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1、10申请公布号CN104173700A43申请公布日20141203CN104173700A21申请号201410450515122申请日20140905A61K36/896420060171申请人南京泽朗生物科技有限公司地址211225江苏省南京市溧水县白马镇工业集中区食品园3号72发明人苏刘花杨存54发明名称一种知母总皂苷的提取方法57摘要本发明公开了一种知母总皂苷的提取方法。方法步骤如下1）将知母烘干，粉碎；2）称取一定量的知母粉末加水浸润，然后加入知母粉末重量053的生物酶试剂进行酶解处理；3）酶解完成后，加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）将提取液过滤，滤渣重复提取，合并提取液，。
2、减压浓缩，得到知母总皂苷浓缩液；5）将浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得知母总皂苷。采用本发明制备知母总皂苷，工艺操作简单、生产成本低、所得产品纯度高、易于实现工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104173700ACN104173700A1/1页21一种知母总皂苷的提取方法，其特征在于以下步骤1）将知母烘干，粉碎；2）称取一定量的知母粉末加水浸润，然后加入知母粉末重量053的生物酶试剂进行酶解处理，收集酶解原料；3）然后加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）将。
3、提取液过滤，滤渣重复提取23次，合并提取液，减压浓缩至原体积的1/41/2，得到知母总皂苷浓缩液；5）将浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得知母总皂苷。2根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于步骤2）中所述的粉末大小为4060目，粉末与水的质量体积比为1051倍，浸泡时间为3060分钟。3根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于步骤2）中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在3045，酶解时间为24小时。4根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于步骤3）中所述的乙醇水溶液浓度为5070，体积。
4、为粉末重量的36倍。5根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于步骤5）中所述的大孔吸附树脂为X5、AB8、NK2、NKA2、NK9、D3520、D101、WLD中的一种。6根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于步骤5）中所述洗脱过程为先用24倍柱体积水洗去糖分，然后用25倍柱体积、1020乙醇洗去部分杂质，最后用25倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。权利要求书CN104173700A1/3页3一种知母总皂苷的提取方法技术领域0001本发明属于生物技术领域，涉及一种生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法提取、纯化知母总皂苷。背景技术0002知母，中药名，属清热下火药。主。
5、治温热病、高热烦渴、咳嗽气喘、燥咳、便秘、骨蒸潮热、虚烦不眠、消渴淋浊。知母也叫毛知母，在我国各地都有栽培，它有很强的抗旱抗寒能力，属多年生草本植物，在干旱少雨的荒山、荒漠、荒地中都能生长，是绿化山区和荒原的首选品种，它在全年各个季节都能播种，但主要以春播或夏播。知母为常用中药材，被社会广泛使用。家种知母主产河北省安国市、安徽省亳州市，形成了全国知名的两个种植基地。野生毛知母主产地河北张北、易县、赤城、来源、阜平；山西榆社、五台、代县、寿阳；内蒙古扎鲁特旗、西乌珠穆、东台珠穆、林西、科尔左中旗、阿荣旗；辽宁铁岭、阜新等地亦有分布。0003现代研究证明，知母根茎中含总皂甙约6，其中有知母皂甙（T。
6、IMOSAPONIN）A、A、A、A，B和B。其中知母皂甙A是萨尔萨皂甙元D吡喃半乳糖甙，知母皂甙A是萨尔萨皂甙元与知母双糖（TIMOBIOSE）结合而成的双糖甙。知母根茎中的皂甙元有萨尔萨皂甙元（SARSASAPOGENIN）、吗尔考皂甙元（MARKOGENIN）、新芰脱皂甙元（NEOGITOGENIN）。以前从知母中分离出来的皂甙知母宁（ASPHONIN）是吗尔考皂甙、知母皂甙A、A、B等的混合物亦分离出异菝葜皂甙元（SMILAGENIN）等皂甙类成分。尚含有黄酮类的芒果甙（MANGIFERIN,CHIMONIN），异芒果甙（ISOMANGIFERIN）；生物碱类的胆碱（CHOLINE），。
7、尼克酰胺（NICOTINAMIDE）；有机酸类的鞣酸（TANNICACID），烟酸（NICOTINICACID）以及四种知母多糖（ANEMARNA，B，C，D）。另外尚含铁、锌、锰、铜、铬、镍等多种金属元素以及黏液质、还原糖等。可以用于温病，邪在气分，高热、烦渴的气分实热证，有泻火除烦的作用，与石膏、竹叶配伍有协同之效；用于治疗肺热咳嗽或阴虚燥咳，有清泄肺火，滋阴润肺之效。常与贝母同用以增强清肺润燥之功，如医方集解二母散；用于阴虚火旺，骨蒸潮热，盗汗者，有滋阴降火的作用，常与黄柏相须为用；既能清泄肺胃之火，又能滋养肺肾之阴，故宜用于阴虚消渴，症见口渴、饮多、尿多者，同山药、五味子等配合使用可增。
8、强疗效，如玉液汤。0004皂苷（SAPONIN）别称碱皂体、皂素、皂甙、皂角苷或皂草苷。“皂苷”一词由英文名SAPONIN意译而来，英文名则源于拉丁语的SAPO，意为肥皂。皂苷（SAPONIN）是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷，主要分布于陆地高等植物中，也少量存在于海星和海参等海洋生物中。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等有价值的生物活性。0005目前，在我国有关提取知母总皂苷的工艺文献和专利都很少见到。本发明采用生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法提取、纯化知母总皂苷。该发明操作过程简单，提取率高，。
9、对环境污染小，成本消耗低，易于实现工业化生产。说明书CN104173700A2/3页4发明内容0006本发明的目的是为了填补从知母中提取总皂苷工艺的空白，提供一种操作简单、提取效率高、污染小的知母总皂苷的提取方法。0007为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案1）将知母烘干，粉碎；2）称取一定量的知母粉末加水浸润，然后加入知母粉末重量053的生物酶试剂进行酶解处理，收集酶解原料；3）然后加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）将提取液过滤，滤渣重复提取23次，合并提取液，减压浓缩至原体积的1/41/2，得到知母总皂苷浓缩液；5）将浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得。
10、知母总皂苷。0008步骤2）中所述的粉末大小为4060目，粉末与水的质量体积比为1051倍，浸泡时间为3060分钟。0009步骤2）中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在3045，酶解时间为24小时。0010步骤3）中所述的乙醇水溶液浓度为5070，体积为粉末重量的36倍。0011步骤5）中所述的大孔吸附树脂为X5、AB8、NK2、NKA2、NK9、D3520、D101、WLD中的一种。0012步骤5）中所述洗脱过程为先用24倍柱体积水洗去糖分，然后用25倍柱体积、1020乙醇洗去部分杂质，最后用25倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。采用本方法生产知母。
11、总皂苷，利用生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法，充分破坏细胞壁，增加和加快了活性成分的流出，通过大孔吸附树脂柱纯化过程，不仅大大提高了知母总皂苷的纯度，而且大孔吸附树脂可以回收再利用，从而降低了生产成本。该工艺简便易操作、提取效率高、污染小、所得产品纯度高、易于实现工业化生产。0013下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。0014具体实施方式实施例1取新鲜的知母烘干、粉碎，过40目筛。称取知母粉末50克放入提取器中，加入25毫升的水浸泡30分钟，然后加入025克的果胶酶试剂，在温度为30的条件下酶解2分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60。
12、的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取2次，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/4，得到知母总皂苷浓缩液。将知母总皂苷的浓缩液倒入X5大孔吸附树脂柱中，先用2倍柱体积水洗去糖分，然后用2倍柱体积、10乙醇洗去部分杂质，最后用2倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为8953，总皂苷的提取率为595。0015实施例2取新鲜的知母烘干、粉碎，过60目筛。称取知母粉末50克放入提取器中，加入30毫升的水浸泡40分钟，然后加入1克的果胶酶，在温度为40的条件下酶解3分钟，收集酶解说明书CN104173700A3/3页5原料，然后加入250毫升60的乙醇水溶液回流提取，滤。
13、渣提取2次，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/3，得到知母总皂苷浓缩液。将知母总皂苷的浓缩液倒入D3520大孔吸附树脂柱中，先用3倍柱体积水洗去糖分，然后用4倍柱体积、15乙醇洗去部分杂质，最后用4倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为9013，总皂苷的提取率为6052。0016实施例3取新鲜的知母烘干、粉碎，过60目筛。称取知母粉末50克放入提取器中，加入50毫升的水浸泡60分钟，然后加入15G克的生物酶试剂，在温度为45的条件下酶解4分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取3次，合并4次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，得到知母总皂苷浓缩液。将知母总皂苷的浓缩液倒入AB8大孔吸附树脂柱中，先用4倍柱体积水洗去糖分，然后用5倍柱体积、20乙醇洗去部分杂质，最后用5倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为9155，总皂苷的提取率为6145。说明书CN104173700A。