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1、10申请公布号CN104083321A43申请公布日20141008CN104083321A21申请号201410318026022申请日20140704A61K9/06200601A61K47/34200601A61K47/38200601A61K47/42200601A61K31/4188200601A61K31/337200601A61P35/0020060171申请人上海市肿瘤研究所地址200032上海市徐汇区斜土路2200弄25号申请人复旦大学附属华山医院72发明人段友容王怡沈鸣王意达徐媛媛汪晓虹滕延微张祥宇孙颖74专利代理机构上海新天专利代理有限公司31213代理人邬震中54发明名。
2、称一种纳米复合温敏凝胶剂及其应用57摘要本发明涉及一种纳米复合温敏凝胶剂及其应用。将抗肿瘤活性物质包裹制备纳米粒，再加入温敏高分子材料，制成纳米复合温敏凝胶剂。所述的聚合物为MPEGPLGA、MPEGPLGAPLL或者上述共聚物再连接肿瘤靶向基团人表皮生长因子EGF，抗肿瘤活性物质为替莫唑胺、紫杉醇或它们的混合物，本发明制备方法简便，适于大规模生产，特别适应于制备可生物降解、缓控释、主动靶向、运送活性物质、抗肿瘤的药物，尤其适合制备抑制脑部肿瘤术后复发的药物。51INTCL权利要求书1页说明书6页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图1页10申请公。
3、布号CN104083321ACN104083321A1/1页21一种纳米复合温敏凝胶剂，其特征在于聚合物包裹抗肿瘤活性物质制成纳米粒，再加入温敏高分子材料，制成纳米复合温敏凝胶剂，所述的聚合物为聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物MPEGPLGA、聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物连接聚赖氨酸后的共聚物MPEGPLGAPLL或者上述共聚物再连接肿瘤靶向基团；肿瘤靶向基团与聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物MPEGPLGA或聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物连接聚赖氨酸后的共聚物料MPEGPLGAPLL的摩尔比为011；所述的抗肿瘤活性物质为替莫唑胺、紫杉醇或它们的为混合物；所述的纳米粒中抗肿瘤活。
4、性物质的重量百分含量为00015；所述的纳米粒在复合凝胶中的重量和体积比的含量为00012G/100ML凝胶剂。2根据权利要求1所述的纳米复合温敏凝胶剂，其特征在于所述的MPEGPLGA和MPEGPLGAPLL中，MPEG的分子量为100010000，PLGA的分子量为500050000，PLL的分子量为100010000。3根据权利要求1所述的纳米复合温敏凝胶剂，其特征在于所述靶向基团为人表皮生长因子EGF。4根据权利要求1所述的纳米复合温敏凝胶剂，其特征在于所述的抗肿瘤活性物质中替莫唑胺和紫杉醇的重量比为0110，优选为411501。5根据权利要求1所述的纳米复合温敏凝胶剂，其特征在于所述。
5、的抗肿瘤活性物质中替莫唑胺和紫杉醇的重量比为411501。6根据权利要求1所述的一种纳米复合温敏凝胶剂，其特征在于所述温敏高分子材料为普朗尼克F127、F68、羟丙基甲基纤维素或它们的混合物。7根据权利要求1所述的一种纳米复合温敏凝胶剂，其特征在于纳米复合温敏凝胶剂中F127的重量为1520G/100ML凝胶剂、F68的含量为00011G/100ML凝胶剂、羟丙基甲基纤维素的含量为00011G/100ML凝胶剂。8如权利要求1所述的纳米复合温敏凝胶剂用于制备抗肿瘤。权利要求书CN104083321A1/6页3一种纳米复合温敏凝胶剂及其应用技术领域0001本发明属于靶向递送药物载体和应用领域，特。
6、别涉及一种纳米复合温敏凝胶剂及其在脑部肿瘤术后复发的应用。背景技术0002实体肿瘤一般都可实现手术切除，但切除后的复发现象很严重。在临床上术后普遍使用化疗、放疗等方式可有效抑制肿瘤复发，但存在着一些严重的问题。一个主要的问题是化疗药物普遍缺乏选择性，导致严重的剂量依赖性毒副作用的产生，极大地限制了化疗药物的临床治疗效果。使用介入的方式可缩小药物的影响范围，提高药效。但由于药物在体内的代谢和排泄，病灶部位的有效浓度维持时间短，药物也不可避免的分布到正常组织中发生毒副反应。多次介入给药也存在病人顺应性差的问题。此外，化疗药物的多次使用也常导致肿瘤耐药性的产生。0003因此，抑制肿瘤复发的药物制剂应。
7、具有1在肿瘤部位具有较高分布，2克服肿瘤耐药性，3可控释放的性质。0004近几十年来，纳米递送载体由于其独特的优势，能有效的提高治疗效果，而备受国内外关注。与普通化疗制剂相比，可以在一定程度上提高药物在靶器官的分布，降低药物的毒副作用，延迟药物在体内的代谢，改善治疗效果。许多像聚乳酸、聚乳酸羟基乙酸等生物降解材料已经广泛的被用做药物、基因和成像试剂的递送载体，取得了一定的效果。0005给药系统的靶向能力是将活性物质准确递送至靶点的关键，人表皮生长因子EGF是一种有效的靶向分子，众多实验已经证实其对肿瘤新生血管具有很好的靶向效果。将纳米粒采用靶向基团修饰后，靶向基团可以与靶点特异性结合，具有受体。
8、介导的靶向给药系统形成的主动靶向效应，使抗肿瘤药物比较准确送到肿瘤细胞中，实现恶性肿瘤的靶向治疗。0006本课题组运用聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物MPEGPLGAHYUNH,YANGJC,KIMMS,LEEHB,KHANGGSYNTHESISOFMETHOXYPOLYETHYLENEGLYCOL/POLYESTERSDIBLOCKCOPOLYMERSANDEVALUATIONOFMICELLARCHARACTERIZATIONASDRUGCARRIERPOLYMERKOREA,2006,306464470，以及自主设计合成的聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸聚赖氨酸MPEGPLGAPLL，以及。
9、它们连接EGF靶向基团的聚合物MPEGPLGAEGF、MPEGPLGAPLLEGF段友容，孙颖，刘培峰，于晖，亓雪莲，王琪，陈晓炎，李晓昱。聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚赖氨酸纳米递送系统、制备方法及应用。授权公告号CN101732723B，制备包裹抗肿瘤药物的纳米粒，具有较好的抗肿瘤效果。0007由于纳米粒通过胞吞或胞饮形式被细胞摄取，因此能够避免细胞膜上外排蛋白对小分子药物的外排作用，能够在一定程度上克服肿瘤细胞耐药性。0008对于静脉给药的靶向药物制剂来说，药物的全身分布和毒副作用仍然不可完全避免。将靶向药物制剂与介入治疗相结合，将大大提高药物在病灶部位的分布，并减轻全身毒副作用。说明书CN1。
10、04083321A2/6页40009温敏高分子材料是一类随外界温度变化，其水溶液可发生溶液凝胶转变的材料。在药剂学中利用这个性质可在体内形成原位凝胶以达到在给药部位的缓释效果，或在体外固化增加制剂稳定性等。泊洛沙姆是一类生物相容性好，并广泛应用的温敏材料，FDA已批准用于人血管内给药。在温度升高时，其水溶液可转变成水凝胶，在体内通过降解和溶蚀来控制药物释放的速度，起到缓释贮库的作用。聚丙烯酰胺类及其与丙烯酸酯类的共聚物也是研究较为广泛的温敏聚合物，在温度升高时，其水溶液形成网状凝胶结构，通过温度变化和骨架内的渗透控制药物的释放速度。羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、海藻酸钠等也具有类似的反向温敏性。
11、。0010当肿瘤复发时，若不能施行手术，则需迅速控制其发展，这就需要抗肿瘤药物的迅速释放达到较高的局部浓度。原位凝胶和聚合物纳米粒对药物的缓释都是通过聚合物的缓慢降解、溶解以及药物在基质中的低速FICK扩散的形式。低频超声能通过组织吸收及反射形成热能，具有温热效应；超声振荡使组织不断收缩与伸张，具有机械效应。一方面，超声波能增加纳米粒中聚合物基质的降解性和渗透性，从而加快药物释放。另一方面，超声波能使凝胶中的冻结水含量增加以及胶凝温度升高，冷冻水构成的水通道增多导致药物FICK扩散速度加快，胶凝温度升高意味着凝胶更容易溶蚀而释药。也就是说，纳米粒和凝胶中药物的释放以通过超声波处理来加速。001。
12、1将纳米技术、介入手段、温敏技术和低频超声技术联合，恰好能够满足1在肿瘤部位具有较高分布，2克服肿瘤耐药性，3可控释放三个要求。发明内容0012本发明所要解决的技术问题是提供一种纳米复合温敏凝胶剂及其用途，可以用于抗肿瘤药物的制备。该纳米复合温敏凝胶剂适合于肌肉注射、皮下注射、皮内注射、瘤内注射、瘤旁注射等方式；尤其适合用于抑制脑部肿瘤术后复发；制备方法简便，适于大规模生产。0013本发明的纳米复合温敏凝胶剂是采用聚合物包裹抗肿瘤活性物质制成纳米粒，再加入温敏高分子材料，制成纳米复合温敏凝胶剂。所述的纳米粒的平均粒径在101000NM，优选30900NM。所述的聚合物为聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基。
13、乙酸共聚物MPEGPLGA、聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物连接聚赖氨酸后的共聚物料MPEGPLGAPLL或者上述共聚物再连接肿瘤靶向基团；肿瘤靶向基团与聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物MPEGPLGA或肿瘤靶向基团与聚乙二醇单甲醚聚乳酸羟基乙酸共聚物连接聚赖氨酸后的共聚物料MPEGPLGAPLL的摩尔比为011。0014所述的抗肿瘤活性物质为替莫唑胺、紫杉醇或它们的为混合物；所述的纳米粒中抗肿瘤活性物质的重量百分含量为00015；0015所述的纳米粒在复合凝胶中的重量和体积比的含量为00012G/100ML凝胶剂。0016如由高分子聚合物MPEGPLGA或其连接EGF的靶向材料作为载体，。
14、包裹抗肿瘤活性物质替莫唑胺，制成纳米粒，再加入温敏高分子材料，制成纳米复合温敏凝胶剂。0017本发明的纳米复合温敏凝胶剂中，所述的MPEGPLGA和MPEGPLGAPLL中，MPEG的分子量为100010000，PLGA的分子量为500050000，PLL的分子量为100010000。0018所述靶向基团为人表皮生长因子EGF。说明书CN104083321A3/6页50019所述的抗肿瘤活性物质中替莫唑胺和紫杉醇的重量比为0110，优选为411501。0020所述的抗肿瘤活性物质中替莫唑胺和紫杉醇的重量比为411501。0021所述温敏高分子材料为泊洛沙姆、聚N异丙基丙烯酰胺、N异丙基丙烯酰胺。
15、与甲基丙烯酸或甲基丙烯酸酯的共聚物中的一种或几种；所述温敏高分子材料为普朗尼克F127、F68和羟丙基甲基纤维素的组合物权利要求书中描述；其中F127的含量为1520G/100ML凝胶剂，F68的含量为00011G/100ML凝胶剂，羟丙基甲基纤维素的含量为00011G/100ML凝胶剂。0022本发明是一种以高分子聚合物为骨架，以温敏高分子为基质的纳米给药载体系统。通过控制骨架聚合物各嵌段的分子量和组成，可使载体具有较好的生物相容性、较高的载药量和可控的释药速度。调节靶向基团的接枝率可以达到较强的肿瘤靶向功能。调节温敏高分子的种类和组成可以调节凝胶剂的温敏性质。该凝胶剂在室温下是液体，可通过。
16、注射用于机体内，通过温敏作用，在体温下形成凝胶贮库，定位的缓慢释放靶向纳米粒，或在低频超声下速释，于肿瘤细胞。该纳米载体系统具有运送活性物质、肿瘤治疗、逆转或降低耐药等功能。其主要应用于1制备抗肿瘤药物靶向制剂；2制备逆转或降低肿瘤耐药制剂，从而抑制肿瘤复发。0023有益效果0024本发明制备方法简便，适于大规模生产，特别适应于制备具有可生物降解、缓控释、主动靶向、运送活性物质、抗肿瘤的药物。采用本发明的方法获得的抗肿瘤的药物适合于静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、瘤内注射、瘤旁注射或经皮给药等方式，具有良好的应用前景。附图说明0025图1为TMZMPEGPLGA纳米粒A、PTXMPEG。
17、PLGA纳米粒B、TMZMPEGPLGAEGF纳米粒C、PTXMPEGPLGAEGF纳米粒D、TMZPTXMPEGPLGA纳米粒E、TMZPTXMPEGPLGAEGFF粒径分布图。0026图中，TMZ表示替莫唑胺，PTX表示紫杉醇，EGF表示人表皮生长因子。具体实施方式0027下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。0028实施例10029包载替莫唑胺TMZ的MPEGPLGA温敏复合凝胶剂的制备和应。
18、用0030采用复乳法制备取8MGMPEGPLGA溶于400L二氯甲烷，加入40L浓度为4MG/ML的TMZ溶液，超声乳化后，再加入5ML2的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM图1A。说明书CN104083321A4/6页60031在以上纳米粒水分散体中加入F127使F127的浓度为15，即得复合凝胶剂。0032建立大鼠脑肿瘤原位癌模型，开颅手术，切除肿瘤，将该复合凝胶剂加入切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。0033实施例20034包载紫杉醇PTX的。
19、MPEGPLGA温敏复合凝胶剂的制备和应用0035采用乳化蒸发法制备取8MGMPEGPLGA溶于400L二氯甲烷，加入04MGPTX，超声乳化后，再加入5ML1的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM图1B。0036将F127加入以上纳米粒水分散体中，使其浓度为18，冻干，即得复合干凝胶剂。0037建立大鼠脑肿瘤原位癌模型，开颅手术，切除肿瘤，将该复合凝胶剂水化后加入切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。建立脑肿瘤裸鼠原位模型，将该复合凝胶剂水化后加入切除。
20、部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，9个月内未发现肿瘤复发及转移。0038实施例30039包载TMZ的MPEGPLGAEGF温敏复凝胶剂的制备和应用0040采用复乳法制备取10MGMPEGPLGAEGF溶于400L二氯甲烷，加入20L浓度为4MG/ML的TMZ溶液，超声乳化后，再加入5ML05的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM图1C。其中EGF是人表皮生长因子。0041在以上溶液中加入13F127、1HPMC100M使其成为凝胶剂，冻干，即得复合凝胶干剂。0042将该复合凝胶剂用生。
21、理盐水水化后加入脑肿瘤裸鼠原位模型切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，9个月内未发现肿瘤复发及转移。0043实施例40044包载PTX的MPEGPLGAEGF温敏复合凝胶剂的制备和应用0045采用乳化蒸发法制备取10MGMPEGPLGAEGF溶于400L二氯甲烷，加入05MGPTX，超声乳化后，再加入5ML1的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM图1D。0046将F127加入以上纳米粒水分散体中，使其浓度为18，冻干，即得复合干凝胶剂。0047建立大鼠脑肿瘤原位癌模型，开颅手术，切。
22、除肿瘤，将该复合凝胶剂水化后加入切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。0048实施例50049包载PTX和TMZ的MPEGPLGA纳米粒混合温敏凝胶剂的应用0050将实施例1和2中的纳米粒以11、12、13、14的比例混合，加入17F127、05HPMC100M使成凝胶剂，加于大鼠脑肿瘤切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。说明书CN104083321A5/6页70051实施例60052包载PTX和TMZ的MPEGPLGAEGF纳米粒混合温敏凝胶剂的应用0053将实施例3和4中的纳米粒以。
23、11、12、13、14的比例混合，加入20F127使成凝胶剂，加于大鼠脑肿瘤切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。0054实施例70055TMZ和PTX共载的MPEGPLGA复合温敏凝胶剂的制备和应用0056采用复乳法制备取8MGMPEGPLGA溶于含PTX05MG/ML的700L二氯甲烷中，加入80L浓度为4MG/ML的替莫唑胺溶液，超声乳化后，再加入5ML1的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM图1E。0057加入18F127、05HPMC100M、。
24、03PVPK90使成凝胶剂，冻干，即得复合干凝胶剂。0058将该凝胶剂用生理盐水水化后加入小鼠脑肿瘤切除处，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，4个月内未发现肿瘤复发及转移。0059实施例80060TMZ和PTX共载的MPEGPLGAEGF复合温敏凝胶剂的制备和应用0061采用复乳法制备取10MGMPEGPLGAEGF溶于含PTX05MG/ML的700L二氯甲烷中，加入80L浓度为4MG/ML的替莫唑胺溶液，超声乳化后，再加入5ML025的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM图1F。0062。
25、加入18F127、05HPMC100M、03PVPK90使成凝胶剂，冻干，即得复合干凝胶剂。0063将该凝胶剂用生理盐水水化后加入小鼠脑肿瘤切除处，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，4个月内未发现肿瘤复发及转移。0064实施例90065包载替莫唑胺TMZ的MPEGPLGAPLL温敏复合凝胶剂的制备和应用0066采用复乳法制备取8MGMPEGPLGAPLL溶于300L二氯甲烷，加入40L浓度为4MG/ML的TMZ溶液，超声乳化后，再加入5ML01的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM。006。
26、7将纳米粒悬液冻干，加入F127和生理盐水，使纳米粒浓度为2，F127浓度为18，即得复合凝胶剂。0068建立脑肿瘤裸鼠原位癌模型，开颅手术，切除肿瘤，将该复合凝胶剂加入切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。0069实施例10包载紫杉醇PTX的MPEGPLGAPLL温敏复合凝胶剂的制备和应用0070采用乳化蒸发法制备取8MGMPEGPLGAPLL溶于500L二氯甲烷，加入04MGPTX，超声乳化后，再加入5ML02的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM。。
27、说明书CN104083321A6/6页80071将纳米粒混悬液冻干，加入F127、HPMC和生理盐水，使纳米粒浓度为15，F127浓度为20，HPMC浓度为01。0072建立大鼠脑肿瘤原位癌模型，开颅手术，切除肿瘤，将该复合凝胶剂加入切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。0073建立脑肿瘤裸鼠原位模型，将该复合凝胶剂水化后加入切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。0074实施例110075包载TMZ的MPEGPLGAPLLEGF温敏复凝胶剂的制备和应用0076采用复乳法制备取10MGMP。
28、EGPLGAPLLEGF溶于400L二氯甲烷，加入20L浓度为4MG/ML的TMZ溶液，超声乳化后，再加入5ML01的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM。0077在以上溶液中加入26F127、02HPMC100M使其成为凝胶剂，冻干，即得复合凝胶干剂。加1ML生理盐水复溶，即得含纳米粒1、F12713、HPMC1的复合凝胶剂。0078将该干复合凝胶剂用生理盐水水化后加入脑肿瘤裸鼠原位模型切除部位，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，9个月内未发现肿瘤复发及转移。0079实施例120080包。
29、载PTX的MPEGPLGAPLLEGF温敏复合凝胶剂的制备和应用0081采用乳化蒸发法制备取10MGMPEGPLGAPLLEGF溶于400L二氯甲烷，加入05MGPTX，超声乳化后，再加入5ML01的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM。0082将纳米粒混悬液冻干，将F127加入以上纳米粒水分散体中，使其浓度为9，冻干，即得复合干凝胶剂。加25ML生理盐水复溶，得含纳米粒04、F12718的复合凝胶剂。0083建立大鼠脑肿瘤原位癌模型，开颅手术，切除肿瘤，将该复合凝胶剂水化后加入切除部位，待其凝固后，用生物。
30、胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，6个月内未发现肿瘤复发及转移。0084实施例130085TMZ和PTX共载的MPEGPLGAPLLEGF复合温敏凝胶剂的制备和应用0086采用复乳法制备取10MGMPEGPLGAPLLEGF溶于含PTX05MG/ML的600L二氯甲烷中，加入80L浓度为4MG/ML的替莫唑胺溶液，超声乳化后，再加入5ML01的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3H除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在101000NM图1F。0087加入45F127、01HPMC100M、006PVPK90使成凝胶剂，冻干，即得复合干凝胶剂。加1ML生理盐水复溶，得含纳米粒1、F12718、HPMC100M05、PVPK9006的复合凝胶剂。0088将该干凝胶剂用生理盐水水化后加入小鼠脑肿瘤切除处，待其凝固后，用生物胶封闭，缝合伤口。定期MRI观察，4个月内未发现肿瘤复发及转移。说明书CN104083321A1/1页9图1说明书附图CN104083321A。