石斑鱼胰岛素样生长因子Ⅰ受体基因及其应用.pdf

本发明公开了一种石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因，该基因是以石斑鱼下丘脑总RNA为模板，经RT－PCR和Gene RACER方法而得到的具有石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因cDNA序列的基因片段。利用本发明可以获得来源稳定、成本便宜的石斑鱼胰岛素样生长因子I受体的重组蛋白，在制备鱼苗促生长剂或添加剂中有着重要的应用。

1.  一种石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.  如权利要求1所述的石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.  权利要求1的石斑鱼胰岛素样生长因子受体基因在制备鱼苗促生长剂或添加剂中的应用。

4.  如权利要求3所述的石斑鱼胰岛素样生长因子受体基因在制备石斑鱼鱼苗促生长剂或添加剂中的应用。

石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因及其应用
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体地说涉及一种基因。
背景技术
胰岛素样生长因子(IGFs)是一类多功能的细胞增殖因子，具有广泛的生物学效应，在胚胎和个体发育过程中起着重要作用。IGFs通过细胞表面两种类型的IGF受体发挥生物学作用。IGFs受体有两种，分别称为IGF-I受体(IGF-IR或称I型IGF受体)和IGF-II受体(IGF-IIR或称II型IGF受体)。IGFs对细胞的作用绝大多数都是通过与IGF-IR结合而实现的。IGF-IR为四聚体糖蛋白，由2个位于细胞外部的α亚基和2个跨膜β亚基组成。IGF-IR的结构与胰岛素受体极其相似。α亚基的半胱氨酸富集区是其配体的特异识别位点，细胞质部分的β链含有一个酪氨酸激酶活性区。一个α亚基和一个β亚基由二硫键连接起来形成一个半受体，两个半受体由α亚基上的二硫键构成一个完整的受体。IGF-I与IGF-IR结合会引发受体上位于细胞内的β亚基上的酪氨酸和丝氨酸残基的磷酸化，进而导致一系列的生物学效应。IGFs在鱼类的生长繁殖上起着重要作用，而仅仅对IGFs的研究是不足的，应该进一步了解IGFs与其受体的相互作用，这对于认识IGF的分子作用机理具有重要意义。而现有技术中，对IGFs受体的研究主要集中在哺乳动物中，对于鱼类的IGFs受体的研究很少。
石斑鱼是海洋珊瑚礁鱼类，属鮨科(Serranidae)，石斑鱼属(Epinephelus)，有30多种。石斑鱼是一种名贵的海水鱼类，具有极高的经济价值。石斑鱼的苗种培育是养殖生产持续发展的关键，但目前在石斑鱼人工养殖中还没有一种能有效促进其苗种生长的饵料添加剂。
发明内容
本发明的目的在于针对目前石斑鱼的苗种培育问题，提供一种重组石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因，利用该基因可以生产重组石斑鱼胚胎期胰岛素样生长因I受体蛋白，该受体蛋白能够有效促进石斑鱼苗种的生长，在制备鱼苗促生长剂或添加剂中有着重要的应用。
本研究对斜带石斑鱼IGFs受体的cDNA进行克隆和序列分析，以完善IGFs与其受体作用的调控理论，为IGFs系统用于鱼类养殖、促进鱼类生长与繁殖提供理论基础。
氨基酸序列分析表明石斑鱼胰岛素样生长因子I受体前蛋白原氨基酸全序列为1413aa，成熟肽为1384aa。使用Clustalx算法，将斜带石斑鱼IGF-IR前蛋白原氨基酸全序列与其它物种的IGF-R序列进行同源性比较，发现两个主要的功能区即富含亮氨酸区和酪氨酸激酶区的保守性非常高，羧基端的变异性比较大，本发明的石斑鱼IGF-IR序列属于b型。
本发明的石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因是以石斑鱼下丘脑总RNA反转录得到的cDNA为模板，经PCR和Gene RACER方法扩增而得到的。
本发明用于表达石斑鱼IGF-IR重组蛋白的IGF-IR成熟肽基因序列是以石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因双链DNA为模板，经PCR方法扩增而得到的，它来源于石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的α亚基所对应的基因片段。
本发明还构建了上述表达石斑鱼IGF-IR重组蛋白的IGF-IR成熟肽基因序列的载体；特别是含有该基因的大肠杆菌克隆载体以及表达载体。这些载体的构建方法是按常规方法，将通过PCR方法合成的斜带石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因经酶切和分离纯化后，接入到已有的相应载体的相应酶切位点之间，即构建成所需的含有石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的表达载体。
上述含石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的大肠杆菌表达载体优选由本发明合成的石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因与大肠杆菌表达载体pET15b构建成的重组表达载体，命名为pET15b-IGF-IR。
本发明还用上述含有石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的相应表达载体分别构建了能高效表达石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的大肠杆菌重组株。
本发明的上述能表达石斑鱼胰岛素样生长因子I受体大肠杆菌重组菌株优选由含有石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的表达载体pET15b-IGF-IR转化大肠杆菌BL21而得到的菌株，命名为pET15b-IGF-IR-BL21。
本发明还提供了利用上述大肠杆菌重组株生产石斑鱼胰岛素样生长因子I受体的方法。先将将菌种接种在含有氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃，200转/分培养过夜，次日接种于相同培养基中，并经IPTG诱导，37℃，200转/分培养，10小时后收集菌体，经分离纯化得到重组石斑鱼胰岛素样生长因子I受体产品。
本发明的有益效果：石斑鱼具有重大的经济价值，采用常规的基因工程技术，利用本发明的石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因，可以生产重组石斑鱼IGF-I受体蛋白，用于制备鱼苗苗种促生长剂或添加剂，促进了鱼苗的快速生长，具有重大的经济效益。
附图说明
图1是以石斑鱼下丘脑总RNA反转录得到的cDNA为模板的胰岛素样生长因子I受体基因中间片段PCR扩增产物的凝胶电泳分析图；
图2是重组质粒PCR和酶切鉴定凝胶电泳分析图；
图3是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因5’端片段合成的第一次PCR凝胶电泳分析图；
图4是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因5’端片段合成的第二次PCR凝胶电泳分析图；
图5是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因5’端片段重组质粒PCR鉴定；
图6是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因IGF-IR酪氨酸激酶区第一轮PCR凝胶电泳分析图；
图7是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因IGF-IR酪氨酸激酶区第二轮PCR凝胶电泳分析图；
图8是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因IGF-IR酪氨酸激酶区片段重组质粒PCR鉴定；
图9是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因3’端片段合成的第一轮PCR凝胶电泳分析图；
图10是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因3’端片段合成地第二轮PCR凝胶电泳分析图；
图11是石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因IGF-IR3’端片段重组质粒PCR鉴定；
图12是重组石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因表达产物的SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot鉴定图谱；
图13是大肠杆菌重组表达载体pET15b-IGF-IR的构建示意图。
其中，图1中：M：100bp+1.5kb DNA Ladder；1：双引物扩增产物；2：正义引物扩增产物；3：反义义引物扩增产物；4：阴性对照；
图2中：M：100bp+1.5kb DNA Ladder；1、2、3分别为不同质粒的扩增产物；
图3中：M：100bp+1.5kb DNA Ladder；1：扩增产物；2：阴性对照；
图4中：M：1kb DNA Ladder；1：双引物扩增产物；2：正义引物扩增产物；3：反义义引物扩增产物；4：阴性对照；
图5中：M：1kb DNA Ladder；1、2、3分别为不同质粒的扩增产物；
图6中：M：1kb DNA Ladder；1：扩增产物；2：阴性对照；
图7中：M：100bp+1.5kb DNA Ladder；1：扩增产物；2.阴性对照；
图8中：M：100bp+1.5kb DNA Ladder；1、2、3分别为不同质粒的扩增产物；
图9中：M：100bp DNA Ladder；1：扩增产物；2：阴性对照；
图10中：M：100bp DNA Ladder；1：扩增产物；2：阴性对照；
图11中：M：100bp DNA Ladder；1、2、3分别为不同质粒的扩增产物；
图12中：M：分子量标准；1：IPTG诱导Pet-15b-IGF-IR表达；3：Pet-15b-IGF-IR蛋白的Western blot；2、4为阴性对照。
具体实施方式
实施例1：石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因中间片段的合成根据已经在GeneBank里登录的十二种物种的IGF-IR基因序列，用Dnassist软件对它们进行相似性比较，在保守区域设计合成一套用于嵌套PCR扩增的简并引物。正义引物Primer1703：
5’T(G/T)AA(A/G)CC(C/T)TGGAC(A/C/T)CA(A/G)TA(C/T)GC3’(22bp)；
反义引物Primer2935：
5’CACTGAA(A/G)TA(C/T)TC(A/C/G/T)GG(A/G)TT(A/C/G)AC3’(22bp)；
反义引物Primer3100：
5’TC(A/G)TT(A/C/G/T)AC(A/C/T)GTCTT(A/G/T)ATGGC3’(20bp)。反应条件为：95℃预变性5分钟；下边为38个循环，分为两个阶段：(1)95℃变性30秒，从50℃向37℃每两个循环降1℃，退火30秒，共28循环，72℃延伸1分钟；(2)95℃变性30秒，37℃退火30秒，共8循环，72℃延伸1分钟；最后72℃延伸7分钟。第一轮PCR结果Primer1703与Primer3100扩增出一条约1.4kb的条带，嵌套PCRPrimer1703与Primer2935扩增出一条约1.25kb的条带，大小与预期的石斑鱼IGF-IR cDNA中间片段相一致，如图1。
将1.25kb的PCR回收片段连接到pGEM-Teasy(Promega公司)载体上，转化DH5α后蓝白斑筛选重组子，随机挑选了10个重组子扩大培养，PCR鉴定后发现8个阳性克隆。PCR扩增产物的电泳鉴定图见图2。提取阳性质粒后进一步用EcoRI酶切鉴定质粒，选择PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的质粒进行测序。登录http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/网站，利用BLAST软件对已获得的序列和Genebank里已知的其它物种IGF-IR的序列进行同源性比较分析，结果表明所得的序列为石斑鱼的IGF-IR cDNA中间片段。
实施例2：石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因5’端片段的合成操作按GeneRacer Kit Protocol来进行。根据试剂盒的要求，依据已测序的IGF-IR cDNA中间片段序列设计了两条特异性下游引物：反义引物Primer 5R336：5’CCTCTTCCTGGTCTCCCACACCTATG3’(26bp)，嵌套反义引物Primer 5R104n：
5’GGTGCGGATGTAGACCACTTTGC3’(23bp)。
根据GeneRacer Kit试剂盒的通用引物和这两条特异性下游引物做嵌套PCR，最后结果得到一条分子量约为2.4kb的条带。第一次PCR反应条件为：95℃预变性5分钟；下边为40个循环，分为两个阶段：(1)95℃变性30秒，从62℃向47℃每个循环降0.5℃，退火30秒，共32循环，72℃延伸1分钟；(2)95℃变性30秒，46℃退火30秒，共8循环，72℃延伸1分钟；最后72℃延伸7分钟。第二次PCR以第一次PCR产物为模板，反应条件为：95℃预变性5分钟；下边为35个循环：95℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸1分钟30秒；最后72℃延伸7分钟。二次PCR扩增产物的电泳鉴定图如图3和图4所示。
将2.4kb的PCR回收片段连接、转化后挑选了12个重组子，PCR鉴定后有6个阳性克隆，如图5，进一步用EcoRI酶切鉴定质粒，选择PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的质粒进行测序。利用BLAST软件对已获得的2.4kb序列和Genebank里已知的其它物种IGF-IR的序列进行同源性比较分析，结果表明所得的序列为石斑鱼IGF-IR cDNA的5’片段。
实施例3：石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因酪氨酸激酶区片段的合成
根据已得到的中间片段和已报道的其它物种的IGF-IRβ亚基的高度保守区域-酪氨酸激酶活性区的序列，设计两条特异性正义引物和一条简并反义引物，获取石斑鱼IGF-IR酪氨酸激酶活性区片段。正义引物Primer 3R707：5’GCCGTTCACAGTTTACCGCATCG3’(23bp)，正义引物Primer 3R1109n：
5’CGTCCTCTACGCTATGATCTTCG3’(23bp)，反义引物Primer3RYR1：5’GGCTTGTTSTCMKCRCTGTAG3’(21bp)，第一次PCR反应条件为：95℃预变性，5min，下边为30个循环，94℃变性，30sec；50℃-65℃退火，30sec；72℃延伸，1min30sec，最后72℃延伸，10min。第二次PCR以第一次PCR 52℃退火扩增的产物稀释50倍做为模板，反应条件为：95℃预变性，5min，下边为30个循环，94℃变性，30sec；48℃-68℃退火，30sec；72℃延伸，1min，最后72℃延伸，10min。二次PCR扩增产物的电泳鉴定图如图6和图7所示。
将1.1kb的PCR回收片段连接、转化后挑选了9个重组子，PCR鉴定后有8个阳性克隆(图8)，进一步用EcoRI酶切鉴定质粒，选择PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的质粒进行测序。利用BLAST软件对已获得的1.06kb序列和Genebank里已知的IGF-IR的序列进行同源性比较分析，结果表明所得的序列为石斑鱼IGF-IR cDNA酪氨酸激酶活性区片段。
实施例4：石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因3’端片段的合成根据获得的酪氨酸激酶活性区片段序列和几种鱼类的IGF-IR 3’非编码区序列，设计合成了两条3’特异性引物和与之配对的3’非编码区的特异性引物。正义引物Primer 3R3700：5’GTGTTGGCAGTACAATCCTAAG3’(22bp)，正义引物Primer3R3500n：5’AGGGTTTGCTTCCTGTCCGATG3’(22bp)，反义引物Primer 3R6000：5’CCCACTGTGACATCAGGTTC3’(20bp)。第一次PCR反应条件为：95℃预变性，5min，下边为35个循环，94℃变性，30sec；48℃-68℃退火，30sec；72℃延伸，1min，最后72℃延伸，10min。第二次PCR以第一次PCR 60℃退火扩增的产物稀释50倍做为模板，反应条件为：95℃预变性，5min，下边为30个循环，94℃变性，30sec；48℃-68℃退火，30sec；72℃延伸，1min，最后72℃延伸，10min。二次PCR扩增产物的电泳鉴定图如图9和图10所示。
将560bp的PCR回收片段连接、转化后挑选了9个重组子，PCR鉴定后有9个阳性克隆，如图11，阳性率为100％，进一步用EcoRI酶切鉴定质粒，选择PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的质粒进行测序。利用BLAST软件对已获得的560bp序列和Genebank里已知的IGF-IR的序列进行同源性比较分析，结果表明所得的序列为石斑鱼IGF-IRcDNA的3’片段。
实施例5：石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因全长序列的拼接将测序得到的正确IGF-IR中间片段、5’端片段、酪氨酸激酶活性区片段、3’端片段进行拼接得到石斑鱼IGF-IR cDNA全长序列，包括5’端595bp的非编码区，完整的α亚基，β亚基酪氨酸激酶保守区，3’非编码区71bp，总长度4908bp。开放阅读框4242bp，起始密码子从596bp处开始，到4837bp处的终止密码子结束。用DNAsist软件推测出相应蛋白质的氨基酸序列，长度为1413aa，包括29aa的信号肽和1384aa的成熟肽，分为N-末端区、富含半胱氨酸区、蛋白裂解位点、跨胞膜区、酪氨酸激酶区(TK)和羧基末端区等几个功能区。IGF-I受体基因全长和推测的氨基酸序列见序列表。
实施例6：石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的合成
根据在克隆IGF-IR 5’端序列时获得的包括完整α亚基部分的质粒序列，结合Pet-15b载体的多克隆位点，设计合成一对扩增α亚基片段的特异性引物。正义引物Primer Sen13：5’ACGCTCGAGCGACCCAGCATTGACATC3’(27bp)，反义引物Primer Anti1702：5’ATGGATCCGTGGCACCCGGCAAATG3’(25bp)，以克隆IGF-IR5’端序列时获得的包括完整α亚基部分的质粒(1∶100)为模板，扩增IGF-IR-α亚基片段。PCR反应条件为：95℃预变性4分钟；下边为30个循环：94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸1.5分钟；最后72℃延伸7分钟。PCR扩增后出现约1.6kb的亮带，与预期大小相一致，连接进pGEMT-easy载体(Promega公司)后取PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的克隆提取质粒，该质粒为pGEMT-IGF-IR。
实施例7：含石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的大肠杆菌表达载体pET15b-IGF-IR的构建
用BamHI和XhoI对分别Pet-15b(Novagen公司)和pGEMT-IGF-IR(实施例6所得)两种载体进行双酶切，将分别得到的5.7kb和1.6kb预期大小片段回收纯化，T4 ligase(Takara公司)连接后转化到DH5α，筛选阳性克隆提取质粒，送上海博亚生物公司测序，测序结果证明IGF-IR基因成功转进表达载体Pet-15b中，重组载体pET15b-IGF-IR成功构建，质粒构建图见图13。
实施例8：能高效表达石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因的大肠杆菌重组株pET15b-IGF-IR-BL21的构建
CaCl₂法将pET15b-IGF-IR转化E.coli BL21，在含氨苄青霉素的LB平板上筛选转化子，经质粒检测和酶切分析获得含pET15b-IGF-IR的重组转化子pET15b-IGF-IR-BL21。
实施例9：利用大肠杆菌基因工程菌pET15b-IGF-IR-BL21生产重组石斑鱼胚胎期胰岛素样生长因I受体
挑取大肠杆菌基因工程菌pET15b-IGF-IR-BL21单菌落接种在含有100ug/ml氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃，200转/分培养过夜，次日按1∶50接种量接种于适当体积的相同培养基中，37℃培养至A₆₀₀为0.5～0.6，加入IPTG(终浓度为1.0mmol/l)，于37℃诱导培养10小时后收菌。合成的石斑鱼胰岛素样生长因子I受体在大肠杆菌基因工程菌pET15b-IGF-IR-BL21中已获得高效表达。
取少量细胞加2×电泳上样缓冲液，煮沸5分钟后按标准方法跑SDS-PAGE凝胶电泳。结果见图12，显示经诱导的pET15b-IGF-IR-BL21在约61kD的位置上出现一条新的蛋白带，未诱导的pET15b-IGF-IR-BL21不出现此带，证明石斑鱼胚胎期胰岛素样生长因子I受体已在pET15b-IGF-IR-BL21中诱导表达。
将重组石斑鱼胚胎期胰岛素样生长因子I受体采用免疫印迹(Western blot)方法进行免疫活性鉴定。使用Pet-15b本身序列His-tag的抗体作为一抗，羊抗鼠IgG-HRP做为二抗。结果见图12，显示重组蛋白具有特异的免疫活性。
                                   Untitled.ST25
                 SEQUENCE LISTING
<110>中山大学
<120>石斑鱼胰岛素样生长因子I受体基因及其应用
<130>
<160>2
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>4908
<212>DNA
<213>斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)
<220>
<221>CDS
<222>(596)..(4834)
<220>
<221>sig_peptide
<222>(596)..(682)
<400>1
cgactggagc acgaggacac tgacatggac tgaaggagta gaagatttta tccaggatat  60
ttcgaaacaa acgtcgtgtc tttcacgcag gggagctgcg tattgattta atatgttact  120
gaatcgcctg gacagcctct ttccatcaca tttttgaggg ggtttgaccc gtgttctgcc  180
tccagagggt cctccagcag cgggacgttg aacgtttttc ctccagatat ggagtgtgaa  240
gatgcggatt acagaggaat ccccgccgct agtttaaccg cattggtttc atcacacaca  300
ccaatgcggc gttgtttttg tcaggaatag acccgaacta tgaattcaca ttttcacgcc  360
agagggataa atcggtgatt tttttggagc acgactggac tcccattagg aaacgtgaga  420
aagctacccc agctagcccg tttgtagtag ctattagctc cattagccgg ctaactgcta  480
aaaggtgctg gctggagatt aaaaaagctt tttaataatt ctgagcaggt tttgtccacg  540
tttcccccct caacatattt atttacagga tttgggagga tttactcatc cagga atg   598
                                                             Met
                                                             1
agg tct cgt acg gaa agg agc cgc ttg acc ttg ttt tgg ggt ctg atg    646
Arg Ser Arg Thr Glu Arg Ser Arg Leu Thr Leu Phe Trp Gly Leu Met
            5                   10                  15
ctg ggt ctg tcg tcc tgc ctc cgg ccc gcc acc gca gag atc tgt ggc    694
Leu Gly Leu Ser Ser Cys Leu Arg Pro Ala Thr Ala Glu Ile Cys Gly
        20                  25                  30
ccc agc att gac atc ggg aat gac atc agt gaa ttc agg cgt cta gag    742
Pro Ser Ile Asp Ile Gly Asn Asp Ile Ser Glu Phe Arg Arg Leu Glu
    35                  40                  45
aac tgc aca gtg gtg gag ggc tac cta cag atc ctc ctt atc ggt gac    790
Asn Cys Thr Val Val Glu Gly Tyr Leu Gln Ile Leu Leu Ile Gly Asp
50                  55                  60                  65
aaa aac aac aac aac gtc aac cag gaa gtc ctc cgc tcc ctc agt ttc    838
Lys Asn Asn Asn Asn Val Asn Gln Glu Val Leu Arg Ser Leu Ser Phe
                70                  75                  80
cca aag ctg acc atg atc aca gac tac ccg ctg cta ttc cgg gtg tct    886
Pro Lys Leu Thr Met Ile Thr Asp Tyr Pro Leu Leu Phe Arg Val Ser
            85                  90                  95
ggc ctg gac agt ctg agc aca ctc ttt ccc aac ctc acc gtc ata cga    934
Gly Leu Asp Ser Leu Ser Thr Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile Arg
                                            Untitled.ST25
        100                 105                 110
gga cgg aac ctc ttc tac aac tat gcc ctc gtg atc ttt gag atg acc    982
Gly Arg Asn Leu Phe Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met Thr
    115                 120                 125
agc ttg aag gac att ggc ctg tac aac ttg agg aac att acc tgt ggc    1030
Ser Leu Lys Asp Ile Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Cys Gly
130                 135                 140                 145
gcc atc cgc att gag aag aac ccc gag ctc tgc tac ctg gac tcc ata    1078
Ala Ile Arg Ile Glu Lys Asn Pro Glu Leu Cys Tyr Leu Asp Ser Ile
                150                 155                 160
gac tgg tcc ctc atc ctg gac gca gag ttc aac aac tac att gcc gga    1126
Asp Trp Ser Leu Ile Leu Asp Ala Glu Phe Asn Asn Tyr Ile Ala Gly
            165                 170                 175
aac aag cag tcc aag gag tgc agc gat gtt tgt cca ggc atc atg gag    1174
Asn Lys Gln Ser Lys Glu Cys Ser Asp Val Cys Pro Gly Ile Met Glu
        180                 185                 190
aac aac cct cag tgc aga aag acc atg ttc aac aac aac tat aac tac    1222
Asn Asn Pro Gln Cys Arg Lys Thr Met Phe Asn Asn Asn Tyr Asn Tyr
    195                 200                 205
cgc tgc tgg aat tcc aat cac tgc cag aaa gag tgc ccg gag aag tgt    1270
Arg Cys Trp Asn Ser Asn His Cys Gln Lys Glu Cys Pro Glu Lys Cys
210                 215                 220                 225
gtg cgg cga gca tgc aca gcg gac ggc gag tgc tgc cac cct cag tgt    1318
Val Arg Arg Ala Cys Thr Ala Asp Gly Glu Cys Cys His Pro Gln Cys
                230                 235                 240
ctg ggc agc tgc aca gtc cct ggt agt gac aca gca tgt gca gca tgt    1366
Leu Gly Ser Cys Thr Val Pro Gly Ser Asp Thr Ala Cys Ala Ala Cys
            245                 250                 255
gtg cat tac tac cac caa gga cgc tgc gtg gcc gac tgc cct ccc ggc    1414
Val His Tyr Tyr His Gln Gly Arg Cys Val Ala Asp Cys Pro Pro Gly
        260                 265                 270
acc tac aag ttc gag ggc tgg cag tgc atc agc gcc gag ctt tgc tcc    1462
Thr Tyr Lys Phe Glu Gly Trp Gln Cys Ile Ser Ala Glu Leu Cys Ser
    275                 280                 285
aaa gtc cac ctc ccc gac ttc aac agc ttc atc atc cac ggc ggc gag    1510
Lys Val His Leu Pro Asp Phe Asn Ser Phe Ile Ile His Gly Gly Glu
290                 295                 300                 305
tgc atg tct gaa tgt cca cat ggg tac atg cag acc gca ccc aac agt    1558
Cys Met Ser Glu Cys Pro His Gly Tyr Met Gln Thr Ala Pro Asn Ser
                310                 315                 320
atg ttc tgt aca gcc tgt gat ggc ctg tgt gat aaa gta tgt gag gag    1606
Met Phe Cys Thr Ala Cys Asp Gly Leu Cys Asp Lys Val Cys Glu Glu
            325                 330                 335
aag gtc atc gac tcc atg gat gct gct cag tct ctc aaa ggc tgc act    1654
Lys Val Ile Asp Ser Met Asp Ala Ala Gln Ser Leu Lys Gly Cys Thr
        340                 345                 350
gtt atc aaa gga aac ctg cat atc aat atc cgc aga ggc cac aac atc    1702
Val Ile Lys Gly Asn Leu His Ile Asn Ile Arg Arg Gly His Asn Ile
    355                 360                 365
gtg gca gag ctg gag agt ttc aca ggt ttg atc cag agg gtg acc ggt    1750
Val Ala Glu Leu Glu Ser Phe Thr Gly Leu Ile Gln Arg Val Thr Gly
370                 375                 380                 385
aac gtg tgg atc agg cat tcc cac act ctg agc tcc ctg gcc ttc ctc    1798
Asn Val Trp Ile Arg His Ser His Thr Leu Ser Ser Leu Ala Phe Leu
                390                 395                 400
cgc agc ctc aga tac atc gac gga gaa gag ctt ctg gat gac atg tat    1846
                                               Untitled.ST25
Arg Ser Leu Arg Tyr Ile Asp Gly Glu Glu Leu Leu Asp Asp Met Tyr
            405                 410                 415
gcc ttc ttg gca gtt gac aac cag cag ctc cag tat ctt tgg gac tgg    1894
Ala Phe Leu Ala Val Asp Asn Gln Gln Leu Gln Tyr Leu Trp Asp Trp
        420                 425                 430
aag cag cac aac ctc acc atc aag gca gga aag ctg ttc ttc aga gcc    1942
Lys Gln His Asn Leu Thr Ile Lys Ala Gly Lys Leu Phe Phe Arg Ala
    435                 440                 445
aac cca aaa ctg tgc atg tcc gag atc cgt aag atg tgg gag aag aca    1990
Asn Pro Lys Leu Cys Met Ser Glu Ile Arg Lys Met Trp Glu Lys Thr
450                 455                 460                 465
ggc atc cag ggc cac ttt gat gag agt gat ttc cga aac aac ggc gac    2038
Gly Ile Gln Gly His Phe Asp Glu Ser Asp Phe Arg Asn Asn Gly Asp
                470                 475                 480
aga gcc agc tgt gaa agt aca atc ctg aag ttt aag tcc aac agc acc    2086
Arg Ala Ser Cys Glu Ser Thr Ile Leu Lys Phe Lys Ser Asn Ser Thr
            485                 490                 495
agc agt aca agg atc aaa ctg acc tgg cag cgc tac tgg ccc cct gac    2134
Ser Ser Thr Arg Ile Lys Leu Thr Trp Gln Arg Tyr Trp Pro Pro Asp
        500                 505                 510
tac aga gac ctc atc agc ttt att gtc tac tac aag gag gcg cca tac    2182
Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Ile Val Tyr Tyr Lys Glu Ala Pro Tyr
    515                 520                 525
cag aac ata aca gag ttc gag ggg cag gac ggc tgt ggc tac aac agc    2230
Gln Asn Ile Thr Glu Phe Glu Gly Gln Asp Gly Cys Gly Tyr Asn Ser
530                 535                 540                545
tgg aat atg gtg gat gtg gag ctg agg ccg gac aaa gag aca gac ccc    2278
Trp Asn Met Val Asp Val Glu Leu Arg Pro Asp Lys Glu Thr Asp Pro
                550                 555                 560
gga gtt ctg ctg tcc ggc ctg aag ccc tgg acg cac tac gct ata ttc    2326
Gly Val Leu Leu Ser Gly Leu Lys Pro Trp Thr His Tyr Ala Ile Phe
            565                 570                 575
gtt aag gcc atc aca ctc atg gtg gag ggc aaa cat ttg ccg ggt gcc    2374
Val Lys Ala Ile Thr Leu Met Val Glu Gly Lys His Leu Pro Gly Ala
        580                 585                 590
aag agc aaa gtg gtc tac atc cgc acc agc cct tcc gcg ccc tcc atg    2422
Lys Ser Lys Val Val Tyr Ile Arg Thr Ser Pro Ser Ala Pro Ser Met
    595                 600                 605
cct cag gat gtg cga gcg tac tct aac tca tcc aca cag ttg gtg gtg    2470
Pro Gln Asp Val Arg Ala Tyr Ser Asn Ser Ser Thr Gln Leu Val Val
610                 615                 620                 625
cgt tgg tcg ccc cct gtc tca cca aat gga aac caa act tac tac ctg    2518
Arg Trp Ser Pro Pro Val Ser Pro Asn Gly Asn Gln Thr Tyr Tyr Leu
                630                 635                 640
gtt aga tgg cag caa caa gca gaa gat cga gag ctg tat cag cac aat    2566
Val Arg Trp Gln Gln Gln Ala Glu Asp Arg Glu Leu Tyr Gln His Asn
            645                 650                 655
tac tgc tct aaa gag ctg aag atc ccc ata agg att gcg gcc ata ggt    2614
Tyr Cys Ser Lys Glu Leu Lys Ile Pro Ile Arg Ile Ala Ala Ile Gly
        660                 665                 670
gtg gga gac cag gaa gag gac acc aag ccc act aag cca gat ccc gac    2662
Val Gly Asp Gln Glu Glu Asp Thr Lys Pro Thr Lys Pro Asp Pro Asp
    675                 680                 685
gga cca gac aaa ggc ccc tgt tgc ccc tgc ccc aaa tca gtc gag gtt    2710
Gly Pro Asp Lys Gly Pro Cys Cys Pro Cys Pro Lys Ser Val Glu Val
690                 695                 700                 705
                                               Untitled.ST25
ctg gaa gct gaa gct gct gat gcc tcc tac aga aaa gtc ttt gaa aac    2758
Leu Glu Ala Glu Ala Ala Asp Ala Ser Tyr Arg Lys Val Phe Glu Asn
                710                 715                 720
ttc ctg cac aac tcc att ttt aca cca agg cca cca gat cgt cgc cgt    2806
Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Thr Pro Arg Pro Pro Asp Arg Arg Arg
            725                 730                 735
aga gat ctc ttt ggc ata gcc aat gcc act cac ccc cgc cgg aac cgg    2854
Arg Asp Leu Phe Gly Ile Ala Asn Ala Thr His Pro Arg Arg Asn Arg
        740                 745                 750
ctg cac acc aac agc acc agc agc agc acc atc cct tct ctc cta gcc    2902
Leu His Thr Asn Ser Thr Ser Ser Ser Thr Ile Pro Ser Leu Leu Ala
    755                 760                 765
gct ggt aac agc agc acc tca gac gtg gag cca gct gac aga gag ttt    2950
Ala Gly Asn Ser Ser Thr Ser Asp Val Glu Pro Ala Asp Arg Glu Phe
770                 775                 780                 785
gag ttc ata gag caa gcg gtg aca gag cga gag ctg cag atc ttt ggc    2998
Glu Phe Ile Glu Gln Ala Val Thr Glu Arg Glu Leu Gln Ile phe Gly
                790                 795                 800
ctg cag ccg ttc aca gtt tac cgc atc gac att cat gcc tgc aat cgg    3046
Leu Gln Pro Phe Thr Val Tyr Arg Ile Asp Ile His Ala Cys Asn Arg
            805                 810                 815
cag gtc caa cgc tgc agc gct gca gag ttt gtc ttc tcc aga acc aag    3094
Gln Val Gln Arg Cys Ser Ala Ala Glu Phe Val Phe Ser Arg Thr Lys
        820                 825                 830
cct gca gaa aag gca gac gac ata cct ggc cca gtg acc tgg gag ggc    3142
Pro Ala Glu Lys Ala Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Gly
    835                 840                 845
cat gag gac tgg gtg ttt ctg cgc tgg cca gag cct cct cac ccc aac    3190
His Glu Asp Trp Val Phe Leu Arg Trp Pro Glu Pro Pro His Pro Asn
850                 855                 860                 865
gga ctc atc ctc atg tat gag atc aag ttt aaa ctg gct gct gag acc    3238
Gly Leu Ile Leu Met Tyr Glu Ile Lys Phe Lys Leu Ala Ala Glu Thr
                870                 875                 880
gag aag cac gaa tgt gtc tct ggt cag atg tat cac aca cag cgt ggt    3286
Glu Lys His Glu Cys Val Ser Gly Gln Met Tyr His Thr Gln Arg Gly
            885                 890                 895
gtt cgg ctg tcc aac ctc agt cca gga aac tac tca gtc aga gtg aga    3334
Val Arg Leu Ser Asn Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Val Arg Val Arg
        900                 905                 910
gcc acg tca ctg gct ggc aac ggc tcc tgg aca cac gct ctg gat ctc    3382
Ala Thr Ser Leu Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr His Ala Leu Asp Leu
    915                 920                 925
tac gtg gcc gaa cga tat gaa aac gtc ctc tac gct atg atc ttc gtt    3430
Tyr Val Ala Glu Arg Tyr Glu Asn Val Leu Tyr Ala Met Ile Phe Val
930                 935                 940                 945
ccc atc gtc atc atc ctc gtc atc tgt ctt tta gtc tca atg ctg gtg    3478
Pro Ile Val Ile Ile Leu Val Ile Cys Leu Leu Val Ser Met Leu Val
                950                 955                 960
gtc ctc agc agg aaa aga aac agt gac cgg ctc gga aat gga gtc ctg    3526
Val Leu Ser Arg Lys Arg Asn Ser Asp Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu
            965                 970                 975
tac gcc tca gtt aac cca gag tac ttc agc gct gca gaa atg tac gtg    3574
Tyr Ala Ser Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Glu Met Tyr Val
        980                 985                 990
cct gat gag tgg gag gtg gca cgg gag aag atc acc ctg agt cgt gag    3622
Pro Asp Glu Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile Thr Leu Ser Arg Glu
    995                 1000                 1005
                                          Untitled.ST25
ctt ggc cag ggg tcc ttt ggc atg gtg tac gag ggc ttg gca aag    3667
Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu Gly Leu Ala Lys
1010                1015               1020
ggt gtg gtc aaa gac gaa cca gag acg cgt gtg gcc att aag act    3712
Gly Val Val Lys Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala Ile Lys Thr
1025                1030                1035
gtc aac gag tcg gcc agc atg agg gag agg ata gag ttt ctc aat    3757
Val Asn Glu Ser Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn
1040                1045                1050
gaa gcc tca gtc atg aag gag ttc aac tgt cac cat gtg gtt cgt    3802
Glu Ala Ser Val Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val Arg
1055                1060                1065
ctc ctg gga gtg gtt tct cag gga caa cca acc ctg gtc atc atg    3847
Leu Leu Gly Val Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile Met
1070                1075                1080
gag ctg atg acg aga gga gac ctg aag agc tac ctg cgc tcc ctc    3892
Glu Leu Met Thr Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu
1085                1090                1095
cga cct aaa gag caa cag tgg tcg agc ctg tct ctc cct cct cta    3937
Arg Pro Lys Glu Gln Gln Trp Ser Ser Leu Ser Leu Pro Pro Leu
1100                1105                1110
aag aag atg ctt cag atg gcc ggg cag atc gct gac ggc atg gct    3982
Lys Lys Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Ile Ala Asp Gly Met Ala
1115                1120                1125
tac ctc aac gcc aac aag ttt gtc cac aga gac ctg gca gcc agg    4027
Tyr Leu Asn Ala Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg
1130                1135                1140
aac tgc atg gtg gcc gag gac ttc acc gtt aag ata gga gac ttt    4072
Asn Cys Met Val Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe
1145                1150                1155
ggc atg acc aga gac atc tat gag aca gat tac tac cgc aaa ggt    4117
Gly Met Thr Arg Asp Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly
1160                1165                1170
ggt aag ggt ttg ctt cct gtc cga tgg atg tcg ccc gag tct ctg    4162
Gly Lys Gly Leu Leu Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu
1175                1180                1185
aag gat gga gtc ttc acc acc acc tct gat gtc tgg tca ttt gga    4207
Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr Thr Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly
1190                1195                1200
gtt gta ctg tgg gaa att gcc act ctg gca gaa cag ccc tac caa    4252
Val Val Leu Trp Glu Ile Ala Thr Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln
1205                1210                1215
ggt ctg tcc aat gag cag gtg ctc cgc ttt gtc atg gag gga ggg    4297
Gly Leu Ser Asn Glu Gln Val Leu Arg Phe Val Met Glu Gly Gly
1220                1225                1230
ctg ctg gag aaa cca cag aat tgt cct gac atg ctg ttc gag ctg    4342
Leu Leu Glu Lys Pro Gln Asn Cys Pro Asp Met Leu Phe Glu Leu
1235                1240                1245
atg cga atg tgt tgg cag tac aat cct aag atg cgt cca tcc ttc    4387
Met Arg Met Cys Trp Gln Tyr Asn Pro Lys Met Arg Pro Ser Phe
1250                1255                1260
gtg gag atc atc agc agc tta aag gat gag ctg gaa cca gct ttc    4432
Val Glu Ile Ile Ser Ser Leu Lys Asp Glu Leu Glu Pro Ala Phe
1265                1270                1275
aga gag gtt agt ttc ttc tac agt gcg gac aac aag ccg cct gat    4477
Arg Glu Val Ser Phe Phe Tyr Ser Ala Asp Asn Lys Pro Pro Asp
                                           Untitled.ST25
1280                1285                1290
gct ccg cag ctc cac ctg gac aag atg gac aac atg gat gat gtt       4522
Ala Pro Gln Leu His Leu Asp Lys Met Asp Asn Met Asp Asp Val
1295                1300                1305
cct ctg gag ccc ccc tct tcc acg cag cca cag caa acc cca gtc       4567
Pro Leu Glu Pro Pro Ser Ser Thr Gln Pro Gln Gln Thr Pro Val
1310                1315                1320
ccc caa cag acc cca ccc tcc ccg aac tca gag gct cca ccc gtc       4612
Pro Gln Gln Thr Pro Pro Ser Pro Asn Ser Glu Ala Pro Pro Val
1325                1330                1335
ccc tcg tta gcc ccc agc tcc ccc tcc tct ccc tgt acg tcg acc       4657
Pro Ser Leu Ala Pro Ser Ser Pro Ser Ser Pro Cys Thr Ser Thr
1340                1345                1350
gct gcc atg gac aag cag ccc tct ggc cag cag gca gcc aat ggg       4702
Ala Ala Met Asp Lys Gln Pro Ser Gly Gln Gln Ala Ala Asn Gly
1355                1360                1365
ctg tcg ggg gcg ggt cta gca gca ggg tca ggg gcg gtg cgg ccg       4747
Leu Ser Gly Ala Gly Leu Ala Ala Gly Ser Gly Ala Val Arg Pro
1370                1375                1380
tct ctg gac gaa ctg ccg ccg tac gca cac atg aac gga gga cgc       4792
Ser Leu Asp Glu Leu Pro Pro Tyr Ala His Met Asn Gly Gly Arg
1385                1390                1395
aaa aat gaa cgc gcc atg ccc ctc cca cag tcc tct gcc tgc           4834
Lys Asn Glu Arg Ala Met Pro Leu Pro Gln Ser Ser Ala Cys
1400                1405                1410
tgatgggaca gagacaccca ccggactgca aaccctgcca cctacatctc tacagaacct 4894
gatgtcacag tggg                                                   4908
<210>2
<211>1413
<212>PRT
<213>斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)
<400>2
Met Arg Ser Arg Thr Glu Arg Ser Arg Leu Thr Leu Phe Trp Gly Leu
1               5                   10                  15
Met Leu Gly Leu Ser Ser Cys Leu Arg Pro Ala Thr Ala Glu Ile Cys
            20                  25                  30
Gly Pro Ser Ile Asp Ile Gly Asn Asp Ile Ser Glu Phe Arg Arg Leu
        35                  40                  45
Glu Asn Cys Thr Val Val Glu Gly Tyr Leu Gln Ile Leu Leu Ile Gly
    50                  55                  60
Asp Lys Asn Asn Asn Asn Val Asn Gln Glu Val Leu Arg Ser Leu Ser
65                  70                  75                  80
Phe Pro Lys Leu Thr Met Ile Thr Asp Tyr Pro Leu Leu Phe Arg Val
                85                  90                  95
Ser Gly Leu Asp Ser Leu Ser Thr Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile
            100                 105                 110
Arg Gly Arg Asn Leu Phe Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met
                                             Untitled.ST25
        115                 120                 125
Thr Ser Leu Lys Asp Ile Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Cys
    130                 135                 140
Gly Ala Ile Arg Ile Glu Lys Asn Pro Glu Leu Cys Tyr Leu Asp Ser
145                 150                 155                 160
Ile Asp Trp Ser Leu Ile Leu Asp Ala G1u Phe Asn Asn Tyr Ile Ala
                165                 170                 175
Gly Asn Lys Gln Ser Lys Glu Cys Ser Asp Val Cys Pro Gly Ile Met
            180                 185                 190
Glu Asn Asn Pro Gln Cys Arg Lys Thr Met Phe Asn Asn Asn Tyr Asn
        195                 200                 205
Tyr Arg Cys Trp Asn Ser Asn His Cys Gln Lys Glu Cys Pro Glu Lys
    210                 215                 220
Cys Val Arg Arg Ala Cys Thr Ala Asp Gly Glu Cys Cys His Pro Gln
225                 230                 235                 240
Cys Leu Gly Ser Cys Thr Val Pro Gly Ser Asp Thr Ala Cys Ala Ala
                245                 250                 255
Cys Val His Tyr Tyr His Gln Gly Arg Cys Val Ala Asp Cys Pro Pro
            260                 265                 270
Gly Thr Tyr Lys Phe Glu Gly Trp Gln Cys Ile Ser Ala Glu Leu Cys
        275                 280                 285
Ser Lys Val His Leu Pro Asp Phe Asn Ser Phe Ile Ile His Gly Gly
    290                 295                 300
Glu Cys Met Ser Glu Cys Pro His Gly Tyr Met Gln Thr Ala Pro Asn
 305                310                 315                 320
Ser Met Phe Cys Thr Ala Cys Asp Gly Leu Cys Asp Lys Val Cys Glu
                325                 330                 335
Glu Lys Val Ile Asp Ser Met Asp Ala Ala Gln Ser Leu Lys Gly Cys
            340                 345                 350
Thr Val Ile Lys Gly Asn Leu His Ile Asn Ile Arg Arg Gly His Asn
        355                 360                 365
Ile Val Ala Glu Leu Glu Ser Phe Thr Gly Leu Ile Gln Arg Val Thr
    370                 375                 380
Gly Asn Val Trp Ile Arg His Ser His Thr Leu Ser Ser Leu Ala Phe
385                 390                 395                 400
Leu Arg Ser Leu Arg Tyr Ile Asp Gly Glu Glu Leu Leu Asp Asp Met
                405                     410             415
                                               Untitled.ST25
Tyr Ala Phe Leu Ala Val Asp Asn Gln Gln Leu Gln Tyr Leu Trp Asp
            420                 425                 430
Trp Lys Gln His Asn Leu Thr Ile Lys Ala Gly Lys Leu Phe Phe Arg
        435                 440                 445
Ala Asn Pro Lys Leu Cys Met Ser Glu Ile Arg Lys Met Trp Glu Lys
    450                 455                 460
Thr Gly Ile Gln Gly His Phe Asp Glu Ser Asp Phe Arg Asn Asn Gly
465                 470                 475                 480
Asp Arg Ala Ser Cys Glu Ser Thr Ile Leu Lys Phe Lys Ser Asn Ser
                485                 490                 495
Thr Ser Ser Thr Arg Ile Lys Leu Thr Trp Gln Arg Tyr Trp Pro Pro
            500                 505                 510
Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Ile Val Tyr Tyr Lys Glu Ala Pro
        515                 520                 525
Tyr Gln Asn Ile Thr Glu Phe Glu Gly Gln Asp Gly Cys Gly Tyr Asn
    530                 535                 540
Ser Trp Asn Met Val Asp Val Glu Leu Arg Pro Asp Lys Glu Thr Asp
545                 550                 555                 560
Pro Gly Val Leu Leu Ser Gly Leu Lys Pro Trp Thr His Tyr Ala Ile
                565                 570                 575
Phe Val Lys Ala Ile Thr Leu Met Val Glu Gly Lys His Leu Pro Gly
            580                 585                 590
Ala Lys Ser Lys Val Val Tyr Ile Arg Thr Ser Pro Ser Ala Pro Ser
        595                 600                 605
Met Pro Gln Asp Val Arg Ala Tyr Ser Asn Ser Ser Thr Gln Leu Val
    610                 615                 620
Val Arg Trp Ser Pro Pro Val Ser Pro Asn Gly Asn Gln Thr Tyr Tyr
625                 630                 635                 640
Leu Val Arg Trp Gln Gln Gln Ala Glu Asp Arg Glu Leu Tyr Gln His
                645                 650                 655
Asn Tyr Cys Ser Lys Glu Leu Lys Ile Pro Ile Arg Ile Ala Ala Ile
            660                 665                 670
Gly Val Gly Asp Gln Glu Glu Asp Thr Lys Pro Thr Lys Pro Asp Pro
        675                 680                 685
Asp Gly Pro Asp Lys Gly Pro Cys Cys Pro Cys Pro Lys Ser Val Glu
    690                 695                 700
Val Leu Glu Ala Glu Ala Ala Asp Ala Ser Tyr Arg Lys Val Phe Glu
705                 710                 715                 720
                                             Unti tled.ST25
Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Thr Pro Arg Pro Pro Asp Arg Arg
                725                 730                 735
Arg Arg Asp Leu Phe Gly Ile Ala Asn Ala Thr His pro Arg Arg Asn
            740                 745                 750
Arg Leu His Thr Asn Ser Thr Ser Ser Ser Thr Ile Pro Ser Leu Leu
        755                 760                 765
Ala Ala Gly Asn Ser Ser Thr Ser Asp Val Glu Pro Ala Asp Arg Glu
    770                 775                 780
Phe Glu Phe Ile Glu Gln Ala Val Thr Glu Arg Glu Leu Gln Ile Phe
785                 790                 795                 800
Gly Leu Gln Pro Phe Thr Val Tyr Arg Ile Asp Ile His Ala Cys Asn
                805                 810                 815
Arg Gln Val Gln Arg Cys Ser Ala Ala Glu Phe Val Phe Ser Arg Thr
            820                 825                 830
Lys Pro Ala Glu Lys Ala Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu
        835                 840                 845
Gly His Glu Asp Trp Val Phe Leu Arg Trp Pro Glu Pro Pro His Pro
    850                 855                 860
Asn Gly Leu Ile Leu Met Tyr Glu Ile Lys Phe Lys Leu Ala Ala Glu
865                 870                 875                 880
Thr Glu Lys His Glu Cys Val Ser Gly Gln Met Tyr His Thr Gln Arg
                885                 890                 895
Gly Val Arg Leu Ser Asn Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Val Arg Val
            900                 905                 910
Arg Ala Thr Ser Leu Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr His Ala Leu Asp
        915                 920                 925
Leu Tyr Val Ala Glu Arg Tyr Glu Asn Val Leu Tyr Ala Met Ile Phe
    930                 935                 940
Val Pro Ile Val Ile Ile Leu Val Ile Cys Leu Leu Val Ser Met Leu
945                 950                 955                 960
Val Val Leu Ser Arg Lys Arg Asn Ser Asp Arg Leu Gly Asn Gly Val
                965                 970                 975
Leu Tyr Ala Ser Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Glu Met Tyr
            980                 985                 990
Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys ILe Thr Leu Ser Arg
        995                 1000                1005
Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu Gly Leu Ala
    1010                1015                1020
                                             Untitled.ST25
Lys Gly Val Val Lys Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala Ile Lys
    1025                1030                1035
Thr Val Asn Glu Ser Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu
    1040                1045                1050
Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val
    1055                1060                1065
Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile
    1070                1075                1080
Met Glu Leu Met Thr Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser
    1085                1090                1095
Leu Arg Pro Lys Glu Gln Gln Trp Ser Ser Leu Ser Leu Pro Pro
    1100                1105                1110
Leu Lys Lys Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Ile Ala Asp Gly Met
    1115                1120                1125
Ala Tyr Leu Asn Ala Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala
    1130                1135                1140
Arg Asn Cys Met Val Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp
    1145                1150                1155
Phe Gly Met Thr Arg Asp Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys
    1160                1165                1170
Gly Gly Lys Gly Leu Leu Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser
    1175                1180                1185
Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr Thr Ser Asp Val Trp Ser Phe
    1190                1195                1200
Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Ala Thr Leu Ala Glu Gln Pro Tyr
    1205                1210                1215
Gln Gly Leu Ser Asn Glu Gln Val Leu Arg Phe Val Met Glu Gly
    1220                1225                1230
Gly Leu Leu Glu Lys Pro Gln Asn Cys Pro Asp Met Leu Phe Glu
    1235                1240                1245
Leu Met Arg Met Cys Trp Gln Tyr Asn Pro Lys Met Arg Pro Ser
    1250                1255                1260
Phe Val Glu Ile Ile Ser Ser Leu Lys Asp Glu Leu Glu Pro Ala
    1265                1270                1275
Phe Arg Glu Val Ser Phe Phe Tyr Ser Ala Asp Asn Lys Pro Pro
    1280                1285                1290
Asp Ala Pro Gln Leu His Leu Asp Lys Met Asp Asn Met Asp Asp
                                             Untitled.ST25
    1295                1300                1305
Val Pro Leu Glu Pro Pro Ser Ser Thr Gln Pro Gln Gln Thr Pro
    1310                1315                1320
Val Pro Gln Gln Thr Pro Pro Ser Pro Asn Ser Glu Ala Pro Pro
    1325                1330                1335
Val Pro Ser Leu Ala Pro Ser Ser Pro Ser Ser Pro Cys Thr Ser
    1340                1345                1350
Thr Ala Ala Met Asp Lys Gln Pro Ser Gly Gln Gln Ala Ala Asn
    1355                1360                1365
Gly Leu Ser Gly Ala Gly Leu Ala Ala Gly Ser Gly Ala Val Arg
    1370                1375                1380
Pro Ser Leu Asp Glu Leu Pro Pro Tyr Ala His Met Asn Gly Gly
    1385                1390                1395
Arg Lys Asn Glu Arg Ala Met Pro Leu Pro Gln Ser Ser Ala Cys
    1400                1405                1410