本发明涉及化妆品领域、医药保健领域应用的动物提取物及其提取方法。 蜗牛的粘蛋白及蛋白质含量居所有动物之首,内含丰富的特异成分:粘蛋白(醣蛋白)、18种人体无法合成的必需的氨基酸、脂肪酸、有机酸、维生素、30多种具有生物活性的生物酶及免疫活性物、多种矿物质和人体所需的微量元素、硒、锌、硼、钙、磷、铁等多元化的天然营养成份。因此它是一种高蛋白、低脂肪营养丰富的传统食品和具有重要的药用价值,已成功地从蜗牛的消化腺中分离、提取了蜗牛酶,从蜗体内的蛋白腺体中提取对血液学研究有应用价值的凝集素。把蜗牛应用到其他更广泛的领域,越来越被人们所重视;如化妆品领域、医疗保健领域等,关键是如何从蜗牛中提取它的有效营养成份。提取方法必须是工艺简便,适用于扩大生产。提供人们能接受的合理价格,稳定而无菌的蜗牛营养液,目前尚末见报到。
本发明的目的通过严格可行的提取工艺操作步骤,采用新的除菌方法,可完全滤净蜗牛提取液中的全部细菌,并保护了对人体地全部有效成份和蜗牛的生物活性物质不受损失和破坏,从而提供一种稳定而无菌的蜗牛营养提取液。
本发明的全蜗牛营养提取液是以精选的活蜗牛的肉及其内脏的提取液100份(重量),维生素C3~5份(重量)及防腐杀菌0.1份(重量)组成,并通过8~15万分子量的聚砜中空纤维超滤装置超滤除菌而实现的。以10万分子量的聚砜中空纤维最好。除菌率可达到100%。可完全滤净蜗牛提取液的全部细菌,而保护了蜗牛营养提取液中的对人体全部有效的成份滤过和蜗牛酶的生物活性。
本发明的蜗牛营养液制作工艺步骤如下:
(1)精选蜗牛
.凡是人工饲养的蜗牛均可选用,
.要求无病态、活跃、体壮、健康,
.每只重量在10克以上可选用,国内人工饲养的蜗牛一般每只重量均在10克-80克之间,最大的重量可达500克,以每只30-60g较好,
.不能选用有臭味、缩壳、以及已经死亡的蜗牛。
.把经挑选做为提取用的蜗牛放入底部有小孔的塑料箱内静养,每箱最多平放入一层为好,不能堆压。
.将活蜗牛饥饿48-72小时静养,不再喂放任何饮料,蜗牛经静养后基本已排泄干净肠胃内的食物及粪便。
.每隔12小时用15°~25℃左右的清水冲洗蜗牛一次,最好选用早晚时间冲洗冲去蜗牛的排泄物(但不得用水单个洗涮,以防减少体液)。冲洗后,既避免蜗牛因饥饿重新吃掉排泄的粪便,也起到保持和补充蜗牛自身应需的水份。
(2)蜗牛的宰杀及肉、内脏的分离:
.将静养的蜗牛用净水冲洗干净,再用漂白粉水或无毒杀菌剂冲洗一遍,以灭除蜗牛体表面的细菌,捞出后再静放4小时,待次氯酸钙(漂白粉)完全挥发掉后即可宰杀,
.将蜗牛放在操作台上,用方木将蜗牛壳敲碎,注意不要敲坏肉和内脏,敲时用力要均匀,
.剥去碎壳(干燥、粉碎后另做它用),用手抓住蜗牛肉,用不锈钢剪刀沿蜗牛同内脏边缘部分将内脏剪掉(注意:稍离开内脏一点距离,以防剪破内脏,使蜗牛酶流出,造成损失),将完整的肉和内脏分离并分开放置。
(3)蜗牛肉和内脏提取液的操作过程:
(3.1)、将肉放入底部带阀门有搅拌装置的容器中(可用不锈钢或搪瓷的任一种)按蜗牛肉∶水为1∶1~3(重量份),加入去离子水进行搅拌,搅拌速度为150~180转/分,以180转/分较好,每搅2分钟,静置3分钟,重复5次。然后,放净溶解出的全部液体备用;再按以上的方法和步骤重做2次,第四次将已成硬块的蜗牛搅碎,用同样的方法加水,再重复一次放出溶解液备用。收集4次提取液备用。取出剩余的渣滓(干燥后另做它用,注:若每次加工蜗牛肉10公斤,总计加水量不少于20公斤,不得多于80公斤;总计提取液不得少于22.5公斤,不得多于82.5公斤)。
(3.2)、如(3.1)所述方法先将蜗牛的全部内脏按内脏∶水为1∶1~3份(重量)加入去离子水初次溶后,取出溶解液备用。
(3.2.1)第二次将蜗牛全部内脏搅碎,加入2份(重量)水、搅拌溶解,收集溶解液。
(3.2.2)第三次将剩余的内脏加入1~4份(重量)的水,搅拌5分钟后,用100目尼龙筛子过滤,取过滤后溶解液,
(3.2.3)第四次将剩余的物质由再加2份(重量)水,搅拌溶解后,取过滤出的提取液备用。滤完后倒掉渣滓(干燥后另做它用)。共收集4次蜗牛内脏提取液备用。所述每份水的重量与第一次提取蜗牛全部内脏的重量相等。
总计加入水量每10公斤不得少于20公斤,不得多于80公斤,总计提取液不得少于23.5公斤,不得多于89.5公斤。
所述的水可以是去离子水或蒸馏水或矿泉水中的任一种。
以上蜗牛和内脏的提取液分别用孔径为2-10微米(以孔径以5微米最好)的过滤机械过滤,混装到一起,以每100份(重量)提取液加入0.1份(重量)的防腐杀菌剂,再加入3-5份(重量)的维生素C(抗坏血酸,有很强的抗氧化和还原作用,可对抗外界及内部具氧化性物质的氧化作用,保护其中的蜗牛酶及其它易失活和氧化的的效成份的活性)。溶解后,搅拌均匀、静置,使之充分水解(也可在此时进行复配)。
放入储料罐内,再经过并列的2台10万或8-15万分子量以10万分子量最好聚砜的中空纤维超滤装置超滤2次后,滤净内有的全部细菌。第一次滤菌率为99.95%和>99.98%,经第二次超滤后除菌率为100%。
再经-5℃的冷冻设备冷冻8-12小时即得稳定和无菌的全蜗牛营养提取液,或各种灌装前的全蜗牛营养液。可放置1-5℃的低温容器中保存。
通过本发明方法制作的蜗牛营养提取液由于无菌和稳定地保持了原蜗牛中含有的对人体有效营养成份(表1、表2),和蜗牛酶的含量*和生物活性**,
因此:
1、具有优良的生物活性及快速渗透作用、益于人体各部位快速吸收的特点,能有效地补充人体所需的养份,增强细胞活性,能有效、全面地改善肌体的内在养份所需机制,促进新陈代谢,可内服或外用。
2、蜗牛所含的特异成份-粘蛋白,除具有一般的滋养功能外,尚能隔除自由基,涂抹于皮肤表面后可以抵御紫外线,具有明显的抗皱、防晒、防止皮肤衰老的作用。
3、基于蜗牛自身营养成份的多元化和实用价值,以及与人体细胞十分相近的亲缘关系,其所含营养成份均利于人体的快速吸收,使其对人类的应用范围前景广阔。如用于美容、护肤、洗发、护发、洗浴液等高档天然产品的生产;还可用于配制高档营养品服液,及制作各类保健品、保健口服液、浓缩液等。
实例1
选用每只重量40~50克健康活泼的蜗牛10公斤,经饥饿静养60小时后,用20℃左右清水冲洗并用漂白粉溶液冲洗一遍、放置4小时后,将蜗牛在操作台上,用方木将壳敲碎,剥去碎壳,用不锈钢剪刀沿蜗牛同内脏边缘部分将内脏剪掉,将肉和内脏分开放置。将分离的3.5公斤蜗牛肉放入底部带阀门和带搅拌器的不锈钢容器中加入无离子水7公斤,搅抖2分钟,搅拌速度180转/分,静置3分钟,如此重复5次。然后,放净溶解后的全部液体备用;再按以上方法步骤重做2次,第四次将已成硬块的蜗牛搅碎,用同样方法加水,放出溶解液备用。共收集蜗牛肉4次溶解提取液27.8公斤备用。将分离出的蜗牛内脏2.5公斤的去离子水第一次浸泡、搅拌、溶解后取出溶解液备用。第二次再将蜗牛的全部内脏(包括卵),用机械方法将其搅碎成肉馅状,加入5公斤水溶解后,取出溶解液备用;第三次将剩余内脏内加入5公斤去离子水,充分搅动5分钟后,用100目尼龙筛过滤,过滤后取出溶解液备用。第四次将剩余的内脏再加入5公斤的去离子水,搅拌溶解后过滤取滤液备用。共收4次内脏提取液19.2公斤。
将上述蜗牛肉和内脏提取液分别用孔径5微米的过滤机过滤后,混装到一起,加入0.047克食用防腐杀菌剂,再加入1.8克维生素C,溶解后,搅拌均匀、静置4小时,放入储料罐内,再通过2台并列的10万分子量聚砜中空纤维过滤装置过滤,经2次超滤后除菌率达100%。再经-5℃冷冻10小时即得稳定和无菌的蜗牛营养提取液48.2公斤。
表1、粘液中氨基酸含量分析(盐 水解法) (单位:mg/100g)提取前提取后提取前提取后天门冬氨酸66.76.67甘氨酸41.43.6蛋氨酸5.30.49丙氨酸27.72.57苏氨酸25.22.7胱氨酸6.95.8异亮氨酸19.92.0缬氨酸24.42.12丝氨酸25.72.43赖氨酸24.62.20亮氨酸38.43.69组氨酸14.21.3谷氨酸110.612.1氨7.80.61苯丙氨酸21.12.03精氨酸33.83.25
表2、蜗牛肉中氨基酸含量分析(831-50AA氨基酸自动分析仪)(单位:%)提取前提取后提取前提取后门冬氨酸5.130.63异亮氨酸2.181.12苏氨酸2.250.28亮氨酸3.850.57丝氨酸2.770.41酪氨酸1.540.4谷氨酸8.251.12苯丙氨酸1.790.21甘氨酸4.290.5赖氨酸2.950.35丙氨酸2.870.36氨0.860.017胱氨酸0.580.07组氨酸0.820.01缬氨酸2.170.26精氨酸4.140.5蛋氨酸0.300.11脯氨酸2.210.26
*全蜗牛提取液中蜗牛酶含量测定:
蜗牛体内含有纤维素酶、半纤维素酶、乳糖酶、蔗糖酶、蛋白酶等30多种具有生物活性的混合酶,把已制作好的全蜗牛提取液分出1000克经离心(用低温离心机10000转/分,离心10分钟,留上清液,弃掉沉淀物)-→用四号细菌漏头过滤,收集滤液,将滤液预冷到-20℃后进行-→真空干燥后仍得棕褐色的干蜗牛酶0.86克,若换算成按比例等量的消化液,消化液中提取蜗牛酶,应净得0.91克干蜗牛酶(即以62.5ml蜗牛消化液溶成1000ml/克的全蜗牛提取液的比例中所得的干蜗牛酶)。
**全蜗牛提取液中蜗牛酶活性的测定:
经过用相差显微镜观察法、浊度测定法和蛋白质测定法等,以检查球形体的数目,从而得知提取液中蜗牛酶之活性和蜗牛消化腺体中提取的蜗牛酶,无显著差异。