一种动物干扰素液体喷雾剂及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及动物用干扰素的液体喷雾剂及其制备方法，属于药物制剂领域。
背景技术
干扰素(Interferon，简称IFN)是在特定的抗原刺激下由细胞分泌的一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能等生物活性的糖蛋白。自1957年Isaacs和Lindenmann发现干扰素以来，干扰素已经显示出了极强的抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节活性和应用前景。因而干扰素的研究越来越受到人们的广泛关注。目前动物干扰素主要停留在基础研究和临床试验阶段，且大多数集中于猪、鸡、鱼等少数动物，近年来也取得了不小的进展。
IFN的抗病毒活性是通过宿主细胞间接完成的，并具有严格的种属特异性和选择性。根据其来源和结构，IFN可分为α、β、γ三种类型，近年来，还发现了ω、τ等类型的干扰素。IFN-α主要由单核细胞产生；IFN-β主要由纤维母细胞产生，血管内皮细胞也可产生；IFN-γ由抗原及PHA等有丝分裂原刺激T细胞后产生，此外，NK细胞也可产生。IFN-τ是反刍动物孕体附植时滋养层细胞分泌的特有的妊娠识别信号因子，在妊娠识别中发挥着重要的作用。
动物呼吸道疾病已成为我国养殖业十分关注的问题，呼吸道疾病具有流行普遍、危害大、发病率高、死亡率高，造成经济损失大，而且难于控制等特点。呼吸道疾病一般是由病毒、细菌、支原体、免疫抑制病病原、常规活疫苗接种反应和不利环境因素等多种原因或混合感染引起的。目前治疗动物呼吸道疾病采取的主要措施是使用抗生素，而大量实践实施表明，抗生素的大量常期使用会造成有害菌种的耐药性及畜产品药残，从而影响人类健康。作为抗生素的良好替代品干扰素不仅对防治呼吸道病毒感染有明显疗效，可显著缩短病程，减轻症状，并减少或防止复发，且无药残并不会产生耐药性。呼吸道病毒的多样性和可变性，同样说明采用具有广谱的抗病毒活性的干扰素制剂是适宜的。而在临床应用中，干扰素的给药方式是影响干扰素作用的一个重要因素。喷雾剂具有药量小，疗效好，见效快，安全，易行，适于临床推广等优点，特别适用于治疗动物呼吸道疾病。
本发明将动物干扰素制成液体喷雾剂与其他剂型相比具有制造工艺和设备简单、生产周期短、成本低、药物用量少、见效快、疗效好、使用方便等优点。本发明制备的动物干扰素液体喷雾剂主要用于防治呼吸道病毒感染喷于动物口腔或鼻腔，药物迅速进入呼吸系统，发挥药效。
我国是动物养殖大国，每年因呼吸道疾病的爆发给养殖业带来巨大损失，研制出快速、高效的预防和治疗动物呼吸道疾病的药物无疑在养殖业的发展和进步上具有十分重要的意义。
【发明内容】
本发明的目的：
本发明目的之一是提供一种动物干扰素喷雾剂的水溶性配方。
本发明的另一目的是提供一种动物干扰素液体喷雾剂。
本发明的又一目的是提供动物干扰素喷雾剂水溶性配方的应用。
本发明的其他目的，在下面对本发明的具体描述中体现出来。
发明效果：
(1)动物干扰素液体喷雾剂治疗动物多种呼吸道疾病具有见效快，疗效好，易于推广等优势。
(2)动物干扰素液体喷雾剂具有制备方便，成本低廉，无毒副作用及使用方便等特点。
本发明为达到上述效果，提供了一种动物干扰素液体喷雾剂的制备方法。其特征在于：用稀释液稀释干扰素原液，过滤除菌，分装在喷雾瓶中，无菌封口。其中，稀释液的组分如下：
柠檬酸 0.1-1g
氯化钠 4-16g
聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80) 20-150mL
甘油 20-100g
苯酚 0.1-1.0mL
注射用水 至1000mL
调整pH值 6.0-8.0
具体实施方式：
——下面通过实施例进一步详述本发明
实施例1：通过细胞病变抑制法，鸡胚成纤维细胞/VSV检测系统测定鸡α-干扰素原液的生物学活性为1.2×109IU/ml，取鸡α-干扰素原液5ml，用稀释液稀释至1L，0.22μm膜除菌过滤，后分装于10ml喷雾瓶中，无菌封口。
稀释液组方为：
柠檬酸 0.2g
氯化钠 8g
聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80) 50ml
甘油 50g
苯酚 1.0mL
注射用水 至1000ml
调整pH值 7.2
实施例2：通过细胞病变抑制法，鸡胚成纤维细胞/VSV检测系统测定鸡γ-干扰素原液的生物学活性为1.5×109IU/ml，取鸡γ-干扰素原液5ml，用稀释液稀释至1L，0.22μm膜除菌过滤，后分装于10ml喷雾瓶中，无菌封口。
稀释液组方为：
柠檬酸 0.2g
氯化钠 8g
聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80) 45ml
甘油 48g
苯酚 1.0mL
注射用水 至1000ml
调整pH值 7.2
实施例3：通过细胞病变抑制法，MDBK细胞/VSV检测系统测定猪α-干扰素原液的生物学活性为1.4×109IU/ml，取猪α-干扰素原液5ml，用稀释液稀释至1L，0.22μm膜除菌过滤，后分装于10ml喷雾瓶中，无菌封口。
稀释液组方为：
柠檬酸 0.2g
氯化钠 8g
聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80) 40ml
甘油 45g
苯酚 1.0mL
注射用水 至1000ml
调整pH值 7.2
实施例4：通过细胞病变抑制法，MDBK细胞/VSV检测系统测定猪β-干扰素原液的生物学活性为1.8×109IU/ml，取猪β-干扰素原液5ml，用稀释液稀释至1L，0.22μm膜除菌过滤，后分装于10ml喷雾瓶中，无菌封口。
稀释液组方为：
柠檬酸 0.2g
氯化钠 8g
聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80) 45ml
甘油 45g
苯酚 1.0mL
注射用水 至1000ml
调整pH值 7.2
本发明动物用干扰素喷雾剂的稳定性试验
材料和方法：
一、材料：本发明的动物干扰素液体喷雾剂采用本公司生产的重组干扰素，试验前保存于2～6℃冰箱。
二、方法：将实施例中四种干扰素液体喷雾剂成品分别置于2～-8℃、25℃和37℃三个温度条件下，定期进行无菌检测、生物活性测定、外观和pH值测定。
1、干扰素生物活性的测定：鸡干扰素采用鸡胚成纤维细胞/VSV检测系统；猪干扰素采用MDBK细胞/VSV检测系统。
2、无菌检验：按《中华人民共和国兽药典2005年版中的要求进行。
3、外观检查：按《中华人民共和国兽药典2005年版中的要求进行检验。
结果：
表1：不同干扰素液体喷雾剂在2～8℃保存的稳定性(生物学活性106IU/ml)
种类 0个月 4个月 8个月 12个月 16个月 20个月 24个月 鸡α-干扰 素 6.0 5.97 6.02 5.93 5.90 5.84 5.76 鸡γ-干扰 素 7.5 7.49 7.45 7.46 7.42 7.40 7.33 猪α-干扰 素 7.0 7.01 6.99 6.95 6.94 6.90 6.86 猪β-干扰 素 9.0 8.96 8.98 8.93 8.91 8.89 8.82
表2：不同干扰素液体喷雾剂在25℃保存的稳定性(生物学活性106IU/ml)
种类 0个月 4个月 8个月 12个月 16个月 20个月 24个月 鸡α-干扰 素 6.0 4.06 1.43 0.49 —— —— —— 鸡γ-干扰 素 7.5 5.18 2.56 0.87 —— —— —— 猪α-干扰 素 7.0 4.79 1.35 0.56 —— —— —— 猪β-干扰 素 9.0 5.63 2.95 1.08 —— —— ——
表3：不同干扰素液体喷雾剂在37℃保存的稳定性(生物学活性106IU/ml)
种类 0个月 4个月 8个月 12个月 16个月 20个月 24个月 鸡α-干扰 素 6.0 2.56 0.81 —— —— —— —— 鸡γ-干扰 素 7.5 2.91 0.89 —— —— —— ——
种类 0个月 4个月 8个月 12个月 16个月 20个月 24个月 猪α-干扰 素 7.0 3.25 0.79 —— —— —— —— 猪β-干扰 素 9.0 3.89 0.93 —— —— —— ——
1、由表一可以看出，列举的四种干扰素液体喷雾剂在2～8℃能保存2年，干扰素活性基本上不降低；
2、由表二可以看出，在25℃存放条件下，干扰素活力下降比较快，存放12个月，活力下降一个数量级；
3、由表三可以看出，在37℃存放条件下，干扰素活力下降的最快，大约存放8个月时活力就下降了一个数量级；
4、定期对存放的样品进行无菌检验，结果均呈阴性；
5、同时对外观和pH值进行观察和检测，在2～8℃和25℃存放条件下，样品的外观和pH值均没有变化，符合《中华人民共和国兽药典》2005年版中的要求；在37℃存放条件下存放8个月时出现少量絮状物，pH值降至6.3；
上述结果表明：动物干扰素液体喷雾剂在2～8℃条件下保存，其生物活性、无菌、pH值以及外观都十分稳定，说明该制剂生产工艺稳定、可靠。
本发明相关动物试验：
试验药品：重组猪α-干扰素液体喷雾剂，重组鸡α-干扰素液体喷雾剂，重组鸡α-干扰素注射液，试验前保存于2～6℃冰箱。
试验方法：
1、预防试验：
天津某养猪场，取2-10日龄仔猪11窝，共102头，每窝仔猪随机分成两组，试验组仔猪用重组猪α-干扰素液体喷雾剂，每天喷雾1次，连续使用3天。对照组仔猪不使用本发明药物，试验组和对照组在相同的饲养条件下观察20天。20天后试验组的仔猪均未发病，精神及身体状况良好，而对照组的仔猪则有28头表现为精神沉郁、食欲减退、呼吸急促等症状，有明显的呼吸道症状。
2、疗效试验：
取重组猪α-干扰素液体喷雾剂，在天津某猪场做临床疗效试验，用于治疗猪圆环病毒病及继发感染，主要临床症状表现为精神萎顿，食欲减退，腹式呼吸，呼吸急促，咳嗽等。每头每天喷雾1次，连续使用3天。一个疗程后有效率达95％，治愈率达70％。
取重组鸡α-干扰素液体喷雾剂，在天津某鸡场做临床疗效试验，用于治疗鸡传染性支气管炎，主要临床症状表现为精神沉郁，呼吸时有湿性啰音，咳嗽等。每只每天喷雾1次，连续使用3天。一个疗程后有效率达90％以上，治愈率达76％。
3、效果对比试验：
取重组鸡α-干扰素液体喷雾剂和重组鸡α-干扰素注射液，在天津某鸡场做治疗效果对比试验，用于治疗鸡传染性支气管炎，主要临床症状表现为精神沉郁，呼吸时有湿性啰音，咳嗽等。取病鸡40只，分为2组，每组20只，分别采用重组鸡α-干扰素液体喷雾剂和注射液进行治疗。使用喷雾剂组每只每天喷雾1次，连续使用3天；使用注射液组每只每天注射1次，连续注射三天。一个疗程后使用喷雾剂组有效率达90％，治愈率达80％；使用注射液组有效率为75％，治愈率仅为60％。
有益效果：通过以上试验结果分析，可得出动物干扰素液体喷雾剂在预防和治疗畜禽呼吸道疾病方面有显著地疗效。同时本发明药物为喷雾剂，在畜禽呼吸道疾病的治疗过程中，利于吸收，效果明显强于其他制剂，且在临床使用中极为方便，大生产时成本较低，适于在畜牧业中推广应用。