酪氨酸激酶不可逆抑制剂及其制备方法和用途.pdf

本发明提供式I所示的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐及其制备方法和用途，属于药物化学领域。所述酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐具有非常高的抑制肿瘤细胞生长活性，尤其是对EGFR和HER2高表达的肿瘤细胞的生长具有显著的抑制效果。

权利要求书式I所示的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐： 

其中，Y选自：迈克儿受体类化合物，活泼烷基化类化合物； 
Ar选自：苯基，取代的苯基，含有并环类的芳基，杂芳基； 
R选自：H，C1‑C6烷基或不饱和烷基； 
W选自：C1‑C6烷基或取代烷基或不饱和烷基； 
A，B，C各自任选为：CH，N，S或无。 
根据权利要求1所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述包含A、B、C的基团选自如下之一： 

其中，R6选自：H，C1‑C6烷基或不饱和烷基，C6‑C10取代芳烷基，F，Cl，Br，I，CF3，CHF2，CH2F，OR7，NR7R8，CN，CO2R7，CONR7R8，SO2R7，SO2NR7R8，NO2，NCONR7R8，NCO2R7，OCONR7R8，CSNR7R8，NCSNR7R8； 
R7、R8各自任选为：氢、C1‑6的饱和以及不饱和烷基和杂原子取代的烷基。 
根据权利要求1所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其特征在于，Y选自如下基团： 

其中，R3，R4，R5各自任选为：H，F，CN，Cl，C1‑C6烷基或不饱和烷基，含有O、N、S、P杂原子的C1‑C6烷基，环状烷基，不饱和链状或环状烷基，R3，R4，R5中任意两个取代基成环。 
根据权利要求3所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其特征在于，Y选自如下基团： 

R9，R10各自任选为：氢，C1‑6的饱和以及不饱和烷基，含有O、N、S、P杂原子取代的烷基；R9和R10成环； 
n＝1‑6。 
根据权利要求1所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其特征在于，Ar选自如下基团： 

其中，R6的定义如权利要求2。 
根据权利要求1所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其特征在于，选自如下化合物： 

其中，Y选自如下基团： 

R3，R4，R5各自任选为：H，F，CN，Cl，C1‑C6烷基或不饱和烷基，含有O、N、S、P杂原子的C1‑C6烷基或环状烷基或不饱和链状或环状烷基，R3，R4，R5中任意两个取代基成环； 
Ar选自如下基团： 

其中，R6的定义如权利要求2。 
根据权利要求6所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其特征在于，Ar选自如下基团： 
。
根据权利要求1所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其特征在于，选自如下化合物之一： 
N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丁‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺； 
N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙炔酰胺； 
N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丁‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯 酰胺； 
N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙炔酰胺； 
N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丁‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺； 
N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙炔酰胺； 
N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丁‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺； 
(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺； 
N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙炔酰胺。 
权利要求6所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于采用以下路线合成： 

。
权利要求1‑8任一项所述的酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。

说明书酪氨酸激酶不可逆抑制剂及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体来说，特别是涉及一酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐及其制备方法和用途。
背景技术
正常情况下，细胞从静止状态到增殖状态需要获得生长信号。这些生长信号通过特定的信号分子与细胞膜上的受体结合转入细胞。EGF是其中最重要的生长信号分子之一。EGF受体是广泛分布于人体各组织细胞上的多功能跨膜糖蛋白，属于ErbB家族成员之一，这个家族共有四个成员，分别为EGFR(HER1/erbB‑1)，HER2(erbB‑2/neu)，HER3(erbB‑3)，HER4(erbB‑4)。它们均为单一多肽链，相对分子质量约1.7×1O5～1.85×1O5，分别由位于不同染色体上的基因所编码。在多种人类肿瘤细胞中经常出现EGFR和HER2两种受体过表达现象，这种过表达现象与肿瘤的发生、发展过程有着密切关系。
肿瘤临床研究中发现，已知70％的恶性肿瘤都会出现一种或几种ErbB受体的过表达现象。在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞中发现EGFR的表达量超过正常细胞水平的100倍；在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、鼻咽癌等多种肿瘤细胞中发现HER2的扩增或过表达现象。这种过表达的现象通常预示肿瘤患者预后不良，表现为生存期短、肿瘤易复发、易发生远端转移等，并对化疗或激素治疗不敏感。
由于ErbB酪氨酸激酶介导的细胞生长信号在肿瘤的发生、发展中起着非常重要的作用，阻断ErbB细胞信号网络可以达到抑制肿瘤的目的。用小分子ErbB受体酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors，TKIs)，与ATP竞争性结合于ErbB受体酪氨酸激酶的ATP结合区，抑制激酶的催化活性，从而阻断细胞增殖信号的传导是阻断ErbB受体信号通路、抑制肿瘤生长最有效的途径之一。目前开发上市的酪氨酸激酶小分子抑制剂包括吉非替尼(易瑞沙)，盐酸厄洛替尼(特罗凯)，盐酸埃克替尼(凯美纳)拉帕替尼等，其中吉非替尼，盐酸厄洛替尼，盐酸埃克替尼为EGFR可逆抑制剂，拉帕替尼为EGFR/HER2双重可逆抑制剂。
但是国外的临床研究结果发现，仅10％左右肿瘤病人对上述药物有客观反应，其余均无反应或有抗性。在治疗开始时有反应的10％左右肿瘤病人中，大多数也最终对其产生抗性，在延长病人寿命上并无明显改善。究其原因，在于药物抗性的迅速产生。EGFR T790M突变是导致药物抗性的重要原因，突变导致的氨基酸残基骨架的改变使得可逆的EGFR抑制剂如吉非替尼、盐酸厄洛替尼脱离ErbB受体酪氨酸激酶的ATP结合区，从而丧失活性。
为了克服药物抗性以及早期可逆抑制剂给药量大的缺点，学者们开始聚焦于不可逆抑制剂的研究。利用EGFR和HER2激酶ATP结合区边缘的Cys773和Cys805氨基酸残基上巯基具有较强的亲核性的特点，在药物分子中引入一个Michael加成受体，使药物分子能够与激酶形成共价键结合，达到不可逆抑制的目的。
大量的研究表明，发展靶向性EGFR和HER2酪氨酸激酶的双重抑制剂具有以下优势：1.同时抑制EGFR和HER2两种酪氨酸激酶，更易于克服在使用单一酪氨酸激酶抑制剂时EGFR家族其他成员上调引起的细胞生长信号冗余从而产生的抗药性；2.由于EGFR和HER2异源二聚体活性最高，EGFR和HER2酪氨酸激酶的双重抑制剂对更多数的癌症患者有效。3.与单一抑制剂相比，双重抑制剂对肿瘤细胞抑制效果具有叠加效应。体外和体内试验也表明，对EGFR和HER2酪氨酸激酶双重抑制的抗癌效果大于对单一受体的抑制。另外与同时使用两个分别作用于单一靶点的药物相比，作用于两个靶点的药物患者使用起来比较方便，还可以避免药物与药物的相互作用。
综上所述，开发靶向EGFR和HER2酪氨酸激酶的双重不可逆抑制剂是理性的选择。
目前，进入临床研究的不可逆双重酪氨酸激酶抑制剂有BIBW2992，HKI‑272和PF299804，临床实验数据表明这类抑制剂具有很好的开发前景。
最近公开的与EGFR和/或HER2酪氨酸激酶抑制剂相关的有以下专利：CN101824029公布的酪氨酸激酶不可逆抑制剂、其药物组合物及其用途；WO2009012647公布的喹唑啉类衍生物的制备方法及其在医药上的应用；CN102153544公布了一类新型酪氨酸激酶抑制剂的制备及用途；CN1187129公布的具有选择性抑制HER‑2自磷酸化性质的蛋白质酪氨酸激酶芳基和杂芳基喹唑啉化合物；CN1651418公布的人表皮生长因子受体2酪氨酸激酶抑制剂；CN101003513公布的喹唑啉类化合物或其可药用盐和其制备方法与药物用途；CN101347433公布的4‑苯胺喹唑啉衍生物的制药用途；CN101311166酪氨酸激酶抑制剂、其制法及用途；CN101367793公布的一种具有抗肿瘤活性的氨基喹唑啉衍生物及其盐类。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐，其分子结构通式I如下：

其中，Y选自：迈克儿受体类化合物，活泼烷基化类化合物；
Ar选自：苯基，取代的苯基，含有并环类的芳基，杂芳基；
R选自：H，C1‑C6烷基或不饱和烷基；
W选自：C1‑C6烷基或取代烷基或不饱和烷基；
A，B，C各自任选为：CH，N，S或无。
在一些实施例中，所述包含A、B、C的基团选自如下之一：

其中，R6选自：H，C1‑C6烷基或不饱和烷基，C6‑C10取代芳烷基，F，Cl，Br，I，CF3，CHF2，CH2F，OR7，NR7R8，CN，CO2R7，CONR7R8，SO2R7，SO2NR7R8，NO2，NCONR7R8，NCO2R7，OCONR7R8，CSNR7R8，NCSNR7R8；
R7、R8各自任选为：氢、C1‑6的饱和以及不饱和烷基和杂原子取代的烷基。
在一些实施例中，Y选自如下基团：

其中，R3，R4，R5各自任选为：H，F，CN，Cl，C1‑C6烷基或不饱和烷基，含有O、N、S、P杂原子的C1‑C6烷基，环状烷基，不饱和链状或环状烷基，R3，R4，R5中任意两个取代基成环。
在一些实施例中，

R9，R10各自任选为：氢，C1‑6的饱和以及不饱和烷基，含有O、N、S、P杂原子取代的烷基；R9和R10成环；
n＝1‑6。
W优选为CH2，CH2CH2，CH2CH2CH2；
R优选为H，CH3，CH2CH3；
在一些实施例中，Ar优选自如下基团：

其中，R6的定义如上。
在一些实施例中，该酪氨酸激酶不可逆抑制剂优选自如下化合物：

其中，Y选自如下基团：

R3，R4，R5各自任选为：H，F，CN，Cl，C1‑C6烷基或不饱和烷基，含有O、N、S、P杂原子的C1‑C6烷基，环状烷基，不饱和链状或环状烷基，R3，R4，R5中任意两个取代基成环，成为含有杂原子的3‑8元环；
Ar选自如下基团：

其中，R6的定义如权利要求2；
R7、R8各自任选为：氢、C1‑6的饱和以及不饱和烷基和杂原子取代的烷基。
在一些实施例中，Ar特别优选自如下基团：

在一些实施例中，该酪氨酸激酶不可逆抑制剂优选自如下化合物之一：
化合物1，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙烯酰胺；
化合物2，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丁‑2‑烯酰胺；
化合物3，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺；
化合物4，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺；
化合物5，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙炔酰胺；
化合物6，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺；
化合物7，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丁‑2‑烯酰胺；
化合物8，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺；
化合物9，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺；
化合物10，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙炔酰胺；
化合物11，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙烯酰胺；
化合物12，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丁‑2‑烯酰胺；
化合物13，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺；
化合物14，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺；
化合物15，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙炔酰胺；
化合物16，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺；
化合物17，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丁‑2‑烯酰胺；
化合物18，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺；
化合物19，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺；
化合物20，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙炔酰胺。
本发明的第二个目的是提供上述酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐的制备方法，采用以下线路：

其中：

本发明的第三个目的在于提供上述酪氨酸激酶不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：本发明所提供的酪氨酸激酶不可逆抑制剂。利用EGFR和HER2激酶ATP结合区边缘的Cys773和Cys805氨基酸残基上巯基具有较强的亲核性的特点，在药物分子中引入一个Michael加成受体，使药物分子能够与激酶形成共价键结合，达到不可逆抑制的目的。从而具有以下优点：1.同时抑制EGFR和HER2两种酪氨酸激酶，更易于克服在使用单一酪氨酸激酶不可逆抑制剂时EGFR家族其他成员上调引起的细胞生长信号冗余从而产生的抗药性；2.由于EGFR和HER2异源二聚体活性最高，EGFR和HER2酪氨酸激酶的双重抑制剂对更多数的癌症患者有效。3.与单一抑制剂相比，双重抑制剂对肿瘤细胞抑制效果具有叠加效应。体外和体内试验也表明，对EGFR和HER2酪氨酸激酶双重抑制的抗癌效果大于对单一受体的抑制。另外与同时使用两个分别作用于单一靶点的药物相比，作用于两个靶点的药物患者使用起来比较方便，还可以避免药物与药物的相互作用。
具体实施方式
本发明化合物及其盐也可以通过已知用于制备化学相关化合物的方法制备，在实施例中涉及的原料均可通过现有技术的类似方法获得。
实施例1
化合物1，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙烯酰胺的制备。
线路一：

按照上述线路，步骤1)制备化合物I‑2，即2‑胺基‑5‑碘苯甲酸甲酯，方法如下：
在装有滴液漏斗的250mL的两口烧瓶中加入50.19g(332.42mmol)邻胺基苯甲酸甲酯，100mL叔丁醇和50mL水，搅拌下分批加入44.32g(174.52mmol)单质碘，然后缓慢滴加40mL 30％的双氧水，于油浴中加热至50℃保温2h。TLC监控反应。反应结束后，反应体系冷却至室温，加入50mL饱和亚硫酸氢钠水溶液，搅匀，然后用150mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸除去约100mL乙酸乙酯，置于冰箱中重结晶，得到浅黄色晶体55.23g，收率60％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.14(d，J＝2.4Hz，1H)，7.47(d，J＝8.8Hz，1H)，6.53(d，J＝8.8Hz，1H)，5.70(s，2H)，3.86(s，3H)。ESI‑MS m/z：276.4(M‑H)。
该化合物结构式为：

步骤2)制备化合物I‑3，即6‑碘喹唑啉‑4(3H)酮，方法如下：
在装有回流冷凝管的250mL的两口烧瓶中加入37.92g(136.91mmol)2‑胺基‑5‑碘苯甲酸甲酯(即I‑2)，50mL无水甲酰胺，氮气保护，于油浴中加热至180℃，搅拌4h。TLC监控反应。反应结束后，移去油浴，反应体系冷却至室温，加入100mL水，搅拌，抽滤，滤饼用100mL水洗涤两次，抽干，然后用50mL乙醚洗涤两次，真空干燥，得乳白色固体32.04g，收率86％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 12.40(s，1H)，8.38(d，J＝2.0Hz，1H)，8.13(s，1H)，8.10(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.46(d，J＝8.8Hz，1H).ESI‑MS m/z：273.0(M+H)+，270.9(M‑H)
该化合物结构式为：

步骤3)制备化合物I‑5a，方法如下：
在装有回流冷凝管的25mL的两口烧瓶中加入1.36g(5mmol)6‑碘喹唑啉‑4(3H)酮(即I‑3)，0.92g(6mmol)三氯氧磷，6mL甲苯，氮气保护，然后用注射器缓慢加入0.9mL三乙胺，加毕，与油浴中加热至75℃反应2h，稍冷，加入1.2g  1‑(3‑氟苄基)‑1H‑吲唑‑5‑氨的乙腈溶液，再次升温至冷却至75℃反应2h，反应结束，自然降至室温，抽滤，滤饼转入15mL 1M氢氧化钠溶液中搅拌2h，抽滤，滤饼真空干燥，得淡黄粉末1.2g，收率48％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，10.10(s，1H)，8.92(s，1H)，8.51(s，1H)，8.21(d，J＝23Hz，3H)，7.70‑7.50(s，3H)，7.36(dd，J＝14Hz，1H)，7.10(d，J＝8.4Hz，1H)，7.06‑6.83(m，3H)，5.70(s，2H).[M+H]+＝496.4。
该化合物结构式为：

步骤4)制备化合物I‑6a，方法如下：
在氮气保护下，向25mL的两口烧瓶中加入0.495g I‑5a，干燥的THF 3mL，二异丙基氨0.4mL，脱气5min，加入二(三苯基膦)二氯化钯40mg(5％mol)，碘化亚铜19mg(10％mol)，室温下缓慢注入0.193g丙炔胺基甲酸叔丁酯，加毕，室温下搅拌反应2h，TLC监控，反应结束，柱子层析分离，将产物转入10mL30％TFA的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应，TLC监控，反应结束，旋蒸至干，残余物用饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，抽滤，滤饼干燥，得I‑6a 0.25g收率60％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，10.10(s，1H)，8.92(s，1H)，8.51(s，1H)，8.21(d，J＝23Hz，3H)，7.70‑7.50(s，3H)，7.36(dd，J＝14Hz，1H)，7.10(d，J＝8.4Hz，1H)，7.06‑6.83(m，3H)，5.70(s，2H)，5.0(s，2H)，3.36(s，2H).[M+H]+＝423.5。
该化合物结构式为：

步骤5)制备化合物1，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙烯酰胺，方法如下：
氮气保护下，向5mL洁净干燥的反应瓶中加入I‑6a 42mg，丙烯酸8mg，HOBt 3mg，干燥的二氯甲烷3mL，以及催化量的三乙胺，冰水浴下搅拌5min，加入25mg EDCI，搅拌反应30分钟，自然升至室温，继续搅拌反应，TLC，监控，反应结束，用30mL二氯甲烷稀释，水洗，饱和食盐水洗，干燥，快速过柱，得目标产物30mg，收率62.5％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.22(s，1H)，8.82(s，1H)，8.75(s，1H)，8.21(d，J＝13.2Hz，3H)，7.85(s，1H)，7.70‑7.74(m，2H)，7.32‑7.34(m，1H)，7.03‑7.11(m，4H)，6.13‑6.30(m，2H)，5.72(s，2H)，5.66(d，J＝10.0Hz，1H)，4.30(d，J＝3.2Hz，2H).ESI‑MS m/z：477.1(M+H)，475.1(M‑H)。
该化合物的结构式为：

实施例2
化合物2，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丁‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例1，步骤5)如下：
选用2‑丁烯酸，与1‑6a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.01(s，1H)，8.50(s，1H)，8.25(s，1H)，8.16(s，1H)，7.84(s，1H)，7.72(s，1H)，7.54‑7.64(m，3H)，7.33‑7.39(m，1H)，7.04‑7.12(m，4H)，6.67‑6.72(m，1H)，5.95(d，J＝14.8Hz，1H)，5.70(s，2H)，4.27(d，J＝5.2Hz，2H)，1.81(d，J＝6.0Hz，3H).ESI‑MS m/z：491.2(M+H)，489.2(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例3
化合物3，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例1，步骤5)如下：
选用4‑吗啉2‑丁烯酸，与1‑6a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.01(s，1H)，8.50(s，1H)，8.25(s，1H)，8.16(s，1H)，7.84(s，1H)，7.72(s，1H)，7.54‑7.64(m，3H)，7.33‑7.39(m，1H)，7.04‑7.12(m，4H)，6.67‑6.72(m，1H)，6.05‑6.15(m，1H)，5.70(s，2H)，4.27(d，J＝4.0Hz，2H)，3.53(t，J＝4.8Hz，4H)，3.04(d，J＝6.4Hz，2H)，2.32(s，4H).ESI‑MS m/z：576.2(M+H)，574.2(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例4
化合物4，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例1，步骤5)如下：
选用4‑二甲基‑2‑丁烯酸，与1‑6a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.01(s，1H)，8.50(s，1H)，8.25(s，1H)，8.16(s，1H)，7.84(s，1H)，7.72(s，1H)，7.54‑7.64(m，3H)，7.33‑7.39(m，1H)，7.04‑7.12(m，4H)，6.67‑6.72(m，1H)，6.05‑6.15(m，1H)，5.70(s，2H)，4.27(d，J＝4.0Hz，2H)，3.67(dd，J＝11.6，6.0Hz，2H)，2.19(s，6H).ESI‑MS m/z：534.2(M+H)，532.2(M‑H)
该化合物结构式为：

实施例5
化合物5，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑喹唑啉‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙炔酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例1，步骤5)如下：
选用丙炔酸，与1‑6a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.22(s，1H)，8.82(s，1H)，8.75(s，1H)，8.21(d，J＝13.2Hz，3H)，7.85(s，1H)，7.70‑7.74(m，2H)，7.32‑7.34(m，1H)，7.03‑7.11(m，4H)，5.72(s，2H)，4.35(d，J＝5.6Hz，2H)，4.30(s，1H).ESI‑MS m/z：475.1(M+H)，473.1(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例6
化合物6，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺的制备。
按照实施例1中的线路一，步骤1)制备化合物I‑2，即2‑胺基‑5‑碘苯甲酸甲酯，方法如下：
在装有滴液漏斗的250mL的两口烧瓶中加入50.19g(332.42mmol)邻胺基苯甲酸甲酯，100mL叔丁醇和50mL水，搅拌下分批加入44.32g(174.52mmol)单质碘，然后缓慢滴加40mL 30％的双氧水，于油浴中加热至50℃保温2h。TLC监控反应。反应结束后，反应体系冷却至室温，加入50mL饱和亚硫酸氢钠水溶液，搅匀，然后用150mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸除去约100mL乙酸乙酯，置于冰箱中重结晶，得到浅黄色晶体55.23g，收率60％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.14(d，J＝2.4Hz，1H)，7.47(d，J＝8.8Hz，1H)，6.53(d，J＝8.8Hz，1H)，5.70(s，2H)，3.86(s，3H)。ESI‑MS m/z：276.4(M‑H)。
该化合物结构式为：

步骤2)制备化合物I‑3，即6‑碘喹唑啉‑4(3H)酮，方法如下：
在装有回流冷凝管的250mL的两口烧瓶中加入37.92g(136.91mmol)2‑胺基‑5‑碘苯甲酸甲酯(即I‑2)，50mL无水甲酰胺，氮气保护，于油浴中加热至180℃，搅拌4h。TLC监控反应。反应结束后，移去油浴，反应体系冷却至室温，加入100mL水，搅拌，抽滤，滤饼用100mL水洗涤两次，抽干，然后用50mL乙醚洗涤两次，真空干燥，得乳白色固体32.04g，收率86％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 12.40(s，1H)，8.38(d，J＝2.0Hz，1H)，8.13(s，1H)，8.10(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.46(d，J＝8.8Hz，1H).ESI‑MS m/z：273.0(M+H)+，270.9(M‑H)
该化合物结构式为：

步骤3)制备化合物I‑5b，方法如下：
以3‑氯‑4‑氟苯胺替换1‑(3‑氟苄基)‑1H‑吲唑‑5‑氨，详细步骤同实施例1中由I‑3制备化合物I‑5a，制得I‑5b，收率72％。
该化合物表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，9.98(s，1H)，8.72(s，1H)，8.65(s，1H)，8.22(dd，J＝2.8Hz，J＝6.8Hz，1H)，7.84‑7.9(d，J＝9.2Hz，J＝4Hz，2H)，7.74(d，1H)，7.47(s，1H).[M+H]+＝400.4。
该化合物结构式为：

步骤4)制备化合物I‑6b，方法如下：
以I‑5b替换I‑5a，详细步骤同实施例1中由I‑5a制备化合物I‑6a，制得I‑6b，收率63.0％。
该化合物表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，9.98(s，1H)，8.72(s，1H)，8.65(s，1H)，8.22(dd，J＝2.8Hz，J＝6.8Hz，1H)，7.84‑7.9(d，J＝9.2Hz，J＝4Hz，2H)，7.74(d，1H)，7.47(s，1H)，5.1(s，2H)，3.35(s，2H)，[M+H]+＝327.7。
该化合物结构式为：

步骤5)化合物6，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺的制备，方法如下：
氮气保护下，向5mL洁净干燥的反应瓶中加入I‑6b 42mg，丙烯酸8mg，HOBt 3mg，干燥的二氯甲烷3mL，以及催化量的三乙胺，冰水浴下搅拌5min，加入25mg EDCI，搅拌反应30分钟，自然升至室温，继续搅拌反应，TLC，监控，反应结束，用30mL二氯甲烷稀释，水洗，饱和食盐水洗，干燥，快速过柱，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.02(s，1H)，8.83(s，1H)，8.80(s，1H)，8.60(s，1H)，7.89(s，2H)，7.55‑7.62(m，3H)，6.13‑6.30(m，2H)，5.66(d，J＝10.0Hz，1H)，4.30(d，J＝3.2Hz，2H).ESI‑MS m/z：381.0(M+H)，379.0(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例7
化合物7，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丁‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例6，步骤5)如下：
选用2‑丁烯酸，与1‑6b，缩合反应，操作方法如实施例6，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.02(s，1H)，8.83(s，1H)，8.80(s，1H)，8.60(s，1H)，7.89(s，2H)，7.55‑7.62(m，3H)，6.71‑6.75(m，1H)，5.97(d，J＝14.8Hz，1H)，4.26(d，J＝5.2Hz，2H)，1.81(d，J＝6.0Hz，3H).ESI‑MS m/z：395.0(M+H)，393.0(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例8
化合物8，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例6，步骤5)如下：
选用4‑吗啉‑2‑丁烯酸，与1‑6b，缩合反应，操作方法如实施例6，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.00(s，1H)，8.71(s，1H)，8.70(s，1H)，8.21(s，1H)，7.84(s，2H)，7.55‑7.62(m，3H)，6.67‑6.72(m，1H)，6.05‑6.15(m，1H)，4.27(d，J＝4.0Hz，2H)，3.58(t，J＝4.8Hz，4H)，3.07(d，J＝6.4Hz，2H)，2.36(s，4H).ESI‑MS m/z：480.1(M+H)，478.1(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例9
化合物9，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例6，步骤5)如下：
选用4‑二甲基‑丁烯酸，与1‑6b，缩合反应，操作方法如实施例6，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.00(s，1H)，8.71(s，1H)，8.70(s，1H)，8.22(s，1H)，7.83(s，2H)，7.55‑7.62(m，3H)，6.67‑6.72(m，1H)，6.05‑6.15(m，1H)，4.27(d，J＝5.2Hz，2H)，3.00(dd，J＝11.6，6.0Hz，2H)，2.17(s，6H).ESI‑MS m/z：438.2(M+H)，436.1(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例10
化合物10，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)喹唑啉‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙炔酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例6，步骤5)如下：
选用丙炔酸，与1‑6b，缩合反应，操作方法如实施例6，得到目标产物。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 10.02(s，1H)，8.83(s，1H)，8.80(s，1H)，8.60(s，1H)，7.89(s，2H)，7.55‑7.62(m，3H)，4.35(d，J＝3.2Hz，2H)，4.30(s，1H).ESI‑MS m/z：379.0(M+H)，377.0(M‑H)。
该化合物结构式为：

实施例11
化合物11，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2炔)‑丙烯酰胺的制备。
线路二：

按照上述线路，步骤1)制备化合物II‑2，即噻吩并[2，3‑D]嘧啶‑4(3H)‑酮，方法如下：
在装有回流冷凝管的250mL的两口烧瓶中加入25g(136.91mmol)2‑氨基‑3‑噻吩甲酸乙酯(即化合物II‑1)，100mL无水甲酰胺，氮气保护，于油浴中加热至180℃，搅拌反应6h。TLC监控反应。反应结束后，移去油浴，反应体系冷却至室温，加入100mL水，搅拌，抽滤，滤饼用100mL水洗涤两次，抽干，然后用50mL乙醚洗涤两次，真空干燥，得乳白色固体13.4g，收率60％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 12.50(1H，brs)，8.13(1H，s)，7.60(1H，d，J＝5.8Hz)，7.41(1H，d，J＝6.0Hz)，m/z＝167(M+H)+。
该化合物结构式为：

步骤2)制备化合物II‑3a，方法如下：
在装有回流冷凝管的25mL的两口烧瓶中加入1.52g(10mmol)噻吩并[2，3‑D]嘧啶‑4(3H)‑酮(即化合物II‑2)，1.7g(11mmol)三氯氧磷，8mL干甲苯，氮气保护，然后用注射器缓慢加入1.5mL三乙胺，加毕，与油浴中加热至75℃反应2h，稍冷，加入2g  1‑(3‑氟苄基)‑1H‑吲唑‑5‑氨的乙腈溶液，再次升温至冷却至75℃反应2h，反应结束，自然降至室温，抽滤，滤饼转入15mL 1M氢氧化钠溶液中搅拌2h，抽滤，滤饼真空干燥，得N‑(1‑(3‑氟苄基)‑1H‑吲唑‑5‑基)‑噻吩并[2，3‑D]嘧啶4‑氨2.7g，收率72％。
该化合物的表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑J6)δ8.56(s，IH)，，8.15(s，IH)，7.50(dd，IH)，7.30‑7.38(m，2H)，7.20(d，IH)，7.05(s，IH)，6.98(d，IH)，6.80(dd，IH)，6.77‑6.87(m，3H)，4.89(s，2H)[M+H]+＝376.4。
该化合物结构式为：

步骤3)制备化合物II‑4a，方法如下：
氮气保护下，向装有回流冷凝管的25mL的两口烧瓶中加入II‑3a 1.8g，N‑氯代丁二酰亚胺1.3g，冰乙酸20毫升，升温至95℃反应2h，TLC监控，反应结束，旋蒸除去冰乙酸，残余物依次用饱和碳酸氢钠，水洗涤，干燥，得N‑(1‑(3‑氟苄基)‑1H‑吲唑‑5‑基)‑6‑氯噻吩并[2，3‑D]嘧啶4‑氨，1.5g，收率75％。
该化合物表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，9.97(s，1H)，8.92(s，1H)，8.51(s，1H)，8.21(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.36(dd，J＝14Hz，2H)，7.10(d，J＝8.4Hz，1H)，7.06‑6.83(m，3H)，5.71(s，2H)[M+H]+＝410.8。
该化合物结构式为：

步骤4)制备化合物II‑5a，方法如下：
在氮气保护下，向25mL的两口烧瓶中加入0.4g II‑4a，干燥的THF 3mL，二异丙基氨0.4mL，脱气5min，加入二(三苯基膦)二氯化钯40mg(5％mol)，碘化亚铜19mg(10％mol)，室温下缓慢注入0.193g丙炔胺基甲酸叔丁酯，加毕，室温下搅拌反应2h，TLC监控，反应结束，柱子层析分离，将产物转入10mL30％TFA的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应，TLC监控，反应结束，旋蒸至干，残余物用饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，抽滤，滤饼干燥，得II‑5a 0.25g收率59.2％。
该化合物表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，9.97(s，1H)，8.92(s，1H)，8.51(s，1H)，8.21(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.36(dd，J＝14Hz，2H)，7.10(d，J＝8.4Hz，1H)，7.06‑6.83(m，3H)，5.71(s，2H)，5.0(s，2H)，3.36(s，2H).[M+H]+＝429.5。
该化合物结构式为：

步骤5)化合物11，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙烯酰胺的制备，方法如下：
由化合物II‑5a与丙烯酸在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。获得。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.66(s，IH)，8.19(s，IH)，7.50(dd，IH)，7.25‑7.33(m，2H)，7.15(s，IH)，6.99(d，IH)，6.80(dd，IH)，6.75‑6.85(m，3H)，6.10‑6.38(m，3H)，4.89(s，2H)，3.40(s，2H)[M+H]+＝483.15。
该化合物结构式为：

实施例12
化合物12，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丁‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例11，步骤5)如下：
选用2‑丁烯酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.58(s，IH)，8.20(s，IH)，7.49(dd，IH)，7.20‑7.35(m，2H)，7.12(s，IH)，6.97(d，IH)，6.81(dd，IH)，6.77‑6.87(m，3H)，6.38(m，1H)，6.10(d，1H)，4.89(s，2H)，3.40(s，2H)，1.73(s，3H)[M+H]+＝496.1。
该化合物结构式为：

实施例13
化合物13，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例11，步骤5)如下：
选用4‑吗啉‑2‑丁烯酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.73(s，IH)，，8.35(s，IH)，7.82(dd，IH)，7.50‑7.62(m，2H)，7.20(s，IH)，6.95(d，IH)，6.87(dd，IH)，6.73‑6.83(m，3H)，6.38(m，1H)，6.10(d，1H)，4.89(s，2H)，3.68(d，2H)，3.40(s，2H)，3.0(m，2H)，2.20(d，8H)[M+H]+＝567.2。
该化合物结构式为：

实施例14
化合物14，(E)‑N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例11，步骤5)如下：
选用4‑二甲基氨基‑2‑丁烯酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.68(s，IH)，8.23(s，IH)，7.49(dd，IH)，7.20‑7.35(m，2H)，7.12(s，IH)，6.97(d，IH)，6.81(dd，IH)，6.77‑6.87(m，3H)，6.30(m，1H)，6.10(d，1H)，4.89(s，2H)，3.62(m，4H)，3.40(s，2H)，3.02(m，2H)，2.31(s，6H)[M+H]+＝526.2。
该化合物结构式为：

实施例15
化合物15，N‑(3‑(4‑(1‑(3‑氟苯基)‑1H‑吲唑‑5‑胺基)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)‑丙‑2‑炔)‑丙炔酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例11，步骤5)如下：
选用炔丙酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5a，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.56(s，IH)，8.15(s，IH)，7.50(dd，IH)，7.30‑7.38(m，2H)，7.15(s，IH)，6.98(d，IH)，6.80(dd，IH)，6.77‑6.87(m，3H)，4.89(s，2H)，3.40(s，2H)，2.77(s，1H)[M+H]+＝481.1。
该化合物结构式为：

实施例16
化合物16，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺的制备。
按照实施例11中的线路二，步骤1)制备化合物II‑2，即噻吩并[2，3‑D]嘧啶‑4(3H)‑酮，方法如下：
在装有回流冷凝管的250mL的两口烧瓶中加入25g(136.91mmol)2‑氨基‑3‑噻吩甲酸乙酯(即化合物II‑1)，100mL无水甲酰胺，氮气保护，于油浴中加热至180℃，搅拌反应6h。TLC监控反应。反应结束后，移去油浴，反应体系冷却至室温，加入100mL水，搅拌，抽滤，滤饼用100mL水洗涤两次，抽干，然后用50mL乙醚洗涤两次，真空干燥，得乳白色固体13.4g，收率60％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm 12.50(1H，brs)，8.13(1H，s)，7.60(1H，d，J＝5.8Hz)，7.41(1H，d，J＝6.0Hz)，m/z＝167(M+H)+。
该化合物结构式为：

步骤2)制备化合物II‑3b，方法如下：
以3‑氯‑4‑氟苯胺替换实施例11中的1‑(3‑氟苄基)‑1H‑吲唑‑5‑氨，详细步骤同实施例11中由化合物II‑2制备化合物II‑3a，制得II‑3b，收率75％。
该化合物的表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，9.93(s，1H)，8.60(s，1H)，7.29(d，J＝5.0Hz，1H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.76(s，1H).[M+H]+＝280。
该化合物结构式为：

步骤3)制备化合物II‑4b，方法如下：
以II‑3b替换II‑3a，详细步骤同实施例11由化合物II‑3a制备化合物II‑4a，制得II‑4b，收率71％。
该化合物表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，9.93(s，1H)，8.60(s，1H)，7.29(d，J＝5.0Hz，1H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.76(s，1H).[M+H]+＝359.8。
该化合物结构式为：

步骤4)制备化合物II‑5b，方法如下：
以II‑4b替换II‑4a，详细步骤同实施例11中由化合物制II‑4a备化合物II‑5a，制得II‑5b，收率63.0％。
该化合物表征数据为：1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δppm，9.93(s，1H)，8.60(s，1H)，7.29(d，J＝5.0Hz，1H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.76(s，1H)，5.0(s，2H)，3.36(s，2H).[M+H]+＝327.8。
该化合物结构式为：

步骤5)化合物16，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙烯酰胺的制备，方法如下：
由化合物II‑5b与丙烯酸在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.01(s，IH)，7.47(s，IH)，7.23(d，IH)，7.08(m，1H)，6.70(m，1H)，6.55‑6.45(m，3H)，6.35(d，1H)，6.2(m，1H)，5.88(m，1H)，3.46(s，1H)[M+H]+＝386.1。
该化合物结构式为：

实施例17
化合物17，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例16，步骤5)如下：
选用2‑丁烯酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5b，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.15(s，IH)，7.57(s，IH)，7.25(d，IH)，7.09(m，1H)，6.73(m，1H)，6.55‑6.45(m，3H)，6.33(d，1H)，6.15(m，1H)，5.98(m，1H)，3.40(s，1H)，1.78(s，3H)[M+H]+＝400.05。
该化合物结构式为：

实施例18
化合物18，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑吗啡啉丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例16，步骤5)如下：
选用4‑吗啉‑2‑丁烯酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5b，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.11(s，IH)，7.55(s，IH)，7.23(d，IH)，7.11(m，1H)，6.72(m，1H)，6.55‑6.45(m，3H)，6.38(d，1H)，6.12(m，1H)，5.98(m，1H)，3.42(s，1H)，3.01(d，2H)，2.31(s，8H)[M+H]+＝471.1。
该化合物结构式为：

实施例19
化合物19，(E)‑N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)‑4‑(二甲氨基)‑丁基‑2‑烯酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例16，步骤5)如下：
选用4‑二甲基氨基‑2‑丁烯酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5b，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.11(s，IH)，7.55(s，IH)，7.24(d，IH)，7.11(m，1H)，6.72(m，1H)，6.55‑6.45(m，3H)，6.38(d，1H)，6.12(m，1H)，5.98(m，1H)，3.71(m，4H)，3.42(s，1H)，3.02(d，2H)，2.41(m，6H)[M+H]+＝429.1。
该化合物结构式为：

实施例20
化合物20，N‑(3‑(4‑(3‑氯‑4‑氟苯胺)‑嘧啶并噻吩‑6‑基)丙‑2‑炔基)丙炔酰胺的制备。
步骤1)‑4)同实施例16，步骤5)如下：
选用4‑二甲基氨基‑2‑丁烯酸，在EDCI，HOBT和三乙胺在DMF中反应，与II‑5b，缩合反应，操作方法如实施例1，得到目标产物。
该化合物表征数据为：1H‑NMR(DMSO‑d6)δ8.01(s，IH)，7.47(s，IH)，7.21(d，IH)，7.08(m，1H)，6.55‑6.45(m，3H)，6.21(m，1H)，5.89(m，1H)，3.44(s，1H)，2.72(s，1H)[M+H]+＝385.04。
该化合物结构式为：

实施例21
采用体外酶抑制活性用酶联免疫法测定酶抑制活性。具体方法如下：
目标化合物对EGFR和HER2酶抑制活性测定采用Z′‑LYTETM激酶测试盒(invitrogenTM，Z′‑LYTE Kinase assay kit‑TYR6peptide，参考文献：Nature，373，pp.536‑9(1995))进行测试。
按照Z′‑LYTETM激酶测试盒使用说明书进行试剂配置；先把酶和药物分别按照一定的配比加于384孔板，混匀，放置30min；然后加入ATP，混匀，放置2h；加5μL Development Regent，混匀，于室温下，放置15min，30min，1h用酶标仪进行检测；1h后加入5μL的Stop regent，混匀后用酶标仪进行检测。计算相应的磷酸化比例，根据药物的浓度与对应的激酶抑制率作图，得到剂量反应曲线，从中求得药物的半数抑制浓度(IC50)。结果如下：
表1对EGFR和HER2酶的半数抑制浓度(IC50)


从上述结果可知，本发明所提供的酪氨酸激酶不可逆抑制剂对EGFR及HER2两种酪氨酸激酶同时具有抑制作用，其半数抑制浓度与阳性对照物拉帕替尼相比，或优于阳性对照物，或至少于阳性对照物相当，特别是化合物5和化合物11，其对EGFR及HER2两种酪氨酸激酶的半数抑制浓度均小于阳性对照物，具有很好的酶抑制活性。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。