一种透明质酸凝胶及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种透明质酸凝胶及其制备方法，更具体地说是涉及一种质酸凝胶及在透明质酸中加入交联剂制备该透明质酸凝胶的方法。
背景技术
透明质酸β-D-N-乙酰氨基葡萄糖和β-D-葡萄糖醛酸相互结合的直链状高分子多糖，广泛分布于哺乳动物的结缔组织、鸡冠和链球菌的夹膜等地方，由于不具有种属及脏器特异性，由透明质酸制得的透明质酸凝胶作为填充物移植或注入机体都显示良好的机体相容性，起到抗皱、丰乳、充垫等作用，且对人体无副作用，广泛应用医疗、美容行业。
现有透明质酸原料有两个来源，一是动物组织，如鸡冠、牛眼等，通常用提取法制得；另一个来源是利用细菌发酵法制备，但不论哪一种方法，制得的透明质酸原料都含有较多的蛋白质等杂质，如不进行处理，会导致凝胶产品外观发白，不透明，并且易生有害细菌，以致存放期短。
美国专利USP5827937虽然公开了用1，4-丁二醇缩水甘油醚作交联剂制备透明质酸凝胶的方法，但却是在40℃时活化4小时，然后稀释至0.5-1％，再经减压蒸馏才能得到凝胶，国际专利WO8600079是在透明质酸中添加1，4-丁二醇缩水甘油醚于50℃时进行交联，得到质酸凝胶，它们均存在反应温度较高以致透明质酸原料断链、降解，对产品产生不良影响，同时由于交联剂与原料的比例选择不当造成凝胶产品的吸水倍率太高或太低，以致产品注入人体后衬垫效果差的问题。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种保存期长、衬垫效果好的透明质酸凝胶及其制备方法，通过对透明质酸原料增加前处理，在室温下对透明质酸交联制备透明质酸凝胶。
本发明的目的是这样实现的：
一种透明质酸凝胶，它由以下方法制备，并且其吸水率为650倍至350倍：
(1)脱蛋白质前处理：
将透明质酸溶于水形成质量浓度为0.1-2％的溶液，然后加入透明质酸重量0.01-1％地脱蛋白质产品，搅拌均匀后，静置，至产生沉淀，过滤，所得过滤溶液用2～10倍体积的95％的乙醇、甲醇或无水乙醇冲洗、过滤，所得滤物进行真空干燥；
(2)交联反应：
将(1)中得到的已脱蛋白质的透明质酸溶于其重量8-12倍的浓度为1％～2％的NaOH、HCl或醋酸溶液，加入透明质酸重量1～10％的缩水甘油醚，在15～35℃的条件下恒温反应2～24小时后静置至少8小时；所得反应物放入无离子水中浸泡4～24小时，用HCl或NaOH调至pH为6-8。
所述步骤(2)中加入的缩水甘油醚的重量为透明质酸重量的5-7.5％。
所述步骤(2)中的缩水甘油醚为乙二醇缩水甘油醚、1，4-丁二醇的缩水甘油醚。
在(1)的脱蛋白质前处理步骤中，所加入的脱蛋白质产品为天津大学博大公司的BD系列脱蛋白质产品。
一种透明质酸凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)脱蛋白质前处理：
将透明质酸溶于水形成质量浓度为0.1-2％的溶液，然后加入透明质酸重量0.01-1％的脱蛋白质产品，搅拌均匀后，静置，至产生沉淀，过滤，所得过滤溶液用2～10倍体积的95％的乙醇、甲醇或无水乙醇冲洗、过滤，所得滤物进行真空干燥；
(2)交联反应：
将(1)中得到的已脱蛋白质的透明质酸溶于其重量8-12倍的浓度为1％～2％的NaOH、HCl或醋酸溶液，加入透明质酸重量1～10％的缩水甘油醚，在15～35℃的条件下恒温反应2～24小时后静置至少8小时；所得反应物放入无离子水中浸泡4～24小时，用HCl或NaOH调至pH为6-8。
加入的缩水甘油醚的重量为透明质酸重量的5-7.5％。
所述的缩水甘油醚为乙二醇缩水甘油醚、1，4-丁二醇的缩水甘油醚。
在(1)脱蛋白质前处理步骤中，所加入的脱蛋白质产品为天津大学博大公司的BD系列脱蛋白质产品。
本发明具有良好的技术效果：
1.透明质酸脱蛋白质后，经交联可得到无色透明凝胶，同时也防止了某些有害细菌的生长，可长期存放，而未使用脱蛋白质工艺的产品，放置5天后，凝胶发白，混浊，由此可见本发明极大地改善了产品质量。
2.本发明恰当地选用原料与交联剂的使用重量比例，可得到恰当吸水倍率的凝胶，其中吸水倍率是由吸水率公式Q=m2-m1m1]]>得到。Q为吸水倍率，m1为透明质酸的重量(克)，m2为吸水后透明质酸凝胶的重量(克)，试验表明，交联剂的加入量越大，制得的质酸凝胶吸水倍率越低，试验表明当使用的缩水甘油醚重量为透明质酸重量的1-10％时，得到的透明质酸凝胶的吸水率为650倍-350倍，当使用的缩水甘油醚重量为透明质酸重量的5-7.5％时，所得到的透明质酸凝胶的吸水倍率为420-380倍，此范围的凝胶为人体使用的最佳质酸凝胶。
3.本发明使透明质酸和交联剂在15-35℃的温和条件下反应，对透明质酸的保护起到了极有益的作用，有效防止了透明质酸原料的断链、降解，使产品质量得到提高。
【具体实施方式】
脱蛋白质前处理：
实施例1
透明质酸10g溶于1000ml水中，形成1％溶液，加入天津大学博大公司BD-2脱蛋白质产品5mg，充分搅拌后，静置，直出现沉淀后过滤。滤液加入3000ml 95％食用乙醇，强烈搅拌至出现白色沉淀，过滤，滤饼进行真空干燥。得9.8g蛋白质含量小于0.1％的透明质酸。
交联反应：
实施例1
用脱蛋白质前处理实施例1制得的脱蛋白质透明质酸2g溶于1％的NaOH 24ml，加入40mg乙二醇缩水甘油醚，在15℃条件下反应2小时后，静置过夜，然后用无离子水浸泡，用HCl调至中性，充分浸泡后，吸水凝胶重量1000g，故由吸水率公式Q=m2-m1m1]]>可知所得凝胶产品为吸水率500倍的透明质酸凝胶。[Q为吸水倍率，m1为透明质酸的重量(克)，m2为吸水后透明质酸凝胶的重量，该透明质酸水凝胶(见表1)。]
实施例2
用脱蛋白质前处理实施例1制得的脱蛋白质透明质酸2g溶于1.5％NaOH溶液20ml中，加入100mg 1，4-丁二醇缩水甘油醚，搅拌均匀后于20℃放置24小时，反应物置于无离子水中，加HCl调节pH值至中性，充分浸泡后吸水凝胶为840g，由吸水率公式可知所得凝胶产品为吸水倍率420倍的透明质酸凝胶(见表1)。
实施例3
用脱蛋白质前处理实施例1制得的脱蛋白质透明质酸2g溶于1％HCl溶液20ml中，加入200mg1，4-丁二醇缩水甘油醚，在35℃条件下反应，4小时后静置过夜，然后将反应物置入无离子水中，用NaOH调节中性，充分浸泡后，吸水凝胶重量为700g，由吸水率公式可知所得凝胶产品为吸水倍率350倍透明质酸凝胶(见表1)。
表1透明质酸重量(g)交联剂重量(g)交联剂与透明质酸重量之比透明质酸凝胶吸水后的重量(g)吸水倍率20.042％100050020.15％84042020.210％700350