九州虫草镇咳口服液的制备方法.pdf

本发明公开了一种九州虫草镇咳口服液的制备方法，包括发酵液制备、发酵培养和口服液制备等方法步骤。本发明以药食两用的四叶参为培养组分进行九州虫草的组合发酵，工艺简单，对人体安全无害，发酵产品止咳效果明显，有很高的开发应用前景。

1、  一种九州虫草镇咳口服液的制备方法，其特征在于包括以下方法步骤：
(1)发酵液制备
首先取四叶参干粉30-50g，加蒸馏水1000-1500ml，煮沸后保持100℃30-40min，滤出煎液备用，弃残渣；然后取马铃薯800-1200g，切片后加4000-5000ml蒸馏水，煮沸后保持100℃ 4-8min，滤出煎液备用，随后将两种煎液合并，加入葡萄糖80-120g、蛋白胨20-30g、磷酸二氢钾8-12g和硫酸镁8-12g后煮沸使其溶化，用蒸馏水补足发酵液4000-6000ml，最后装瓶灭菌即得发酵液；
(2)发酵培养
将上述发酵液按100ml/瓶量装入250ml三角烧瓶，高压灭菌冷却后，在无菌条件下接入九州虫草菌种，置转速为145r/min、25℃温度条件下的恒温摇床中培养72h；
(3)口服液制备
收集培养完毕的发酵产物，经100℃水浴加热2h处理后，在离心机5000r/min转速下，离心20min，取上清液，减压浓缩至原体积的1/5，冷却后添加占浓缩液体积10％的蜂蜜，混匀后灌装于10ml的小瓶中封口灭菌，即得该口服液。

九州虫草镇咳口服液的制备方法
技术领域
本发明涉及一种镇咳口服液的制备方法。
背景技术
咳嗽是影响人们健康的常见病和多发病，是一种呼吸道受到刺激(如炎症，异物)后，发出冲动传入延髓咳嗽中枢引起的生理反射。咳嗽能影响个人和周边人群休息和健康，使人产生烦躁、焦虑的等不良情绪，如不及时治疗，会加重病症的发展或产生其他并发症。现有的镇咳口服液有些效果不明显且有副作用，有时会使病症复发。
为制备一种便捷显效的镇咳产品，选用具有镇咳作用的九州虫草和四叶参进行组合发酵，利用发酵液的提取物进行动物的镇咳试验，取得了很好的实验结果。
发明内容
为解决以上存在的问题，本发明选用具有镇咳作用的九州虫草和四叶参进行组合发酵，提供了一种九州虫草镇咳口服液的制备方法，其所采取的技术方案是：
该制备方法包括以下方法步骤：
(1)发酵液制备
首先取四叶参干粉30-50g，加蒸馏水1000-1500ml，煮沸后保持100℃30-40min，滤出煎液备用，弃残渣；然后取马铃薯800-1200g，切片后加4000-5000ml蒸馏水，煮沸后保持100℃4-8min，滤出煎液备用，随后将两种煎液合并，加入葡萄糖80-120g、蛋白胨20-30g、磷酸二氢钾8-12g和硫酸镁8-12g后煮沸使其溶化，用蒸馏水补足发酵液4000-6000ml，最后装瓶灭菌即得发酵液；
(2)发酵培养
将上述发酵液按100ml/瓶量装入250ml三角烧瓶内，高压灭菌冷却后，无菌条件下接入虫草菌种，置转速为125-160r/min、22℃-26℃条件下的恒温摇床中培养72h；
(3)口服液制备
收集培养完毕的发酵产物，经80-100℃水浴加热2-4h处理后，在离心机5000r/min转速下，离心20min，取上清液，减压浓缩至原体积的1/4-1/6，冷却后添加占浓缩液体积5-10％的蜂蜜，混匀后灌装到10ml的小瓶中封口灭菌，即得该口服液。
九州虫草(Cordyceps kyushuensis Kobayasi)是野生于泰山海拔750min的麻栎树下的一种虫草。具有益肺肾、补精髓、止咳化痰等功能。可用于痰饮咳、久病体虚、肿瘤、哮喘、糖尿病、高血压、神经衰弱等多种疾病。
四叶参(Codonopsis lanceolata Benth.etHook.f)为桔梗科党参属植物，又名轮叶党参、山海螺等。本品有补气通乳、养阴润肺、清热解毒、消肿排脓等作用。民间以其根入药，主要用于益气体虚、肺燥干咳等症的治疗。
本发明以药食两用的四叶参为培养组分进行九州虫草的组合发酵，工艺简单，对人体安全无害，发酵产品止咳效果明显，有很高的开发应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步描述：
实施例1：
九州虫草镇咳口服液制备包括以下方法步骤：
(1)发酵液制备
首先取四叶参干粉40g，加蒸馏水1200ml，煮沸后保持100℃40min，滤出煎液备用，弃残渣，然后取马铃薯1000g，切片后加4000ml蒸馏水，煮沸后保持1000C5min，滤出煎液备用，随后将两种煎液合并，加入葡萄糖100g、蛋白胨25g、磷酸二氢钾10g和硫酸镁10g后煮沸，使其溶化后用蒸馏水补足5000ml，然后装瓶灭菌即得发酵液；
(2)发酵培养
将上述发酵液按100ml/瓶量装入三角烧瓶，高压灭菌冷却后，无菌接入虫草菌种，置转速为145r/min、25℃温度条件下的恒温摇床中培养72h；
(3)口服液制备
收集培养完毕的发酵产物，经100℃水浴加热2h处理后，在离心机5000r/min转速下，离心20min，取上清液，减压浓缩至原体积的1/5，冷却后添加占浓缩液体积10％的蜂蜜，混匀后灌装到10ml的小瓶中封口灭菌，即得该口服液。
实施例2：
九州虫草镇咳口服液制备包括以下方法步骤：
(1)发酵液制备
首先取四叶参干粉30g，加蒸馏水1000ml，煮沸后保持100℃30min，滤出煎液备用，弃残渣，然后取马铃薯800g，切片后加4000ml蒸馏水，煮沸后保持100℃4min，滤出煎液备用，随后将两种煎液合并，加入葡萄糖80g、蛋白胨20g、磷酸二氢钾8g和硫酸镁8g后煮沸，使其溶化后用蒸馏水补足4000ml，然后装瓶灭菌即得发酵液；
(2)发酵培养
将上述发酵液按100ml/瓶量装入三角烧瓶，高压灭菌冷却后，无菌接入虫草菌种，置转速为145r/min、25℃温度条件下的恒温摇床中培养72h；
(3)口服液制备
收集培养完毕的发酵产物，经100℃水浴加热2h处理后，在离心机5000r/min转速下，离心20min，取上清液，减压浓缩至原体积的1/5，冷却后添加占浓缩液体积10％的蜂蜜，混匀后灌装到10ml的小瓶中封口灭菌，即得该口服液。
实施例3：
九州虫草镇咳口服液制备包括以下方法步骤：
(1)发酵液制备
首先取四叶参干粉50g，加蒸馏水1500ml，煮沸后保持100℃40min，滤出煎液备用，弃残渣，然后取马铃薯1200g，切片后加5000ml蒸馏水，煮沸后保持100℃8min，滤出煎液备用，随后将两种煎液合并，加入葡萄糖120g、蛋白胨30g、磷酸二氢钾12g和硫酸镁12g后煮沸，使其溶化后用蒸馏水补足6000ml，然后装瓶灭菌即得发酵液；
(2)发酵培养
将上述发酵液按100ml/瓶量装入三角烧瓶，高压灭菌冷却后，无菌接入虫草菌种，置转速为145r/min、25℃温度条件下的恒温摇床中培养72h；
(3)口服液制备
收集培养完毕的发酵产物，经100℃水浴加热2h处理后，在离心机5000r/min转速下，离心20min，取上清液，减压浓缩至原体积的1/5，冷却后添加占浓缩液体积10％的蜂蜜，混匀后灌装到10ml的小瓶中封口灭菌，即得该口服液。
镇咳实验如下：
1.泰山虫草发酵产品的镇咳试验
分组：实验选取雌性成年小鼠(18~25g)，随机分为五组，每组10只，依次为空白组、高剂量组、低剂量组、阳性对照组、阴性对照组。
给药：各组小鼠空腹24h后，按照表1灌胃给药。
表1 各组给药情况

引咳：给药后20min后，把用线系好的棉球悬吊于烧杯底部，胶泥固定，向棉球中滴入1滴250mg/ml浓氨水溶液，把各组小鼠分别放入倒扣的烧杯内，启动秒表，观察记录各鼠咳嗽的潜伏期及2min内的咳嗽次数。
2.镇咳试验结果
表2 镇咳实验结果

通过t-检验，各组之间的关系如下表：
表3 统计分析结果

注K：空白组，S1：双向发酵低剂量组，S2：双向发酵高剂量组，Y₁：阴性对照组，Y₂：阳性对照组；“Y₁Y₂”表示Y_I组与Y₂组相比较；**P<0.01；*表示P<0.05。
该项研究表明，采用药基发酵液的高剂量组(S1组)、低剂量组(S2组)的咳嗽潜伏期明显长于空白组和阴性对照组(P<0.01)，和阳性对照组无明显差异，而咳嗽次数明显低于空白组和阴性对照组(P<0.01)，与阳性对照组无明显差异。这说明给药组均具有较好的缓解小鼠咳嗽症状的作用，能使应激小鼠咳嗽恢复为正常。
高剂量组(S1组)的咳嗽次数明显低于低剂量组(S2组)的咳嗽次数，高剂量组(S1组)的镇咳潜伏期明显高于低剂量组(S2组)的咳嗽潜伏期，说明且其镇咳作用与剂量呈正相关。