草珊瑚有效部位提取物及其制备方法.pdf

本发明涉及一种从中药草珊瑚中提取的酚酸类有效部位及其制备方法，所述有效部位中所含的酚酸类化合物包括迷迭香酸、原儿茶酸、异秦皮啶、咖啡酸，提取物中酚酸类化合物的总含量≥50％。草珊瑚用水或乙醇提取，提取液高速离心，离心液用有机复合膜进行超滤，超滤液调pH值为1～7，上树脂柱吸附，先用2～3倍柱体积的水洗脱，再用pH为8～14的10％～70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得有效部位提取物。

1.  一种草珊瑚有效部位提取物，其特征在于：该提取物是从中药草珊瑚中提取的酚酸类有效部位，所述有效部位中所含的酚酸类化合物包括迷迭香酸、原儿茶酸、异秦皮啶、咖啡酸。

2.  根据权利要求1所述的草珊瑚有效部位提取物，其特征在于：其中酚酸类化合物总含量≥50％。

3.  根据权利要求1或2所述的草珊瑚有效部位提取物的制备方法，其特征在于：该方法包括下列步骤：
(1)、草珊瑚用水或乙醇提取，提取液高速离心，离心液用有机复合膜进行超滤；
(2)、超滤液调pH值为1～7，上树脂柱吸附，先用水洗脱，再用pH为8～14的10％～70％乙醇洗脱；
(3)、收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得有效部位提取物。

4.  根据权利要求3所述的草珊瑚有效部位提取物的制备方法，其特征在于：超滤所用的有机复合膜选自聚砜、醋酸纤维、聚四氟乙烯或聚丙烯类，其截留分子量为5000～200000。

5.  根据权利要求3所述的草珊瑚有效部位提取物的制备方法，其特征在于所述的树脂选自大孔树脂或聚酰胺树脂，其中大孔吸附树脂选自HPD-100、HPD-400、HPD-500或AB-8。

6.  根据权利要求1所述的草珊瑚酚酸类有效部位与药学上可接受的药用辅料组成的药物组合物或制剂。

7.  根据权利要求6所述的制剂，包括注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、口服液、软膏剂或凝胶剂。

8.  根据权利要求1所述的草珊瑚酚酸类有效部位提取物在制备抗菌消炎药物中的应用。

9.  根据权利要求1所述的草珊瑚酚酸类有效部位提取物在制备癌症的辅助治疗药物中的应用。

草珊瑚有效部位提取物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种中药有效部位提取物，特别是一种从中药草珊瑚中提取的酚酸类有效部位及其制备方法和其在制备抗菌消炎药物和癌症的辅助治疗药物中的应用。
背景技术
草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai)为金粟兰科植物，又名肿节风、九节茶、接骨莲、接骨木等。药用全草，具有抗菌消炎、清热解毒、祛风除湿、活血止痛、通经接骨等功效，用于治疗各种炎症性疾病、风湿关节痛、疮疡肿毒、跌打损伤、骨折等，近年亦用于癌症的辅助治疗，对胰腺癌、胃癌、直肠癌、肝癌、食道癌等有明显疗效。
虽然部分从草珊瑚中分得的化合物已被证明有一定的药理活性，但到目前为止还没有完全明确草珊瑚的药用物质基础，市场上销售的草珊瑚制剂均属粗提物制剂，如《中国药典》2005版收载的“肿节风片”、“血康口服液”、“复方草珊瑚含片”和《卫生部药品标准》十四册收载的“肿节风注射液”；因此，开发用量小、疗效高、有效成分明确的草珊瑚有效部位制剂对提升中药草珊瑚的药用价值具有重大意义。
目前对草珊瑚有效部位的研究大多集中在黄酮、香豆素和有机酸类化合物，对酚酸类化合物的研究甚少，公开号为CN 1879672A的专利公开了一种以咖啡酸3，4-二羟基苯乙酯为有效成分的肿节风有效部位总多酚和公开号为CN 101020637A的专利公开了一种以肿节风为原料制备含迷迭香酸总多酚的方法，但前者所述有效成分咖啡酸3，4-二羟基苯乙酯至今没有其从草珊瑚中分离得到的文献报道，后者除迷迭香酸之外，没有明确总多酚中的其它酚类成分，且关键在于两者所采用的有效部位制备方法较为繁琐，实施难度较高，不便于工业化大生产。
据大量文献报道，草珊瑚酚酸类化合物中含量较高的迷迭香酸具有多种与草珊瑚全草相同或相近的药理作用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种新的草珊瑚酚酸类有效部位及其制备方法，利于工业化大生产；本发明另一个目的就是开发用量小、疗效高、有效成分明确的草珊瑚有效部位制剂。
本发明公开的草珊瑚有效部位提取物是从中药草珊瑚中提取的酚酸类有效部位，所述有效部位中所含的酚酸类化合物包括原儿茶酸、咖啡酸、异秦皮啶和迷迭香酸。
所述的中药草珊瑚为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai的干燥全株。
所述的草珊瑚有效部位提取物中酚酸类化合物的总含量≥50％。
本发明是通过以下技术方案完成的。包括对草珊瑚中酚酸类化合物分离纯化，并对所得有效部位提取物的化学成分进行了深入的研究，对其结构进行了鉴定；酚酸类化合物提取工艺研究；总酚酸的含量测定方法研究；草珊瑚中酚酸类化合物抗菌消炎作用研究，具体过程及结果如下：
一、草珊瑚有效部位提取物中酚酸类化学成分的分离
草珊瑚有效部位提取物，加水溶解后，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液分别减压浓缩得乙酸乙酯溶解部分和正丁醇溶解部分。
乙酸乙酯溶解部分用硅胶柱层析(100-200目)进行粗分离，再通过硅胶柱层析(200-300目)、RP-18反相柱层析、凝胶柱层析和重结晶等方法进一步分离、纯化，最终鉴定了其中4个酚酸类化合物，他们分别是3，4-二羟基苯甲酸、3，4-二羟基肉桂酸、异秦皮啶和迷迭香酸，其余酚酸类化合物还需进一步分离纯化。
二、草珊瑚有效部位提取物中酚酸类化学成分的鉴定
3，4-二羟基苯甲酸[又叫原儿茶酸(3，4-Dihydroxybenzoic acid)]：分子式C₇H₆O₄，白色粒状晶体(甲醇)，易溶于甲醇；UV(MeOH)λ_max(logε)：222(3.92)，343(3.94)nm；ESIMS m/z：307[2M□H]^□，189[M+Cl]^□，153[M□H]^□，109[M□COOH]^□；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.32(1H，d，J＝2.0Hz，H-2)，7.27(1H，dd，J＝2.0，8.0Hz，H-6)，6.76(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)。结构式如下：

3，4-二羟基肉桂酸[又名咖啡酸(Caffeic acid)]：分子式C₉H₈O₄，淡黄色簇晶(MeOH)；UV(MeOH)λ_max：326，300，217nm；ESI-MS m/z：181[M+Na]⁺，分子质量180；¹HNMR(Acetoned₆，400mHz)δ：8.25(1H，brs，H-4)，8.15(1H，brs，H-3)，7.55(1H，d，J＝15.6Hz，H-8)，7.16(1H，d，J＝2.0Hz，H-2)，7.04(1H，d，J＝8.0，2.0Hz，H-6)，6.87(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，6.27(1H，d，J＝16.0Hz，H-7)；¹³CNMR(Acetone-d₆，100mHz)δ：127.3(C-1)，116.0(C-2)，146.0(C-3)，148.4(C-4)，122.1(C-5)，115.4(C-6)，145.6(C-7)，114.8(C-8)，167.9(C-9)。结构式如下：

异秦皮啶(Isofraxidin)：分子式C₁₁H₁₀O₅，黄色针晶(丙酮)，易溶于甲醇、丙酮；UV(MeOH)λ_max(logε)：222(4.25)，266(4.04)，326(2.35)nm；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.90(1H，d，J＝9.6Hz，H-3)，7.02(1H，s，H-5)，6.24(1H，d，J＝9.6Hz，H-4)，3.82(6H，s，2□OCH₃)。结构式如下：

迷迭香酸(Rosmarinic acid)：分子式C₁₈H₁₆O₈，_D²⁰+142□(c1.5，MeOH)，淡黄色粉末，易溶于甲醇；UV(MeOH)λ_max(logε)：221(4.07)，291(4.04)，327(4.17)nm；ESIMS m/z：719[2M□H]^□，359[M□H]^□；197，161；¹H NMR(400MHz，C₅D₅N)：δ8.01(1H，d，J＝16.0Hz，H-7)，7.51(1H，d，J＝2.0Hz，H-2)，7.49(1H，d，J＝2Hz，H-2′)，7.20(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，7.15(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，7.05(1H，dd，J＝8.0，1.6Hz，H-6)，7.03(1H，dd J＝8.0，1.6Hz，H-6′)，6.67(1H，d，J＝16.0Hz，H-8)，5.92(1H，dd，J＝4.0，8.4Hz，H-8′)，3.57(1H，dd，J＝4.0，14.4Hz，H-7′a)，3.48(1H，dd，J＝8.4，14.4，H-7′b)；¹³C NMR(100MHz，C₅D₅N)：δ126.8(C-1)，116.0(C-2)，147.7(C-3)，150.6(C-4)，118.0(C-5)，122.2(C-6)，146.2(C-7)，114.8(C-8)，167.4(C-9)，129.3(C-1′)，116.7(C-2′)，147.3(C-3′)，146.6(C-4′)，116.6(C-5′)，121.1(C-6′)，37.8(C-7′)，74.9(C-8′)，173.4(C-9′)。结构式如下：

本发明还利用高效液相色谱法对所得有效部位提取物进行进一步分析，在所得色谱图上成功归属了上述已鉴定的4个酚酸类化合物。
本发明所要解决的另一个技术问题是公开上述草珊瑚有效部位提取物的制备方法，所述制备方法包括下列步骤：
草珊瑚用水或乙醇提取，提取液高速离心，其中乙醇提取的药液先回收乙醇，然后用等量的水充分溶解后，静置，过滤，滤液高速离心，离心液用有机复合膜进行超滤，超滤液调pH值为1～7，上大孔吸附树脂柱吸附，先用2～3倍柱体积的水洗脱，再用pH为8～14的10％～70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得有效部位提取物。
本发明草珊瑚有效部位提取物制备过程中，超滤所用的有机复合膜可以是聚砜类、醋酸纤维类、聚四氟乙烯类或聚丙烯类有机复合膜，其截留分子量为5000～200000；所述的树脂柱选自大孔树脂或聚酰胺树脂，其中大孔吸附树脂柱所用的大孔吸附树脂可以是HPD-100、HPD-400、HPD-500或AB-8。
本发明草珊瑚有效部位提取物可以在制备抗菌消炎药物中应用。
本发明草珊瑚有效部位提取物可作为药物活性成分与药学上可接受的药用辅料组成抗菌消炎的药物组合物或制剂，所述药物组合物或制剂的剂型包括注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、口服液、软膏剂或凝胶剂。
本发明草珊瑚有效部位提取物(提取物A)与草珊瑚总水提物(提取物B)在抗菌消炎方面的药效学比较研究试验：
1.两种提取物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响
取体重为18～22g的小鼠60只，雄性，常规饲养3天后，按体重随机分组，分别灌胃草珊瑚提取物A 30g/kg，草珊瑚提取物B 30g/kg，强的松10mg/kg及等量蒸馏水，每天两次，连续7天，末次给药后1小时于小鼠右后足皮下注射1％角叉菜胶0.05ml/只致炎，在致炎后4小时，以长短毛交界处取下左右后足称重，以左右后足重量差作为肿胀度。结果见表1。
表1草珊瑚两种提取物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响(X±SD)