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1、10申请公布号CN104042657A43申请公布日20140917CN104042657A21申请号201410301672622申请日20140627A61K36/258200601A61P1/16200601A61K35/58200601A61K35/55200601A61K35/41320060171申请人漳州片仔癀药业股份有限公司地址363000福建省漳州市上街1号72发明人潘杰黄进明洪绯罗志毅陈志亮74专利代理机构北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250代理人赵敏54发明名称片仔癀及其制剂在制备治疗肝纤维化药物中的用途57摘要本发明属于中药药理领域，公开了片仔癀用于制备抗肝纤维化。
2、药物中的用途。所述片仔癀能够显著改善肝纤维化大鼠肝功能，减轻肝脏纤维化程度，使片仔癀在抗肝纤维化方面的临床应用具备科学依据。51INTCL权利要求书1页说明书8页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书8页附图2页10申请公布号CN104042657ACN104042657A1/1页21片仔癀及其制剂在制备治疗肝纤维化药物中的用途。2根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述治疗肝纤维化是指显著改善肝功能，减轻肝脏纤维化程度。3根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述片仔癀选择性加入常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的制剂。4根据权利要求3所述的用。
3、途，其特征在于，所述片仔癀制剂选择性添加常规辅料制成临床上可接受的锭剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、酊剂、酒剂、煎膏剂、合剂。5如权利要求14任一所述的用途，其特征在于，其中片仔癀及其制剂的日服用制剂量中含片仔癀0309G。权利要求书CN104042657A1/8页3片仔癀及其制剂在制备治疗肝纤维化药物中的用途技术领域0001本发明属于中药药理领域，具体涉及一种片仔癀及其制剂在制备治疗肝纤维化药物中的用途。背景技术0002肝纤维化是各种致病因子引起的肝脏内结缔组织增生出现异常，进而引起肝脏内细胞外基质过度沉积的渐进性病理过程。肝纤维化是各种慢性肝病共同病理过程，具有可逆性，逆转肝纤维化是。
4、防治慢性肝病和肝硬化的关键。现临床上多采用干扰素、拉米夫定等抗病毒治疗，但易产生耐药性，且长期服用副作用较大，一旦停药还会产生反跳现象，严重者导致死亡。显然，抗病毒治疗很难防止肝纤维化。0003中医认为，肝纤维化病机复杂，特点是本虚标实，虚实夹杂，其主要病理因素有湿、热、痰、瘀、郁、毒，正气亏虚，热毒蕴结肝络是肝纤维化病机的要点。0004片仔癀是由牛黄、三七、蛇胆、麝香等多种名贵中药精制而成的锭剂，气微香，味苦、微甘。方中三七益气活血，归心、肝二经，为君药，配以牛黄、蛇胆同样归心、肝二经，清热解毒为臣，防治郁久化热或辅助君药加强活血化瘀的作用，佐以麝香，性温、味辛香，功善走窜，开窍化瘀有神效，。
5、引诸药直达病所，共奏清热解毒、凉血化瘀、消肿止痛之功，对肝硬化症属热毒蕴结者有显著疗效。发明内容0005为此，本发明的目的在于公开了片仔癀及其制剂在制备治疗肝纤维化药物中的新用途。0006所述治疗肝纤维化是指显著改善肝功能，减轻肝脏纤维化程度。0007所述片仔癀选择性加入常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的制剂。0008所述片仔癀制剂选择性添加常规辅料制成临床上可接受的锭剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、酊剂、酒剂、煎膏剂、合剂。0009所述片仔癀及其制剂的日服用制剂量中含片仔癀0309G。0010为解决上述技术问题，本发明采用药效学研究方法证实了片仔癀在治疗肝纤维化方面的显著作用，使。
6、片仔癀在治疗肝纤维化方面的临床应用具备科学依据。0011本发明所述方案的药物新用途在现有片仔癀复方制剂的基础上，开发出其与原有疗效不同的新的治疗用途，发现现有片仔癀可用于制备治疗肝纤维化药物的新用途，不仅为现有片仔癀制剂的利用开发出新的用途，同时也为肝纤维化这一病机复杂、治疗效果欠佳的慢性疾病开辟了一种新的中药治疗方法，不仅有效率高且副作用低。0012实验例001311材料0014111药物0015给药组片仔癀根据现有技术常规方法制得。说明书CN104042657A2/8页40016对照组药物扶正化瘀胶囊由上海黄海制药有限责任公司生产，规格001760粒装，批号121101；0018CCL4购。
7、于国药集团化学试剂有限公司，批号20130129；0019橄榄油购于益海嘉里食品营销有限公司，批号20121209。0020112动物0021雄性WISTER大鼠，清洁级，体重15010G，共64只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号SCXK京20120001，饲养于上海中医药大学实验动物中心屏障动物房，室温202，相对湿度6070。002212方法0023121模型建立0024CCL4大鼠肝纤维化模型复制清洁级雄性WISTAR大鼠15010G，首次以CCL45MLKG1大鼠体重的剂量皮下注射，第二次开始以40CCL4橄榄油混悬液3MLKG1大鼠体重的剂量皮下注射，每周2次，共。
8、4W。前两周饲以高脂低蛋白饲料，后两周饲以纯玉米饲料，自由饮水。高脂饲料配方795玉米粉、20猪油、05胆固醇，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。0025122分组与治疗0026在造模的同时，按下表随机分组，分为4组药物治疗组，正常组、模型组用灭菌自来水10MLKG1灌胃，其余各组以相应药物灌胃，每日一次。治疗用药4W。4W结束后收集标本作相关指标检测，进行药效学对照观察。00270028123实验观察与取材0029每周测量各组大鼠体重，记录动物一般情况。0030用药疗程结束后，以2戊巴比妥腹腔注射麻醉大鼠，后腔静脉采血，离心分离血清，取肝脏左叶组织，10福尔马林固定，脱水，透明，石蜡包埋。
9、，用于胶原和免疫组化染色。其余肝组织分装在15ML离心管备用。记录大鼠一般情况、体重、肝重、脾重，腹水情况。0031124血清学指标检测0032全自动生化分析仪天门冬氨酸氨基转移酶AST测定试剂盒PUREAUTOSAST，上海华臣生物试剂有限公司，批号01AST121210。0033丙氨酸氨基转移酶ALT测定试剂盒PUREAUTOSALT，上海华臣生物试剂有限公司，批号01ALT121112。说明书CN104042657A3/8页50034白蛋白ALB测定试剂盒ALBUMIN，上海华臣生物试剂有限公司，批号02ALB121106。0035胆固醇CHOL测定试剂盒CHOLESTEROL，上海华臣。
10、生物试剂有限公司，批号01CHOL121107。0036甘油三酯TG测定试剂盒TRIGLYCERIDES，上海华臣生物试剂有限公司，批号02TG130514。0037低密度脂蛋白胆固醇LDLC测定试剂盒LDLCHOLESTEROL，上海华臣生物试剂有限公司，批号02LDL121212。0038高密度脂蛋白胆固醇HDLC测定试剂盒HDLCHOLESTEROL，上海华臣生物试剂有限公司，批号02HDL121212。0039手工检测谷氨酰胺转肽酶GT，南京建成生物工程研究所，批号20131120。0040125肝组织病理染色0041肝组织经中性甲醛缓冲液固定，石蜡包埋，切片厚度为4M。0042HE染。
11、色脱蜡入水即石蜡切片58烘箱放置30MIN，二甲苯10MIN，二甲苯10MIN，无水乙醇10MIN，无水乙醇10MIN，95乙醇2MIN，80乙醇2MIN，70乙醇2MIN，蒸馏水洗净乙醇。HARRIS苏木素染色510MIN，自来水迅速洗去浮色，蒸馏水稍洗，75盐酸分化30S，自来水冲洗切片至细胞核返蓝，蒸馏水稍洗，伊红乙醇液12MIN。脱水、透明和封固95乙醇1MIN，5乙醇1MIN，100乙醇1MIN，100乙醇1MIN，二甲苯1MIN，二甲苯1MIN，中性树胶封固。0043胶原纤维染色天狼星红染色石蜡切片常规脱蜡至水，加天狼星红30MIN，置湿盒，纯酒精分化2S，脱水、透明，中性树胶封固。
12、。0044126统计方法0045不同的资料采用不同的统计方法。计量资料采用均数加减标准差表示，当资料满足正态分布且方差齐性时，采用单因素方差分析ONEFACTORANOVA的单向分类的方差分析ONEWAYCLASSICATIONANOVA，多个样本均数间的多重比较采用最小显著差异LEASTSIGNICANTDIFFERENCE，LSDT检验或SNKSTUDENTNEWMANKEULS检验；当资料满足正态分布不满足方差齐性时，采用独立样本T检验；当资料不满足正态分布和方差不齐时采用TAMHANEST2或DUNNETTST3；等级分组资料采用RIDIT分析；所有数据均采用SPSS115统计软件进行。
13、统计。00462实验结果004721肝脏、脾脏变化与死亡率统计结果。0048与正常大鼠相比，模型组大鼠体重下降，统计学差异显著P005；各组间无统计学差异P005，结果见表2。0050表1各组药物对CCL4模型大鼠肝重/体重、脾重/体重的影响0051说明书CN104042657A4/8页60052注正常组与模型组比较P005。0068表4各组药物对CCL4模型大鼠血清中血脂指标的影响00690070注正常组与模型组比较P005，P001；给药组与模型组比较P005，P001说明书CN104042657A6/8页8007124各组药物对CCL4模型大鼠血清中GT指标的影响0072与正常组大鼠相比。
14、，模型组大鼠GT升高，且统计学差异显著P001；与模型组相比，各给药组GT降低，但只有对照组和中剂量组统计学差异显著P005，其余无统计学差异；各治疗组间无统计学差异，结果见表5及图4。0073表5各组药物对CCL4模型大鼠血清中GT指标的影响007400750076注正常组与模型组比较P005，P001；给药组与模型组比较P005，P001007725肝组织病理学观察0078251大鼠肝组织HE染色结果0079与正常组大鼠相比，模型组大鼠肝组织出现较广泛的肝细胞肿胀，小叶内广泛分布大泡肝细胞脂肪变性，胞浆内脂滴大小不一，中央静脉周围肝细胞出现气球样变性，肝小叶结构紊乱。与模型组相比，治疗组大。
15、鼠肝细胞索较为规则，治疗组肝组织脂滴大小和数量均明显下降，结果见图5，图中A正常组；B模型组；C对照组；D低剂量组；E中剂量组；F高剂量组。0080252大鼠肝组织天狼星红染色结果00812521病理观察0082与正常组大鼠相比，模型组大鼠肝组织胶原增生明显，纤维组织弥漫性增生严重，向肝小叶组织内伸展，分割包绕肝组织，肝小叶结构紊乱形成假小叶。治疗组大鼠肝纤维组织增生程度减轻，纤维间隔较窄，着色浅，多为不完全间隔，肝窦内连续性环状胶原减少或断续，结果见图6，图中A正常组；B模型组；C对照组；D低剂量组；E中剂量组；F高剂量组。00832522胶原染色肝纤维化分级统计结果0084胶原染色肝纤维化。
16、分级统计结果详见表6。0085表6各组药物对DMN肝纤维化大鼠肝纤维化CHILD分级的影响00860087说明书CN104042657A7/8页90088各组间方差分析F8210，P0000，可以认为各组间存在差异。同时通LSD和SNK两两间比较发现，与正常大鼠比较，模型大鼠肝组织纤维化程度存在显著差异P000；与模型组比较，中剂量组在改善纤维化程度存在显著差异P001，高剂量组存在差异P005；各组间无统计学差异。00893结论0090本实验结果表明，CCL4模型大鼠给予口服灌胃片仔癀粉末混悬液治疗4周后，大鼠血清中AST、ALT、TBIL较模型组活性均明显降低，肝纤维组织增生程度减轻，说明。
17、片仔癀粉末混悬液能够显著改善肝功能，减轻CCL4所致的慢性肝损伤和纤维化，其中以中、高剂量组疗效相对较好。附图说明0091为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中0092图1为本发明所述实验例中大鼠血清中ALT及AST酶活力比较；0093图2为本发明所述实验例中大鼠血清中白蛋白及总胆红素含量测定结果比较；0094图3为本发明所述实验例中大鼠血清中胆固醇，甘油三酯，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量测定结果比较；0095图4为本发明所述实验例中大鼠血清中GT含量测定结果比较；0096图5为本发明所述实验例中各组大鼠肝组织HE染色情况。
18、比较HE染色，200；0097图6为本发明所述实验例中各组大鼠肝组织天狼星红染色情况比较天狼星红染色，200。具体实施方式0098实施例10099取三七85重量份，蛇胆7重量份，牛黄5重量份，麝香3重量份，按照传统工艺制成锭剂，每粒0630G，用于治疗肝纤维化。每日3次，每次0309G。0100实施例20101取实施例1中片仔癀锭剂粉碎成颗粒，加入常规辅料按照常规工艺制成片剂，每片制剂中含有片仔癀0204G，用于治疗肝纤维化。每日3次，每次24片。说明书CN104042657A8/8页100102实施例30103取实施例1中片仔癀锭剂粉碎成颗粒，填充胶囊制成胶囊剂，每粒胶囊装0204G。用于治。
19、疗肝纤维化。每日3次，每次24粒。0104实施例40105取实施例1中片仔癀锭剂粉碎成颗粒，加入常规辅料按照常规工艺制成颗粒剂，每袋颗粒剂中含有片仔癀0309G，用于治疗肝纤维化。每日3次，每次1袋。0106实施例50107取实施例1中片仔癀锭剂粉碎成颗粒，加入常规辅料按照常规工艺制成丸剂，每丸制剂中含有片仔癀00502G，用于治疗肝纤维化。每日3次，每次36丸。0108显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。说明书CN104042657A101/2页11图1图2图3说明书附图CN104042657A112/2页12图4图5图6说明书附图CN104042657A12。