D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的晶态形式 【发明领域】
本发明涉及D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的晶态形式、用于制备它们的方法、包含它们的药物制剂、以及它们在治疗不同病况和疾病中的用途。具体而言，本发明涉及D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)、结晶改性体2(多晶型I)、以及结晶改性体3(多晶型X)。
【发明背景】
化合物D-异谷氨酰基-D-色氨酸(也称为H-D-γ-Glu-D-Trp-OH或H-D-iGlu-D-Trp-OH或iDD或D-(iEW)或timodepressin或thymodepressin)是具有以下化学结构的一种合成血调节二肽：
Thymodepressin是游离二酸并且具有化学文摘服务社(CAS)登记号186087-26-3。它是一种免疫抑制剂并且选择性地抑制骨髓细胞的增殖。它有效地用于在骨髓、器官以及组织的移植过程中抑制免疫系统(Semina，O.V et al.(2001)Bulletin of Experimental Biology andMedicine，131(5)，493-495)；保护骨髓细胞和免疫系统抵抗化学疗法以及放射的损害作用(U.S.Patent No.5,736,519、6,103,699以及6,410,515)；以及治疗自身免疫疾病，如银屑病以及特应性皮炎(Sapuntsova，S.G.，et al.(May 2002)，Bulletin of Experimental Biologyand Medicine，133(5)，488-490)。
用于制备thymodepressin的一种方法披露于美国专利号5,736,519、6,103,699以及6,410,515的实例1中。然而，大规模地生产thymodepressin不能使用这种方法的实验性细节来进行，因为产生了D-谷氨酰基-D-色氨酸与D-异谷氨酰基-D-色氨酸的混合物，该混合物必须进行分离并且用离子交换色谱法进行纯化，导致非常低的thymodepressin的产率(12.25％)。
美国专利号5,736,519、6,103,699以及6,410,515传授了其中所披露的肽类可以通过将与无机酸类(包括盐酸、硫酸、氢溴酸、磷酸、等等)，或与有机酸类(包括甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、水杨酸、苯磺酸、以及甲苯磺酸类)进行反应而被转化成酸加成盐类。然而，thymodepressin的碱加成盐类和用于制备此类盐的方法在这些专利中均没有被披露。
Thymodepressin作为一种处于传统的片剂或胶囊的形式的口服药物是没有生物有效的。目前，它正作为处于液体配制品中的二钠盐而在俄国出售，用于针对银屑病、特应性皮炎、以及类风湿性关节炎的治疗的注射以及鼻内给药。D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐的固体形式是一种吸湿的并且很难以进行处理的无定形粉末。D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐具有分子式C16H17N3Na2O5以及以下化学结构：
D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐未经CAS登记系统鉴定，未在CAS REGISTRYSM File中列出并且不具有与它相关的CAS登记号。D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐的鉴定和结构确认已通过红外(IR)光谱得到确定(Kashirin，D.M.，et al.(2000)，Pharmaceutical ChemistryJournal，34(11)，619-622)。然而，尽管D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐是已知的，但它的制备、分离、以及进一步的表征还未被披露。
通过我们实验室中的研究，我们已经确定经冷冻干燥的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐是极其吸湿的；在数分钟左右在空气中变成凝胶，并且因此无法容易地进行处理。旨在用于药学用途的粉状或无定形的形式的化合物可能引起制造方面的问题，这是因为堆密度问题、吸湿性以及不能通过真空干燥而得到校正的可变的含水量。D-异谷氨酰基-D-色氨酸是一种二肽，并且不推荐在真空条件中在升高的温度(例如80至100℃)下将无定形的形式干燥。因此，在D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐的纯化并在制造规模上获得纯的二钠盐的过程中经历了重大的困难。此外，如以上所讨论，不存在针对其制备的已公开的操作。
D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐是经过CAS登记系统鉴定的，并且在CAS REGISTRYSM File中以CAS登记号863988-88-9列出并且具有以下化学结构：
然而，不存在引用D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的参考文献并且因此不存在关于其身份、其物理和/或化学特性、其处于固态形式地表征或用于其制备和分离的操作的公布。因此，对于D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的存在而言不存在支持性证据。
经冷冻干燥的肽类药物的一钠盐和二钠盐的粉末可能不具有用于配制的可控性粉末的堆密度范围并且在冷冻干燥分散技术中可能要求显著的投资。
因此，对于发展晶态的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的药学上可接受的盐类存在一种需要。总体而言，此类晶态的盐类可以比无定形的形式更容易被纯化并且可能拥有其他一些有利的特性，例如关于它们特定的晶态形式和/或它们的溶解度特征和/或它们所缺乏的吸湿性和/或它们的稳定性特征，包括它们的热稳定特性和/或它们经受氧化降解作用的能力。
发明概述
之前我们已经发明了用于制造D-异谷氨酰基-D-色氨酸以及一种晶态的多晶型体的一种方法、一种新颖的稳定的一铵盐以及用于制造该一铵盐的一种方法。这一内容是于2006年11月28日提交的加拿大专利申请号2,569,204的主题，并且通过引用结合在此。之前我们还发明了D-异谷氨酰基-D-色氨酸的钙、镁、钾、以及锂盐以及它们的制造方法。这一内容是于2006年12月19日提交的加拿大专利申请号2,571,645的主题，并且通过引用结合在此。
对于药物二肽制剂的生产而言，经常有利的是采用处于一种特定的钠盐形式的羧酸基团，它具有(例如)更有利的溶解度、更有利的吸收行为、更有利的稳定性、更有利的溶解度pH、或总体上更有利的特性特征。
我们已经确定，D-异谷氨酰基-D-色氨酸可以与氢氧化钠形成多种盐，例如一种一钠盐，其中来自羧酸的一个氢原子被一个钠离子所代替，该钠盐在形式上可以用化学式III表示；或一种二钠盐，其中两个氢原子被两个钠盐所代替，该二钠盐在形式上可以用化学式II表示。
我们已经进行了形态形成(speciation)研究并且总结了如图1中所示的图解曲线。我们已经确定，在药物制剂中使用的一种有利的盐是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐，它在形式上可以由化学式III表示，该一钠盐是在中性pH值下占主导的药物盐。这利用了该氨基酸是一种两性离子这一事实。我们已经确定，如在化学式III中所示的一钠盐是在药物制剂中最优选的盐。具有化学式II的二钠盐是在约12或之上的pH处的主导种类。二钠盐在水中的溶液具有的pH为约12，并且因此它不适宜在液体配制品中使用。将二钠盐的溶液调回到pH为约7至约7.4，实际上产生了作为溶液中的主导种类的一钠盐。
因此，本发明的一个目的是提供处于适宜于药物用途的形式并且通过适宜在大型工业规模上进行的方法制备的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐。
一种稳定的晶态一钠盐可以被用在多种药物制剂中，这些药物制剂根据它们的组成以及给药途径来专门定制，以提供在特定的情况下所希望的药用效果。
现在我们已经确定，通过将D-异谷氨酰基-D-色氨酸与碱性的钠化合物(例如，氢氧化钠)进行反应可以将D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐制备成一种适宜于药物用途的固体晶态形式。使用氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、C1-C4醇钠被认为是明显的氢氧化钠的化学等效物。出人意料地，此处证明固体的晶态的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐能够以多种不同的结晶改性体(即，多晶型)而出现，这些结晶改性体可以通过调整反应条件和/或结晶条件而得到特定地制备并且它们在理化特性方面有所不同。因此，这些结晶改性体可以例如在它们的溶解度、溶解速度、或在药物加工过程中的行为方面有所不同，并且允许从一种单一的母体化合物开始而生产具有不同特性特征的药物制剂。
根据本发明的一个方面，在此提供了处于晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐。
在本发明的另一个实施方案中，晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐在一个X射线衍射测量中产生多个特殊的峰，这些峰在使用CuKα辐射在反射角2θ处进行测量时具有低于2°的半值宽度。
在本发明的另一个实施方案中，晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐是结晶改性体1(多晶型F)。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)具有如图2中所提供的XRPD图形。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)的特征为在XRPD图形中具有以下2θ值的多个峰：9.23±0.20、9.91±0.20、12.41±0.20、13.76±0.20、14.87±0.20、15.75±0.20、17.88±0.20、18.78±0.20、19.57±0.20、19.84±0.20、20.31±0.20、21.32±0.20、21.55±0.20、22.95±0.20、23.45±0.20、24.34±0.20、24.96±0.20、27.49±0.20、27.94±0.20、29.27±0.20、30.07±0.20、30.43±0.20、31.29±0.20、32.25±0.20、34.07±0.20、34.94±0.20、35.53±0.20、36.08±0.20、37.21±0.20、38.17±0.20、39.19±0.20、以及9.23±0.20。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)的特征为在XRPD图形中具有以下2θ值的多个峰：9.23±0.10、9.91±0.10、12.41±0.10、13.76±0.10、14.87±0.10、15.75±0.10、17.88±0.10、18.78±0.10、19.57±0.10、19.84±0.10、20.31±0.10、21.32±0.10、21.55±0.10、22.95±0.10、23.45±0.10、24.34±0.10、24.96±0.10、27.49±0.10、27.94±0.10、29.27±0.10、30.07±0.10、30.43±0.10、31.29±0.10、32.25±0.10、34.07±0.10、34.94±0.10、35.53±0.10、36.08±0.10、37.21±0.10、38.17±0.10、39.19±0.10、以及9.23±0.10。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)的特征为一个XRPD图形，该图形通过平面间距离d、布拉格角2θ、以及相对强度(表达为相对于最强射线的一个百分比)表达如下：
在本发明的另一个实施方案中，晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐是结晶改性体2(多晶型I)。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体2(多晶型I)具有在图3中所提供的XRPD图形。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体2(多晶型I)的特征为在XRPD图形中具有以下2θ值的多个峰：9.65±0.20、10.41±0.20、11.2±0.20、11.71±0.20、13.45±0.20、13.93±0.20、14.44±0.20、15.61±0.20、17.01±0.20、18.18±0.20、18.65±0.20、20.02±0.20、20.85±0.20、21.39±0.20、21.73±0.20、22.52±0.20、23.27±0.20、24.3±0.20、25.84±0.20、26.82±0.20、28.49±0.20、30.18±0.20、30.76±0.20、31.49±0.20、33.03±0.20、34.55±0.20、34.97±0.20、35.74±0.20、37.25±0.20、37.71±0.20、以及38.79±0.20。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体2(多晶型I)的特征为在XRPD图形中具有以下2θ值的多个峰：9.65±0.10、10.41±0.10、11.2±0.10、11.71±0.10、13.45±0.10、13.93±0.10、14.44±0.10、15.61±0.10、17.01±0.10、18.18±0.10、18.65±0.10、20.02±0.10、20.85±0.10、21.39±0.10、21.73±0.10、22.52±0.10、23.27±0.10、24.3±0.10、25.84±0.10、26.82±0.10、28.49±0.10、30.18±0.10、30.76±0.10、31.49±0.10、33.03±0.10、34.55±0.10、34.97±0.10、35.74±0.10、37.25±0.10、37.71±0.10、以及38.79±0.10。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体2(多晶型I)的特征为一个XRPD图形，该图形通过平面间距离d、布拉格角2θ、以及相对强度(表达为相对于最强射线的一个百分比)表达如下：
在本发明的另一个实施方案中，晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐是结晶改性体3(多晶型X)。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)具有在图4中所提供的XRPD图形。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)的特征为在XRPD图形中具有以下2θ值的多个峰：9.187±0.200、11.058±0.200、11.713±0.200、12.239±0.200、13.785±0.200、14.806±0.200、15.763±0.200、17.126±0.200、17.693±0.200、18.268±0.200、18.562±0.200、19.261±0.200、20.033±0.200、20.63±0.200、21.006±0.200、21.778±0.200、22.268±0.200、23.054±0.200、23.361±0.200、23.851±0.200、24.626±0.200、24.981±0.200、25.507±0.200、26.257±0.200、26.963±0.200、27.329±0.200、27.807±0.200、28.243±0.200、28.975±0.200、29.264±0.200、29.687±0.200、30.409±0.200、30.798±0.200、31.193±0.200、31.724±0.200、32.505±0.200、32.985±0.200、33.645±0.200、34.249±0.200、34.587±0.200、35.048±0.200、35.41±0.200、35.933±0.200、36.833±0.200、37.276±0.200、37.937±0.200、38.467±0.200、以及39±0.200。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)的特征为在XRPD图形中具有以下2θ值的多个峰：9.187±0.100、11.058±0.100、11.713±0.100、12.239±0.100、13.785±0.100、14.806±0.100、15.763±0.100、17.126±0.100、17.693±0.100、18.268±0.100、18.562±0.100、19.261±0.100、20.033±0.100、20.63±0.100、21.006±0.100、21.778±0.100、22.268±0.100、23.054±0.100、23.361±0.100、23.851±0.100、24.626±0.100、24.981±0.100、25.507±0.100、26.257±0.100、26.963±0.100、27.329±0.100、27.807±0.100、28.243±0.100、28.975±0.100、29.264±0.100、29.687±0.100、30.409±0.100、30.798±0.100、31.193±0.100、31.724±0.100、32.505±0.100、32.985±0.100、33.645±0.100、34.249±0.100、34.587±0.100、35.048±0.100、35.41±0.100、35.933±0.100、36.833±0.100、37.276±0.100、37.937±0.100、38.467±0.100、以及39±0.100。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)的特征为一个XRPD图形，该图形通过平面间距离d、布拉格角2θ、以及相对强度(表达为相对于最强射线的一个百分比)表达如下：
在本发明的另一个实施方案中，晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体2(多晶型I)的一种混合物。
在本发明的另一个实施方案中，晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体3(多晶型X)的一种混合物。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体3(多晶型X)的混合物具1有在图9中所提供的XRPD图形。
根据本发明的另一方面，在此提供了一种药物组合物，该药物组合物包括以上所说明的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的任何一种晶态形式、连同至少一种药学上可接受的载体。
根据本发明的另一方面，在此提供了一种方法，该方法用于制备包括以上所说明的晶态形式中任何形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的药物组合物，其中所述方法包括将以上所说明的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的任何一种晶态形式与至少一种药学上可接受的载体相结合。
根据本发明的另一方面，在此提供了以上所说明的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的任何一种晶态形式(在一种药物组合物的制造中没有进行色谱法纯化)的用途。
根据本发明的另一方面，在此提供了D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的任何一种晶态形式作为一种抗银屑病药剂的用途。
根据本发明的另一方面，在此提供了用于制备处于晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的一种方法，该方法包括以下步骤：
(a)在约6.5至约7.2的pH下制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸与氢氧化钠在水中的溶液；
(b)将该溶液过滤以去除固体微粒；
(c)将水蒸发以浓缩该滤液；并且
(d)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀，
或者
(e)用乙酸乙酯搅拌从处理步骤(a)、(b)、(c)、以及(d)获得的固体；并且
(f)将该固体过滤，
或者
如以上说明的步骤(a)和步骤(b)之后跟随以下步骤：
(g)蒸发来自步骤(b)的滤液以给出一种固体；
(h)加入水以获得D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的溶液；并且
(i)经超过约5小时的时间将水蒸发以给出处于晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐，
或者
(j)制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐在甲醇中的溶液；
(k)将该溶液过滤以去除固体微粒；并且
(l)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀，
或者
(m)制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一铵盐与氢氧化钠在水中的溶液，
随后进行如以上所说明的步骤(b)、(c)、以及(d)。
在本发明的一个实施方案中，其中该方法包括步骤(a)、(b)、(c)、以及(d)，步骤(b)中的搅拌时间是从约1.5到约16小时。
在本发明的另一个实施方案中，其中该方法包括步骤(a)、(b)、(c)、以及(d)，步骤(d)中的搅拌时间是约1小时。
在本发明的另一个实施方案中，其中该方法包括步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)以及(f)，步骤(d)中的搅拌时间是约1小时并且在步骤(f)中在乙酸乙酯中的搅拌时间是约2.5小时。
在本发明的另一个实施方案中，其中该方法包括步骤(a)、(b)、(g)、(h)以及(i)，在步骤(h)中每克D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐加入约18到约22ml的水，并且在步骤(i)中蒸发时间是从约5到约6小时，并且蒸发的温度是从约30℃到约35℃。
在本发明的另一个实施方案中，其中该方法包括步骤(j)、(k)以及(l)，在步骤(j)中D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的比例是每约11到约13ml甲醇1克，并且在步骤(l)中异丙醇与甲醇之比是从约0.4到约0.6ml比约1ml。
在本发明的另一个实施方案中，其中该方法包括步骤(m)、(b)、(c)、以及(d)，步骤(d)中的搅拌时间是从约12到约16小时。
本发明的其他的以及进一步的优势以及特征从以下本发明的具体说明结合附图而言对于本领域普通技术人员将是明显的。
附图简要说明
在这些附图中：
图1是使用实验确定的酸和胺基团的pKa而计算的二肽H-D-iGlu-D-Trp-OH及其盐的形态分析图。
图2是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)的特征性XRPD图形。
图3是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体2(多晶型I)的特征性XRPD图形。
图4是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)的特征性XRPD图形。
图5是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)的特征性红外(IR)吸收光谱。
图6是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体2(多晶型I)的特征性红外(IR)吸收光谱。
图7是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)的特征性红外(IR)吸收光谱。
图8显示了D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)、结晶改性体2(多晶型I)、以及结晶改性体3(多晶型X)的XRPD图形的对比。
图9是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体3(多晶型X)的混合物的特征性XRPD图形。
本发明的详细说明
如此处所使用，D-异谷氨酰基-D-色氨酸是二肽
氨基酸或简单的二肽的化学性质由于-NH2基团是一种碱而-CO2H基团是一种酸这一事实而变得复杂。因此，在水溶液中，H+离子从分子的一端被转移到另一端而形成两性离子。
两性离子是同时带电荷的并且是电中性的。它们含有正电荷以及负电荷，但是在分子上净电荷是零。尽管盐形成的基础不完全受理论所束缚，但是H-D-iGlu-D-Trp-OH的iGlu氨基酸单元作为一个两性离子而存在，并且因此，当仅使用一当量的单价氢氧化钠来调节pH至中性条件时仅剩下一个-CO2H基团可供用来形成盐。当将具有化学式III的H-D-iGlu-D-Trp-OH一钠盐画成以上示出的形式时，仅有一个CO2H基团可以接纳一个一钠金属来给出具有化学式III的盐。在具有化学式(III)的化合物中，一个钠阳离子在具有化学式(I)的化合物的羧酸部分上代替了一个氢原子。
图1是使用实验确定的酸以及胺基团的pKa用软件HyperquadSimulation & Speciation而计算的二肽H-D-iGlu-D-Trp-OH及其盐的形态分析图。LH2＝处于二酸形式的H-D-iGlu-D-Trp-OH，由具有化学式I的一种化合物表示，LH＝单羧酸盐(如一钠盐)，由具有化学式III的一种化合物表示，L＝二羧酸盐(如二钠盐)，由具有化学式II的一种化合物表示，LH3＝H-D-iGlu-D-Trp-OH的酸加成盐(如具有化学式I的一种化合物的单盐酸盐)，其中该NH2是质子化的。X轴提供了溶液的pH。Y轴报告了在一个具体pH值下存在的种类的摩尔分数。注意：相对L的％形成是该软件的默认术语。在分离过程中0.5M的浓度是用来反映等效于在6ml水中1克的thymodepressin。该图表明，在约7.0至约7.4的pH下大约100％的thymodepressin是处于在水中的一钠盐的形式。
本发明针对新颖的具有化学式(III)的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐，新颖的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的晶态形式，包括新颖的结晶改性体1(多晶型F)、新颖的结晶改性体2(多晶型I)、以及新颖的结晶改性体3(多晶型X)。
本发明还针对一种方法，该方法用于制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的新颖的结晶改性体1(多晶型F)、新颖的结晶改性体2(多晶型I)、新颖的结晶改性体3(多晶型X)、以及新颖的结晶改性体1和3的一种混合物，其中该方法包括以下步骤：
(a)在从约6.5至约7.0的pH下制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸与氢氧化钠在水中的溶液；
(b)将该溶液过滤以去除固体微粒；
(c)将水蒸发以浓缩该滤液；并且
(d)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀，
或者
如以上说明的步骤(a)、(b)、(c)、和(d)，之后跟随以下步骤：
(e)用乙酸乙酯搅拌从步骤(d)获得的固体；并且
(f)将该固体过滤，
或者
如以上说明的步骤(a)和步骤(b)，之后跟随以下步骤：
(g)蒸发来自步骤(b)的滤液以给出一种固体；
(h)加入水以获得D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的溶液；并且
(i)经超过约5小时的时间将水蒸发掉以给出处于晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐，
或者
(j)制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐在甲醇中的溶液；
(k)将该溶液过滤以去除固体微粒；并且
(l)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀，
或者
(m)制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一铵盐与氢氧化钠在水中的溶液，
随后进行如以上所述的步骤(b)、(c)、以及(d)。
优选地，使用包括如以上说明的步骤(a)、(b)、(c)、以及(d)的方法来制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)以及结晶改性体2(多晶型I)。该方法包括以下步骤：
(a)制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸与氢氧化钠在水中的溶液；
(b)将该溶液过滤以去除固体微粒；
(c)将水蒸发以浓缩该滤液；并且
(d)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀。
取决于异丙醇与D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的溶液的体积比以及该溶液的浓度和搅拌时间，可以通过这种方法获得纯的晶体改性体1或纯的结晶改性体2。基于如图1中所提供的形态分析图的计算，在进行步骤(b)之前，来自步骤(a)的溶液的pH应该处于约6.5到约7.2的pH，优选是处于约7.0的pH。
通过将固体D-异谷氨酰基-D-色氨酸加至氢氧化钠溶液中制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸与氢氧化钠在水中的溶液。D-异谷氨酰基-D-色氨酸在水中具有受限的溶解度(在水中＜20mg/ml)，但该钠盐在水中是极为可溶的。选择氢氧化钠是基于获得氢氧化钠溶液的便利性，然而，也可以使用其他钠碱类，如氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠。这些化学物质是明显的用于本方法的步骤(a)的氢氧化钠的化学等效物。在步骤(b)中，将该溶液过滤以在步骤(c)之前去除任何微粒。
在用于制备结晶改性体1的方法中，来自步骤(b)的滤液接着在步骤(c)中被浓缩以去除水从而在溶液中达到约1.3至约3mmol/ml溶质的估算浓度。该溶质是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐。使用一种抗溶剂来使该一钠盐沉淀。如此处所使用，抗溶剂是可以引起一种溶质在溶液中发生沉淀的一种溶剂。用于在本发明中使用的抗溶剂的实例是异丙醇以及C1-C4链烷醇。在一个优选的实施方案中，将异丙醇作为一种抗溶剂来使用使该一钠盐沉淀。在步骤(d)中，每ml的在水中的异谷氨酰基-D-色氨酸钠盐加入约30ml至约40ml的异丙醇以引起D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1的沉淀。搅拌时间是从约1.5至约16小时，优选从约12至约16小时。该固体通过过滤而得到分离并在真空烘箱中在高度真空条件下干燥。优选的干燥温度是从约40℃至约45℃，并且优选的真空设置是低于约8mmHg。仍然优选所施用的真空是低于约5mm Hg。
在用于制备结晶改性体2的方法中，来自步骤(b)的滤液接着在步骤(c)中被浓缩以去除水从而在溶液中达到约3mmol/ml至约18mmol/ml溶质的估算浓度。该溶质是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐。将异丙醇作为一种抗溶剂来使用使该一钠盐沉淀。每ml的在水中的D-异谷氨酰基-D-色氨酸一钠盐加入40ml异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体2沉淀。搅拌时间是约1小时。该固体通过过滤而得到分离并在真空烘箱中在高度真空条件下干燥。优选的干燥温度是从约40至约45℃，并且优选的真空设置是低于约8mm Hg。仍然优选所施用的真空是低于约5mm Hg。
尽管不受理论束缚，但我们已经确定，在步骤(d)中的异丙醇的沉淀反应中，搅拌时间在决定结晶改性体1或2作为该反应的产物方面发挥重要作用。约一小时或少于约一小时的短的搅拌时间产生结晶改性体2(多晶型I)，而高达约16小时的长的搅拌时间产生结晶改性体1(多晶型F)。结晶改性体的结果还取决于溶液中该一钠盐的浓度以及异丙醇作为一种抗溶剂而添加的量。实验条件的细节可以在以下说明的实例1和2中找到。
我们还已发现，当用大约3mmol/ml浓度的异丙醇使具有化学式III的一钠盐在水中的溶液沉淀时，可以获得结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体3(多晶型X)的一种混合物。当将这一混合物与乙酸乙酯进行搅拌并且接着过滤时，该晶态形式中大多数是结晶改性体1，并且在以下详细说明的实例4B中提供了该实验信息。
因此，优选地，用于生产D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)的一种方法包括以下步骤：
(a)在约6.5至约7.0的pH下制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸与氢氧化钠在水中的溶液；
(b)将该溶液过滤以去除固体微粒；
(c)将水蒸发以浓缩该滤液；
(d)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀；
(e)用乙酸乙酯搅拌在步骤(d)中获得的固体；并且
(f)将该固体过滤。
结晶改性体3(多晶型X)与结晶改性体1(多晶型F)相混合而存在要求进一步的研究，这导致发明了用于制备结晶改性体3的两种方法。
优选地，使用包括如以上说明的步骤(a)、(b)、(g)、(h)以及(i)的方法来制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型I)。该方法包括以下步骤：
(a)在约6.5至约7.2的pH下制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸与氢氧化钠在水中的溶液；
(b)将该溶液过滤以去除固体微粒；
(g)蒸发来自步骤(b)的滤液以给出一种固体；
(h)加入水以获得D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的溶液；并且
(i)经超过约5小时的时间将水蒸发掉以给出处于晶态形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐。
如以上所说明进行步骤(a)和步骤(b)。在步骤(g)中，每克的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐加入约18到约22ml的水来制备该溶液。在减压条件下缓慢地蒸发溶剂给出了D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)。在步骤(h)中，溶剂的蒸发是在真空下使用旋转蒸发器在圆底烧瓶中进行的。用于溶剂蒸发的外部水浴的优选的温度是约30℃到约35℃，优选的真空是约14至约20mmHg，并且优选的蒸发时间期限是约5至约7小时。
可替代地但也是优选地，使用包括步骤(j)、(k)、以及(l)的方法来制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)。该方法包括以下步骤：
(j)制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐在甲醇中的溶液；
(k)将该溶液过滤以去除固体微粒；并且
(l)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀。
在步骤(j)中，通过将固体的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(处于任何多晶型)溶解在甲醇中来制备该一钠盐在甲醇中的溶液。要求对甲醇中的悬浮液进行加热以促进溶解。该溶质(一钠盐)与甲醇的优选浓度是每约11至约13ml的甲醇有1克溶质。然后将不可溶的微粒在步骤(k)中进行过滤。将约0.4至约0.6ml的异丙醇加入每ml的来自步骤(l)的甲醇溶液中。不溶性材料通过抽滤而得到分离，并且是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体3(多晶型X)。
在本发明的另一个实施方案中，D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐可以通过D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一铵盐与氢氧化钠之间的盐交换反应进行制备。该方法包括如以上所说明的以及如下的步骤(m)、(b)、(c)、和(d)：
(m)制备D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一铵盐与氢氧化钠在水中的溶液；
(b)将该溶液过滤以去除固体微粒；
(c)将水蒸发以浓缩该滤液；并且
(d)加入异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐沉淀。
在步骤(m)中，将D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一铵盐与氢氧化钠以大致约1∶1的比例在水中进行混合。在步骤(b)中将该溶液过滤。应该注意到，在步骤(m)中释放出氢氧化铵。因此，该溶液的pH高于约7.5的pH。不要求调节pH。将该滤液浓缩至每ml水中约0.25至约0.5克溶质(一钠盐)的估算浓度。在步骤(d)中，向每ml的来自步骤(c)的溶液加入约15至约30ml的异丙醇以使D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1(多晶型F)沉淀。
如本发明的实例4中所说明，含有结晶改性体1和3的一钠盐的混合的多晶型体还可以通过改变条件从D-异谷氨酰基-D-色氨酸与氢氧化钠的反应获得。作为本发明的一部分，我们已经阐述了在实例4中通过在乙酸乙酯中搅拌该固体将结晶改性体1和3的混合物转变成主要为结晶改性体1。
如以上针对D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的制备所进行的总体阐述，当进行该方法以及所说明的其他方法时额外地将异丙醇加至该钠盐的水溶液中用于钠盐晶态固体的分离，这是有利的。
尽管不受理论所束缚，与异丙醇一起的短的搅拌时间(正常地约一小时或更少)生成具有化学式III的一钠盐的结晶改性体2(多晶型I)。长的搅拌时间(高达约16小时)生成结晶改性体1(多晶型F)。当生成结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体3(多晶型X)的混合物的情况下，可以通过在乙酸乙酯中进行搅拌来生产纯的结晶改性体1。
当在甲醇中制备一钠盐的溶液时，将异丙醇作为一种抗溶剂而使用给出了本发明的结晶改性体3。
晶态的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐以及结晶改性体1、2、以及3的药理特性以及它们用于多种病症的治疗和预防的可能的用途对应于(如果这些物质是以独立于该固体的原始形式的已溶解的形式在靶器官或靶细胞中存在)针对thymodepressin及其二钠盐所说明的那些内容，那些内容除其他之外说明于美国专利号5,736,519、6,103,699以及6,410,5151 Semina，O.V et al.(2001)，Bulletin ofExperimental Biology and Medicine，131(5)，493-495)；以及Sapuntsova，S.G.，et al.(May 2002)，Bulletin of Experimental Biology and Medicine，133(5)，488-490)。
可以研究晶体改性体1、2以及3(例如)在药理学模型中的作用，这些作用除其他之外说明于美国专利号5,736,519、6,103,699以及6,410,5151；Semina，O.V et al.(2001)，Bulletin of Experimental Biologyand Medicine，131(5)，493-495)；以及Sapuntsova，S.G.，et al.May 2002)，Bulletin of Experimental Biology and Medicine，133(5)，488-490)，这些通过引用结合在此并且其相应的内容是本披露的一部分。
因此，根据本发明的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体能够以其自身、与另一种相混合、或以药物制剂(或药物组合物)的形式作为药物在动物中、优选在哺乳动物中、并且特别是在人类中使用。因此，本发明还涉及晶态的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐以及D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体作为药物的用途、它们作为抗银屑病药剂的用途，并且特别是它们作为免疫抑制剂的用途，以及还有它们用于它们的药品的生产的用途。此外本发明涉及多种药物制剂，这些药物制剂含有作为活性成分的以下物质：一个有效剂量的晶态的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐，特别是处于结晶改性体1、2、以及3中一种或多种的形式的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐；以及至少一种药学上可接受的载体，该载体是一种或多种运载物和/或赋形剂。这些药物制剂含有，例如，处于结晶改性体1的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐以及至少一种药学上可接受的载体，或者处于结晶改性体2的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐以及至少一种药学上可接受的载体，或者处于结晶改性体3的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐以及至少一种药学上可接受的载体，或者例如，根据本发明的结晶改性体中的两种，如结晶改性体1和2、或结晶改性体1和3、或结晶改性体2和3，每种情况下均是与至少一种药学上可接受的载体一起。
应用与给药
D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐已用于治疗银屑病、特应性皮炎以及类风湿性关节炎。因此，可以将本发明的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐配制成药物组合物，用于将治疗有效量并且以适宜于体内给药的生物相容的形式(即，有待给药的肽的形式)给予受试者，其中治疗作用超过任何毒性作用。
根据图1中所示出的形态分析图，中性pH下的主导种类是thymodepressin的单羧酸盐形式，若抗衡离子是钠，即二肽D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐。D-异谷氨酰基-D-色氨酸的二钠盐是极度吸湿的并且非常难以进行处理而进行配药。取决于其浓度，二钠盐的溶液的pH大于约8.2。按照形态分析图(图1)，含有100％的二钠盐的溶液具有的pH为大于约11.5。高pH不适宜作为溶液给予人类。用无机酸将pH从约7.2调节至约7.4将额外的盐(例如氯化钠)引至该配制品中。
晶态形式的一钠盐是在不同配制品的生产中代替二钠盐的理想的候选者。如在此所说明，可通过针对全身活性治疗性药物的可接受的给药形式中的任何形式对本发明的新颖的晶态盐进行给药。这些方法包括口服的、肠胃外的以及另外的全身的、气溶胶的或局部的形式。
取决于预计的给药方式，所使用的组合物可以处于固体、半固体或液体剂型的形式，如片剂、舌下片剂、栓剂、丸剂、胶囊、粉末、液体、气溶胶、悬浮剂、或类似形式，优选是处于适宜于精确剂量的单次给药的单元剂型。这些组合物将包括至少一种常规的药物载体或赋形剂以及晶态的D-异谷氨酰基-D-色氨酸一钠盐，并且此外还可能包括其他药剂(medicinal agent)、药学制剂(pharmaceutical agent)、载体、辅助剂等。
对于固体组合物而言，可以使用常规的无毒固体载体，包括例如，药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁、以及类似物。使用例如聚亚烷基二醇、丙二醇作为载体，可将如以上所定义的活性化合物配制成栓剂。液态的药学上可进行给药的组合物可以例如通过将如以上所定义的一种活性化合物以及可任选的药物辅助剂溶解、分散(等等)于一种载体中(例如水、盐水、水性右旋糖、甘油、乙醇、以及类似物)，由此形成一种溶液或悬浮液。若希望的话，该有待进行给药的药物组合物还可能含有少量无毒的辅助性物质，如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂以及类似物，例如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、油酸三乙醇胺酯等。对于本领域的普通技术人员而言，制备此类给药形式的实际方法是已知的，或将是明显的；例如参见Remington：The Scienceand Practice of Pharmacy，21st Edition，2006，Part 5，PharmaceuticalManufacturing，Chapters 37，39，41-47and 50，pp.702-719，745-775，802-938，and 1000-1017(之前已知为Remington′s PharmaceuticalSciences)，David B.Troy(Ed.)，Lipincott Williams & Wilkins，Baltimore，Maryland。在任何情况下，有待进行给药的组合物或配制品都将含有大量的一种或多种活性化合物，其量值有效缓解正在接受治疗的受试者的症状。
总体而言，肠胃外给药的特征为皮下、肌内或经静脉进行注射。可以将可注射剂制备成常规的形式，无论作为液体溶液或悬浮液、适宜于在注射之前溶解于或悬浮于液体中的固体形式、或者作为乳液。适宜的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油、乙醇或类似物。另外，若希望的话，有待进行给药的药学组合物还可能含有少量的无毒的辅助性物质，如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂以及类似物，例如醋酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺酯、等等。
对于D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐而言，无论是口服或鼻内(支气管)给药都是优选的，取决于正在治疗的病症的性质。
对于口服给药而言，通过掺入通常采用的赋形剂中的任何赋形剂而形成一种药学上可接受的无毒组合物，这些赋形剂例如药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁、以及类似物。此类组合物所采用了溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、粉末、持续释放的配制品的形式以及类似形式。此类组合物可含有从约1％至约95％的活性成分，优选是从约25％至约70％。
口服和鼻内给药至肺也可以通过气溶胶递送形式发挥作用。对于气溶胶给药而言，活性成分优选是连同表面活性剂以及推进剂一起以精细分散的形式而被提供。典型的活性成分的百分数是按重量计从约0.01％至约20％，优选是按重量计从约0.04％至约1.0％。
当然，表面活性剂必须是无毒的，并且优选在推进剂中是可溶的。此类试剂的代表是含有从6至22个碳原子的脂肪酸类(如己酸、辛酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、油硬脂酸以及油酸)与脂肪族多元醇或其环状酸酐(例如乙二醇、甘油、赤藓糖醇、阿糖醇、甘露醇、山梨糖醇、衍生于山梨糖醇的己糖醇酸酐(以商品名出售的山梨糖醇酯类))的酯类或偏酯类以及这些酯类的聚氧乙烯以及聚氧丙烯的衍生物类。可以采用混合的酯类，如混合的或天然的甘油酯类。优选的表面活性剂是油酸酯或山梨聚糖，例如以商品名C(倍半油酸山梨坦)、80(脱水山梨糖醇单油酸酯)以及85(三油酸山梨坦)出售的那些产品。该表面活性剂可能由按该组合物的重量计从约0.1％至约20％，优选是从约0.25％至约5％而构成。
组合物的剩余部分一般是推进剂。液化的推进剂在环境条件下典型地是气体，并且在压力下被压缩。在适宜的液化的推进剂中的是含有高达五个碳的低级烷类，如丁烷以及丙烷；并且优选氟化的或氟氯化的烷类，如以商品名而被出售。也可以采用以上物质的混合物。
在生成气溶胶时，装配着适宜的阀门的容器灌满了合适的推进剂，含有精细分散的活性成分以及表面活性剂。因此，将这些成分保持在增高的压力下，直至通过阀门的作用而被释放。
对于局部给药而言，这些组合物包括有效量的这类化合物与一种药学上可接受的无毒载体的混合物。组合物的适宜的范围是从约0.1％到约10％的活性成分，以及平衡性的载体(balance carrier)，优选是从约1％到约2％的活性成分。在药物组合物中适宜于局部施用的活性成分的浓度会发生变化，依赖于所使用的化合物的具体的活性，结合有待治疗的病况以及受试者。用于这些化合物的局部施用的适宜的载体和药物运载体包括膏状物、软膏、洗液、乳剂、溶液以及类似物。
例如，用于本发明的化合物的局部施用的一种合适的软膏含有约百分之15至约百分之45的具有16至24个碳原子的一种饱和脂肪醇，如鲸蜡醇、硬脂醇、山萮醇、以及类似物，以及约45至85重量百分数的一种乙二醇溶剂，如丙二醇、聚乙二醇、二丙二醇、以及它们的混合物。该软膏还可以含有从约0到约15重量百分数的一种增塑剂，如聚乙二醇、1，2，6-己三醇、山梨糖醇、甘油、以及类似物；从约0到约15重量百分数的一种偶合剂，如具有从16到24个碳原子的一种饱和脂肪酸，例如硬脂酸、棕榈酸、山萮酸、一种脂肪酸酰胺，例如油酰胺、棕榈酰胺、硬脂酰胺、山萮酰胺，以及具有从16到24个碳原子的一种脂肪酸的酯，如山梨醇单硬脂酸酯、聚乙二醇单硬脂酸酯、聚丙二醇或其他脂肪酸类(如油酸以及棕榈酸)的相应的单酯；以及从约0到约20重量百分数的一种渗透剂，如二甲亚砜或二甲基乙酰胺。
晶态的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的治疗性活性量根据多个因素可以发生变化，如：个体的疾病状况、年龄、性别以及体重。给药方案可以发生改变以提供最适宜的治疗反应。总体而言，每天的方案应该在从约1到约200mg肽的范围内。
以下是代表性的配制品的实例并且绝非限制在不同药物组合物的制备中的范围。
以上成分被充分混合并且压制成单刻痕的片。
以上成分被混合并且引入硬壳胶囊中。
以上成分被密切混合并且压制成单刻痕的片。
以上成分被混合并且引入硬壳胶囊中。
以上成分被混合并且引入硬壳胶囊中。
制备的一种缓冲到pH为7的可注射的制剂，它具有以下组成：
制备一种缓冲至pH为7的可注射的制剂，它具有以下组分：
制备一种口服悬浮液，它具有以下组分：
局部配制品
将以上所有成分(除水以外)进行组合，并且在搅拌下加热至45℃。然后加入45℃的足量水，同时剧烈搅拌以乳化这些成分，并接着将水加至适量100g。
本发明的优选实施方案的另外的细节在以下实例中进行了阐述，这些实例应理解为对所附加的权利要求没有限制。
实例
实例1
D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体1(多晶型F)的制备
方法A：从D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一铵盐(1∶1)以及氢氧化钠
将H-D-iGlu-D-Trp-OH、单铵盐(1∶1)(496mg，1.34mmol)以及1N氢氧化钠(1.4mL，1.40mmol)在水中(15mL)的溶液在室温下搅拌30分钟。将反应混合物在减压条件下蒸发至约1至2mL溶剂。冷却至室温之后，加入异丙醇(30mL)直至沉淀出一种固体。将得到的悬浮液在室温下过夜搅拌，在此之后通过抽滤收集固体。将该固体用异丙醇(2×40mL)洗涤并且接着在烘箱中在44℃下干燥过夜。获得了一种灰白色的晶态固体(462mg，97％的产率)。这种材料被称为D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体1(多晶型F)。
如通过Karl-Fischer测试所确定，这种材料的含水量是3.4％。
MS(m/z)：356.0[M]+，334.1[C16H20N3O5]+，187.9(100％)。
这种材料的XRPD图形在图2中示出。这种XRPD图形还可通过平面间距离d、布拉格角θ、以及相对强度(表达为相对于最强射线的百分比)表达如下：
通过正规的前置填充技术制备粉末化的样品并且用Cu-kα源在45kV/45mA条件下进行操作，在D8Discovery Diffractometer系统上运行。该系统装配着2D比例面积检测器(2D-proportional area detector)(GADDS)。在涵盖3°至35°(2θ)的范围内的两种框架上每个框架暴露600s，收集实验数据。然后将所获得的2D衍射图像进行整合以获得标准的I与2θ进行比较的衍射图形。通过不同的Bruker AXS数据处理软件对数据进行处理，这些软件包括：EVATM 8.0以及TOPASTMv.2.1(必要时用于峰形拟合分析以及应用)。在此包括的所有XRPD图形均使用以上说明的技术、仪器以及设置进行测定。
这种材料的FT-IR(KBr)光谱在图5中示出。
方法B：从D-异谷氨酰基-D-色氨酸和氢氧化钠
在装配有磁力搅拌棒的100mL圆底烧瓶中放入2.91mL氢氧化钠(1.000N，2.91mmoL)以及2.91mL去离子水。用冰水浴将该溶液冷却到0℃，并且同时将全部固体H-D-iGlu-D-Trp-OH(1.00g，3.00mmol)一次加入。再加入3mL去离子水，并且将所得到的溶液再搅拌15分钟。该溶液的pH是约5.5至约6.0通过加入40μM的NaOH溶液(0.500N的溶液)将pH调整到约6.5。将混合物过滤以去除任何固体微粒，并接着将滤液在真空中在30℃的浴温下浓缩至约0.5mL的溶液。用0.6mL的去离子水将残余物稀释并且在剧烈搅拌下加入异丙醇(10mL)，并且沉淀出一种固体。将该混合物超声处理数分钟。然后，再加入30mL异丙醇。搅拌90分钟之后，将该混合物分成两部分(A和B)。
A.将A部分的混合物过滤并且用异丙醇(2x 10mL)洗涤固体。将该固体空气干燥约1h，并且接着在真空下在烘箱中于40℃下干燥过夜。这一A部分的材料的XRPD图形以及IR(KBr)光谱分别与如以上方法A中所说明，在图2和图5中示出的多晶型F相类似。
B.将B部分的混合物搅拌过夜。然后将该混合物过滤，并且用2x 10mL的异丙醇洗涤固体，将该固体进行空气干燥约15分钟，然后在真空下于40℃下干燥过夜。这一B部分的材料的XRPD图形以及IR(KBr)光谱分别与如以上在方法A中所说明，在图2和图5中示出的多晶型F相类似。
实例2
D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体2(多晶型I)的制备
在装配有磁力搅拌棒的100mL的圆底烧瓶中放入2.97mL氢氧化钠(1.000N，2.97mmoL)以及3.0mL去离子水。用冰水浴将该溶液冷却到0℃，并且同时将全部固体H-D-iGlu-D-Trp-OH(1.00g，3.00mmol)一次加入，以给出一种澄清的略带粉红色的溶液。该溶液的pH是约7.0。将该混合物过滤以去除任何固体微粒，并接着将滤液在真空中浓缩以给出一种油。用0.6mL去离子水将残余物稀释并且在剧烈搅拌下加入异丙醇(40mL)，并且沉淀出一种固体。搅拌1h之后，接着将该混合物过滤，并且用2x 15mL的异丙醇洗涤固体，将该固体进行空气干燥约15分钟，然后在真空下于36℃下干燥过夜。获得了一种白色的晶态固体(1.00g，94％的产率)。这种材料被称为D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体2(多晶型I)。
这种材料具有98.5％的HPLC纯度(峰面积百分比)。HPLC法；柱：XTerra MS C18；5μm，4.6×250mm；流动相：A＝水相：4mM Tris，2mM EDTA，pH 7.4；B＝有机相：CH3CN；梯度：B％：0min.5％，15min.55％，30min.55％，32min.5％，35min.5％；流速：1mL/min；注射体积：5μL；λ：222nm、254nm、280nm、450nm；产物的停留时间：6.39min。
如通过Karl-Fischer测试确定，这种材料的含水量是6.0％。
UV(水，c＝22.4μM，λmax nm)：221(ε30528)，280(ε4958)。
MS(m/z)：356.0[M]+，334.2[C16H20N3O5]+，187.9(100％)。
这种材料的XRPD图形在图3中示出。该XRPD图形还可通过平面间距离d、布拉格角θ、以及相对强度(表达为相对于最强射线的百分比)表达如下：
这种材料的FT-IR(KBr)光谱在图6中示出。
这种材料是由与以下所说明的方式相类似的方式进行制备的：
将去离子水(18mL)与1N NaOH溶液(18.0mL，18mmol)在250mL圆底烧瓶中组合，并且冷却到0℃。加入固体H-D-iGlu-D-Trp-OH(6.0g，18mmol)并且缓慢溶解。1h之后，该溶液已变成一种浅粉色。将此溶液的一部份(6mL)去除并且在真空中蒸发至一种油。用0.6mL去离子水将该油稀释并且逐滴加入IPA(40mL)。将该混合物剧烈搅拌1h并且接着过滤。将该固体进行空气干燥并且接着在真空烘箱中干燥过夜以给出作为一种白色固体的450mg化合物，mp：186.9至189.2℃。这种材料的XRPD以及IR光谱分别与如以上所说明，在图3和图6中所提供的那些XRPD以及IR光谱相类似。
实例3
D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体3(多晶型X)的制备
方法A：将如以上实例1，将如方法B中所说明而进行制备的固体D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(800mg)悬浮在甲醇中(10mL)。将该混合物轻微加热以使固体溶解。将该溶液通过烧结玻璃漏斗过滤两遍并且收集到100mL的圆底烧瓶中。该烧瓶装配有一个搅拌棒，并且缓慢加入IPA(4mL)直至形成一种固体。将该悬浮液搅拌4h并且接着过滤。用IPA(3x 10mL)洗涤该固体。将该固体进行空气干燥(固体变成浅粉色)并且接着在真空烘箱中干燥过夜。获得了一种白色的晶态固体(480mg，60％的产率)，mp：182.3至186.1℃。这种材料被称为D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体3(多晶型X)。
这种材料的XRPD图形在图4中示出。该XRPD图形还可通过平面间距离d、布拉格角θ、以及相对强度(表达为相对于最强射线的百分比)表达如下：
如通过Karl-Fischer测试所确定，这种材料的含水量是9.3％。
MS(m/z)：356.0[M]+，334.2[C16H20N3O5]+，187.9(100％)。
该FT-IR(KBr)光谱在图7中示出。
方法B：将去离子水(6mL)与1N NaOH溶液(6.0mL，6mmol)在100mL的圆底烧瓶中进行混合并且冷却到0℃。加入固体H-D-iGlu-D-Trp-OH(2.0g，6mmol)，并且将该混合物超声处理约2分钟以溶解所有固体。该溶液的pH是约6.0。将此溶液的一部份(6mL)去除并且过滤以去除任何固体微粒。将滤液在真空中蒸发以给出一种固体(1.02g)。将一部分固体(0.5g)溶解在去离子水中(10mL)以给出一种澄清无色的溶液。使用旋转蒸发器(用冰水来冷却冷凝器)在真空中去除挥发物并且在30℃的浴温下进行6h的时间以给出一种固体。这种材料的XRPD图形以及IR光谱分别与如以上在方法A中所说明，在图4和图7中所提供的那些XRPD图形以及IR光谱相类似。
实例4
D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体3(多晶型X)的混合物的制备
在装配有磁力搅拌棒的50mL的圆底烧瓶中放入3.0mL氢氧化钠(1.0M，3mmol)以及3mL蒸馏水。用冰水浴将该溶液冷却到0℃，并且加入固体H-D-iGlu-D-Trp-OH(1.00g，3.0mmol)，以给出一种澄清的粉红色溶液。允许在冰冷的温度下将该溶液搅拌1h并且接着升温至室温。将该溶液过滤并且接着浓缩至约1mL的溶剂。加入IPA(38mL)直至形成一种固体沉淀。将该溶液剧烈搅拌1h。将这种溶液的一半过滤并且用2x 15mL的IPA洗涤。将该固体进行空气干燥并且接着在真空烘箱中在35℃下干燥过夜以产生379mg的一种白色晶态固体。这种材料是D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体1(多晶型F)与结晶改性体3(多晶型X)的混合物。这种材料的XRPD衍射图形在图9中提供。
将如以上所说明而获得的固体的一部分(50mg)在室温下悬浮于3mL乙酸乙酯中并且进行搅拌。2.5h之后，将该溶液过滤，将固体进行空气干燥并且接着在真空烘箱中干燥过夜以给出38mg(78％的产率)的一种白色晶态固体。对XRPD图形的分析表明，这种材料实质上是如以上在实例1中所说明的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐(1∶1)的结晶改性体1(多晶型F)，其XRPD图形在图2中提供。
以上所说明的D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1、2以及3的XRPD图形分别在图2、3以及4中提供。本领域的普通技术人员应理解的是，在D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1、2以及3的XRPD图形中的2θ值可能会从一台机器到另一台机器和/或从一个样品到另一个样品略有不同，因而所引用的这些值不得解释为是绝对的。2θ值典型地应当是可重现到约±0.2度，优选到约±0.1度。本领域的普通技术人员还应理解的是，在D-异谷氨酰基-D-色氨酸的一钠盐的结晶改性体1、2以及3的XRPD图形中的相对强度可能会从一台机器到另一台机器和/或从一个样品到另一个样品发生相当大的变化，因而所引用的这些值不得解释为是绝对的。
尽管在此已说明了本发明的优选的实施方案，但本领域的普通技术人员应当理解，在不偏离本发明的精神或所附加的权利要求的范围的情况下可以对其作出变化。