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本发明涉及一种具有抗血管新生协同作用的中药有效成分组合配方，属于药物配方技术领域。该配方由苦参碱与青藤碱混合而成，该两种成分的用量比例为：苦参碱∶青藤碱＝1∶0.05～1。本发明具有“增效减毒”的协同作用效果，对类风湿性关节炎、实体肿瘤等血管新生相关疾病具有明显的治疗作用，且药效物质基础明确，同时又保存了传统中药方剂配伍的特性。

1、  一种具有抗血管新生协同作用的中药有效成分组合配方，其特征在于：该配方由苦参碱与青藤碱混合而成，该两种成分的用量比例为：
苦参碱∶青藤碱＝1∶0.05～1。

2、  如权利要求1所述的配方，其特征在于：所述配方的临床一次用量为：
苦参碱总量44.69mg～191.48mg，青藤碱对应的范围为2.23mg～191.48mg。

一种具有抗血管新生协同作用的中药有效成分组合配方
技术领域
本发明属于药物配方技术领域，特别涉及一种具有抗血管新生协同作用的中药有效成分组合配方。
背景技术
“血管新生”(新生血管形成)是类风湿性关节炎(RA)、肿瘤等危害人民生命健康的重大疾病的共性病理环节。抗血管新生药物是阻断类风湿性关节炎病变进程，“饿死肿瘤”(治疗实体肿瘤)等疾病发生发展的重要途径。以类风湿性关节炎为例，目前，在中国类风湿药物市场上主要为非甾体类抗炎药物、慢作用药物和中成药。目前专用于治疗类风湿性关节炎中药以中成药为主，包括以下12种：风湿寒痛片，痹苦乃停片，麝香丸，血痹大易方，防风丸，痹隆清安片，正清风痛宁，石楠散，燥湿化痰丸，虎骨丸，益肾蠲痹丸，活血丹。以上中成药处方较大，特色不突出，同时作用机理不够明确。成份较为明确的中药提取物主要为昆明山海棠片，雷公藤总苷片，该二药具有免疫抑制作用，但其严重的胃肠道、肾脏和生殖毒性却限制了它们的应用，同时也面临自然资源枯竭的问题。
“清络饮”是一种用于治疗类风湿性关节炎中药复方。其主要药物组成为：苦参，青风藤，黄柏，粉萆。该方由李济仁教授、张舜华主任医师长期临床实践经验所得。经现代药理学实验表明，“清络饮”方剂具有抗炎、减少滑膜毛细血管新生、防止血管翳的形成，改善软骨破坏、减轻滑膜细胞亢进的分泌功能及代谢活性，并在分子、组织、病理等多层次上表现出抑制“血管新生”的显著效果，被国际上认为是目前进行中医方剂与血管新生的代表性研究之一。因此，“清络饮”作为标本兼治、特点突出、安全的抗血管新生相关病种如类风湿性关节炎等疾病的中药，具有充足的成长动力和充分的成长空间。
然而，“清络饮”复方的药物成份复杂，同时方剂之间不是药物成份的单纯迭加，各成份间还存在着复杂的相互作用。因此采用中药饮片形式进行配伍的原有“清络饮”复方存在成分繁杂，质量难以控制，药效物质基础不明确，药物作用机理不清晰等现有中药方剂所普遍存在的诸多不足与局限。
总的看来，目前抗血管新生相关疾病(类风湿性关节炎)的治疗现状是：(1)尚缺乏治疗类风湿性关节炎的有效中药。(2)没有以抗血管新生为特点的治疗类风湿性关节炎的中成药及中药制剂。(3)没有以中药有效组合形式申报专利的抗血管新生相关疾病的中药组合。(4)面对患者人群庞大且不断增长的类风湿性关节炎等血管新生相关疾病的市场，治疗需求远未得到满足。
发明内容
本发明的目的是为克服已有技术的不足之处，提出一种具有抗血管新生协同作用的中药有效成分组合配方，该配方是中药“清络饮”复方饮片配伍中提取的，具有“增效减毒”的效果，对类风湿性关节炎、实体肿瘤等血管新生相关疾病具有明显的治疗作用，且药效物质基础明确，同时又保存了传统中药方剂配伍的特性。
本发明提出的具有抗血管新生协同作用的中药有效成分组合配方，其特征在于：由苦参碱与青藤碱混合而成，该两种成分的用量比例为：
苦参碱∶青藤碱＝1∶0.05～1。
上述配方的临床一次用量为：
苦参碱总量44.69mg～191.48mg，青藤碱对应的范围为2.23mg～191.48mg。
本配方还可作用于其它对象(动物、细胞等)的用量，可按照药理实验公式推广使用。
上述也可由苦参碱与青藤碱中的衍生物或盐类混合而成，其用量按衍生物或盐类的分子量推算。
本发明的组合配方可采用常规的制备方法制成中、西药的各种剂型。
本发明所述苦参碱(别名母菊碱，英文名matrine)与青藤碱(或称盐酸青藤碱能够对类风湿性关节炎、实体肿瘤等血管新生相关疾病发挥治疗作用，同时在苦参碱与青藤碱的作用上存在“增效减毒”的交互作用。
苦参碱(别名母菊碱、a-苦参碱；英文名matrine、(+)-Matrine、α-Matrine)，分子式为C15H24N2O；分子量为248.36；结构式为：

苦参碱(Matrine)结构式
青藤碱(或称盐酸青藤碱Sinomenine hydrochloride；别名青风碱、防己碱、毛防己碱；英文名sinomenine，Cucoline)，分子式为C19H23N04；分子量为329.39；结构式为：

青藤碱(Sinomenine)结构式
本发明的技术特点及效果
(1)采用液相色谱-质谱连用分析技术，通过对实验动物口服“清络饮”水煎液后，不同时间点血浆中的药物成分分析，发现“清络饮”经代谢吸收入血的成分主要为苦参碱和青藤碱。同时，细胞实验显示苦参碱和青藤碱具有较强的抗血管增生药理活性，二者的适当组合具有“增效减毒”的协同作用效果。因此，苦参碱和青藤碱应为“清络饮”的主要药效物质。
(2)在配方比例上，通过“清络饮”单味药及全方水煎液中，对苦参碱和青藤碱等生物碱含量进行高效液相(HPLC)分析测定，同时考虑到氧化苦参碱在体内转化为苦参碱，按转化率为50％～100％，得到苦参碱与青藤碱组合的比例为(53.04∶28.81)～(92.83∶28.29)，即1.84∶1至3.28∶1之间。考虑到苦参为君药，在临床使用时的剂量范围为10克至25克，因此苦参碱与青藤碱的配比为1∶(0.05～1)，临床一次口服量为：苦参碱44.69mg～191.48mg，青藤碱对应的范围为2.23mg～～191.48mg。
(3)对于代表血管新生的内皮细胞实验研究发现，苦参碱、青藤碱二者均有明显的抑制内皮细胞增殖作用。通过苦参碱和青藤碱组合的细胞实验，采用国际公认的等效线方法评价二者抑制作用的交互效应，结果发现苦参碱和青藤碱上述的比例范畴内，例如1∶0.05、1∶0.22、1∶0.44、1∶1时，均具有抑制内皮细胞增殖的明显交互作用(详见实验三)。以上结果表明苦参碱和青藤碱的组合具有“增效减毒”的交互作用，即与青藤碱的适当地配伍组合，既可使抗血管新生的功效加强，同时又可有效地避免苦参碱用量过大所可能带来的毒性。动物实验研究发现，苦参碱和青藤碱的有效组合对于实验动物的抗血管新生治疗效果与原方“清络饮”相当，部分方面优于原方以及雷公藤总苷片对照组。
具体实施方式
实施例1：其一次用量的配方为：苦参碱的剂量为2000μg/ml，青藤碱剂量为100μg/ml，苦参碱和青藤碱的比例为1∶0.05。本实施例抑制内皮细胞增殖的交互作用最强，抑制率达80.16％；
实施例2：其一次用量的配方为：苦参碱的剂量为1350μg/ml，青藤碱剂量为300μg/ml，苦参碱和青藤碱的比例为1∶0.22。本实施例具有抑制内皮细胞增殖的交互作用，抑制率达72.02％；
实施例3：其一次用量的配方为：苦参碱的剂量为888μg/ml，青藤碱剂量为394μg/ml，苦参碱和青藤碱的比例为1∶0.44。本实施例具有抑制内皮细胞增殖的交互作用，抑制率达70.91％；
实施例4：其一次用量的配方为：苦参碱的剂量为445μg/ml，青藤碱剂量为445μg/ml，苦参碱和青藤碱的比例为1∶1。本实施例具有抑制内皮细胞增殖的交互作用，抑制率达54.12％。
本发明的实验及效果
实验一  实验动物口服清络饮水煎液的入血成分分析
实验方案：采用液相色谱-紫外-质联用仪、高效液相色谱仪等仪器分析方法，对实验大鼠口服“清络饮”水煎液后，不同时间点血浆中的药物成分分析，测试“清络饮”代谢吸收入血的成分。本实验分别进行清络饮水煎液和各单味药的分析测试、清络饮样品与清络饮加空白血浆样品分析、空白及含药(给药清络饮浓缩液20min，1h，2h取血)血浆样品的质谱分析与比较。
实验结果：发现大鼠灌胃给药清络饮后，清络饮中迅速进入到血浆中的成分主要包括330(青藤碱)和249(苦参碱)，此外尚有少量的205(N-甲基金雀花碱)和247(槐果碱)，可以认为清络饮最主要的入血成分为青藤碱和苦参碱。因此，我们通过对实验动物口服“清络饮”水煎液后，不同时间点血浆中的药物成分分析，发现“清络饮”的经代谢吸收入血的成分主要为苦参碱和青藤碱，故可以推断清络饮抗血管新生的主要药效物质至少包括了苦参碱和青藤碱，为对这两个成分进行组合研究提供了坚实的科学依据。
实验二  清络饮水煎液中苦参碱与青藤碱等生物碱的含量测定
实验方案：采用高效液相色谱仪等仪器分析方法，对于清络饮水煎液及单味药水煎液中苦参碱(以及在体内可转化为苦参碱的氧化苦参碱)与青藤碱的含量进行测定。供含量测定对照所用的苦参碱、氧化苦参碱、青藤碱标准品购自中国药品生物制品检定所。本实验所建立的生物碱测试方法在工作曲线浓度范围内线性关系良好，相关系数(R²)达0.999以上，精密度、稳定性、重复性试验相对标准偏差(RSD)都在3％以内，低中高浓度回收率亦都在94％以上。
实验结果：清络饮水煎液及单味药水煎液中苦参碱、氧化苦参碱与青藤碱的含量测试结果见表1。可见合煎后氧化苦参碱的含量下降，而苦参碱的浓度则比单煎时几乎增加了一倍，青藤碱浓度增加了8.28％。通过应用该法对清络饮水煎液中相应生物碱含量进行分析测定，同时考虑到氧化苦参碱在体内转化为苦参碱，按转化率为50％～100％，可得苦参碱与青藤碱组合的比例为(53.04∶28.81)～(92.83∶28.29)，即1.84∶1～3.28∶1之间。
表1  三个生物碱在清络饮及其单味药水煎液中的浓度