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1、10申请公布号CN104086473A43申请公布日20141008CN104086473A21申请号201410266245922申请日20140616C07C409/14200601A61K31/327200601A61K47/36200601A61K47/28200601A61K47/12200601A61P35/0220060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种叶轮木素的制备方法及抗白血病应用57摘要本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种叶轮木素的制备方法及抗白血病。
2、应用。制备方法包括以下步骤（1）取圆锥花叶轮木的茎原料粉碎，加入510倍量5099甲醇溶液超声提取23次；（2）提取液加入活性炭回流脱色，滤出活性炭浓缩；（3）加入大孔树脂柱中吸附，先用39倍量2050甲醇溶液洗脱，再用510倍柱体积5090甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩；（4）用乙酸乙酯溶液萃取，收集萃取液回收试剂用高速逆流色谱仪分离，紫外检测器在线监测，收集流分减压干燥即得叶轮木素产品。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度叶轮木素的生产。叶轮木素具有抗白血病作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国。
3、家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104086473ACN104086473A1/1页21一种叶轮木素的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）取圆锥花叶轮木的茎原料粉碎，加入510倍量5099甲醇溶液超声提取23次；（2）提取液加入活性炭回流脱色，滤出活性炭浓缩；（3）加入大孔树脂柱中吸附，先用39倍量2050甲醇溶液洗脱，再用510倍柱体积5090甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩；（4）用乙酸乙酯溶液萃取，收集萃取液回收试剂用高速逆流色谱仪分离，紫外检测器在线监测，收集流分减压干燥即得叶轮木产品。2根据权利要求1所述的叶轮木素的制备方法，其特征在于步骤（3）所述的。
4、大孔树脂可选HZ816、HPD100、AB8和D101中的一种。3根据权利要求1所述的叶轮木素的制备方法，其特征在于步骤（4）所述的高速逆流色谱仪分离条件为取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按13354725混合，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速7001000RPM，流速为13ML/MIN。4根据权利要求13所述方法制备的叶轮木素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂。5根据权利要求4所述的叶轮木素，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。权利要求书CN104086473A1/3页3一种叶轮木素的制备方法及抗白血病应用技术领域0001本发明公开。
5、了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种叶轮木素的制备方法及抗白血病应用。背景技术0002叶轮木素（OSTODIN），分子式为C33H46O10，分子量为60272，结构式为叶轮木素是从大戟科EUPHORBIACEAE圆锥花叶轮木OSTODESPANICULATABLUME的茎中分离得到的一种二萜类活性物质。叶轮木素具有细胞毒活性，体外对P388的ED50为0055G/ML。0003通过文献检索，现有活性物质的提取大都是采用硅胶、凝胶色谱法进行分乙醇提回流提取，硅胶、凝胶色谱法进行分离等步骤。由于操作复杂，制备量较小，样品得率低，不适合叶轮木素的工业化制备。发明内容0004为满足临床需要。
6、，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种叶轮木素的制备方法及抗白血病应用。0005为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种叶轮木素的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）取圆锥花叶轮木的茎原料粉碎，加入510倍量5099甲醇溶液超声提取23次；（2）提取液加入活性炭回流脱色，滤出活性炭浓缩；（3）加入大孔树脂柱中吸附，先用39倍量2050甲醇溶液洗脱，再用510倍柱体积5090甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩；（4）用乙酸乙酯溶液萃取，收集萃取液回收试剂用高速逆流色谱仪分离，紫外检测器在线监测，收集流分减压干燥即得叶轮木产品。0006步骤（3）所述的大孔树脂可选HZ816、HPD100、AB8和D。
7、101中的一种。0007步骤（4）所述的高速逆流色谱仪分离条件为取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按13354725混合，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速7001000RPM，流速为13ML/MIN。说明书CN104086473A2/3页40008所述制备的叶轮木素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。0009采用本法制备叶轮木素，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。0010下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式。
8、0011实施例1叶轮木素的制备取圆锥花叶轮木的茎粉碎，称10KG，用100L90甲醇溶液超声提取30分钟，提取2次，提取液加入100G活性炭回流脱色，滤出活性炭，减压浓缩至无醇加入HZ816大孔树脂柱中吸附，用4倍柱体积30甲醇溶液洗脱，再用7倍柱体积70甲醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至1000ML，加入乙酸乙酯溶液萃取5次，萃取液回收试剂，得浸膏。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按1342混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱管做固定相，开转主机，转速850RPM，同时泵入下相做流定相，建立动态平衡后，流速调节为2ML/MIN，用流动相溶解浸膏，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，。
9、连续制备，流分回收试剂，得叶轮木素32G，经HPLC检测，含量988。0012实施例2P388的抗白血病应用1、材料动物昆明种小鼠，雌雄各半性，体重202G，由南京中医药大学提供。0013细胞株P388小鼠淋巴细胞性白血病细胞株（S180），由中国科学院上海药物研究所提供。00142、方法在含有10胎牛血清的RPMI1640培养基中，将被试细胞调成密度为2104细胞/ML。将上述细胞株悬液接种于96孔培养板，每孔50L，置于饱和湿度、37和5CO2培养箱中培养24小时。分别加入溶剂对照01二甲基亚砜、阳性对照顺铂（DDP）以及不同浓度单体化合物的二甲亚砜溶液各50L，每组设3个复孔。培养72小。
10、时，于培养结束前4小时，各培养孔加入5MG/ML四唑翁盐MTT10L，置于饱和湿度、37和5CO2培养箱中培养4小时，每孔中加入150L二甲亚砜，振荡溶解生成MTT晶体甲臜，用酶标仪测570NMOD值，细胞存活率由样品OD值对于对照品OD值的比值计算。其中，叶轮木素对P388细胞的半数抑制浓度（IC50）有剂量效应曲线得到。00153、结果实现结果（见表1）本发明叶轮木素对P388细胞的生长有明显的抑制作用，其对P388细胞的生长抑制活性强于阳性对照顺铂（DDP），说明叶轮木素具有极佳的急性髓原细胞白血病的活性，在制备抗白血病药物中有良好的应用前景。0016表1本发明叶轮木素对P388细胞的抑制作用（N10，S）说明书CN104086473A3/3页5组别IC50（M）空白对照组阳性对照组5318叶轮木素组4417说明书CN104086473A。