加酶乳品及其制备方法 本发明涉及酶的制备、活化、纯化方法，特别是加酶乳品及其制备方法。
世界上大部分地区的人和动物患所谓“乳糖不耐受症”，这是由于小肠系统乳糖酶的缺乏。含乳糖的食品没有被分解，不能被充分分解为葡萄糖和半乳糖，因不能吸收乳糖引起小肠疾患，造成腹胀、腹痛、腹泻等症状。因而国外有在牛奶中加入乳糖酶，以供大量的乳糖不耐受症患者食用的。
已知乳糖酶的制备方法是这样的：先制备培养基，其配方由酵母浸膏10克，麦芽浸膏5克，蛋白胨10克，葡萄糖粉10克，蒸馏水1000毫升，和琼脂组成。当该培养基的琼脂斜片出现后，将乳酸克鲁维酵母菌菌种接种在PH值为5-6.5的培养基琼脂斜片上，温度控制在30℃，摇床旋转速度控制在200转/分钟条件下，培养14小时，就能培养出乳酸克鲤维酵母菌(Klwveromyses)。根据产量要求进行分级扩大培养，以10％接种量接种一级发酵罐，在PH5-6.5，温度24-30℃的条件下，经过14小时培养，可进入二级发酵罐培养，经过14小时培养，又可进入三级发酵罐培养，所得悬浊液经离心机除去培养基，就可得到大量的乳酸克鲁维醇母菌。此种方法所取得的酵母菌，其乳糖酶活性较低。
已知CN1072956A专利技术提取乳糖酶的方法是采用多种无毒或低毒有机溶剂，按一定比例配制成破膜剂，使酵母细胞在短时间内破膜，并使用外源性蛋白酶加速乳糖从酵母细胞膜上释放，然后用蛋白酶抑制物将蛋白酶灭活，得到初步纯化的酵母乳糖酶提取液。有机溶剂在酶提取液的后处理中经蒸发或超滤去除。用这种方法提取乳糖酶，其步骤复杂；所用的有机溶剂价格昂贵，造成提取的成本增加；特别是有毒的溶剂，在后处理中蒸发或超滤去除的不充分，就会残留在乳糖酶提取液中，给食用者造成危害。
欧洲专利0145092号是通过消毒分解乳糖酶滤液。用此种方法需要反复地放置或消毒，严重地阻碍了这个过程的效率，也就是消毒的次数越多，其乳糖酶的活性越低。
已知国外将提取地乳糖酶滤液制成片剂后再加入牛奶中食用。制造工艺复杂，成本较高给消费者增加了经济上的负担。
本发明的目的在于简化乳糖酶的制备工艺，降低乳糖酶的制取成本，提高乳糖酶的相对活性，解决残留成分的污染，改善乳糖酶的质量，从而提高加酶乳品的质量，并且用酶液直接加入乳品中，降低加酶乳品的成本。
本发明加酶乳品的制备方法是按照如下步骤实现的：将经发酵罐培养，并经离心机清除培养基后的乳酸克鲁维酵母菌置于-25℃--40℃低温条件下速冻25-35分钟，取出融化，待完全融化后，进行第二次速冻，完全融化后，进行第三次速冻和融化，第二、三次速冻所用温度及时间与第一次速冻相同，经三次冻融，乳酸克鲁维酵母菌细胞膜破碎，释放出乳糖酶，即可得到粗的乳糖酶液；将该乳糖酶液以0.5-5％的比例直接加入乳品中，在4℃条件下，经12-14小时贮存，即构成加酶乳品。
由上述方法制备的加酶乳品，是将粗的乳糖酶液以0.5-5％直接加入乳品中，乳品中的乳糖水解率达到50-80％左右。
采用本加酶乳品制备方法具有良好的效果，弥补了采用有机溶剂破坏细胞膜的方法所带来的缺陷，使乳品无有机溶剂的残留，无毒无污染；本方法不使用价格昂贵的有机溶剂，无需蒸发或超滤等后处理，简化了制备工艺，降低了产品成本，容易实施；本方法比用消毒的方法分解乳糖酶可提高酶的活性，提高制取效率，从而也提高了乳糖酶及自加酶乳品的质量。本制备方法将粗的乳糖酶液直接加入到乳品中，勿需先制成片剂再加入乳品中，简化了生产工艺，降低加酶乳品的成本，减轻消费者经济负担，使消费者易于接受，从而使广泛存在的乳糖不耐受症患者受益，有利人们的身体健康。
为了更有效地提高乳酸克鲁维酵母菌中乳糖酶的活性，可在制备乳糖酶的二级发酵罐中加入千分之0.5至10的乳糖进行诱导，使乳酸克鲁维酵母菌中乳糖酶的活性大大提高。其结果如下表所示：诱导乳糖加入量(0/00) 对比 0.5 1 2乳糖酶活性(％) 100 101.52 102.3 104.934 6 8 10115.82 113.92 117.64 116.33
从上述结果看，添加4‰的乳糖进行诱导比较经济，比未加乳糖的其相对活性增加15.82％。用改良Dahavist法进行测定乳糖酶活性，每克蛋白质含32-38。
对20名曾对牛奶不耐受者(即患所谓乳糖不耐受症患者)进行试验，饮用加乳糖酶液牛奶1周，无腹泻、腹痛、腹胀等不适反应；同时对5人进行呼吸氢测定，结果是呼吸氢明显下降。对照组呼出氢气含量为12.13±5.32PPM，试验组呼出氢气含量为2.98±1.73，比对照组降低9.15PPM。试验说明，饮(食)用加酶乳品可解决大部分人，特别是我国人民饮奶引起的消化不良问题，同时也大大提高了人体对乳糖、蛋白质和钙的吸收率。
本发明的一个实施例如下所述，用酵母浸膏10g、麦芽浸膏10g、蛋白胨10g、葡萄糖粉10g、加蒸馏水1000毫升，加琼脂20g制成培养基，选用乳酸克鲁维酵母菌为菌种进行培养。当培养基琼脂斜片出现后，将乳酸克鲁维酵母菌的菌种接种在PH5至6.5培养基琼脂斜片上，温度控制在30℃，摇床旋转速度为每分钟200转培养14小时，就得到一定数量的乳酸克鲁维酵母菌，将得到的乳酸克鲁维酵母菌以10％的接种量接在一级发酵罐内，培养基PH控制在5至6.5范围内，温度控制在24至30℃范围内，经14小时的培养，又得到一定数量的乳酸克鲁维酵母菌。再将这些乳酸克鲁维酵母菌，以10％的接种量接在二级发酵罐内，条件与一级发酵罐相同。为了增加乳酸克鲁维酵母菌的活性，在二级发酵罐内加入干分之4的乳糖进行诱导，使乳酸克鲁维酵母菌中乳糖酶的活性大大提高。通过用乳糖诱导得到的悬浊液放在每分钟3000转的离心机中，在4度条件下经过15分钟的离心，就除掉了培养基物质，得到了乳酸克鲁维酵母菌。将所得到的乳酸兢鲁维酵母菌放在负25至40度低温条件下速冻25至35分钟，然后取出融化，待完全融化后再放置负25至40度低温条件下速冻25至35分钟，再融化，这样连续冻融三次，乳酸克鲁维酵母菌的细胞膜破碎，释放出乳糖酶，这样就得到了粗的乳糖酶液。将该粗的乳糖酶液按4％比例加入牛奶中，在4℃条件下，经过12-14小时贮存，牛奶乳糖水解，牛奶中乳糖水解率达到60-80％左右。