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一种免疫抑制药物
    【技术领域】

    本发明涉及一种用于免疫抑制的1′-O-β-D-(3，4-二羟基苯乙基)-4′-O-咖啡酰基-葡萄糖苷，该化合物又称Calceolarioside A，属于免疫抑制药物技术领域。

    背景技术

    目前用于免疫抑制治疗的药物有四大类。1、化学制剂。主要有烷化剂和抗代谢药物两大类，用于抗肿瘤。2、激素。用于抗炎和各型超敏反应性疾病的治疗。3、真菌代谢产物。主要有环孢菌素A和FK-506，此类药物对T细胞，尤其是TH细胞有较好的选择性抑制作用，而对其他的免疫细胞的抑制作用则相对较弱。4、中药。例如雷公藤多甙，用于治疗肾炎、红斑狼疮、风湿性关节炎等。

    Calceolarioside A是一种从植物中提取的化合物。其化学结构式如下：

    

    Calceolarioside A的理化性质：

    1、形态：淡黄色粉末。

    2、分子量及分子式：478，C₂₃H₂₆O₁₁。

    3、溶解性：易溶于甲醇、乙醇，能溶于水。

    CalceolariosideA结构不同于现有的其他免疫抑制药物，分子量小，结构简单，易于合成。

    对此有所报道的文献有：

    1、Tanahashi T，Shimada A，Nagakura N，Inoue K，Kuwajima H，Takaishi K，et al.Isolation ofOleayunnanoside from Fraxinus insularis and Revision of Its Structure to Insularoside-6&prime；-O-β-D-glucoside，Chem Pharm Bull 1993；41(9)：1649.

    从木犀科植物Fraxinus insularis中提取了Calceolarioside A。

    2、Hyoung Ja Kim，Yeon Gyu Yu，Hokoon Park，Yong Sup Lee，HIV gp41 Binding PhenolicComponents from Fraxinus sieboldiana var.angustata，Planta Med 2002；68(11)：1034.

    从木犀科植物Fraxinus sieboldiana提取了Calceolarioside A。

    3、郑晓珂，李军，冯卫生，毕跃峰，冀春茹，石胆草化学成分的研究，中国中药杂志，2002，27(12)：926-928。

    从石胆草中分离得到Calceolarioside A。

    化学制剂和真菌代谢产物具有较强的细胞亚性选择性。激素的副作用较大，长期使用会引起代谢紊乱，表现为向心性肥胖、满月面容等，诱发或加重感染、消化性溃疡、肾上腺皮质萎缩或功能不全，还会出现反跳现象及停药症状。雷公藤多甙等中药用药剂量比较大。而CalceolariosideA的药理活性尚未为人们掌握，从而尚未确定其用途。

    【发明内容】

    本发明的目的在于克服现有免疫抑制治疗药物的缺点，获得一种适用的细胞亚性多、低毒、小剂量的免疫抑制药物。

    本发明特征在于活性物质为1′-O-β-D-(3，4-二羟基苯乙基)-4′-O-咖啡酰基-葡萄糖苷，其用途是免疫抑制。

    动物实验研究结果表明其免疫抑制作用与环孢菌素A相似或稍强。有效治疗量比雷公藤多甙少。没有激素样副作用。并且仍具有免疫抑制药物普遍具有的抑制肿瘤细胞的作用。

    体内、体外药学实验显示，Calceolarioside A具有好的免疫抑制作用，其细胞免疫强度与现有临床上广泛使用的免疫抑制药物环孢菌素A相当，其体液免疫抑制作用明显优于环孢菌素A。以灌胃方式给药，小鼠的半数致死量LD₅₀为1500mg/kg，比治疗剂量ID₅₀12mg/kg高出100倍以上，说明急性毒性很低。

    CalceolariosideA组合物以口服方式，或者以经皮给药的方式用于治疗。以口服方式治疗时，需要将CalceolariosideA组合物制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、缓释缓控微丸等剂型，按照药学领域的常规生产方法制备，例如使用活性成分Calceolarioside A与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

    根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的具体病症的严重程度等确定CalceolariosideA的使用量，其日剂量是0.01～100mg/kg体重，优选0.1～10mg/kg体重，1～3次/日，副作用小，基本没有毒性。

    【附图说明】

    图1是Calceolarioside A的¹H-NMR谱。图2是Calceolarioside A的¹³C-NMR谱。图3是Calceolarioside A的HMQC谱。图4是Calceolarioside A的HMBC谱。

    【具体实施方式】

    提取：从水曲柳中提取。

    波谱检测：

    使用500M，在DMSO-d6中测定所提取物质的1H-NMR，13C-NMR和HMBC核磁共振波谱数据见下表：

    

    由上述波谱鉴定结果可知，所提取的物质为Calceolarioside A。

    实验：

    1、TNF-α免疫分析

    将THP-1细胞以5×10⁵/ml的密度接种于24孔培养板中，分别加入不同浓度的药物，培养1h后加LPS诱导于5％CO₂、37℃培养4h，3000r/min离心收集细胞培养上清，按照HumanTNF-α/TNFSF1A Immunoassay(R&D Systems)说明书操作。同时利用考马斯亮蓝法(Bradford法)测定细胞的蛋白含量，也就是不同药物处理的细胞所含TNF-α(肿瘤坏死因子-α)的相对释放量。实验结果见下表：

    

    通过实验结果的比较，可知Calceolarioside A的TNF-α释放量低于洛伐他汀(Lovostatin)，并且略高于维生素E(VE)。Calceolarioside A的低、中、高三个浓度相差不大，均具有显著抑制TNF-α释放活性，与现有阳性药洛伐他汀相比活性稍强。说明Calceolarioside A具有体液免疫作用。

    2、T淋巴细胞增殖

    健康昆明小鼠摘眼球除血，取脾脏，用注射器反复吹打脾脏，将淋巴细胞全部吹出，用培养液配成1×10⁶/ml的细胞悬液，铺96孔板。加入不同浓度的药物，于5％CO₂、37℃培养72h。MTT法测定并计算药物对淋巴细胞的增殖活性。经观察与对照，可知增殖不明显，Calceolarioside A并未促进小鼠T淋巴细胞增殖。Calceolarioside A对T淋巴细胞无增殖活性。证明Calceolarioside A具有细胞免疫作用。

    以1′-O-β-D-(3，4-二羟基苯乙基)-′-O-咖啡酰基-葡萄糖苷(以下称Calceolarioside A)为活性物质制作的免疫抑制片剂的重量配比为：

    Calceolarioside A  3.97％，

    淀粉               94.84％，

    硬脂酸镁           1.19％。

    按上述重量配比称取活性成分Calceolarioside A 1.0g，淀粉23.9g，硬脂酸镁0.3g，将Calceolarioside A和淀粉混合，用水均匀湿润，将湿润后的混合物过16目筛并干燥，然后过14目筛，加入硬脂酸镁，将混合物压片，每片重25mg，活性成分Calceolarioside A含量为8mg。