一种含乌骨藤提取物的消癌平分散片及其制备方法和应用.pdf

一种含乌骨藤提取物的消癌平分散片，其主要由乌骨藤提取物、改性剂、填充剂、崩解剂、润湿剂按比例混合后，经制粒、干燥、整粒、总混、压片后制备得到；乌骨藤提取物是采用复合酶水浴提取乌骨藤原料后获得；具体的制备方法包括：先对乌骨藤进行预处理，再加入复合酶，酶解乌骨藤后获得清膏；再进行真空干燥、粉碎成乌骨藤提取物细粉，最后加入改性剂，再与填充剂、崩解剂、润湿剂按比例混合制粒，压片，即得含乌骨藤提取物的消癌平分散片。本发明的含乌骨藤提取物的消癌平分散片可在制备抗肿瘤药物中应用，具有起效快、崩解迅速、服用方便、生物利用度高、不良反应小等优点。

1.  一种含乌骨藤提取物的消癌平分散片，所述分散片主要由乌骨藤提取物、改性剂、填充剂、崩解剂、润湿剂按比例混合后，经制粒、干燥、整粒、总混、压片后制备得到；其特征在于：所述乌骨藤提取物是采用复合酶水浴提取乌骨藤后获得。

2.  根据权利要求1所述的含乌骨藤提取物的消癌平分散片，其特征在于：所述改性剂为微粉硅胶，且微粉硅胶的用量为所述分散片质量的3％～7％。

3.  根据权利要求1或2所述的含乌骨藤提取物的消癌平分散片，其特征在于，所述填充剂为乳糖和微晶纤维素的混合物，乳糖和微晶纤维素的质量比为1∶0.8～1.0，且填充剂的用量为所述分散片质量的60％～80％；所述崩解剂为交联聚维酮与低取代羟丙基纤维素的混合物，且崩解剂的用量为所述分散片质量的15％～25％；所述润湿剂为乙醇溶液。

4.  一种如权利要求1或2或3所述的含乌骨藤提取物的消癌平分散片的制备方法，包括以下步骤：
(1)乌骨藤的预处理：将原料乌骨藤进行净选，清洗，晾干，粉碎，过筛；
(2)乌骨藤提取：将上述步骤(1)后的乌骨藤加入水中，搅拌后得混合料液，加酸调节pH值至4.5～5.5，再加入复合酶，在酶解温度下进行水浴提取，提取完成后升温至90℃以上灭活复合酶，过滤，滤渣再加水回流提取，合并提取液，静置过夜，抽滤，滤液浓缩至清膏；
(3)后加工：将上述步骤(2)获得的清膏进行真空干燥，粉碎成乌骨藤提取物细粉；
(4)成型：取上述步骤(3)所得的乌骨藤提取物细粉，加入改性剂，再与填充剂、崩解剂、润湿剂按比例混合制粒，干燥，整粒，总混，压片，即得含乌骨藤提取物的消癌平分散片。

5.  根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述复合酶包含果胶酶和纤维素酶，且果胶酶和纤维素酶的质量比为1∶2。

6.  根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述复合酶的添加量为混合料液质量的0.25％～0.45％，且混合料液中乌骨藤与水的料液比为1∶8～16。

7.  根据权利要求4、5或6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述酶解温度为35℃～55℃，酶解时间为80min～110min。

8.  根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述复合酶的添加量为混合料液质量的0.37％，所述酶解温度为53℃，酶解时间为103min。

9.  根据权利要求4、5或6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，灭活复合酶的温度为90℃～95℃，灭活时间不低于5min，所述真空浓缩获得清膏的相对密度至少为1.23。

10.  一种如权利要求1或2或3所述的或者如权利要求4～9中任一项所述制备方法获得的含乌骨藤提取物的消癌平分散片在制备抗肿瘤药物中的应用。

一种含乌骨藤提取物的消癌平分散片及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于中医药产品领域，具体涉及一种抗肿瘤用的分散片及其制备方法和应用。
背景技术
消癌平分散片是一种高效广谱抗肿瘤药物，以中药乌骨藤提取物为原料，加入适宜的优质辅料制备而成，主要功能为抗癌、消炎、平喘；可用于食道癌、胃癌、肺癌，对大肠癌、宫颈癌、白血病等多种恶性肿瘤，亦有一定疗效。
常用的乌骨藤制剂的提取方法有水煎煮法、热回流提取法、醇提法、超声提取法等。如王俊香，消癌平片生产工艺研究[J]，辽宁中医药大学学报，2013，15(10):49-50以多糖、橙皮苷的浸出量与浸膏得率为评价指标确定了消癌平片的最佳水提工艺；申请号为201310001833.5的中国专利文献将乌骨藤粉碎，加水浸泡，超声处理制得消癌平提取物；申请号为201210072224.4的中国专利文献将乌骨藤粉碎，水浴醇提制得消癌平提取物。然而，水煎煮法需长时间浸泡，一般需12-18h；醇提法则使用有机溶剂，易造成溶剂污染，且生产成本较高；超声提取不适用于工业化大规模生产。
另外，现已上市的消癌平制剂主要有片剂、颗粒剂、胶囊剂等，如申请号为201210072224.4的中国专利文献公开了一种乌骨藤颗粒冲剂，申请号为201220693927.4的中国专利文献公开了一种消癌平片；申请号为201310735138.1的中国专利文献公开了一种乌骨藤软胶囊及其制备方法；但这些剂型存在服用量较大、生物利用度不高、内在质量难以控制等缺点。
分散片的制备方法简便，在水中能够迅速溶解、起效快、生物利用度高、且能很好的解决患者吞咽困难等特点。分散片的崩解度对药物的质量具有直接的影响，尤其是中药分散片，因此选择适宜的辅料改善原料的性质、提高药物的崩解性能是成型工艺的关键。已有的研究表明，选用微粉硅胶对中药提取物研磨改性，可使中药提取物在细化的同时比表面积及空隙体积增大，接触角变小，润湿性增大，亲水性随之增加，降低黏性；因此，在一定程度上可以减少辅料的加入量，增加分散片的载药量，从而减少患者的服用量。申请号为200510044399.4、200510032623.8的中国专利文献均提供了一种乌骨藤分散片的制备方法，其中微粉硅胶在处方中主要是起润滑剂的作用，且存在辅料用量大、服用量大、崩解时间长等缺点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种起效 快、崩解迅速、服用方便、生物利用度高、不良反应小的含乌骨藤提取物的消癌平分散片，还相应提供一种简便快捷、时间短、成本低、无毒、提取率高、能耗小的含乌骨藤提取物的消癌平分散片的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种含乌骨藤提取物的消癌平分散片，所述分散片主要由乌骨藤提取物、改性剂、填充剂、崩解剂、润湿剂按一定比例混合后，经制粒、干燥、整粒、总混、压片后制备得到；所述乌骨藤提取物是采用复合酶水浴提取乌骨藤后获得。
本发明上述的酶法提取是在传统溶剂提取法的基础上，利用酶反应高度专一性的特点，将细胞壁组分水解或降解，使细胞壁软化、膨胀和崩溃，改变细胞壁的通透性，提高细胞内含物的提取率，降低提取液的粘度；且其具有操作简便快捷、提取时间短、转移率高以及无溶剂污染等特点。
上述的含乌骨藤提取物的消癌平分散片，优选的：所述改性剂为微粉硅胶，且微粉硅胶的用量为所述分散片质量的3％～7％(最优选为5％)。优选的方案中通过添加微粉硅胶对乌骨藤提取物研磨改性，降低其粘性，可以更好地克服乌骨藤提取物成分复杂、粘性较大、水分难以浸透分散等缺陷。
上述的含乌骨藤提取物的消癌平分散片，优选的：所述填充剂为乳糖和微晶纤维素的混合物，乳糖和微晶纤维素的质量比为1∶0.8～1.0，且填充剂的用量为所述分散片质量的60％～80％；所述崩解剂为交联聚维酮与低取代羟丙基纤维素的混合物，且崩解剂的用量为所述分散片质量的15％～25％。
所述润湿剂为乙醇溶液。
作为一个总的技术构思，本发明还提供一种上述的含乌骨藤提取物的消癌平分散片的制备方法，包括以下步骤：
(1)乌骨藤的预处理：将原料乌骨藤进行净选，清洗，晾干，粉碎，过筛(例如过80目筛)；
(2)乌骨藤提取：将上述步骤(1)后的乌骨藤加入水中，搅拌后得混合料液(一般搅拌时间不少于30min)，调节pH值(优选为4.5～5.5)，再加入复合酶，在酶解温度下进行水浴提取，提取完成后升温至90℃以上灭活复合酶，过滤，滤渣再加水回流提取(优选110～140min)，合并提取液，静置过夜，抽滤，滤液浓缩获得清膏；
(3)后加工：将上述步骤(2)获得的清膏于真空干燥箱进行真空干燥，粉碎成乌骨藤提取物细粉；
(4)成型：取上述步骤(3)所得的乌骨藤提取物细粉，加入改性剂，再与填充剂、崩 解剂、润湿剂按比例混合制粒，干燥，整粒，干颗粒可选择性加入适量的润滑剂、甜味剂等，混合均匀，压片，即得含乌骨藤提取物的消癌平分散片。
上述的制备方法中，优选的：所述步骤(2)中，所述复合酶包含果胶酶和纤维素酶，且果胶酶和纤维素酶的质量比为1∶2。更优选的：所述步骤(2)中，所述复合酶的添加量为混合料液质量的0.25％～0.45％，且混合料液中乌骨藤与水的料液比为1∶8～16(更优选1∶12)。
上述的制备方法中，优选的：所述步骤(2)中，所述酶解温度为35℃～55℃，酶解时间为80min～110min。所述步骤(2)中，所述复合酶的添加量为混合料液质量的0.37％，所述酶解温度为53℃，酶解时间为103min。
上述的制备方法中，优选的：所述步骤(2)中，灭活复合酶的温度为90℃～95℃，灭活时间不低于5min，所述真空浓缩获得清膏的相对密度至少为1.23。
作为一个总的技术构思，本发明还提供一种上述本发明获得的含乌骨藤提取物的消癌平分散片在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的上述技术方案是以中医药理论为基础，结合现代高科技提取设备、制药技术及色谱技术，参考乌骨藤化学成分及药理作用的研究，对乌骨藤进行酶提取方法及成型方法研究，大大降低能耗、提高有效成分溶出，获得了一种起效快、生物利用度高、服用方便、不良反应小、疗效确切的含乌骨藤提取物的消癌平分散片。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)本发明制成的含乌骨藤提取物的消癌平分散片，其制备方法简便，既能保留普通剂型的疗效及性状特征，又具有起效快、崩解迅速、服用方便、生物利用度高、不良反应小等特点。
(2)本发明采用了复合酶提取乌骨藤，其主要优点是以水为提取溶剂，采用复合酶提取，与常用水提、醇提、超声提取相比，具有简便、快捷、提取时间短、成本低、无毒、提取率高等特点；且应用本发明的复合酶提方法，总多糖、总皂苷的提取率明显优于普通的水提方法。
(3)本发明以抑制率作为评价抗肿瘤活性强度的指标，采用MTT比色法对本发明的酶提法所得提取物与常用的水提法所得提取物的体外抗肿瘤活性进行了比较，结果显示，通过酶提取法不仅缩短了提取时间，节约能耗，降低成本，简化工艺，还能有效的提高该制剂的治疗效果。
(4)本发明优选的方案中加入微粉硅胶对乌骨藤提取物研磨改性，降低其粘性，解决了乌骨藤提取物成分复杂、粘性较大、水分难以浸透分散等不足，既能促进该分散片的崩解， 又能在一定程度上提高载药量，减少患者的服用量，提高疗效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中料液比对总多糖、总皂苷提取率的影响趋势图。
图2为本发明实施例1中复合酶配比对总多糖、总皂苷提取率的影响趋势图。
图3为本发明实施例1中加酶量对总多糖、总皂苷提取率的影响趋势图。
图4为本发明实施例1中酶解温度对总多糖、总皂苷提取率的影响趋势图。
图5为本发明实施例1中酶解时间对总多糖、总皂苷提取率的影响趋势图。
图6为本发明实施例1中回流提取时间对总多糖、总皂苷提取率的影响趋势图。
图7为本发明实施例1中酶加入量与酶解时间对综合评分的影响。
图8为本发明实施例1中酶解时间与酶解温度对综合评分交互影响。
图9为本发明实施例1中酶加入量与酶解温度对综合评分的影响。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明作更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体的实施例。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
实施例1：
一种本发明的含乌骨藤提取物的消癌平分散片，该分散片主要由乌骨藤提取物、改性剂(改性剂为微粉硅胶)、填充剂、崩解剂、润湿剂按比例混合后，经制粒、干燥、整粒、混匀、压片后制备得到；乌骨藤提取物是采用复合酶水浴提取乌骨藤原料后获得；微粉硅胶的用量为分散片质量的5％。
本实施例上述的含乌骨藤提取物的消癌平分散片的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)乌骨藤的前处理：将原料乌骨藤进行净选，清洗，晾干，粉碎，过80目筛；
(2)酶提取：将上述步骤(1)后的乌骨藤按一定料液比加入到饮用水中，搅拌30min， 加磷酸调节pH值，加入一定量的酶，在酶解温度下进行水浴提取，提取完成后升温至90℃～95℃保温5min，灭活复合酶，4层纱布过滤，滤渣加入一定量的水回流提取，过滤，合并两次提取液，静置过夜，抽滤，滤液浓缩至相对密度为1.23的清膏；
(3)后加工：将上述步骤(2)获得的清膏进行真空干燥，粉碎成乌骨藤提取物细粉；
(4)成型：取上述步骤(3)所得的乌骨藤提取物细粉，加入改性剂微粉硅胶，微粉硅胶的用量为分散片质量的5％，再与填充剂、崩解剂、润湿剂按比例混合制粒，干燥，整粒，混合均匀，压片，即得含乌骨藤提取物的消癌平分散片。
(一)酶的选择
在上述本实施例的制备方法中，先设定料液比为1∶12，磷酸调节pH值至5.0，加酶量为0.2％，50℃条件下酶解60min，分别加入果胶酶、纤维素酶、以及果胶酶与纤维素酶的复合酶酶解90min，滤渣再回流提取120min，考察不同的酶提取对总多糖与总皂苷提取率的影响，结果显示，复合酶法提取总多糖、总皂苷的提取率均大于其他酶提法，因此，我们选择复合酶提取法。
(二)单因素试验设计
按照上述确立的复合酶提取法，分别研究了料液比(1∶8、1∶10、1∶12、1∶14、1∶16)、果胶酶和纤维素酶的配比(2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4)、加酶量(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％)、酶解温度(30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)、酶解时间(30min、60min、90min、120min、150min)，回流提取时间(60min，90min，120min，150min，180min)对乌骨藤中总多糖与总皂苷提取率的影响。
1.料液比对乌骨藤总多糖与总皂苷提取率的影响
如图1显示，随着提取液用量的增加，总多糖与总皂苷的提取率逐渐升高，但料液比在1∶12之后提取率增加的幅度则有所减小，因此我们选择1∶12为最佳料液比。
2.果胶酶和纤维素酶的配比对乌骨藤总多糖与总皂苷提取率的影响
如图2显示，随着纤维素酶所占比例的增加，总多糖、总皂苷的提取率逐渐升高，可能是因为乌骨藤细胞壁的组成成分主要以纤维素为主，所以提高纤维素酶的量可以更彻底地破坏细胞壁，使有效成分溶出速率更快、溶出量更多。当果胶酶与纤维素酶比例小于1∶2时，多糖、皂苷的提取率增加幅度明显减小，因此，选择1∶2作为果胶酶与纤维素酶的最佳配比。
3.加酶量对乌骨藤总多糖与总皂苷提取率的影响
如图3显示，随着加酶量的增大，总多糖、总皂苷的提取率逐渐增大，但当加酶量大于0.3％时，提取率增加幅度明显减小，考虑到实际生产中成本问题，选择复合酶的加入量作为考察因素作进一步的考察(0.25％～0.45％)。
4.酶解温度对乌骨藤总多糖与总皂苷提取率的影响
如图4所示，随着温度的升高，总多糖、总皂苷的提取率显著增加，但当温度大于50℃时，提取率又随之降低，选择酶解温度(35℃～55℃)作为考察因素作进一步考察。
5.酶解时间对乌骨藤总多糖与总皂苷提取率的影响
如图5显示，随着酶解时间的延长，总多糖与总皂苷的提取率大幅度增大，但当酶解时间大于60min时，提取率增加的幅度明显减小，我们选择酶解时间为80～110min作为考察因素作进一步考察。
6.回流提取时间对乌骨藤总多糖与总皂苷提取率的影响
如图6显示，随着回流提取时间的延长，总多糖、总皂苷的提取率逐渐增加，当回流提取时间大于120min时，提取率增加的幅度明显减小，并渐趋于平稳，考虑到降低能耗与节约成本问题，故选择120min作为最佳的提取时间。
为了优化提取条件，在上述单因素试验结果的基础上，利用软件Design Expert 8.0.6，采用Box-Behnken试验设计，选择上述酶加入量、酶解时间、酶解温度作为考察因素，以总多糖、总皂苷的提取率为评价指标，优选最佳提取条件。所选因素水平及正交试验结果如下表1、表2。
表1：酶提工艺响应面试验因素水平表

表2：酶提工艺响应面设计方法及结果


注：综合评分＝总多糖提取率/总多糖提取率最大值×0.5+总皂苷提取率/总皂苷提取率最大值×0.5(因本皂苷、多糖类成分均为乌骨藤中主要的抗肿瘤成分，故权重系数均定为50％)。
综合评分回归方程的建立及方差分析
采用Design Expert8.0.6软件对上表2数据进行多元回归拟合，解得回归方程如下：
Y＝93.03－6.16A+7.85B+10.33C+0.93AB+1.39AC+0.32BC－12.46A²－7.88B²－7.05C²(式中：Y为综合评分，A为酶加入量，B为酶解时间，C为酶解温度)。试验的各因素方差分析表如下表3。从表3可知：综合评分回归模型显著(P＜0.01)，校正R²＝0.9458，说明该二次多元回归模型极其显著，这可很好地解释响应值的变化。失拟项P＝0.135＞0.05，表明由误差引起的失拟不显著，因而该模型拟合程度比较好，试验误差小。由F值和P值可以看出，三因素的一次项和二次项(P值均小于0.05)。
表3：综合评分回归模型方差分析结果