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1、10申请公布号CN104189005A43申请公布日20141210CN104189005A21申请号201410366515322申请日20090518085318720080516FR200980117470320090518A61K35/06200601A61P17/02200601A61P17/00200601A61K31/04720060171申请人皮埃尔法布尔皮肤化妆品公司地址法国布洛涅比扬古72发明人P法夫雷C普日贝尔斯基JF科尔多利安尼M科佩茨74专利代理机构北京戈程知识产权代理有限公司11314代理人程伟李媛54发明名称润肤剂组合物57摘要本发明涉及润肤剂组合物，特别是用于局。
2、部用途的润肤剂组合物，其包含水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石蜡的组合作为活性成分。本发明还涉及所述润肤剂组合物在制备用于治疗与如特应性皮炎、鱼鳞病和牛皮癣的某些皮肤病相关的干燥皮肤症状的药物中的用途；在制备用于治疗小浅表烧伤的药物中的用途；以及在制备用于预防和/或治疗和/或减少在经受特应性皮炎的患者中所观察到的湿疹发作的频率和强度的药物中的用途。30优先权数据62分案原申请数据51INTCL权利要求书1页说明书10页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书10页附图1页10申请公布号CN104189005ACN104189005A1/1页21一。
3、种用于局部用途的组合物，其包含水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石蜡的组合作为活性成分。2根据权利要求1所述的组合物，其中所述凡士林的500MHZ碳13NMR波谱谱图包含在2455PPM处的峰，所述峰的面积相对于1四甲基硅烷TMS对照样为4至8。3根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述凡士林具有51至57，特别是54的滴点。4根据前述权利要求任意项所述的组合物，其中所述凡士林具有1751/10MM至1951/10MM的稠度在25下锥体针入度。5根据权利要求4所述的组合物，其中所述凡士林具有大约1851/10MM的稠度在25下锥体针入度。6根据前述权利要求任意项所述的组合物，其中所述。
4、凡士林在100下具有4CST至5CST的粘度。7根据权利要求6所述的组合物，其中所述凡士林在100下具有大约48CST的粘度。8根据前述权利要求任意项所述的组合物，其包含大约15的丙三醇、大约8的凡士林和大约2的液体石蜡。9根据前述权利要求任意项所述的组合物，其包含选自硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、聚二甲基环硅氧烷、二甲聚硅氧烷、聚乙二醇600、三乙醇胺、对羟苯甲酸丙酯、氯甲酚、PEG40硬脂酸酯、蒸馏水的一种或多种赋形剂。10如前述权利要求任意项所述的组合物在制备用于治疗如特应性皮炎、鱼鳞病和牛皮癣的某些皮肤病的皮肤干燥症状的药物中的用途。11如权利要求1至9中任意项所述的组合物在制备用于治疗小浅。
5、表烧伤的药物中的用途。12如权利要求1至9中任意项所述的组合物在制备用于预防和/或治疗和/或减少在经受特应性皮炎的患者中所观察到的湿疹发作的频率和强度的药物中的用途。13滴点为51至57的凡士林在制备用于局部用途的组合物中的用途，所述组合物包含水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石蜡的组合作为活性成分。14凡士林在制备用于局部用途的组合物中的用途，所述凡士林的500MHZ碳13NMR波谱谱图包含在2455PPM处的峰，所述峰的面积相对于1四甲基硅烷TMS对照样为4至8，所述组合物包含水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石蜡的组合作为活性成分。权利要求书CN104189005A1。
6、/10页3润肤剂组合物0001本申请是申请号为2009801174703，申请日为2009年5月18日，发明名称为“润肤剂组合物”的中国专利申请的分案申请。技术领域0002本发明涉及与受感染皮肤的屏障作用相关的病理和症状的治疗领域。背景技术0003表皮为不断进行更新的外胚层源的复层上皮。0004其保护身体不受脱水、机械应力和某些致病攻击的影响。0005其由数种细胞类型组成90以上的角质化细胞，以及朗氏细胞、默克尔细胞和黑素细胞。0006不同形态性质和细胞组成的数个层由内向外可分为基底层其为细胞层，它的角质化细胞具有非常强的增生能力，这确保了表皮的自我更新，接着为上基底层颗粒层、表皮生发层，最后。
7、为角质层SC。0007皮肤的基本功能之一是通过一方面防止来自环境的真菌、细菌和变应原渗入表皮，另一方面防止脱水而确保身体与外部介质间的屏障。0008屏障作用的质量在人体的活体内通过测量不显性水丢失和水合率进行评价，以及在老鼠内通过测量由于脱水导致的胚胎死亡、对染料的皮肤渗透性或体重的下降而进行评价。0009细胞外脂类粘固剂的完整性，以及角质层的所有细胞单元，和角质化细胞增生与分化之间的平衡对于维持表皮的功能性屏障作用是必须的。0010PH梯度调节各种酶的活性，因此有助于屏障的平衡。0011通过调节颗粒层中片状体的分泌物，钙离子浓度影响角质层的细胞外粘固剂的组成并因而影响表皮屏障的平衡LEE等人。
8、的CALCIUMANDPOTASSIUMAREIMPORTANTREGULATORSOFBARRIERHOMEOSTASISINMURINEEPIDERMIS，JCLININVEST，89，530538，1992。0012水分梯度其由在表皮的可见层中的70变化至在SC的底层中的30变化至在表皮的最外细胞层中的15WARNER等人，ELECTRONPROBEANALYSISOFHUMANSKINDETERMINATIONOFTHEWATERCONCENTRATIONPROFILE,JINVESTDERMATOL，90，218224，1988的存在表明一些水保留在颗粒层与角质层的接合处。0013在。
9、角质层中的水的作用之一为使得酶水解反应能够发生，所述酶水解反应对于皮肤的弹性和正常表皮脱落是必须的。如果在SC中存在的水的量降至临界阈值以下，酶反应被中断，从而导致角化细胞的粘附以及细胞在皮肤的表面上的积聚。这产生可见的干燥外观，且皮肤发痒、脱皮和剥落。0014皮肤水合在于两种现象自循环血液通过经表皮流动提供水以及保留表皮水该表皮水发挥皮肤屏障作用。然而，针对水分流失的屏障不是绝对的。在外部介质与内部介说明书CN104189005A2/10页4质之间通过角质层的水分交换的正常移动称为TEWL经表皮水分流失，并构成不显性水丢失的一部分。0015在人群中最普遍的大多数皮肤病变中，皮肤屏障作用受到影。
10、响，并经常伴随着炎性成分牛皮癣、特应性皮炎、鱼鳞病、皮肤干燥等。皮肤屏障作用也在许多与时间皮肤老化相关或者与环境攻击紫外线、湿度水平、污染、灼伤相关的生理症状中受到影响。0016屏障作用的破坏慢性或急性的使得身体对外部攻击和脱水更敏感。其与剥落紊乱以及增殖相关JACKSON等人，PATHOBIOLOGYOFTHESTRATUMCORNEUM，WESTJMED，158，279285，1993。0017专利申请FR2847467涉及氧固醇7羟化酶的至少一种活性调节剂在制备用于预防和/或治疗影响皮肤屏障的正常功能的皮肤和/或粘膜的病症的化妆品组合物中的用途。0018专利申请FR2831443涉及银杏。
11、或齐墩果树的至少一种提取物在制备用于改进皮肤的屏障作用的组合物中的用途。0019专利申请FR2905857涉及包含角豆树果肉的提取物的组合物用于保湿和/或保护皮肤免于干燥的用途。0020需要治疗与受影响的皮肤的屏障作用相关的病理和症状。0021以令人惊奇且出乎意料的方式，发明人注意到水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石蜡的组合可治疗皮肤干燥症状。0022发明人证明该组合将皮肤屏障恢复至保护和功能状态。发明人通过使用诱导性皮肤脱水的活体外皮肤模型评价了该组合的水合活性以及由此带来的皮肤屏障作用的改进。而且，发明人通过定量PCR和免疫组织化学观察到在表皮屏障作用的体内平衡中潜在涉及的分子。
12、表皮标记的表达。0023发明人还通过原位酶谱法追踪了丝氨酸蛋白酶的活性并使用荧光探针追踪了皮肤屏障的功能性。结果表明水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石蜡的组合恢复了丝氨酸蛋白酶的活性并抑制了应力诱发的炎症。0024发明人还证明在该组合中选择特定的凡士林特别有利于获得以上结果。作为闭塞剂和润肤剂的凡士林在组合物中特别重要。实际上，通过在皮肤上形成保护性薄膜，其有助于补偿受影响的屏障作用的不足。在皮肤上形成的薄膜的质量非常强烈地取决于在制备中使用的凡士林的流变学性能。发明内容0025因此，本发明的一个目的为用于局部用途的组合物，该组合物包含水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石。
13、蜡的组合作为活性成分。0026在本发明的上下文中，“活性组合”是指水包油或油包水乳液形式的丙三醇、凡士林和液体石蜡的组合。0027有利地，丙三醇、凡士林和液体石蜡具有根据“欧洲药典”第6版所记载和规定的标准。0028有利地，活性组合的凡士林具有35至70，优选51至57，且在特别优选的方式中为大约54的滴点。滴点根据在“欧洲药典”第6版中所述的2217方法测量。说明书CN104189005A3/10页50029有利地，活性组合的凡士林具有1751/10MM至1951/10MM，优选大约1851/10MM的稠度在25下锥体针入度。0030有利地，活性组合的凡士林具有在100下4CST至5CST，。
14、优选在100下大约48CST的粘度。0031有利地，活性组合的凡士林的500MHZ碳1313CNMR波谱谱图包含在2455PPM处的峰，所述峰的面积相对于1四甲基硅烷TMS对照样为4至8。0032在本发明的组合物中，活性组合的存在比例以组合物的总重量计为10重量至50重量，优选20重量至30重量；丙三醇浓度以组合物的总重量计为5重量至30重量，优选10重量至20重量，在特别优选的方式中为大约15重量；凡士林浓度以组合物的总重量计为3重量至20重量，优选5重量至10重量，在特别优选的方式中为大约8重量；且液体石蜡浓度以组合物的总重量计为05重量至5重量，优选1重量至3重量，在特别优选的方式中为大。
15、约2重量。0033在水相中，水以组合物的总重量计为30重量至80重量。0034有利地，本发明的组合物由以组合物的总重量计大约15重量的丙三醇、大约8重量的凡士林和大约2重量的液体石蜡组成。0035本发明的皮肤病学组合物进一步包含常规的皮肤病学可相容赋形剂。0036本发明的皮肤病学组合物可以油包水W/O或水包油O/W乳液的形式，多乳液形式，如水包油包水W/O/W形式或油包水包油O/W/O乳液形式，或者以水分散体或脂分散体、凝胶或气溶胶形式制得。0037皮肤病学可相容的赋形剂可以为本领域技术人员公知的任何赋形剂，从而获得乳膏、洗剂、凝胶、软膏、乳液、微乳剂、喷雾剂等形式的用于局部施用的组合物。00。
16、38本发明的组合物可特别地包含添加剂和制剂助剂，如乳化剂、增稠剂、胶凝剂、水固定剂、铺展剂、稳定剂、染料、香料和防腐剂。0039合适的乳化剂包括硬脂酸、三乙醇胺和PEG40硬脂酸酯。0040优选地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计大约5重量的乳化剂。0041有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计1重量至5重量，优选大约3重量的硬脂酸。0042有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计0重量至2重量，优选大约05重量的三乙醇胺。0043有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计0重量至2重量，优选大约05重量的PEG40硬脂酸酯。0044合适的增稠剂包括单硬脂酸甘油酯和PEG600。
17、。0045优选地，本发明的组合物具有以组合物总重量计大约5重量的增稠剂。0046有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计2重量至10重量，优选大约5重量的单硬脂酸甘油酯。0047有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计2重量至10重量，优选大约5重量的PEG600。0048合适的防腐剂包括对羟苯甲酸丙酯和氯甲酚。0049优选地，本发明的组合物具有以组合物总重量计大约01重量的防腐剂。说明书CN104189005A4/10页60050有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计005重量至1重量，优选大约01重量的对羟苯甲酸丙酯。0051合适的铺展剂包括二甲聚硅氧烷和聚二甲基环硅氧烷。0。
18、052优选地，本发明的组合物具有以组合物总重量计大约2重量的铺展剂。0053有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计02重量至2重量，优选大约05重量的二甲聚硅氧烷。0054有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计1重量至3重量，优选大约25重量的聚二甲基环硅氧烷。0055合适的水固定剂包括聚乙二醇，优选聚乙二醇600。0056优选地，本发明的组合物具有以组合物总重量计大约8重量的水固定剂。0057有利地，本发明的组合物具有以组合物的总重量计2重量至10重量，优选大约5重量的聚乙二醇。0058用于乳液的水相的水可以为蒸馏水或者具有美肤性质的热水。0059有利地，本发明的组合物由如下组成。
19、0060大约15的丙三醇，0061大约8的凡士林，0062大约2的液体石蜡，以及作为赋形剂的如下组分0063大约1至5的硬脂酸，0064大约2至10的单硬脂酸甘油酯，0065大约1至3的聚二甲基环硅氧烷，0066大约02至2的二甲聚硅氧烷，0067大约2至10的聚乙二醇600，0068大约0至2的三乙醇胺，0069大约005至1的对羟苯甲酸丙酯，0070水直至100。0071本发明的再一目的为本发明的组合物在制备用于治疗与如特应性皮炎、鱼鳞病和牛皮癣的某些皮肤病相关的干燥皮肤症状的药物中的用途。0072本发明的另一目的为本发明的组合物在制备用于治疗小浅表烧伤的药物中的用途。0073本发明的又一。
20、个目的为本发明的组合物在制备用于预防和/或治疗和/或减少在经受特应性皮炎的患者中所观察到的湿疹发作的频率和强度的药物中的用途。0074通过以下实施例阐明本发明。附图说明0075图1为SYNTADEXA凡士林SYNTHAL以及组合物A的5克样品的500MHZ碳13NMR波谱。具体实施方式0076实施例说明书CN104189005A5/10页70077实施例1制剂0078组合物A007915克的丙三醇，00808克的凡士林，00812克的液体石蜡，008205克的三乙醇胺，0083以及作为赋形剂的如下组分硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、聚二甲基环硅氧烷、二甲聚硅氧烷、聚乙二醇PEG600、对羟苯甲酸丙酯，。
21、0084水直至100克。0085组合物A008615克的丙三醇，00878克的凡士林，00882克的液体石蜡，008915克的硬脂酸，00905克的单硬脂酸甘油酯，009115克的聚二甲基环硅氧烷，009205克的二甲聚硅氧烷，00935克的聚乙二醇600，0094015克的三乙醇胺，009501克的对羟苯甲酸丙酯，0096水直至100克。0097组合物B009815克的丙三醇，00998克的凡士林，01002克的液体石蜡，010105克的PEG40硬脂酸酯，0102以及作为赋形剂的如下组分硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、聚二甲基环硅氧烷、二甲聚硅氧烷、聚乙二醇600、氯甲酚，0103水直至100克。。
22、0104组合物B010515克的丙三醇，01068克的凡士林，01072克的液体石蜡，01083克的硬脂酸，01095克的单硬脂酸甘油酯，01102克的聚二甲基环硅氧烷，011105克的二甲聚硅氧烷，011201克的三乙醇胺，01133克的聚乙二醇600，说明书CN104189005A6/10页8011405克的PEG40硬脂酸酯，01150075克的氯甲酚，0116水直至100克。0117实施例2对诱导性皮肤脱水的调节的分析0118在此，我们通过使用诱导性皮肤脱水的活体外皮肤模型评价了组合物A的水合活性以及由此带来的皮肤屏障作用的改进。0119我们通过定量PCR和免疫组织化学观察了微分分子表。
23、皮标记的表达。0120我们还通过原位酶谱法追踪了丝氨酸蛋白酶的活性并通过西式印迹法追踪了角膜桥粒蛋白的降解。0121皮肤屏障的功能通过使用荧光探针进行分析。0122材料和方法01231、组织模型01241、皮肤移植物的制备0125实验室从整形外科乳腺减少的操作废料中回收皮肤样品。这些样品的使用落入法国高等教育和研究部规定的“PIERREFABRE组的研究方案所需的人体元件的保存和制备活动的声明”“THEDECLARATIONOFANACTIVITYFORPRESERVINGANDPREPARINGELEMENTSOFTHEHUMANBODYFORTHENEEDSOFARESEARCHPROGR。
24、AMOFTHEPIERREFABREGROUP”的范围。0126将这些样品在PBS浴中洗涤10次，然后用冲压机切出2厘米直径的圆盘。将皮肤移植物在培养皿中的网格上展开，并将1厘米直径的环嵌入皮肤以界定治疗区域。01272、模型的动力学0128对于诱导性脱水模型，皮肤在无盖的盘中在细胞培养罩下干燥2小时，然后将皮肤置于保温箱中，在有或无活性组合的情况下局部治疗2小时。在封闭的培养皿中，脱水应激的阴性对照样进行相同的动力学。01293、用于分析的样品0130在治疗之后，取样2个直径为6毫米的活组织用于RNA表达分析，将一个直径为4毫米的活组织封装在TISSUE树脂SAKURAFINETEK块中用于。
25、组织学。为了分析蛋白质，将皮肤暴露于60水浴中的热冲击5分钟，然后暴露于4浴的热冲击2分钟，从而从真皮分离表皮。0131在进行分析之前，活组织和表皮在液氮中冷冻，并在80下存储。0132II、通过定量PCR分析转录组0133皮肤活组织在用液氮预冷却的研钵中破碎，RNA根据制造商的推荐使用试剂盒QIAGEN提取。然后使用BIOANALYZERAGILENTTECHNOLOGIES在RNA6000NANO片上测定RNA。使用寡DT引物，通过采用ACCESSRTPCRCORE试剂盒PROMEGA进行的酶反向转录反应自1微克RNA获取CDNA。根据40个循环的方案其包括在95下变性15秒和在60下伸展。
26、1分钟，通过在配备PCRIQTMSUPERGREENMIX试剂盒BIORAD的ICYCLERBIORAD荧光热循说明书CN104189005A7/10页9环器上的定量PCR分析基因表达水平。使用ICYCLER软件，一个接一个循环地观察到正比于荧光发射设置的GREEN的PCR产品的积聚。0134ICYCLER版本31分析软件传送CT循环阈值的原始值，自该循环起CDNA放大开始。使用程序GENORM版本34平行分析数个参照基因的表达，这使得有可能从各样品中选择最稳定的参照基因。然后使用该基因作为参照，通过计算CTCT目标基因CT对照基因来归一化结果。0135然后计算相比于对应的对照条件的每个治疗的。
27、诱导因子IF。IF2CT，其中CT治疗CT对照CT。对来自5个不同个体的五个试验评价MRNA表达两次。当相比于对照样的诱导因子为2以上时，认为基因表达受到诱导，当其为05以下时，认为表达被抑制。通过用下式计算的抑制百分数来评价活性成分对在模型中引起的应激反应的影响0136应激反应抑制100应激的IF无应激的对照IF治疗的IF无应激的对照IF/应激的IF无应激的对照IF。0137与研究模型相比，“无应激的对照”条件对应于无干燥的对照；“应激的”条件对应于干燥2小时然后在对照条件下即无局部治疗度过另外2小时的皮肤活组织；最后，“治疗的”条件为进行2小时干燥接着用润肤剂局部治疗2小时的皮肤。0138。
28、III、通过西式印迹法分析蛋白表达0139治疗的表皮在用液氮冷却的研钵中破碎，并在RIPA溶解缓冲液50MMTRISHCLPH8；150MMNACL；1TRITONX100；1NA去氧胆酸盐；01SDS；5MMEDTA；100MMDTT；蛋白酶抑制剂的混合物P8340，SIGMA中提取蛋白质。0140然后通过DCDC蛋白质测定BIORAD法测定蛋白质，并通过西式印迹法分析蛋白质。对于每个条件，将25微克至40微克的总蛋白质沉积在75聚丙烯酰胺TRISGLYCINE凝胶上。使用MINIPROTEANII系统BIORAD通过电泳法分离蛋白质混合物，并将蛋白质转移至PVDF膜HYBONDP，AMER。
29、SHAM。通过特异性抗体和ECL试剂盒AMERSHAM显现目标蛋白质。在相比于肌动蛋白参照蛋白质归一化之后，使用IMAGEMASTERTOTALLAB版本111软件AMERSHAM计算蛋白质的量和降解形式的比例。0141IV、组织学技术0142采用CRYOTOMELEICACM3050S将皮肤活组织切成厚度为5微米的切块，并将其沉积在观察载玻片上。01431、免疫组织化学0144在通过免疫化学标记进行分析之前，将冷冻活组织在20下的丙酮中固定10分钟，然后在PBS中再水合。在固定和再水合之后，皮肤切块用3的BSA溶液进行饱和，并用针对目标蛋白质的初级抗体培养1小时。接着，皮肤切块用与ALEXA。
30、488或ALEXA555荧光染料结合的第二抗体培养1小时，最后固定在包含DAPI的MOWIOL中以染色细胞核。01452、原位酶谱法0146在20下的丙酮中固定10分钟之后，切块在洗涤液在水中的1TWEEN20中冲洗，并用包含与荧光团结合的目标酶的特异性底物二级的的溶液在37下培养2小时。当酶为活性时，荧光团被分开，释放可在显微镜下观察到的荧光信号。然后在落射荧光说明书CN104189005A8/10页10显微镜NIKONECLIPSE50I下或者在ZEISSAXIOVERT100反相同焦点显微镜下观察标记的载玻片。01473、荧光探针0148在脱水治疗之后，使用在HBSS缓冲液中的1MM萤光。
31、黄碳酰肼锂盐荧光探针INVITROGEN，在37下在保温箱中培养皮肤移植物另外1小时。然后在HBSS浴中冲洗皮肤1分钟，接着取样直径为4毫米的活组织，将其封装在TISSUE树脂SAKURAFINETEK中MATSUKI等人，1998。然后切开皮肤，细胞核用DAPI染色，如上所述在荧光显微镜下在450纳米波长下观察载玻片。0149结果0150I、由诱导干燥导致的屏障作用破裂模型01511、通过荧光探针测量皮肤渗透性0152第一分析为研究皮肤屏障作用中的基本功能参数表皮上层的渗透性。在干燥实验之后使用荧光探针萤光黄的皮肤培养使得有可能表征皮肤渗透性的转变。在对照条件下，标记非常弱和浅；探针较少穿透。
32、角质层，并在冲洗过程中被消除。在干燥2小时之后，标记可在角质层的较深层中观察到。干燥使得皮肤更具有渗透性，其屏障作用被破坏。在干燥两小时后采用组合物A的局部治疗恢复了SC相对于探针的不可渗透性；标记再次变得弱和浅，如同在对照条件下。由此可以得出结论水合治疗对于干燥皮肤以及对于皮肤屏障作用具有修复效果，这可在组织模型上观察到。01532、对转录组和蛋白质组的调节的影响0154在干燥模型的不同应激或治疗条件下，通过定量PCR测量在表皮屏障作用的体内平衡中潜在涉及的不同基因的表达。免疫组织化学的分析显示了某些蛋白质表达的重组就定位而言，例如牢固结合。角膜桥粒蛋白的降解通过西式印迹法分析。0155将使。
33、用这些不同方法研究的目标根据其生理学作用进行归类参见表1。该研究的目的是观察可见的应激反应以及由于组合物A的局部施用带来的应激效果的修正。0156进行的工作还表明某些目标的不同调节水平。因此需注意的是对表皮脱落酶不是在转录水平上进行调节，而是更特别地在它们的活性水平上进行调节参见结果3。0157表1在干燥模型中研究的目标和药理反应的汇总0158Y是，目标在模型中反应；0159N否，目标在模型中不反应。0160工具应激反应组合物A的应激反应抑制皮肤渗透性YY桥粒芯糖蛋白1YYCDSNNN桥粒糖蛋白YY说明书CN104189005A109/10页11盘状球蛋白YNKLK5YNKLK7NNKLK8N。
34、N丝氨酸蛋白酶YY组织蛋白酶DNNABCA12YYABCG1NNBGCNNDES2NN中间丝相关蛋白YY外皮蛋白NNTG1NNTG3NN半胱天冬酶14NNELOX3YN12RLOXNNHAS2YNCD44NNAQP3YYNHE1YYIL1YY咬合蛋白YY闭合蛋白1YY说明书CN104189005A1110/10页12闭合蛋白4YYZO1NNE钙粘蛋白NN连环蛋白NN016101623、与脱屑相关的酶活性的测量0163丝氨酸蛋白酶的活性通过原位酶谱法在脱水模型上评价，并在对照条件在干燥两小时之后，以及在干燥两小时，然后用组合物A培养两小时之后下在共焦显微镜下进行观察。在对照条件下标记最强，其对应。
35、于正常的强活性。在干燥2小时之后该标记减少并沿着角质层变得不规则，而在用组合物A培养2小时之后其强度增加且活性定位重组。干燥的效果是降低并破坏了酶活性。这些结果与通过干燥观察到的角膜桥粒蛋白降解的减少一致，并证实了干燥对于降低在开发的模型上观察到的脱屑的效果。组合物A能够恢复脱水皮肤的酶活性，这证实了该组合物对于重返脱屑的内环境平衡的效果。0164这些结果显示，组合物A恢复了分子目标的表达水平，分子目标的表达通过诱导性皮肤脱水的应激而得以提高。组合物A还恢复了丝氨酸蛋白酶的活性。此外，组合物A的局部施用抑制了应激诱发性炎症。0165所有这些结果表明组合物A的局部施用恢复了皮肤屏障作用，限制0166实施例3通过NMR表征SYNTADEXA凡士林0167将5克样品溶解在氘代氯仿中用于通过500MHZ碳13NMR进行测量。0168SYNTADEXA凡士林SYNTHAL显示出特征的500MHZ碳1313CNMR波谱谱图，其明显包括在2455PPM处的峰，所述峰的面积相对于1四甲基硅烷TMS对照样为4至8。0169在组合物A中发现该相同的峰。说明书CN104189005A121/1页13图1说明书附图CN104189005A13。