铁皮石斛的快速生长栽培方法 【技术领域】
本发明属于一种铁皮石斛繁殖领域，更具体涉及一种铁皮石斛的快速生长栽培的方法。
背景技术
铁皮石斛俗名人间仙草，主要成分是生物碱和多糖，还富含氨基酸，还含有丰富的微量元素.现代临床应用和药用研究证实.铁皮石斛对咽喉疾病，肠胃疾病，白内障，心血管疾病，糖尿病和抑制肿瘤生长有显著疗效，过内外市场需求量不断增加，售价一路飙升.由于野生铁皮石斛生长慢，产量低，再加上人们不断采挖，导致野生铁皮石斛面临枯绝状态.无法满足市场需求.中国药界将铁皮石斛列为一类重点保护的珍惜濒危物种，并鼓励人工大面积栽培铁皮石斛.目前我国的一些科研机构和企业单位对铁皮石斛的组培和人工大面积栽培技术进行了探索和试验，取得了一定成绩，但组培和栽培时期使用了化学，化工，农药等原料，尚存在铁皮石斛种苗扩繁速度慢、组培苗、练苗移栽成活率低、生长速度缓慢、产量不高、有残余化学成分、有效成分低等主要问题，严重制约了铁皮石斛产业化、规模化发展.
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种铁皮石斛的快速生长栽培方法，从组培苗到栽培，确保幼苗移栽时不断根、成活率高、生长快、产量高、无残余化学成分.栽培床透气、滤水满足了铁皮石斛天然基质附生的特性，实现节约化、规模化、高产化的铁皮石斛快速生长栽培方法.
为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：
本发明将铁皮石斛种子经过一定的消毒程序，在自制的培养基里进行种子萌发，原球茎增值分化、壮苗、生根培养，约需90天的时间苗高度长到5cm以上.
传统的铁皮石斛种苗组培技术，是采用MS基本培养基+不同激素(a-萘乙酸、吲哚丁酸、苄基腺嘌呤等)配比+有机添加物(土豆汁、香蕉汁等)+琼脂，但其所选用的激素，和有机添加物的成分和比例，使用效果不太理想，从铁皮石斛种子组培到可移栽大苗(5cm以上)约需8-11个月.由于使用的培养基都是宜结块，结团原料，种苗移栽时撕扯宜损伤苗的根系、成活率低、生长缓慢.
本发明提供的铁皮石斛快速扩繁技术，无需激素和有机添加物采用的是140目细沙，从铁皮石斛种子到培养成大苗(5cm以上)只需90天，大大缩短了种苗组培时间，降低了成本。
一种铁皮石斛的快速生长栽培方法，其步骤是：它包括铁皮石斜种苗快速扩繁技术、铁皮石斜组培苗练苗技术、铁皮石斜移栽技术和铁皮石斜的采收方法，其特征在于其中的铁皮石斜种苗快速扩繁技术由以下步骤组成：
将野生铁皮石斜原产地成熟的荫果种子来回后，放在千净的培养皿里，待其自然开裂后，将种子倒入洁净的烧杯里密封起来，存放于低温箱内；将储存的种子经过一定的消毒程序，放入MS基本培养基十a-奈乙酸0.5-0.9mg/L+土豆汁22-28W/V+琼脂8-11g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度24-27C，每日光照8小时，光强1200-1600lx，16天后种子逐渐转绿，十个月形成原球茎，用放大镜看，可看到原球茎有针叶出现；将原球茎转入MS基本培养基+6-卡基腺嚎岭0.5-0.9mg/L+土豆汁22-28W/V+琼脂8-11g/L培养基里，进行原球茎增值、分化培养，2个月可观察到瓶内原球茎分化出小苗，高1cm左右，同时伴随着有部分新的原球茎产生；将小茁转入MS基本培养基十扩奈乙酸0.4-0.6mg/L+土豆汁20哪V/V+琼脂8g/L的培养基里，进行壮苗生根培养，2个月可观察到小苗发育成2.0-3.5cm的中苗，将申苗再转接到同样的培养基里，再进行大苗培养，2个月可培养出5Cm高以上的大苗，大苗可出瓶练苗、移栽；其中的铁皮石斜组培苗练苗技术是；练苗基质是刨木花+珍珠岩+草碳土，体积比为H1∶1；练苗方法是练苗容器为7cm高的小花盆，在花盆的底部铺直径1-2cm的细碎石，厚度3cm；再将体积比为1∶1∶1的刨木花、珍珠岩、草碳土混合基质放于细碎石上，厚度3cm，每盆放10株苗，将混合基质扒开一小窝，将植株的根须轻放于窝内并覆盖好，植株的基部露于外，浇一遍定根水，控制好温度、光照度、水分、湿度；练苗条件是普通温室大棚均可作为练苗棚，练苗的温度20-25℃空气湿度为75-85％，基质水分为润，基质过湿或偏千均会严重影响练苗成活率；光照为正常光照1/3的散射光，光强1800-2500lx，练苗季节为每年春、秋两季，练苗时间4-5个月；其中的铁皮石斜移栽技术是：移栽基质是直径3-5cm大碎石+直径1-3cm细碎石+苔薛，体积比为4∶2∶1；移栽条件是普通塑料大棚均可作为移栽大棚，大棚四周应挖设排水沟，棚内应铺设栽培床，移栽苗的生长温度22-28℃；空气湿度75-85％，基质水分为润；光照为正常光照1/3的散射光，光强2000--3200lx，移栽苗季节为每年春、秋两季；
移栽方法是：
1、在栽培床底层铺设直径3-5Cm的大碎石，厚度8cm；
2、在大碎石上铺设直径1-3cm的细碎石，厚度4cm；
3、将消毒晒干后的苔孽，用水先浸泡30分钟，再挤干放入塑料框待用；
4、按照12×15Cm的行列距，将细碎石扒开工小窝，每窝放4-6株苗；
5、将植株的根须撒开轻贴于窝内的细碎石面，在根须周围零星撒一点备好的苔孽，再府细碎石将根须轻轻盖住，植株的基部露于外；
6、栽完苗，浇一遍定根水；其中的铁皮石斜的采收方法是：
铁皮石斜组培苗经练苗、移栽后，1.5-2年即可采收，可连续采收5-6年；采收期为每年的12月-元月，采收前1个月应停止给植株施肥和用药，采收时应采取采旧留新、采大留小的原则。
申请人通过将生长健壮的铁皮石斜母株人工授粉得到的果实用种子萌发培养基培养，种子萌发成原球茎并进一步形成小苗，将小苗用试管开花培养基培养，将开花后的植株人工授粉，果实成熟后无菌播种，使种子长成小植株，小植株在壮苗培养基上培养，形成的成苗经过炼苗就可进一步栽培成种苗，成苗地成活率可达95％以上，从而实现了本发明的目的。或通过以下技术方案来实现本发明：本发明的铁皮石斜种苗繁殖方法，其特征包括以下的步骤：
A、开花时选取生长健壮的铁皮石斜(Dendobi皿officinale Kimura et怅go)母株进行人工授粉，授粉后果实成熟，将果实作为外植体；
B、彻将外植体依次用酒精浸泡，升汞溶液消毒，无菌水漂洗后切开，将粉末状胚接种到种子萌发培养基，种子萌发形成原球茎，并进一步形成小苗，所述的种子萌发培养基每升含花宝1号1-1.5g蛋白膊0.5-2g椰子汁50-100乱，蔗糖15-30g琼脂6-7g，活性炭0.5-1g，其余为MS培养基申的维生素和肌醇成分；
C、将小苗用试管开花培养基培养，开花后选取生长健壮的植株进行试管内人工授粉，果实成熟后切开进行无菌播种，种子萌发形成原球茎，并进一步形成完整的小植株，所述的试管开花培养基为每升含6-卡基膘玲0.5-1.0mg，蔡乙酸0.1-0.2啤，其余为MS培养基；
D、将小植株移植到壮苗培养基上培养，形成成茁，所述的壮苗培养基每升含花宝1号1-1.5g花宝2号1-1.5g蛋白脉0.5-2g水解酪萤白0.1-0.3g，香蕉汁50-150g，胡萝卜汁10-30g，苹果汁lo-30g蔗糖lo-20g琼脂6-7g活性炭1-2奈乙酸0、5-1.0mg，其余为MS培养基中的维生素和肌醇成分；
E、将成苗在自然光下炼苗，然后洗挣根部的培养基，在用水苔或泥炭和兰石按体积比1∶1混合的基质中栽培，得到种苗；
上述步骤(B)-(D)中培养基pH5.2-5.4，培养温度(26±2)。
步骤(A)所述的果实成熟期为110-130天。
步骤(B)所述的酒精浓度最好是体积分数70％-80％咪，浸泡时间最好是30-60秒，所述的升汞溶液的浓度最好是质量分数0.1％-0.2％，消毒时间最好是20-30分钟，所述的无菌水的漂洗次数最好是4-5次，所述的花宝1号可以从市场上购得，为了在生产过程中获得更多的种苗，还可以将所述的原球茎形成芽和类原球茎的混合组织，在继代增殖培养基上能进行继代增殖，形成的类原球茎可继续进行增殖，而带根的小苗则进入步骤(C)所述的培养，所述的继代增殖培养基每升含花宝1号1-2g，蛋白膝0.5-2g椰子汁50-100mL，蔗糖io-2og，琼脂6-7g，6-卡基嗓岭0.5-1mL，活性炭1-2g，其余为MS培养基中的维生素和肌醇成分。
步骤(C)所述的小苗的高度最好为2-3cm，所述的果实成熟期为50-60天。
步骤(D)所述的成苗最好高3-4cm每从有2-3个芽，所述的花宝2号。
步骤(E)所述的炼苗时间最好为8-12天，所述的自然光照的照度为1500-2000lx，光照时间最好12-16小时/天。
步骤(B)和(D)培养基申使用的花宝1号和花宝2号均可从市场上购得。再或采用以下技术措施：
1、铁皮石斛快速育苗：
(1)组培室的条件：
将铁皮石斛种子经过常规消毒程序，放入140目细沙，湿度96％以上的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度24-26℃，每日光照8小时，光强1500-1800lx，约2周种子逐渐转绿，45天形成原球茎，50天可看到原球茎有针叶出现，约55天可看到盘内原球茎分化出小苗，高约1cm左右，同时伴随着有部分新的原球茎产生，约60天可观察到小苗发育成高2-3cm的中苗。约80天左右幼苗可长到5cm以上。
(2)铁皮石斛快速育苗：
将铁皮石斛种子经过一定的消毒程序，放入140目细沙，不宜结块，大苗分栽时撕扯损伤苗根，无需练苗，湿度96％的培养基里进行种子萌发培养.培养温度24-26℃，每日光照8小时，光强1500-1800ix约2周后种子逐渐转绿，45天形成原球茎，可看到原球茎有针叶出现.约55天可看到盘内原球茎分化出小苗，高约1cm左右，同时伴随着新的原球茎产生，约60可看到小苗发育成高2-3cm的种苗.约80天左右，幼苗金额长到5cm以上，可出盘移栽到大棚.大苗移栽方法：在大棚内采用锯末8目40％.松树皮4mm×4mm40％；建筑用黄沙8目20％，混合均匀，铺成宽1500mm，厚150mm长不限的栽培床.本方法栽培床滤水、透气性好属原生态栽培基质.成品质量纯正.栽培床整理好后，将大苗移栽到床体，间距120cm×150cm的行列距.将基质扒开一小窝，每窝放3-5株苗，将植株的根须撒开贴于窝内，在根须周围撒上少量栽培料，以植株基部露于外为宜，栽完苗后，浇一遍定跟水.控制好温度、湿度、水分、光照度等。
2、铁皮石斛快速生长移栽：
(1)移栽条件：
一般塑料大棚均可作为移栽大棚，大棚需铺盖保滑膜、遮阳网.四周需挖排水沟，棚内需铺设栽培床.栽培床宽150mm，中间留操作走道，移栽苗适宜温度23-26℃，最高不高于30℃，最低不低于8℃，空气湿度70-85％为宜，基质水分以润为佳.基质水分过湿或过干均会影响植株生长和产量.光照为正常光照，散射光约1800-3000lx，夏季和秋季要使用遮阳网遮阳.移栽季节四季均可栽培.移栽后一年即可采收，一年四季可采收，采收时取大留小，可连续采收5-6年，但在采收前一个月应停止给植物喷洒杀虫剂.
(2)铁皮石斛生长栽培方法：
铁皮石斛组培苗经90天培养达5cm以上后，植株已处于较为健壮稳定状态，从组培基盘取出后.轻轻抖动，组培基料会自动脱落，不用撕扯，不会损伤苗的根系，移栽后生长较快.通过对野生铁皮石斛原生态环境的深入调研，经过多项试验，其额定移栽基质采用锯末8目40％，黄沙8目20％，松树皮4mm×4mm 40％的比例(体积比)混合使用，结合合理的施肥、浇水、光照等控制，，可保证植株在5-6年内基质的透水、透气性良好，不会出现基质板结现象，并具有一定的保湿等特点.植株成活率达97％以上。
虽然国内早有关于铁皮石斜种苗生产的专利和文献报道，但是却没有见到利用试管开花授粉结果的方法来繁殖铁皮石斜的。而本发明的方法，不但操作简单，成本低廉，而且能大大地缩短铁皮石斜果实的成熟期，高效且无病虫害，能周年生产铁皮石斜种子，成苗的移栽成活率可达95％以上，从而为铁皮石斜种苗的繁殖开辟了一条新的途径。四季可采收成品.可连续采收5-6年，年亩产在500公斤以上。
【具体实施方式】
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。实施例申使用的花宝1号(HYPONeX 1)和花宝2-(HYPONeX 2)均为美国生产台湾台和园艺企业股份有限股份有限公司分装产品。
实施例1：
开花时选取生长健壮的母株进行人工授粉，授粉后120天果实成熟，将果实作为外植体用于播种。播种时，将外植体依次用体积分数7叭的酒精浸泡30秒，质量分数0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4次，然后切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基(培养基中每升含花宝1号1.5g蛋白膝0.5g椰子汁50mL，蔗糖15g，琼脂6g『活性炭堰，其余为MS培养基申的维生素和肌醇成分)上，10天后种子萌发，形成原球茎，80天后形成小苗。
将2-3cm高的小苗100株转瓶到试管开花培养基(每升含6-卡基嗓岭(6-BA)0.5mg，蔡乙酸(NAA)0.1mg，其余为MS培养基)上，45天时20株开花，开花率可达20拷，选取试管内生长健壮的植株进行试管内人工授粉，55天果实成熟，来下果实，果实无需消毒，切开果实进行无菌播种，7天左右种子萌发形成原球茎，80天时能形成完整的小植株，每个果的数量在5万株以上。
将无菌播种获得的密集的小植株分开后转移到壮苗培养基(每升含花宝1号1.5g花宝2号1.5g蛋白陈0.5g，水解酪蛋白0.1g，香蕉汁50g，胡萝卜汁10g，苹果汁10g，蔗糖10g琼脂6g，活性炭1g，NAA0.5mg，其余为MS培养基申的维生素和肌醇成分)上培养，80天形成株高3-4cm，每丛有2-3个芽的成茁。将成苗转移到自然光下炼苗10天，光照度1500-2000lx，光照12小时/天，然后将其从玻璃瓶申取出，洗净根部的培养基，在用水苔和兰石按体积比1∶1混合的基质中栽培，保持适当遍风和足够的湿度，1000抹成活950株，移栽的成活率均可达95％。在上述实验中所用的培养基均为pH5.2-5.4，培养温度26℃。
实施例2；
开花时选取生长健壮的母株进行人工授粉，授粉后110天果实成熟，将果实作为外植体用于播种；播种时，将外植体依次用体积分数75％的酒精浸泡40秒，质量分数0.15％的升汞溶液申消毒30分钟，无菌水漂洗5次，然后切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基(培养基中每升含花宝1-号蛇，蛋白炼1g，椰子汁80mL，蔗糖25g，琼脂6.5g，活性炭0.8g，其余为MS培养基中的维生素和肌醇成分)上，10天后种子萌发，形成原球茎，为了在生产过程申获得更多的种苗，将原球茎形成芽和类原球茎的混合组织，在继代增殖培养基(每升含花宝孔号1g，蛋白炼0.5g，椰子汁50mL，蔗糖10g琼脂6g，活性炭1g，6-芋基嚎吟0.5mg，其余为Ms培养基中的维生素和肌醇成分)上继代增殖，40天后增殖4倍，形成的类原球茎继续进行增殖，得到带根的小苗，每个果的数量在5万株以上。将2-3cm高带根的小苗100转瓶到试管开花培养基(每升含6-BA 1.0mg NAA 0.2mg，其余为MS培养基)上，45天时22株开花，开花率可达22拷，选取试管内生长健壮的植株进行试管内人工授粉，50天果实成熟，采下果实，果实无需消毒，切开果实进行无菌播种，7天左右种子萌发形成原球茎，80天时能形成完整的小植株，每个果的数量在5万株以上。将无菌播种获得的密集的小植株分开后转移到壮苗培养基(每升含花宝1号1g，花宝2号1g，蛋白陈2g，水解酪蛋白0.3g，香蕉汁150g胡萝卜汁30g，苹果汁30g，蔗糖20g，琼脂6.5g，活性炭2g，NAA 1.0mg其余为MS培养基中的维生素和肌醇成分)上培养，70天形成株高3-4cm)每丛有2-3个芽的成苗。
将成苗转移到自然光下炼苗8天，光照度15oo-2ooolx，光照14小时/天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在用水苔和兰石按体积比1∶1混合的基质中栽培，保持适当通风和足够的湿度，1000抹成活965株，移栽的成活率均可达96.5％。在上述实验中所用的培养基均为pH 5.2-5.4，培养温度26℃。
实施例3：
开花时选取生长健壮的母株进行人工授粉，授粉后130天果实成熟，将果实作为外植体用于播种。播种时，将外植体依次用体积分数80的酒精浸泡60秒，质量分数0.2％的升汞溶液中消毒30分钟，无菌水漂洗4次，然后切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基(培养基申每升含花宝1号1.5g，蛋白炼2g椰子汁100mL，蔗糖30g，琼脂7g，活性炭歧，其余为Ms培养基中的维生素和肌醇成分)上，10天后种子萌发，形成原球茎，为了在生产过程申获得更多的种苗，将原球茎形成芽和类原球茎的混合组织，在继代增殖培养基(每升含花宝1号2g蛋白胯2g椰子汁100mL，蔗糖20g，琼脂7g，6-布基嚎岭1.omg，活性炭2g，其余为峪培养基中的维生素和肌醇成分)上继代增殖，40天后增殖4倍，形成的类原球茎继续进行增殖，得到带根的小苗，每个果的数量在5万株以上。将2-3cm高的小苗100株转瓶到试管开花培养基(每升含6-BA0.5mg，NAA 0.1mg，其余为MS培养基)上，45天时40株开花，开花率可达40好，选取试管内生长健壮的植株进行试管内人工授粉，60天果实成熟，采下果实，果实无斋消毒，切开果实进行无菌播种，7天左右种子萌发形成原球茎，80天时能形成完整的小植株，每个果的数量在5万株以上。将无菌播种获得的密集的小植株分开后转移到壮苗培养基(每升含花宝1号1.2g，花宝2号1.2g，蛋白臃1g，水解酪蛋白0.2g香蕉汁100g胡萝卜汁20g苹果汁20g，蔗糖15g琼脂7g活性炭1.5g，NAA0.8mg其余为MS培养基申的维生素和肌醇成分)上培养，60天形成株高3-4cm，每丛有2-3个芽的成苗。将成苗转移到自然光下炼苗12天，光照度1500-2000lx，光照16小时/天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在用泥炭和兰石按体积比1∶1混合的基质中栽培，保持适当通风和足够的湿度，1000抹成活980株，移栽的成活率均可达98％。
在上述实验申所用的培养基均为pH 5.2-5.4，培养温度26℃。