、流涎、腹泻、嗜睡、和昏迷等症状。
1.3 结果
马钱液体外用用制剂小剂量组(2mg/kg)和大剂量组(4mg/kg)外用时对完整皮肤家免的行为、活动、饮食、皮毛光泽和体重(表1)无影响，先观察7天内无家免死亡，未出现急性毒性反应。在涂受试物后20～40min，三组家兔均有喘息现象，可能是在操作过程家兔挣扎所致。
2.皮肤刺激性实验
2.1 受试动物的处理
取健康家兔(1.5±0.2kg)8只，雌雄各半，分为完整皮肤组及破损皮肤组。实验开始前48h，将动物脊柱两侧用剪刀剪去初毛，再用电动剃须刀剃毛，脱去毛后24h检查去毛皮肤是否因去毛而受伤。破损皮肤的制作：用消毒后的手术剪将去毛消毒皮肤划破，以渗血为度，控制左右两侧皮肤的破损程度基本保持一致。
2.2 方法
实验采用自身左右侧对照。家兔左侧去毛区涂敷1.0ml马钱子总碱液体制剂(1mg/ml)和右侧去毛区涂敷1.0ml空白基质作为对照，用PE膜和胶布固定。每只动物分笼饲养，给受试物24小时后用温水洗去残留物，去除去受试物后第1、24、48、72小时观察涂抹部位有无红斑和水肿等情况，并进行评分，评分标准表2、表3。
表1 用于完整皮肤时对家兔体重的影响(g)(X±SD，n＝4)

表2 皮肤刺激反应评分标准

表3 皮肤刺激性强度评价标准

2.3 结果
马钱子总碱液体外用制剂分别对家兔完整皮肤和破损皮肤给药，在72h内观察，家兔完整皮肤组未发现红斑、水肿等过敏性反应，而破损皮肤组有个别家兔出现损伤部位有水肿现象，但可在72h内逐渐减轻，总的刺激强度评分值在0-0.49之间，属于无刺激，说明马钱子总碱液体外用制剂对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激作用，结果见表4。
3.对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的实验
3.1 方法
选取健康小鼠30只，按体重随机分为3组，分别为①受试物组：马钱子总碱液体制剂(1mg/ml)；②阳性对照药组：云南白药气雾剂(云南白药集团股份有限责任公司生产，生产批号：20071108)；③空白对照组：生理盐水。各组小鼠右耳两面分别按0.05ml/只涂相应受试物，再涂上0.02ml致炎剂二甲苯；左耳不做任何处理。30min后，将动物脱颈处死，沿耳廓剪下双耳，用9mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用分析天平称重。以左右耳重量差值为肿胀度指标，将对照组与给药组进行统计学处理。耳廓肿胀抑制率＝(对照组平均肿胀度一给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度
3.2 结果
结果表明马钱子总碱喷雾剂有显著的抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀的作用，具有较好的抗炎作用，见表5。
表4 家兔单次给药皮肤刺激性实验

表5 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(X±SD，n＝10)

与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.对醋酸致小鼠扭体反应的影响
4.1 方法
选取健康小鼠30只，按体重随机分为3组，分组同实验3，首先备皮，即用弯头剪从小鼠背部至两侧腹部仔细小心剪除毛约5cm²。对三组小鼠用去除针头的注射器外涂给药，每鼠均给药0.5ml，随即将小鼠固定，防止其自身或相互舔食撕咬。保证药液吸收1h后将其固定套去除，做相应实验。经皮给药1h后，将事先配置好化学刺激物0.6％醋酸溶液以0.2ml/只注射入小鼠腹腔内。观察并记录15分钟内小鼠扭体次数。结果见下表。
表6 对醋酸致小鼠扭体反应的影响(X±SD，n＝10)

注：与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.2 结果
与生理盐水组比，马钱子总生物碱液体外用用制剂对醋酸所致小鼠扭体反应有显著的抑制作用，表明本制剂具有明显的镇痛作用。
马钱子总生物碱中士的宁毒性极强，有可能经皮吸收出现中毒。本品为经皮液体外用制剂，药物经皮吸收与皮肤的给药面积正比，也与皮肤的种类有关，人体给药面积一般不会超过50cm²，且人体皮肤角质层比家兔皮肤角质厚，药物经皮吸收比家兔慢。而本制剂对完整皮肤急性毒性实验中给药面积为100cm²，故人体实际用药过程可耐受马钱子总生物碱的浓度会更高。综上所述，马钱子总生物碱液体外用制剂对完整皮肤急性毒性实验和皮肤刺激性实验结果表明本发明的制剂皮肤外用给药安全性较好。马钱子总碱液体外用制剂能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，提示本制剂在炎症早期有明显抑制炎性肿胀的作用，在组织损伤的早期可抑制出血，加速对淤血、水肿的吸收，有利于抗渗出和促进受损组织尽早复原，具有显著的抗炎作用；醋酸所致小鼠扭体反应结果表明：本发明制剂具有显著的镇痛作用。上述实验结果表明本制剂使用安全有效，实现了发明的预期目标。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定，本发明可以按发明内容所述的任何一种方式实施。
实施例1：
马钱子总生物碱  0.2g
氮酮            5ml
丙二醇          30ml
尼泊金乙酯      0.1g
加水至          100ml
处方中马钱子总生物碱为主药，氮酮为通透促进剂，丙二醇具有通透促进剂、保湿及溶剂的作用，尼泊金乙酯为防腐剂，水为溶剂。
精密称取马钱子总生物碱溶入丙二醇中，加入氮酮和尼泊金乙酯；再加适量水至100ml。将其装入包装瓶中即可作搽剂或涂剂；装入带特殊喷雾装置的喷雾剂瓶中为喷雾剂；将药液用特制敷料吸附，密封即可用作湿敷贴。
实施例2：
马钱子总生物碱  0.1g
氮酮            5ml
丙二醇          10ml
甘油        35ml
加水至      100ml
处方中马钱子总生物碱为主药，氮酮、丙二醇为通透促进剂，甘油具有保湿和防腐作用，水为溶剂。
精密称取马钱子总生物碱溶入丙二醇中，加入氮酮和甘油；再加适量水至100ml。将其装入包装瓶中即可作搽剂或涂剂；装入带特殊喷雾装置的喷雾剂瓶中为喷雾剂；将药液用特制敷料吸附，密封即可用作湿敷贴。
实施例3：
马钱子总生物碱    0.4g
油酸              10ml
丙二醇            10ml
乙醇              25ml
甘油              25ml
加水至            100ml
处方中马钱子总生物碱为主药，油酸、丙二醇为通透促进剂，甘油具有保湿的作用，乙醇为防腐剂和溶剂，水为溶剂。
精密称取马钱子总生物碱溶入乙醇中，加入油酸、丙二醇、甘油；再加适量水至100ml。将其装入包装瓶中即可作搽剂或涂剂；装入带特殊喷雾装置的喷雾剂瓶中为喷雾剂；将药液用特制敷料吸附，密封即可用作湿敷贴。
实施例4：
马钱子总生物碱   0.1g
桉叶油           2ml
丙二醇          10ml
甘油            35ml
加溶剂至        100ml
处方中马钱子总生物碱为主药，桉叶油、丙二醇为通透促进剂，甘油具有保湿的作用，桉叶油具有防腐的作用，水为溶剂。
精密称取马钱子总生物碱溶入丙二醇中，加入桉叶油；再加适量水至100ml。将其装入包装瓶中即可作搽剂或涂剂；装入带特殊喷雾装置的喷雾剂瓶中为喷雾剂；将药液用特制敷料吸附，密封即可用作湿敷贴。
实施例5：
马钱子总生物碱    0.3g
薄荷油            5ml
乙醇              30ml
甘油              25
加水至            100ml
处方中马钱子总生物碱为主药，薄荷油、丙二醇为通透促进剂，甘油具有保湿的作用，乙醇具有防腐的作用，水为溶剂。
精密称取马钱子总生物碱溶入乙醇中，加入氮酮和甘油；再加适量水至100ml。将其装入包装瓶中即可作搽剂或涂剂；装入带特殊喷雾装置的喷雾剂瓶中为喷雾剂；将药液用特制敷料吸附，密封即可用作湿敷贴。
实施例6：
马钱子总生物碱    0.4g
桉叶油            5ml
甘油             25ml
乙醇             25ml
加乙醇至         100ml
处方中马钱子总生物碱为主药，桉叶油具有通透促进作用，乙醇作为防腐剂25ml，并同时作为溶剂并兼有通透促进和防腐作用，甘油具有保湿的作用。
取马钱子总生物加入适量的乙醇中，再加入桉叶油和甘油，加乙醇至100ml，装入包装瓶中即可作搽剂或涂剂；装入带特殊喷雾装置的喷雾剂瓶中为喷雾剂；将药液用特制敷料吸附，密封即可用作湿敷贴。
实施例7：
马钱子总生物碱     0.4g
氮酮               5ml
甘油               25ml
乙醇               25ml
加乙醇至           100ml
处方中马钱子总生物碱为主药，氮酮具有通透促进作用，乙醇为溶剂及防腐乙醇作为防腐剂为25ml，，一般只需在药液中含有20％以上乙醇即可具有防腐功能。另外，在本实施例中乙醇还并兼有一定的通透促进作用，甘油具有保湿的作用。
取马钱子总生物加入适量的乙醇中，再加入氮酮和甘油，加乙醇至100ml，装入包装瓶中即可作搽剂或涂剂；装入带特殊喷雾装置的喷雾剂瓶中为喷雾剂；将药液用特制敷料吸附，密封即可用作湿敷贴。