注射用伊维菌素亚微乳液 一、技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种注射用伊维菌素亚微乳液。
二、背景技术
伊维菌素(Ivermectin，IVM)是由阿维链霉菌发酵产生的半合成大环内酯类多组分抗生素，主要含伊维菌素B1(B1a+B1b)不低于93％，其中B1a不得少于85％。伊维菌素是新型的广谱、高效、低毒抗生素类抗寄生虫药，对体内外寄生虫特别是线虫和节肢动物均有良好驱杀作用。目前，国外有不少以伊维菌素作为有效成分的抗寄生虫制剂，在国际动物保健品市场，伊维菌素居销售额第一位。我国也已有多家药厂生产并已投入市场。
然而，目前我国应用于兽医临床的主要是一些伊维菌素传统制剂，其药物的释放大多按一级动力学进行，血药浓度起伏大，常出现“峰谷”现象，有可能超出最低中毒浓度，且有效血药浓度维持时间短，需要多次重复给药才能达到有效治疗目的。有的剂型重复给药对动物的刺激较大，应激反应明显，且易发生药物代谢缓慢，更易造成动物性食品中药物残留，影响人类的身体健康。同时药物随粪便、尿液排泄到环境当中，对生态平衡也有着不容忽视的影响。
亚微乳是目前医药领域中发展较快的剂型，其具有许多特点，能保护被包封药物、载药量大、可提高药物稳定性、延长药物作用时间、降低毒副作用、使药物缓释、控释及具有一定的靶向性等。另外，亚微乳剂的制备工艺简便，适合工业化生产，因此注射用亚微乳具有很好的应用前景。伊维菌素难溶于水，而注射用亚微乳，可作为水溶性差或油溶性药物的重要载体，有利于减少不良反应，增加药物的溶解性，更好的发挥药效。
公开文献99107712.1，99107713.X中，公开了一种伊维菌素微乳剂，该专利处方中均应用了大量的乳化剂和助溶剂。其主要用于绿色农业发展，用于作为水果、蔬菜、棉花等农作物上病虫防治。
公开文献99111296.2中，公开了一种含阿维菌素、伊维菌素或氯氰碘柳胺钠的动物用抗寄生虫乳剂。该乳剂为复方抗寄生虫乳剂，虽然其抗寄生虫谱扩大了，但该制剂易导致抗药性、药物残留增加、药物浪费和制剂成本增加。
公开文献200810016606.9中，公开了一种伊维菌素乳剂，是将伊维菌素与苯甲酸苄酯，注射用植物油及注射用水混合制成脂肪乳剂，这种乳剂，可以克服现有注射剂的一些缺点，改善血药浓度起伏变化大，降低后局部的红肿反应，其仍然存在一些不足：例如稳定性较差，处方中不含有抗氧化剂，而且生产工艺中没有氮气的保护，所以该乳剂在高温灭菌和贮存过程中不稳定。
公开文献200810150354.9中，公开了一种伊维菌素纳米乳药物组合物及其制备方法，该专利处方中也应用了大量的乳化剂(Tween-80)和助溶剂(1，2-丙二醇)，该制剂在注射后，会出现局部疼痛、形成肿块，甚至发生局部组织坏死；进入血液中也会引起溶血等不良反应，给动物造成伤害。
为了发展生态绿色农业，提高肉质食品的安全性和动物用药的有效、安全性及依从性，因此需要研发一种安全、有效、稳定、质量可控、毒副作用低的伊维菌素制剂。
三、发明内容
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种注射用伊维菌素亚微乳液，可有效解决伊维菌素微乳剂稳定性差，毒副作用高的问题。
本发明的技术方案是，本发明乳液是由每ml中含有以下有效组分：伊维菌素1～20mg/mL、注射用植物油50～200mg/mL、乳化剂8～24mg/mL、助乳化剂1～20mg/mL、稳定剂0.1～3mg/mL、抗氧剂维生素E 0.8mg/mL和等渗调节剂甘油22.5mg/mL制成，其制备方法是，在55～85℃下，先将稳定剂、乳化剂、伊维菌素、抗氧剂维生素E和注射用植物油加入到有机溶剂中溶解，在30～45℃下，减压除去有机溶剂，加热至55～85℃，搅拌均匀，制成油相，保温，备用；在55～85℃下，将助乳化剂、等渗调节剂甘油加入到注射用水中溶解，制成水相，水相的温度保持在55～85℃恒温下，边搅拌边将油相缓缓注入到水相中，快速搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.2～7.4，经匀质机匀质，匀质速度为6000～12000rpm，时间为2～15min，制得初乳，再将初乳过微射流仪，在3000～18000PSI的压力下，匀质6～20次，得乳剂，分装于容器中，充氮气，封口，在115℃下，灭菌30min或在121℃下，灭菌15min，质检，即得本发明注射用伊维菌素亚微乳液；所说的重量体积是指固体用g计，液体用ml计(以下同)；所说的注射用植物油为大豆油、蓖麻油、茶油、麻油、红花油、棉籽油、中长链脂肪酸食用油、橄榄油中的任意一种或两种以上的混和物；所说的乳化剂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、合成磷脂中的任意一种；所说的助乳化剂为泊洛沙姆188、聚乙二醇硬脂酸酯、胆固醇、壳聚糖中的任意一种；所说的稳定剂为油酸、油酸钠中的任意一种；所说的有机溶剂为乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷中的任意一种或两种以上的混和物。
本发明增加了药物的溶解性，延长药物在体内的作用时间，并且具有缓控释作用和提高药物的治疗效果，降低毒副作用，本发明制备工艺简单、载药量高、稳定、质量可控，适合工业化生产。
四、具体实施方式
以下结合实际情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
由技术方案给出，具体实施如下：
实施例1：
由伊维菌素100mg、大豆油5000mg、大豆卵磷脂800mg、泊洛沙姆188200mg、油酸10mg、抗氧剂维生素E 80mg和等渗调节剂甘油2250mg制成，其制备方法如下：
(1)、制备油相：在60℃下，将伊维菌素、大豆油、大豆卵磷脂、油酸和抗氧剂维生素E加入乙醇中溶解，在32℃下，减压除去乙醇，加热至60℃，搅拌均匀，制成油相；
(2)制备水相：在60℃下，将泊洛沙姆188和等渗调节剂甘油加入到注射用水中溶解，制成水相；
(3)制备初乳：水相的温度保持在60℃恒温，边搅拌边将油相缓缓注入到水相中，快速搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.2，经匀质机匀质6000rpm，匀质15min，制得初乳；
(4)终乳的制备：将制得的初乳过微射流仪，在3000PSI的压力下，匀质20次，制得乳剂；
(5)将乳剂分装于容器中，充氮气，熔封，在121℃下，灭菌15min，质检，即得本发明注射用伊维菌素亚微乳液。
实施例2
由伊维菌素100mg、大豆油10000mg、大豆卵磷脂1200mg、泊洛沙姆188500mg、油酸钠50mg、抗氧剂维生素E 80mg和等渗调节剂甘油2250mg制成，其制备方法是：
(1)制备油相：在65℃下，将伊维菌素、大豆油、大豆卵磷脂、油酸钠和抗氧剂维生素E加入甲醇中溶解，在35℃下，减压除去甲醇，加热至65℃，搅拌均匀，制成油相；
(2)制备水相：在65℃下，将泊洛沙姆188和等渗调节剂甘油加入到注射用水中溶解，制成水相；
(3)制备初乳：水相的温度保持在65℃恒温，边搅拌边将油相缓缓注入到水相中，快速搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.3，经匀质机匀质8000rpm，匀质10min，制得初乳；
(4)终乳的制备：将制得的初乳过微射流仪，在6000PSI的压力下，匀质15次，制得乳剂；
(5)将制得的乳剂分装于容器中，充氮气，熔封，在121℃下，灭菌15min，质检，即得本发明注射用伊维菌素亚微乳液。
实施例3
由伊维菌素500mg、大豆油5000mg、橄榄油5000mg、蛋黄卵磷脂1600mg、聚乙二醇硬脂酸酯800mg、油酸钠100mg、抗氧剂维生素E 80mg和等渗调节剂甘油2250mg制成，其制备方法是：
(1)制备油相：在70℃下，将伊维菌素、大豆油、橄榄油、蛋黄卵磷脂、油酸钠和抗氧剂维生素E加入氯仿中溶解，在37℃下，减压除去氯仿，加热至70℃，搅拌均匀，制成油相；
(2)制备水相：在70℃下，将聚乙二醇硬脂酸酯和等渗调节剂甘油加入到注射用水中溶解，制成水相；
(3)制备初乳：水相的温度保持在70℃恒温，边搅拌边将油相缓缓注入到水相中，快速搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.4，经匀质机匀质10000rpm匀质5min，制得初乳；
(4)终乳的制备：将制得的初乳过微射流仪，在10000PSI的压力下，匀质10次，制得乳剂；
(5)将制得的乳剂分装于容器中，充氮气，熔封，在115℃下，灭菌30min，质检，即得本发明注射用伊维菌素亚微乳液。
实施例4
由伊维菌素1000mg、蓖麻油15000mg、氢化大豆磷脂2000mg、胆固醇1400mg、油酸钠200mg、抗氧剂维生素E 80mg和等渗调节剂甘油2250mg制成，其制备方法是：
(1)制备油相：在75℃下，将伊维菌素、蓖麻油、氢化大豆磷脂、油酸钠和抗氧剂维生素E加入二氯甲烷中溶解，在40℃下，减压除去二氯甲烷，加热至75℃，搅拌均匀，制成油相；
(2)制备水相：在75℃下，将胆固醇和等渗调节剂甘油加入到注射用水中溶解，制成水相；
(3)制备初乳：水相的温度保持在75℃恒温，边搅拌边将油相缓缓注入到水相中，快速搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.2，经匀质机匀质11000rpm，匀质4min，制得初乳；
(4)终乳的制备：将制得的初乳过微射流仪，在16000PSI地压力下，匀质8次，制得乳剂；
(5)将制得的乳剂分装于容器中，充氮气，熔封，在115℃下，灭菌30min，质检，即得本发明注射用伊维菌素亚微乳液。
实施例5
由伊维菌素2000mg、茶油20000mg、蛋黄卵磷脂2000mg、氢化大豆磷脂200mg、壳聚糖1800mg、油酸250mg、抗氧剂维生素E 80mg、等渗调节剂甘油2250mg制成，其制备方法是：
(1)制备油相：在80℃下，将伊维菌素、茶油、蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、油酸和抗氧剂维生素E加入二氯甲烷中溶解，在42℃下，减压除去二氯甲烷，加热至80℃，搅拌均匀，制成油相；
(2)制备水相：在80℃下，将壳聚糖和等渗调节剂甘油加入到注射用水中溶解，制成水相；
(3)制备初乳：水相的温度保持在80℃恒温，边搅拌边将油相缓缓注入到水相中，快速搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.3，经匀质机匀质11000rpm，匀质4min，制得初乳；
(4)终乳的制备：将制得的初乳过微射流仪，在16000PSI的压力下，匀质8次，制得乳剂；
(5)将制得的乳剂分装于容器中，充氮气，熔封，在115℃下，灭菌30min，质检，即得本发明注射用伊维菌素亚微乳液。
实施例6
由伊维菌素800mg、大豆油20000mg、蛋黄卵磷脂1200mg、大豆卵磷脂1200mg、泊洛沙姆1882000mg、油酸300mg、抗氧剂维生素E 80mg和等渗调节剂甘油2250mg制成，其制备方法是：
(1)制备油相：在84℃下，将伊维菌素、大豆油、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、油酸和抗氧剂维生素E加入乙醇中溶解，在44℃下，减压除去乙醇，加热至84℃，搅拌均匀，制成油相；
(2)制备水相：在84℃下，将泊洛沙姆188和等渗调节剂甘油加入到注射用水中溶解，形成水相；
(3)制备初乳：水相的温度保持在84℃恒温，边搅拌边将油相缓缓注入到水相中，快速搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.4，经匀质机匀质12000rpm匀质2min，制得初乳；
(4)终乳的制备：将制得的初乳过微射流仪，在18000PSI的压力下，匀质6次，制得乳剂；
(5)将制得的乳剂分装于容器中，充氮气，熔封，在121℃灭菌15min，质检，即得本发明注射用伊维菌素亚微乳液。
本发明制备的注射用伊维菌素亚微乳液，采用Nano-ZS90型激光纳米粒径分析仪测定乳滴粒径和zeta电位，结果显示，注射用伊维菌素亚微乳液的乳滴分布均匀，平均粒径为174.9nm，平均zeta电位为-30.9mV。
含量测定采用高效液相色谱仪(Agilent 1100型)测定。色谱条件：流动相为甲醇∶水＝90∶10，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长245nm，进样量20μl。取注射用伊维菌素亚微乳液2mL，置于200mL容量瓶，加入15mL甲醇，涡旋混匀使伊维菌素亚微乳液溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤。精密量取续滤液20μL，注入液相色谱仪记录色谱图，以对照品溶液作为外标，按外标法，以峰面积计算。结果显示，注射用伊维菌素亚微乳液中伊维菌素的平均百分含量为98.8％。
根据《兽药稳定性试验技术规范》中药物加速试验的规定进行稳定性试验：将三批注射用伊维菌素亚微乳液置于30℃，相对湿度60％的恒温恒湿箱中，于第0，1，2，3，6个月取出样品，考察乳剂的外观、粒径、pH值及亚微乳中药物的含量变化，结果见表1。
表-1注射用伊维菌素亚微乳液稳定性试验结果(x±s，n＝3)
由稳定性实验结果可知：注射用伊维菌素亚微乳液稳定性好，各项指标均符合要求。
根据《兽药实验临床试验技术规范》进行注射用伊维菌素亚微乳液局部刺激性试验。实验动物选择鼠龄相同、体重相近的健康清洁级鼠40只，随机分为实验组(注射用伊维菌素亚微乳液)和对照组(市售的普通伊维菌素注射剂)，分别皮下注射给药，剂量为0.1mg/kg体重。注射后逐日观察注射部位的变化，结果见表2。
表-2皮下注射后局部变化
综上所述，本发明比市售的普通伊维菌素注射剂毒副作用可降低达50％以上，具有制备工艺简单、载药量和稳定性高、质量可控，适合工业化生产，本发明旨在克服现有注射剂和脂肪乳剂的缺点，提供一种新的注射用伊维菌素亚微乳液，该亚微乳不仅可直接用于肌肉和皮下注射，而且也可用于静脉注射，疗效优于现有水针剂性，同时具有良好的安全性及稳定性。静脉注射伊维菌素亚微可较好的增加药物的溶解性，延长药物在体内的作用时间，并且具有缓控释作用和提高药物的治疗效果，降低毒副作用。注射用伊维菌素亚微乳液使用范围广，对各种动物体内外寄生虫均有良好的驱杀作用。