制何首乌在制备抗紫外线产品及抗衰老外用产品中的应用.pdf

本发明涉及制何首乌提取物在制备抗紫外线产品中的应用。所述抗紫外线产品为以制何首乌提取物为活性成分制成的任一药学上可接受的药物，所述抗紫外线产品为外用药物；本发明还提供了制何首乌提取物在制备抗衰老外用产品中的应用。本发明可有效抑制由紫外线引起的体内的SOD含量下降，并能抑制由紫外线引起的体内的MDA含量升高，保护皮肤不受紫外线引起的物理损伤，提高皮肤的自我修复能力，从而解决紫外辐射给皮肤带来的损伤问题。将本发明的制何首乌提取物制备成外用产品应用时，在抗衰老的同时能够显著降低其对肝脏的损伤，在拓展制何首乌的使用方法的同时保证了用药的安全性。

1.  制何首乌提取物在制备抗紫外线产品中的应用。

2.  根据权利要求1所述的制何首乌提取物在制备抗紫外线产品中的应用，其特征在于，所述抗紫外线产品为以制何首乌提取物为活性成分制成的任一药学上可接受的药物。

3.  根据权利要求1所述的制何首乌提取物在制备抗紫外线产品中的应用，其特征在于，所述抗紫外线产品为外用药物。

4.  制何首乌提取物在制备治疗或缓解由紫外线引起的超氧化物歧化酶活性下降的产品中的应用。

5.  制何首乌提取物在制备治疗或缓解由紫外线引起的丙二醛含量增高的产品中的应用。

6.  制何首乌提取物在制备治疗或缓解由紫外线引起皮肤物理损伤产品中的应用。

7.  制何首乌提取物在制备抗衰老外用产品中的应用。

8.  制何首乌提取物在制备治疗或缓解由D-半乳糖引起的羟基脯氨酸浓度下降的外用产品中的应用。

9.  制何首乌提取物在制备治疗或缓解由D-半乳糖引起的金属蛋白酶组织抑制因子浓度下降的外用产品中的应用。

10.  根据权利要求1或权利要求7所述应用，其特征在于，所述制何首乌提取物按如下方法制备：
    以制何首乌的干燥块根为原料，粉碎得制何首乌粗粉，以70%乙醇-水为溶剂，回流提取3次，2 h/次，合并醇浸提取液，减压浓缩并干燥，制得干粉备用；
其中，所述制何首乌粗粉与所述70%乙醇-水的质量体积比为1:10。

制何首乌在制备抗紫外线产品及抗衰老外用产品中的应用
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及制何首乌在制备抗紫外线产品及抗衰老外用产品中的应用。
背景技术
紫外线对人类健康的危害，主要来自于自然界的太阳光和用于医学治疗的人造光。太阳光中的紫外辐射对人类来说是一种环境中的致癌物。紫外辐射给普通人皮肤带来的急性病主要包括红斑、黑斑以及局部或整个免疫系统功能下降。
目前用于防紫外线的方式主要有物理方法和化学方法；物理方法主要是使紫外线发生折射、反射、散射，比如防紫外线的阳伞就是利用这个原理，还可以通过物理防晒霜来防紫外线，物理防晒霜中含有二氧化钛，二氧化钛是一种非常有效的紫外线防晒霜，对人体无害，其缺点是物理防晒霜的颗粒感比较严重；化学方法主要是在皮肤表面涂上含有能够吸收紫外线的物质，并能通过吸收紫外线使自身发生化学反应，从而转化为无害的另一种化合物，化学防晒霜也有利用这种原理的，大多数化学防晒霜可以制成水薄型，体感较好，但其缺点是有些化学合成的防晒霜因光稳定性差，易氧化变质。因此仍需寻求一种防紫外线性能好体感较好的防晒剂。
制何首乌是一味道地的岭南药材，其口服药理作用主要表现为调节免疫功能、降血脂及抗动脉粥样硬化作用、心肌保护作用、保护神经作用和抗菌作用等，但是其长期口服给药可能会导致肝损伤。现有技术中的何首乌主要应用于延缓衰老、降血脂和抗动脉粥样硬化以及抗菌等作用，尚未有研究何首乌是否具有抗紫外的功效，本专利对何首乌的抗紫外功效进行研究并尝试寻求一种降低何首乌对肝损伤的使用方法。
发明内容
为解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种制何首乌在制备抗紫外线产品中的应用，本发明可有效抑制由紫外线引起的体内的SOD含量下降，并能抑制由紫外线引起的体内的MDA含量升高，保护皮肤不受紫外线引起的物理损伤，提高皮肤的自我修复能力，从而解决紫外辐射给皮肤带来的损伤问题。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
制何首乌提取物在制备抗紫外线产品中的应用。
发明人在将制何首乌提取物应用到小鼠抗紫外实验模型中后发现，制何首乌提取物能够有效抑制由紫外线引起的体内的SOD含量下降，对由紫外线引起的小鼠体内的MDA含量的增高有明显地抑制作用，同时还能够减少小鼠皮肤红斑面积及皱纹的产生，使用制何首乌提取物后可使小鼠皮肤外观受紫外线照射后造成的损伤得到修复，提高小鼠的抗紫外损伤修复能力。本发明为发明人首次发现制何首乌提取物具有抗紫外的功能，以制何首乌提取物为主要活性成分制备得到的药物具有较佳的抗紫外线功效，本发明可大大的扩展制何首乌的使用范围。
优选地，所述抗紫外线产品为以制何首乌提取物为活性成分制成的任一药学上可接受的药物。
优选地，所述抗紫外线产品为外用药物；进一步优选地，所述外用药物为外用洗剂、软膏剂或贴剂。制何首乌虽然具备各种提高机体免疫力的能力，但是诸多研究表明口服制何首乌及其成方制剂可导致肝损伤，发明人在实验中发现，将制何首乌制备成外用的抗紫外线产品，即经皮给药进一步有利于避免口服制何首乌制剂导致的对内脏的损伤。
优选地，制何首乌提取物在制备治疗或缓解由紫外线引起的超氧化物歧化酶活性下降的产品中的应用；发明人在进行制何首乌提取物对小鼠进行实验后发现，制何首乌提取物能够对由紫外线引起的小鼠体内的SOD酶活性的下降具有明显的抑制作用，从而能够抵抗紫外线辐射。
优选地，制何首乌提取物在制备治疗或缓解由紫外线引起的丙二醛含量增高的产品中的应用；发明人将制何首乌提取物应用到小鼠抗紫外实验模型后发现，较乳膏基质组相比，涂抹制何首乌提取物的小鼠体内的丙二醛含量低于乳膏基质组中的含量，与空白组中的丙二醛含量接近。
优选地，制何首乌提取物在制备治疗或缓解由紫外线引起皮肤物理损伤产品中的应用，进一步优选地，所述产品为能够保持皮肤表皮层结构完整、胶原纤维粗细分布均匀的产品，发明人经过小鼠实验发现，使用制何首乌醇提物组的小鼠皮肤表皮层结构较为完整，细胞分层较为清晰，真皮层可见波浪状胶原纤维组织，胶原纤维的粗细及分布较为均匀，没有明显断裂及排列紊乱现象，明显优于未使用制何首乌醇提物组的小鼠。
本发明的另一目的在于提供制何首乌提取物在制备抗衰老外用产品中的应用。
优选地，制何首乌提取物在制备治疗或缓解由D-半乳糖引起的羟基脯氨酸浓度下降的外用产品中的应用，发明人在实验中发现制何首乌醇提物成分可明显抑制由D-半乳糖引起的小鼠皮下组织中的羟基脯氨酸浓度的下降，保持小鼠体内的羟基脯氨酸浓度达到正常小鼠皮下组织中的水平。
    优选地，制何首乌提取物在制备治疗或缓解由D-半乳糖引起的金属蛋白酶组织抑制因子浓度下降的外用产品中的应用；发明人在实验中发现制何首乌醇提物成分可以明显增加小鼠皮下组织中的TIMP-1浓度，抑制由D-半乳糖引起的小鼠体内的TIMP-1浓度的降低，并将小鼠体内的TIMP-1浓度维持在正常小鼠皮下组织中的水平。
上述制何首乌提取物的制备方法如下：
以制何首乌的干燥块根为原料，粉碎得制何首乌粗粉，以70%乙醇-水为溶剂，回流提取3次，2 h/次，合并醇浸提取液，减压浓缩并干燥，制得干粉备用；
其中，所述制何首乌粗粉与所述70%乙醇-水的质量体积比为1:10。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明可有效抑制由紫外线引起的体内的SOD含量下降，并能抑制由紫外线引起的体内的MDA含量的升高，保护皮肤不受紫外线引起的物理损伤，提高皮肤的自我修复能力；本发明是发明人首次发现制何首乌醇提物具有抗紫外的功能，以制何首乌醇提物为主要活性成分制备得到的产品具有较佳的抗紫外线功效，本发明可大大的扩展制何首乌醇提物的使用范围。
另外，本发明在将制何首乌以外用产品的形式作用于小鼠时，不仅能治疗或缓解由D-半乳糖引起的羟基脯氨酸浓度和TIMP-1浓度的下降，保持体内的羟基脯氨酸浓度和TIMP-1浓度与正常水平一致，同时还能够显著降低制何首乌造成的小鼠肝损伤，在拓展制何首乌的使用方法的同时保证了用药的安全性。
附图说明
图1为皮肤外观评价图；其中，A组为空白对照组，B组乳膏基质组，C组为制何首乌醇提物组，D为阳性对照组；
图2为空白对照组的小鼠皮肤组织切片镜下图（显微镜下×100倍）；
图3为阳性组的小鼠皮肤组织切片镜下图（显微镜下×100倍）；
图4为乳膏基质组的小鼠皮肤组织切片镜下图（显微镜下×100倍）；
图5为制何首乌醇提物组的小鼠皮肤组织切片镜下图（显微镜下×100倍）。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法：所使用原料、助剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场购买等商业途径得到的原料和助剂。
实施例1 制何首乌醇提物的制备
以蓼科植物何首乌的干燥块根（制何首乌）为原料，经清洗，烘干后，粉碎得粗粉,以70%乙醇-水为溶剂，比例为(W／V=1：10)，回流提取3次，2 h/次，合并醇浸提取液, 减压浓缩并干燥,制得干粉备用。
实施例2 抗紫外线照射修复的动物实验
SPF级KM小鼠40只，按体重随机分为空白对照组、乳膏基质组、制何首乌醇提物组、阳性对照组。实验前24h将小鼠背部剔毛。各实验组按2mg/cm²均匀涂对应药物，25min后紫外灯下照射。最初照射时间为30min，每天逐渐增加直至1h后不再增加，照射14d。14d后处死动物，测量皮肤匀浆液中的SOD、MDA活力，各组同时另取皮肤组织常规HE染色。在显微镜下观察表皮、真皮层结构，胶原纤维组织粗细及分布。
   其中，空白对照组不给小鼠药物，也不进行紫外线照射；乳膏基质组使用空白乳膏；制何首乌醇提物组使用浓度为5%的制何首乌醇提物；阳性对照组使用Mamonde梦妆双重倍护防晒乳（爱茉莉化妆品（上海）有限公司生产）。
实施例3 制何首乌醇提物动物抗衰老实验
SPF级KM小鼠40只，按体重将小鼠随机分为空白对照（A）、乳膏基质组（B）、制何首乌醇提物组（C）、阳性对照组（D）。将各组小鼠的背部剃毛2cm×3cm。除空白组以外，其它各组每天颈背部皮下注射5% D-半乳糖200mg·kg^-1,共28天，建立小鼠亚急性衰老模型；空白组不造模。从造模第1天开始，阳性对照组每天9:00给小鼠按3.0mg/10g体重灌胃，其余各组按2mg·cm^-2每天涂药，连续用药8天，其中，空白对照组不给小鼠药物；乳膏基质组使用空白乳膏；制何首乌醇提物组使用浓度为5%的制何首乌醇提物；阳性对照组使用七宝美髯丸（由佛山德众药业有限公司生产，产品批号为120602）；末次给药1h后处死小鼠，分别制作皮肤水解液和皮肤匀浆液，然后测量皮肤其中的羟脯氨酸以及皮肤匀浆液中TIMP-1含量。
实施例4 动物抗紫外线照射修复实验和抗衰老实验结果
实施例1～3的实验结果如下：
（1）体重评价
表1  各组小鼠体重变化(g,                                                ± s, n=10)
。
     如表1所示，各组小鼠生长良好，体重稳步增加，未见异常肥胖和体重减少，每日饮水和排尿均未见异常，精神状态良好，各组体重与空白对照组比较均无明显差异（P>0.05）。小鼠紫外照射后出现躁狂现象，具有很强攻击力。
（2）皮肤外观评价
     如图1所示，经紫外线照射4d后, 乳膏基质组照射部位开始出现红斑,随着照射时间的延长,红斑面积逐渐扩大并加重，实验结束时背部皮肤出现程度不一的皱纹；制何首乌醇提物组及其阳性组背部皮肤也出现轻度红斑，其后随着实验时间的延长、背部皮肤出现少量的皱纹，但是制何首乌醇提物组出现红斑及皱纹的程度不如乳膏基质组严重；制何首乌醇提物和阳性药物一样，使用后可使小鼠皮肤外观受紫外线照射后造成的损伤得到保护。
（3）制何首乌醇提物对紫外线导致小鼠皮肤匀浆中SOD减少的影响
如表2所示，与乳膏基质组相比，制何首乌醇提物组皮肤匀浆中SOD含量增多(P<0.05）；而阳性组皮肤匀浆中SOD含量显著增多（P<0.01）。与空白组相比，乳膏基质组皮肤中SOD含量减少（P< 0.01），制何首乌醇提物组与阳性组的皮肤匀浆中SOD含量同空白组无显著差异（P> 0.05）。说明紫外线照射导致小鼠皮肤中的SOD酶活性下降，而制何首乌醇提物对紫外照射造成的小鼠皮肤匀浆中SOD酶活性下降有明显地抑制作用。
表2 紫外线对各组小鼠皮肤SOD的影响(± s)
。
注：与乳膏基质组比较： P1<0.05，P2<0.01
（4）制何首乌醇提物对紫外线导致小鼠皮肤匀浆中MDA增加的影响
如表3所示，与乳膏基质组相比，制何首乌醇提物组与阳性组可以降低皮肤匀浆中的MDA含量（P<0.05）。与空白组相比，乳膏基质组的皮肤匀浆中MDA含量升高（P<0.05），制何首乌醇提物和阳性组各组同空白组无显著差异（P>0.05），制何首乌醇提物组与阳性组之间亦无明显差异。紫外线照射可导致小鼠皮肤匀浆中MDA含量增高，而制何首乌醇提物组对紫外照射造成的小鼠皮肤匀浆中MDA含量的增高有明显地抑制作用。
表3 紫外线对各组小鼠皮肤MDA的影响(± s)
。
注：与乳膏基质组比较： P1<0.05
（5）小鼠皮肤组织切片镜下结果
紫外线对各组小鼠皮肤组织影响（显微镜下×100倍）观察结果如下：
图2为空白对照组的显微镜照片，图3为阳性组的显微镜照片；如图2、图3所示，未经紫外照射并未使用药物的空白对照组同经紫外照射并用过阳性药物组皮肤组织镜下结果较一致，小鼠皮肤表皮层结构完整，较薄，细胞分层清晰，具有明显的表皮乳突及真皮乳头，真皮层可见波浪状胶原纤维组织，胶原纤维的粗细及分布皆均匀，没有明显断裂及排列紊乱现象。
图4为乳膏基质组的显微镜照片，如图4所示，乳膏基质组表皮厚度不一，角化过度，表皮有脱落，乳头层变平，真皮层变厚明显，真皮内胶原纤维增粗、有断裂现象，且排列紊乱，炎性细胞浸润多见，皮脂腺不规则增生。
图5为制何首乌醇提物组的显微镜照片，如图5所示，制何首乌醇提物组与图4中的乳膏基质组相比，小鼠皮肤表皮层结构较为完整，细胞分层较为清晰，真皮层可见波浪状胶原纤维组织，胶原纤维的粗细及分布较为均匀，没有明显断裂及排列紊乱现象。
（6）小鼠皮肤中羟基脯氨酸浓度测定结果
表4为各组小鼠皮肤中羟基脯氨酸含量的测定结果，如表4所示，同乳膏基质组相比较，制何首乌醇提物组、阳性组皮肤匀浆中羟基脯氨酸明显升高（P<0.05）；与空白组相比，制何首乌醇提物组、阳性组较未进行衰老造模的正常小鼠皮肤匀浆中羟基脯氨酸含量无明显差异（P>0.05）；而且制何首乌醇提物组、阳性组之间的羟基脯氨酸浓度进行比较无明显差异（P>0.05）。由此可知，制何首乌醇提物可以使衰老小鼠皮肤组织中羟基脯氨酸浓度显著升高，浓度升高发生的可能性以及大小同阳性对照物、未衰老造模前的空白组一致。由表4可知，制何首乌醇提物成分可明显升高衰老小鼠皮下组织中的羟基脯氨酸含量，其浓度可以达到正常未衰老小鼠皮下组织中的羟基脯氨酸含量。
表4 各组小鼠皮肤中羟基脯氨酸含量 (± s, n=10)
。
注：与乳膏基质组比较P1<0.05,P2<0.01。
（7）小鼠皮肤中TIMP-1浓度测定结果
如表5所示，与基质模型组相比较，制何首乌醇提物组、阳性组皮肤中TIMP-1明显升高（P<0.05）；同未造模的空白组比较，乳膏基质组皮肤中TIMP-1含量显著降低（P<0.01），制何首乌醇提物组与阳性组之间的小鼠皮肤中的TIMP-1浓度无明显差异（P>0.05）。
由此可知，乳膏基质组中的小鼠并未使用制何首乌醇提物，也未使用任何抗衰老阳性物质，其结果是乳膏基质组中的小鼠的皮肤匀浆中的TIMP-1同正常未造模的空白组、制何首乌醇提物组、阳性组相比均显著下降。使用了制何首乌醇提物或阳性对照物的小鼠皮肤中的TIMP-1浓度比乳膏基质组的小鼠皮肤中的TIMP-1浓度显著升高，使用制何首乌醇提物的小鼠的皮肤匀浆中的TIMP-1浓度与阳性对照物、未衰老造模前的空白组基本一致。即制何首乌醇提物成分可以明显升高衰老小鼠皮下组织中的TIMP-1含量，其浓度可以达到正常未衰老小鼠皮下组织中的TIMP-1含量。
表5  各组小鼠皮肤中TIMP-1含量(± s, n=10)
。
注：与乳膏基质组比较P1<0.05,P2<0.01。
实施例5 动物肝损伤长期毒性实验
    选取健康 SD大鼠 30只,雌雄各半，体质量为192.4±12.6g随机分成 3组, 即口服组（给小鼠按40g/kg体重灌胃）、外用组（脱毛面积为大鼠体表面积的10%，每天均匀涂以能配制的最高浓度20%的制何首乌提取物乳膏）、对照组（脱毛面积为大鼠体表面积的10%，每天均匀涂以空白乳膏），1次/天，连续用药90天。于末次给药后取血液进行生化检测,同时取大鼠肝脏匀浆进行丙二醛(MDA)、单胺氧化酶( MAO)、谷胱甘肽-S转移酶( GSH -S T ) 检测。计量资料以均 ±s 表示, 用 t 检验进行组间比较,以 P<0.05为差异显著。
    结果给药3个月后口服组大鼠血液中AST含量较对照组显著增高(P<0.05)，而外用组无显著改变（P>0.05），见表6。大鼠肝组织中MDA、GSH-ST的含量较对照组显著增加(P<0.05)，而外用组未见明显改变（P>0.05），结果如表7。这些结果显示外用制何首乌醇提物对肝脏无毒性，表明外用更安全。
表6 给药3个月后大鼠血液中ALT、AST的含量变化（±s，n=10）
。
          注：与对照组比较P1<0.05。
表7 给药3个月后大鼠肝组织中MDA、MAO、GSH-ST的含量变化（±s，n=10）
。
注：与对照组比较P1<0.05。