独角石斛兰无菌播种和试管育苗技术 【技术领域】
本发明涉及石斛兰的无菌播种和组织培养技术。
背景技术
斛兰属约有1000种以上，我国有70多种，多数具有很高的观赏价值，杂交品种繁多，是世界兰花产业中最重要的种类之一。独角石斛是原产越南地原生种，花色艳丽，花型独特，具有极高的观赏价值，少数野生植株在市场上极为枪手。目前石斛兰的商品都要通过人工播种和组培繁殖进行生产，市场需求大，石斛兰的繁殖多采用分株法，繁殖速度慢，而石斛兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发，但在合适人工培养基上可以进行。
本发明采用人工营养液利用无菌播种的方法获得大量试管苗，并利用无菌播种出的原球茎和小苗进行增殖，通过生根培养能形成完整植株。
【发明内容】
本发明技术是在开花时选取生长健壯的独角石斛母株进行人工授粉，授粉后120天，果实基本成熟。将果实取下，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分种，无菌水冲洗4-5次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚接种到壮苗培养基上壮苗培养。为获得更多的种苗，利用原球茎或小苗继代培养在增殖培养基上能形成芽和类原球茎混合组织，这类组织在壮苗培养基上，30天后可形成带短根的丛生植株，及时将植株分开，接种到新的壮苗培养基上培养壮苗。种子萌发与生根壮苗时蔗糖浓度以2％最佳，继代培养时以3％最佳。试管苗长到6-8厘米时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用水苔栽培，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率可达90％以上。
本发明所述的技术包括如下的步骤：
1、材料：开花时选取生长健壮的母株进行人工授粉，授粉后果实120天成熟时做为外植体用播种。
2、无菌播种：用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％地升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4-5次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上30天左右胚萌发，60天左右形成完整小植株，及时将小植株转入壮苗培养基。
3、组织培养：将无菌播种产生的原球茎或小苗培养在增殖培养基上能形成芽和类原球茎混合组织，在相同的培养基上能进行继代增殖，将混合组织接种到壮苗培养基上，30天后可形成带短根的丛生植株，及时将植株分开，接种到新的壮苗培养基上培养壮苗。
4、试管苗壮苗培养60天后(植株约6-8厘米高)，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用水苔种植，保持适当通风和足够的湿度，移栽成活率可达90％以上。所用培养基pH5.2-5.4，琼脂0.7％。培养温度(26±2)℃，光照度1500-2000Ix，光照12小时/天。
本发明所述的无菌播种和试管育苗技术，与现有技术相比，具有萌发率高，出苗快，苗壮，种苗品质好、生长良好等优势。本发明供试材料有广泛代表性，可作为其它石斛兰属其它属间杂种的无菌播种和组织培养方法，具有配方简单有效、投入少，产出高的特点，培养设备简单，因而有很好的应用前景。
实施例：
1、材料：开花时选取生长健壮的独角石斛母株母株进行人工授粉，授粉后果实120天成熟时做为外植体用播种。
2、无菌播种：取下果实，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4-5次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上30天左右胚萌发，60天左右形成完整小植株，及时将小植株转入壮苗培养基。
3、组织培养：将无菌播种产生的原球茎或小苗培养在增殖培养基上能形成芽和类原球茎混合组织，在相同的培养基上能进行继代增殖，将混合组织接种到壮苗培养基上，30天后可形成带短根的丛生植株，及时将植株分开，接种到新的壮苗培养基上培养壮苗。
4、试管苗移栽：试管苗壮苗培养60天后(植株约6-8厘米高)，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用水苔种植，保持适当通风和足够的湿度，移栽成活率可达90％以上。所用培养基pH5.2-5.4，琼脂0.7％。培养温度(26±2)℃，光照度1500-2000Ix，光照12小时/天。