日本红枫的组织培养快繁方法.pdf

本发明涉及一种日本红枫的组织培养快繁方法，该方法是由外植体的选取与灭菌、最佳的诱导培养基和生长培养基、制备无菌苗、芽的增殖、增殖生长、生根培养和炼苗移栽六个主要步骤，获得到大量种苗。本发明的有益技术效果是：利用无性繁殖技术对种苗培育方面的传统方式行了改进。在人工制造的优化环境里，解决了种苗体质优化的难题。并且可以把植物中各种优良种性，如抗寒、抗旱、抗病、抗虫以及快速生长等进行移植和优化组合，创造出新型的优良品种，组培苗生根率达95％以上，移栽成活率达85％以上。使生根时间大大缩短，这与植物的童性或幼性得到激发有直接的关系。对于加快新品种扩繁，降低种苗成本意义巨大。

1、  日本红枫的组织培养快繁方法，包括基本培养基、外植体的选取与灭菌、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽六个步骤，其特征在于：基本培养基和组培各阶段培养基由以下配方组成：
1)基本培养基：选用WPM为培养基，pH5～6，蔗糖20～40％，琼脂6～10g/L；
2)诱导培养基：WPM+0.05～0.2mg/L TDZ+0.0.05～0.2mg/L BA；
4)增殖培养基：WPM+0.1～0.3mg/L TDZ+0.05～0.3mg/L BA；
5)生根培养基：WPM+0.1～0.6mg/L IBA+0.1～0.6mg/L NAA。

2、  根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：基本培养基和组培各阶段培养基的配方为：
1)基本培养基：以WPM为基本培养基，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8；
2)诱导培养基：WPM+0.1mg/L TDZ+0.1mg/L BA；
3)增殖培养基：WPM+0.2mg/L TDZ+0.1mg/L BA；
4)生根培养基：WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA。

3、  根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：外植体的选取与表面灭菌是：选取日本红枫实生苗的幼嫩枝，去叶，切取带有腋芽的茎段，经NaClO表面灭菌处理后，作为组培用的外植体。

4、  根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：诱导培养是：无菌条件下将表面灭菌处理的茎段的切口变褐处切除，迅速将腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基上，在常温光照培养条件下，诱导腋芽萌发，然后分化丛生芽，得到单株芽。

5、  根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：增殖培养是：将单株芽接入增殖培养基中，在常温光照培养条件下，每2月继代培养1次。

6、  根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：生根培养是：将所得单株芽中2-3cm以上的有效苗切割下来，除去周围的小芽及组织，接种到生根培养基中，在生根光照培养条件下培养1-2周，得到组培苗。

7、  根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：炼苗移栽是：当生根的组培苗生长到3-5cm以上时，将培养罐开盖，进行炼苗1-2周，炼苗后将组培苗上残留的培养基洗净，植入园上∶腐叶土∶砂土＝2∶2∶1的培养土中。

8、  根据权利要求4和权利要求5所述的日日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：常温光照培养条件是：温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux。

9、  根据权利要求6所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于：生根光照培养条件是：温度为22±2℃、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux。

日本红枫的组织培养快繁方法
技术领域
本发明涉及一种组织培养方法，更具体的说涉及一种日本红枫的组织培养快繁方法。
技术背景
日本红枫(Acer palmatum atropurpureum)是槭树科槭树属落叶小乔木，为鸡爪槭的变种，原产地为日本和韩国。因其树型小巧精致，叶片掌状且叶裂深浅多样以及艳丽的红色而闻名。日本红枫生长速度比普通国产红枫快的多，叶片颜色更鲜艳，耐寒性更强，因此在园林景观彩叶植物中，日本红枫是应用最为广泛的槭树科品种之一。
日本红枫的现有的繁殖方法主要是种子繁殖和嫁接法。种子繁殖对培育条件要求苛刻，且耗时较长。嫁接法，秋季采用芽接，春季则用枝接。以1-2年生健壮实生苗亲和力较强的青枫为砧木，以落地嫁接为宜。接穗采用种子繁殖方式获得，但由其播种繁殖变异大，生长缓慢，且不易扦插成活，远不能满足嫁接需求，严重制约了日本红枫的推广。
发明内容
基本培养基和组培各阶段培养基由以下配方组成：
1)基本培养基：选用WPM为培养基，pH5～6，蔗糖20～40％，琼脂6～10g/L；
2)诱导培养基：WPM+0.05～0.2mg/L TDZ+0.0.05～0.2mg/L BA；
4)增殖培养基：WPM+0.1～0.3mg/L TDZ+0.05～0.3mg/L BA；
5)生根培养基：WPM+0.1～0.6mg/L IBA+0.1～0.6mg/L NAA。
基本培养基和组培各阶段培养基的具体配方为：
1)基本培养基：以WPM为基本培养基，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8；
2)诱导培养基：WPM+0.1mg/L TDZ+0.1mg/L BA；
3)增殖培养基：WPM+0.2mg/L TDZ+0.1mg/L BA；
4)生根培养基：WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA。
外植体的选取与表面灭菌是：选取日本红枫实生苗的幼嫩枝，去叶，切取带有腋芽的茎段，经NaClO表面灭菌处理后，作为组培用的外植体。
诱导培养是：无菌条件下将表面灭菌处理的茎段的切口变褐处切除，迅速将腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基上，在常温光照培养条件下，诱导腋芽萌发，然后分化丛生芽，得到单株芽。
增殖培养是：将单株芽接入增殖培养基中，在常温光照培养条件下，每2月继代培养1次。
生根培养是：将所得单株芽中2-3cm以上的有效苗切割下来，除去周围的小芽及组织，接种到生根培养基中，在生根光照培养条件下培养1-2周，得到组培苗。
炼苗移栽是：当生根的组培苗生长到3-5cm以上时，将培养罐开盖，进行炼苗1-2周，炼苗后将组培苗上残留的培养基洗净，植入园土∶腐叶土∶砂土＝2∶2∶1的培养土中。
常温光照培养条件是：温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux；
生根光照培养条件是：温度为22±2℃、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux。
本发明的有益技术效果是：利用无性繁殖技术对种苗培育方面的传统方式行了改进。在人工制造的优化环境里，促进细胞的快速分裂和繁殖；使用优化基因组合技术，解决了种苗体质优化的难题。并且可以把植物中各种优良种性，如抗寒、抗旱、抗病、抗虫以及快速生长等进行移植和优化组合，创造出新型的优良品种，组培苗生根率达95％以上，移栽成活率达85％以上。采用该技术特别适用于母本材料少，急需大量商品苗，且原先需嫁接红枫品种。通过多代循环技术后，还能使生根时间大大缩短，这与植物的童性或幼性得到激发有直接的关系。正确理解与运用快繁技术，对于加快新品种扩繁，降低种苗成本意义巨大。
具体实施方式
a、外植体选择与表面灭菌：剪取日本红枫优良实生苗幼嫩枝，切取带有腋芽的茎段，将含腋芽的茎段在清水冲洗1h；然后外植体经75％酒精浸泡40s，再用体积比为3％NaClO溶液浸泡15min，最后用灭菌蒸馏水冲洗4～5次后作为组培的外植体待用；
b、诱导培养：无菌条件下将外植体切口变褐处切除，迅速将腋芽茎段的芽向上接入WPM+0.1mg/L TDZ+0.1mg/L BA诱导培养基上，诱导腋芽萌发，然后分化丛生芽；培养条件为：温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux；
c、增殖培养：在无菌条件下将丛生芽切成单株接入WPM+0.2mg/L TDZ+0.1mg/L BA增殖培养基中进行增殖培养，继续分化丛生芽，扩大增殖系数；每2月继代培养1次。培养条件为：温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux；
d、生根培养：将单株芽生长到2-3cm时，将组培苗接种到WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA生根培养基中培养1-2周，诱导生根，生根率可达95％以上。培养条件为：温度为22±2℃、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux；
e、组培苗炼苗：当生根的组培苗生长到3-5cm以上时，将培养罐开盖，进行炼苗1-2周，选取生长良好的进行移栽；
f、移栽：将组培苗上残留的培养基洗净，植入园土∶腐叶土∶砂土＝2∶2∶1的培养土中，成活率达85％以上。