《褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用.pdf（12页完整版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN104208059A43申请公布日20141217CN104208059A21申请号201410452770X22申请日20140905A61K31/4045200601A61P9/1420060171申请人中国医学科学院北京协和医院地址100730北京市东城区帅府园一号72发明人刘昌伟杨根欢倪冷叶炜刘暴74专利代理机构北京明和龙知识产权代理有限公司11281代理人吴凤英54发明名称褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用57摘要本发明涉及一种褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用，大量的实验表明，褪黑素能够明显减轻吸烟引起的血管炎症反应，对吸烟状态下的血管起保护作。
2、用，因此褪黑素既能够对吸烟引起的血管炎症损伤起治疗作用，也具有预防吸烟引起的血管炎症损伤的保护作用。褪黑素是已应用于临床的药物，给药途径方便、安全，为保护吸烟引起的血管损伤增加了新的药物。51INTCL权利要求书1页说明书5页附图5页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图5页10申请公布号CN104208059ACN104208059A1/1页21褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用，所述褪黑素化学名称为N乙酰基5甲氧基色胺，结构式如式所示式。权利要求书CN104208059A1/5页3褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用技术领域0001本。
3、发明涉及一种褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用，具体地说褪黑素既能够对吸烟引起的血管炎症损伤起治疗作用，也具有预防吸烟引起的血管炎症损伤的保护作用，属医药领域。背景技术0002大量研究证实，吸烟是许多心、脑血管疾病及周围血管疾病的主要危险因素。吸烟者的冠心病、高血压病、脑血管病及周围血管病的发病率均明显升高。统计资料表明，冠心病和高血压病患者中75有吸烟史。吸烟者的冠心病发病率较不吸烟者高35倍，冠心病的病死率前者较后者高6倍，心肌梗死的发病率前者较后者高26倍。病理解剖也发现，吸烟者的冠状动脉粥样硬化性病变较不吸烟者广泛而严重。心血管疾病死亡人数中的3040由吸烟引起，死亡率的增长。
4、与吸烟量成正比。0003众所周知吸烟可引起动脉粥样硬化，可损伤血管内皮细胞，并引起血清高密度脂蛋白降低，低密度脂蛋白升高、总胆固醇升高，前列腺素I2水平降低，血栓素A2增加，碳氧血红蛋白增加，代偿性红细胞增多、血流减慢、微循环障碍、血浆纤维蛋白原水平增加，血小板聚集性增加、血液粘滞度增高、血液凝固性增加和生命器官缺氧等许多有害作用。上述这些吸烟引起的多种有害作用的综合远期结果就是引起动脉粥样硬化。0004吸烟主要引起血管的炎症损伤和氧化损伤，进而会导致动脉粥样硬化的发生。目前广泛应用的治疗动脉粥样硬化的药物主要是调节血脂的他汀类药物。从治疗动脉粥样硬化的角度讲他汀类药物对吸烟引起的血管损伤可能。
5、具有一定的预防作用。但他汀类药物只能应用于已经出现动脉粥样硬化或伴有高脂血症的吸烟者且具有一定的副作用如肝功能的损害及诱发横纹肌溶解等，并不能应用于单纯的吸烟者，如不伴有任何疾病的年轻的吸烟者。而且在他汀类药物的说明书上并没有注明可以应用于减轻吸烟引起的血管损伤。严格地讲，目前尚没有一种药物明确说明可以用来保护吸烟引起的血管损伤。0005当然戒烟是最直接最根本的方法，但目前绝大部分人仍无法戒烟。有统计表明全世界20的人在吸烟，而中国成人中60的人在吸烟。我们研究此药物的目的就是想使这些无法戒烟的人群受益。0006褪黑素，英文名为MELATONIN。化学名为N乙酰基5甲氧基色胺，英文名称是NAC。
6、ETYL5METHOXYTRYPTAMINE。褪黑素又称美拉酮宁、抑黑素、松果体素，主要是由哺乳动物和人类的松果体产生的一种胺类激素。分子式为C13H16N2O2，分子量为23228。大量的体内外实验已经证实褪黑素具有重要的抗炎和抗氧化损伤的作用，它是一种重要的细胞保护剂。国内外有关褪黑素的保健功能涉及调节内分泌及免疫功能，调节肠道功能、对脑炎病毒感染有保护作用，并降低其感染后的死亡率。美国FDA认为褪黑素可作为普通的膳食补充剂。到目前为止，我国卫生部先后批准了20种含有褪黑素的产品作为“改善睡眠”保健药品。褪黑素的调节免疫功能、抗肿瘤、抗衰老等方面的保健功能正显示其具有强大的药理作用，它作为。
7、一种新型的保健药品有着巨大的潜力，有待于进一步的开发。但褪黑素可对吸说明书CN104208059A2/5页4烟引起血管损伤进行保护尚未见报导。发明内容0007本发明的目的是根据褪黑素具有很强的抗炎和抗氧化损伤的作用，而提供褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用，从而为保护吸烟引起的血管损伤增加新的药物。0008本发明的目的是通过下列技术方案实现的0009褪黑素在制备保护吸烟引起血管损伤药物中的应用，所述褪黑素化学名称为N乙酰基5甲氧基色胺，结构式如式所示00100011式。0012本发明的药物可以制成片剂、注射液、粉剂、粒剂、胶囊、口服液、膏剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学。
8、领域的常规方法制备。0013本发明药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体等，必要时还可以加入香味剂、甜味剂。0014由于采取上述技术方案使本发明技术与己有技术相比具有如下优点及效果0015A、褪黑素能够明显减轻吸烟引起的血管炎症反应，对吸烟状态下的血管起保护作用，因此褪黑素既能够对吸烟引起的血管炎症损伤起治疗作用，也具有预防吸烟引起的血管炎症损伤的保护作用；0016B、褪黑素是已经应用于临床的药物，是一种口服保健药品，给药途径方便、安全；0017C褪黑素能够抑制吸烟引起的血管内膜的增厚，表明褪。
9、黑素对吸烟状态下的血管具有保护作用。附图说明0018图1为褪黑素抑制吸烟大鼠颈动脉中NFB的表达；0019图2为各组大鼠颈动脉中NFB的表达情况；0020图3为褪黑素抑制吸烟大鼠颈动脉中MCP1、ICAM1、VCAM1的表达；0021图4为各组大鼠颈动脉中MCP1、ICAM1、VCAM1的表达情况；0022图5为褪黑素抑制吸烟大鼠颈动脉中IL1、IL6、TNF的表达；0023图6为各组大鼠颈动脉中IL1、IL6、TNF的表达情况；0024图7为褪黑素诱导吸烟大鼠颈动脉中ENOS的表达；0025图8为各组大鼠颈动脉中ENOS的表达情况；说明书CN104208059A3/5页50026图9为褪黑素。
10、抑制吸烟引起的血管内膜的增厚；0027图10为各组大鼠颈动脉的内膜面积与中膜面积的比值情况。具体实施方式0028实施例100291实验目的0030吸烟主要引起血管的炎症损伤和氧化损伤。本实验主要从炎症损伤的角度说明吸烟对血管造成的损害，说明褪黑素对吸烟引起的血管的炎症损伤的治疗作用。本实验用一系列的炎症因子来标记血管的炎症损伤。炎症因子包括NFB,MCP1,ICAM1,VCAM1,IL1,IL6、TNF。以上炎症因子的中文名称依次为核转录因子B、单核细胞趋化蛋白1、细胞间粘附分子1、血管细胞粘附分子1、白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子。00312实验方法0032选用15只SPF级雄性S。
11、D大鼠，体量35020G，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，北京协和医院实验动物中心饲养。将实验大鼠随机分为3组，每组5只。分组如下A组对照组CONTROL、B组吸烟组SMOKING、C组吸烟并注射褪黑素组SMOKINGANDINJECTEDWITHMELATONIN。B组和C组大鼠置于吸烟装置中吸烟，每天吸烟1次，每次吸烟10支。香烟焦油量13MG/支，烟碱量12MG/支，CO量14MG/支。每次同时点燃2支香烟，燃烧完后休息5MIN再继续吸烟。A组大鼠每天与B、C组大鼠同步置于单独的吸烟装置中，但不点燃香烟即暴露于空气中。C组大鼠，每天腹腔注射褪黑素1次，剂量为5MG/KG。A组及B。
12、组大鼠每天注射同等体积的生理盐水。吸烟21天后取各组大鼠颈动脉标本置于液氮中保存。00333检测方法0034应用WESTERNBLOT方法检测各组颈动脉标本中上述炎症因子和ENOS的表达。ENOS的中文名称为内皮细胞一氧化氮合酶，是一种血管保护因子。具体实施方法为将各颈动脉组织标本从液氮中取出后置于研钵中，加入200L组织裂解液后研磨成组织匀浆。将组织匀浆100煮沸10分钟后12000RPM常温离心10MIN,取其上清。BCA法测蛋白浓度并计算上样量。10SDSPAGE电泳分离蛋白，每孔20G样品蛋白140V电泳60MIN。然后将蛋白转移到NC膜上，330MA转膜60MIN。5的牛血清白蛋白封。
13、闭NC膜。于4下用上述因子的抗体孵育NC膜过夜。TBST冲洗3次，室温下辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1H，TBST再次冲洗3次后显影。用ALPHAEASEFC软件测量条带的灰度值，将各组的灰度值行统计学分析。00354实验结果003641各组颈动脉中炎症因子的表达情况，见表10037表1各组颈动脉中炎症因子的表达情况0038说明书CN104208059A4/5页60039实验结果显示，B组吸烟组大鼠颈动脉中上述炎症因子的表达显著高于A组对照组大鼠的颈动脉。C组吸烟并注射褪黑素组大鼠颈动脉中炎症因子的表达显著低于B组吸烟组大鼠的颈动脉。结果显示吸烟能够引起血管壁中以上炎症因子表达的增加，表明吸烟。
14、引起了血管的炎症损伤。而应用褪黑素后，血管壁中以上炎症因子的表达又明显降低，这说明褪黑素能够减轻吸烟引起的血管壁的炎症损伤，能够对吸烟状态下的血管起治疗作用。如图1至图6所示，B组与A组或C组相比，P001、P005。004042各组颈动脉中ENOS的表达情况，见表20041表2各组颈动脉中ENOS的表达情况00420043实验结果显示，B组吸烟组大鼠颈动脉中ENOS的表达显著低于A组对照组大鼠的颈动脉。C组吸烟并注射褪黑素组大鼠颈动脉中ENOS的表达显著高于B组吸烟组大鼠的颈动脉。说明吸烟能够导致血管壁中具有保护作用的ENOS的减少，表明吸烟能够导致血管的“自我保护作用”的降低，能够对血管造。
15、成损伤。而应用褪黑素后，血管壁中的ENOS又升高了，这表明褪黑素对吸烟状态下的血管具有保护作用。如图7、图8所示，B组与A组或C组相比，P001。0044实施例200451实验目的0046血管壁受到损伤包括机械性损伤、炎症损伤及氧化损伤后会出现血管形态学的变化，也就是内膜的增厚及管腔的狭窄。吸烟对血管造成的损伤主要是非机械性损伤即炎症损伤和氧化损伤，这种损伤引起血管内膜的增厚及管腔的狭窄所需时间比较长，不太容易观察到。将大鼠颈动脉行球囊损伤，然后在此基础上再给大鼠进行吸烟，这样就使得吸烟引起的血管形态学变化能够在短时间内显现出来。进而在此动物模型上观察褪黑素对吸烟引起的血管损伤的保护作用。00。
16、472实验方法0048选用15只SPF级雄性SD大鼠，体量35020G，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，北京协和医院实验动物中心饲养。将大鼠随机分为3组，每组5只。分组如下组对照组单纯球囊损伤组CONTROL、组球囊损伤吸烟组SMOKING、组说明书CN104208059A5/5页7球囊损伤吸烟注射褪黑素组SMOKINGANDINJECTEDWITHMELATONIN。组和组大鼠置于吸烟装置中吸烟，每天吸烟1次，每次吸烟10支。香烟焦油量13MG/支，烟碱量12MG/支，CO量14MG/支。每次同时点燃2支香烟，燃烧完后休息5MIN再继续吸烟。组大鼠每天与、组大鼠同步置于单独的吸烟装置。
17、中，但不点燃香烟即暴露于空气中。组大鼠，每天腹腔注射褪黑素1次，剂量为5MG/KG。组及组大鼠每天注射同等体积的生理盐水。吸烟7天后，将各组大鼠实施颈动脉球囊损伤。即通过大鼠左侧的颈外动脉将2F的FORGARTY取栓导管置于颈总动脉中，将球囊中注入005ML生理盐水后，将球囊在颈总动脉中来回拖动3次以损伤血管内皮。之后将各组大鼠继续给予烟雾及空气暴露，方案同前。14天后将各组大鼠麻醉，将球囊损伤段的颈总动脉取出，置于4多聚甲醛中固定保存。00493检测方法0050用石蜡将各组颈动脉标本进行包埋。然后将石蜡块行5UM超薄切片。之后将各切片行VERHOEFFVANGIESON弹力蛋白染色。将切片置。
18、于显微镜下观察并拍照。将血管壁内外弹力膜之间的区域定义为血管的中膜，内弹力膜以内的区域定义为血管内膜。用IMAGEPRO60软件测量血管内膜和血管中膜的面积。用内膜面积/中膜面积I/M代表血管的狭窄程度。将各组颈动脉的I/M值行统计学分析并进行比较。00514实验结果见表30052表3各组颈动脉的内膜面积与中膜面积的比值I/M情况00530054实验结果显示，正常颈动脉的血管内膜很薄，如图9的NORMALCAROTIDARTERY所示，I/M几乎为零，其中I代表血管内膜，M代表血管中膜。组单纯球囊损伤组颈动脉的血管内膜较正常的颈动脉明显增厚，表明球囊的机械性损伤对血管壁造成了损伤，引起了血管管。
19、腔的狭窄。组球囊损伤吸烟组的血管内膜较组明显增厚，I/M值较组明显增大。这表明组血管受到的损伤较组明显增大，也就是说吸烟对血管造成了非机械性的损伤。组球囊损伤吸烟注射褪黑素组的血管内膜较组明显变薄，I/M值较组明显减少。这说明组血管受到的损伤较组明显减少，也就是说褪黑素减轻了吸烟造成的血管损伤。结果表明褪黑素对吸烟状态下的血管具有保护作用。如图9、图10所示，组与组或组相比，P001。说明书CN104208059A1/5页8图1图2说明书附图CN104208059A2/5页9图3图4说明书附图CN104208059A3/5页10图5图6说明书附图CN104208059A104/5页11图7图8说明书附图CN104208059A115/5页12图9图10说明书附图CN104208059A12。