新型氟苯尼考类抗生素 发明领域
本发明涉及有机化学、药物化学、生物化学及医学领域。具体地说，本发明涉及新型氟苯尼考类抗生素。
发明背景
氟苯尼考为具有抗多种革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌活性的广谱抗生素。氟苯尼考可用于预防和治疗由鸟类、爬行动物、鱼类、贝类及哺乳动物的易感病原体引起的细菌感染。其主要用途之一为治疗由Mannhemia haemolytica、多杀巴斯德氏菌(Pasturellamultocida)和(或)睡眠嗜血菌(Haemophilus somnus)引起的牛肺炎及相关的牛呼吸道感染(通常通称为牛呼吸性疾病或BRD)。其还被证明可用于治疗由以下细菌引起的感染：坏死梭杆菌(Fusobacteriumnecrophorum)和产黑素拟杆菌(Bacterioides melaninogenicus)引起的牛蹄皮炎；多杀巴斯德氏菌、大叶性肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)、猪链球菌(Streptococcus suis)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerasuis)和(或)支原体(Mycoplasma spp.)引起的猪呼吸性疾病；大肠杆菌(Escherichia coli)引起的鸡大肠杆菌病；鲶鱼爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)引起的鲶鱼肠败血症；杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)引起的鳟鱼疖病。已证实对氟苯尼考敏感的其它属细菌包括：肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、博德特氏菌属(Bordetella)、变形菌属(Proteus)和志贺氏菌属(Shigella)。尤其是，氯霉素耐药性微生物菌株如肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)、阴沟肠杆菌(E.cloacae)、伤寒沙门氏菌(S.typhus)和大肠杆菌(E.coli)对氟苯尼考敏感。
氟苯尼考是甲砜霉素的结构类似物，后者又为氯霉素的衍生物，氯霉素的芳香硝基被甲磺酰基置换，该硝基与氯霉素诱发的、非剂量相关的不可逆的人类再生障碍性贫血有关。
氯霉素 甲砜霉素 氟苯尼考
氟苯尼考含有氟原子，该氟原子代替了氯霉素和甲砜霉素的伯羟基。这使得氟苯尼考对含质粒编码的酶，即氯霉素乙酰转移酶(CAT)的细菌引起地失活作用较不敏感，CAT使氯霉素和甲砜霉素的伯羟基乙酰化，从而阻止了氯霉素和甲砜霉素与敏感细菌的核糖体亚基结合。与核糖体结合是氯霉素抗生素的主要作用机理，其导致抑制肽基转移酶，该转移酶负责细菌体内将氨基酸向生长肽链的转运及随后的蛋白质形成过程。尽管如此，全球持续使用氯霉素和甲砜霉素结果证明，具有伯羟基的化合物确实具有治疗细菌感染的功效。
近年来，许多属和种的细菌开始显示出对氟苯尼考的某些耐药性。例如已发现以下细菌有耐药性：沙门氏菌(Salmonella sp.)(Bolton，L.F.等，Clin.Microbiol.1999，37，1348)；大肠杆菌(Keyes，K.等，Antimicrob.Agents Chemother，2000，44，421.)；肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)(Cloeckaert，A.等，Antimicrob.AgentsChemother.，2001，45，2381)；以及水生病原体，美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobaterium damselae subsp.piscicida)(以前称杀鱼巴斯德氏菌(Pasteurella piscicida))(Kim，E.等，Microbiol.Immunol.，1996，40，665)。已发现该耐药性与高度保守基因(flo)有关，所述基因产生抗生素流出泵(Flo)。
氟苯尼考耐药性的出现及其扩散危险促进了对新的抗生素的需求，所述新抗生素能够保留或超过氟苯尼考的活性，保持其不受CAT酶的影响，以及不会成为Flo流出泵的底物。本发明化合物就属于这类抗生素。
概述
因此，本发明的一个实施方案是具有以下化学结构式的化合物：
其中：
R1选自-OH和-F；
R2和R3独立选自氢、(1C-4C)烷基、卤基、-CF3、-NH2、-CN和N3；
R4选自以下：
-C(＝R5)R6；
其中
R5选自氧、N-C≡N和NOR7，
其中：
R7选自氢、烷基、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基；
R6选自氢、(1C-4C)烷基、(3C-6C)环烷基、(1C-4C)烷氧基、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基；
其中：
A1为碳或氮；
A2、A3、A4和A5独立选自碳、氮、氧和硫，条件是A1-A5中至少一个不为碳，所述环上的氮、氧和硫原子的总数不超过四个，而且所示环为芳香环；
所示环的碳原子独立被选自以下的取代基取代：氢、(1C-4C)烷基、(3C-6C)环烷基、(1C-4C)烷基O-、-CF3、-OH、-CN、卤基、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-、-NH2、(1C-4C)烷基NH-、((1C-4C)烷基)2N-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基C(O)-、(3C-6C)环烷基C(O)-、(1C-4C)烷基OC(O)-、(1C-4C)烷基C(O)NH-、-C(O)NH2、(1C-4C)烷基NHC(O)-和((1C-4C)烷基)2NC(O)-，其中在所述任何取代基上的任何烷基可任选被选自以下的基团取代：卤基和-OH；如果A1为碳且所示环不含氧或硫，则氮原子中的一个可任选被选自以下的取代基取代：(1C-4C)烷基、(1C-4C)烷基S(O)2-和-NH2；
其中：
A6、A7、A8、A9和A10独立选自以下：碳、氮和条件是每次在A6-A10中只能有一个可以为
所示环上碳原子独立被选自以下的取代基取代：氢、(1C-4C)烷基、(3C-6C)环烷基、(1C-4C)烷基O-、-CF3、-OH、-CN、卤基、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-、-NH2、(1C-4C)烷基NH-、((1C-4C)烷基)2N-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基C(O)-、(3C-6C)环烷基C(O)-、(1C-4C)烷基OC(O)-、(1C-4C)烷基C(O)NH-、-C(O)NH2、(1C-4C)烷基NHC(O)-、((1C-4C)烷基)2NC(O)-和-OCH2O-，-OCH2O-取代基上的氧原子与相邻环碳原子结合，其中在所述任何取代基上的任何烷基可任选被选自卤基和-OH的基团取代；
除当R2和R3均为F时R8为氢或F外，R8在所有化合物中均为氢；所述化合物或者为具有所示相对立体化学的外消旋体，或者为基本对映体纯的并且具有所示绝对立体化学。
在本发明的一个实施方案中，R1为-F。
在本发明的一个实施方案中，R2和R3独立选自Cl、F。
在本发明的一个实施方案中，R8为氢。
在本发明的一个实施方案中，R4为-C(＝R5)R6，其中R5和R6如上定义。
在本发明的一个实施方案中，R4为CH3C(O)-。
在本发明的一个实施方案中，R4为
其中：
A6、A7、A8、A9和A10如上定义，且A6-A10中的任何碳被选自以下的取代基取代：氢、-NH2、卤基-、-CN、(1C-4C)烷基-、(1C-4C)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-，其中在所述任何取代基上的任何烷基可任选被卤基或-OH取代。
在本发明的一个实施方案中，R4为而A6-A10中的一个、两个或三个为氮；所示环上剩余碳原子中的一个或两个任选被-NH2取代，环上的所有其它碳原子未被取代。
在本发明的一个目前优选的实施方案中，R4选自以下：
和
在本发明的一个实施方案中，R4为如上定义的
在本发明的一个实施方案中，R4为所有的碳原子和氮原子均未被取代。
在本发明的一个实施方案中，R4为A2-A5中的一个碳被-NH2取代，所示环上的所有其它的碳未被取代，合适时，氮原子也未被取代。
在本发明的一个目前优选的实施方案中，R4选自以下：
和
本发明的一个目前优选的实施方案是选自以下的一种化合物：
和
其中所述化合物或者为具有所示相对立体化学的外消旋体，或者为基本对映体纯的并且具有所示绝对立体化学。
本发明的一个目前具体优选的实施方案是选自以下的一种化合物：
和
其中该化合物或者为具有所示相对立体化学的外消旋体，或者为基本对映体纯的并且具有所示绝对立体化学。
在本发明另一个具体优选的实施方案中，此中的化合物为基本对映体纯的并且具有1-(R)-2-(S)绝对构型。
本发明的一个实施方案是治疗或预防细菌感染的方法，所述方法包括给予有需要的患者药用有效量的本发明化合物。
在本发明的一个实施方案中，所述细菌感染是由以下属的细菌引起的：巴斯德氏属(Pasteurella)、嗜血菌属(Haemophilus)、梭杆菌属(Fusobacterium)、拟杆菌属(Bacterioides)、气单胞菌属(Aeromonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、埃希氏菌属(Escherichia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属(Shigella)、放线杆菌属(Actinobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、支原体属(Mycoplasma)、爱德华氏菌属(Edwardsiella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、博德特氏菌属(Bordetella)、变形菌属(Proteus)或Mannheimia。
在本发明的一个实施方案中，所述细菌感染是由以下细菌引起：Mannhemia haemolytica、多杀巴斯德氏菌、睡眠嗜血菌、坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum)、产黑素拟杆菌、大叶性肺炎放线杆菌、猪链球菌、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerasuis)、牛支原体(Mycoplasma bovis)、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)、猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)、鸡败血支原体(Mycoplasmagallisepticum)、鲶鱼爱德华氏菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、中间葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumomae)、产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)、奇异变形菌(Proteus mirabilis)或杀鲑气单胞菌(Aeromonassalmonicida)。
发明详述
附表简述
表1显示本发明代表性化合物的结构。该表和表中的化合物既不意味着也不应认为以任何方式限制本发明。
表2是测试本发明化合物的微生物一览表。该一览表既不意味着也不应认为以任何方式限制本发明。
定义
本文所用的“卤基”是指氟、氯、溴或碘。
本文所用的“烷基”是指饱和(不含多重键)脂族(无离域π电子系统)烃(如果未被取代，则只含碳和氢)。符号(n1C-n2C)烷基，其中n1和n2为1-6的整数，是指含n1-n2个碳原子的直链或支链烷基。例如(1C-4C)烷基是指CH3-、CH3CH2-、CH3CH2CH2-、CH3CH(CH3)-、CH3CH2CH2CH2-、CH3CH2CH(CH3)-或(CH3)3C-。所述烷基可以是未取代的，或者被一个或多个选自以下的部分取代：卤基、-OH、OCH3和-C≡N。
本文所用的“环烷基”是指全碳环或稠合多环，其尽管可含有一个或多个双键，但仍然保持基本的脂族特性；即双键之间不会相互作用形成环绕环的离域π电子系统。对于本发明的目的，所述环最多可含有七个碳原子。符号(3C-6C)环烷基是指三、四、五和六元全碳原子环。本文所用的“稠合的”是指两个环烷基至少共享它们之间的一个环原子。因此，对于本发明的目的，象螺[4.4]壬烷这种化合物可认为是“稠合的”。更常见的是，稠环共享两个相邻的环碳原子。这种稠合系统的一个实例为萘烷。环烷基环可以是未取代的，或者被一个选自以下的部分取代：-OH、-OCH3、卤基和-C≡N。
本文所用的“芳基”是指单个全碳六元环或两个稠合的六元环，该单环或稠环具有离域π电子系统。“稠合”是指系统中的每个环与至少另外一个环共享两个相邻的环碳原子。芳环可以是未取代的，或者被一个或多个选自以下的部分取代：-OH、-OCH3、卤基和-C≡N。
本文所用的“杂芳基”是指五元环或六元环或双环，即两个五元环，两个六元环或者一个五元环和一个六元环稠合在一起，其中单环和稠环具有离域π电子系统。如果环为六元环，其只能由碳和氮组成，可含有1-4个氮原子。如果环为五元环，其必须含有一个氮、氧或硫原子，可含有一个、两个或三个另外的氮原子。在五元环中央的一个圆圈表示该环为杂芳环。该圆圈用于强调这样一个事实，即使环具有芳香性的双键的位置不是固定的，而是所述位置取决于形成环的原子的性质，即它们是碳、氮、氧还是硫，以及何种基团与它们结合。一旦指明环原子，本领域技术人员立即就能明了任何五元杂芳环的实际结构。对于杂芳基，术语“稠合的”与在芳基中的含义相同。杂芳基可以是未取代的，或者被上述芳基的任何部分取代。
本文所用的“杂脂环”是指含有选自碳、氮、氧和硫的原子但无离域π电子系统的环系或稠合环系。“稠合的”的含义与上述环烷基环中阐述的含义相同。同样，杂脂环可以是未取代的，或者被任何上述环烷基环中的相同部分取代。
当环碳原子被称作“未取代”时，说明任何未填满的化合价实际上被氢原子占据。同样，如果环氮原子能够被进一步取代，则称其是未取代的，是指该氮与氢原子结合。
本文所用的“相对立体化学”是指取代基彼此之间在空间的相对位置。
本文所用的“绝对立体化学”是指按Cahn-Ingold-Prelog规则确定的取代基在三维空间中的确切位置，所述规则的应用是本领域技术人员众所周知的。
本文所用的“对映体”是指一个分子的两种绝对立体化学构型中的一种，所述构型能使平面偏振光向一个方向或相反方向旋转(即顺其原来轴向的逆时针方向旋转，习惯上称“左旋”，或顺时针方向旋转，习惯上称“右旋”)。“基本对映体纯的”是指该化合物含有的一种对映体大于90％，优选大于95％，最优选大于99％。
本文所用的“外消旋体”是指化合物的两种对映体的1∶1混合物。外消旋混合物用符号(+/-)表示。基本对映体纯的化合物不用该符号表示。
本文所用的“患者”是指鸟类、爬行动物、鱼类、贝类和哺乳动物。具体地说，是指鸟类例如但不限于鸡和火鸡；鱼类例如但不限于鳟鱼、鲑鱼、鲶鱼和黄条狮鱼；哺乳动物例如但不限于猫、犬、兔、绵羊、牛、猪、马和山羊以及人。
讨论
预期本发明化合物可用于治疗患者的细菌感染。
化合物
以上概述对本发明化合物进行了一般性的阐述。本发明的示例性化合物如表1所示。该表和表中的化合物既不意味着也不应认为以任何方式限制本发明的范围。
表1
合成
以市售氯霉素碱(1)为原料制备对映体纯形式的中间体，或在碱性条件下使对溴苯甲醛与甘氨酸缩合制成外消旋混合物。为了合成中间体如9的纯对映体，可将氯霉素碱转变为化合物3(Rebstock，M.C.等，J.Am，Chem.Soc.，1949，71，2458；Evans，D.D.等，J.Chem.Soc.，1954，1687；Morris，D.S.和Smith，S.D.，J.Chem.Soc.，1954，1680)。使化合物3经历Sandmeyer反应，之后在酸性条件下除去乙酸酯保护基团，生成纯对映体9。
另外，可使对溴苯甲醛(5)转变为(d/l)-苏-对溴苯基甘氨酸(6，流程1)(Bolhoffer，W.A.J.Am.Chem.Soc.1954，76，1322；Herbert，R.B.；Wilkinson，B.；Ellames，G.J.Can.J.Chem.1994，72，114)，其可被保护为N-Boc衍生物7，然后用两步还原：用DCC和N-羟基琥珀酰亚胺活化，随后用NaBH4处理，得到8。可将化合物9分离为其TFA盐或游离碱。通过将胺和苄羟基保护为苯基噁唑啉10，随后用三氟化(二乙氨基)硫(DAST)或三氟化[双(2-甲氧基乙基)氨基]硫氟化(Lal，G.S.，J.Org.Chem.，1999，64，7048)，区域选择性地引入氟，得到11。化合物11可用于Suzuki交叉偶联反应，以合成联芳衍生物。另一个Suzuki反应的参与者即芳基硼酸，例如12可按所示流程制备，并可与芳基卤反应。
流程1
i)纯Ac2O；ii)H2(g)、10％Pd/C；iii)0℃，NaNO2/HBr水溶液，然后CuBr/HBr水溶液；iv)10％H2SO4，Δ，然后NaOH后处理；v)KOH、甘氨酸，然后HCl水溶液，然后NH4OH；vi)Boc2O、二氧六环、水；vii)DCC、HOSu，然后NaBH4 THF然后H2O；viii)TFA，然后NaOH后处理；ix)苯甲亚氨酸乙酯盐酸盐、Et3N；x)-78℃至室温，DAST或三氟化[双(2-甲氧基乙基)氨基]硫；xi)先n-BuLi，-78℃，然后B(OMe)3，-78℃至室温。
已证明除去苯基噁唑啉保护基团的条件与芳环的对位上的许多官能团不兼容。因此，根据文献方法(流程2；Jommi，G.等，Gazz.Chim.Ital.，1986，116：485)开发出了新的保护基团。使苯基丝氨酸6转变为甲酯13，将后者保护为噁唑烷酮(oxazolidinone)14，而14又用NaBH4还原为15。用DAST或者用三氟化[双(2-甲氧基乙基)氨基]硫氟化，生成中间体16，其不能达到稳定良好的Suzuki反应收率。因此，将16转变为17。引入Boc基团可促进噁唑烷酮保护基团的裂解(Grehn，L.等，Acta Chim.Scand.B，1986，40，745)，随后通过碱催化裂解，生成18(Ishizuka，T.和Kunieda，T.，Tetrahedron Lett.，1987，28，4185；Jommi，G.等Gazz.Chim.Ital.，1988，118：75)。
流程2
i)HCl、MeOH，0℃至室温，18小时，然后回流18小时；ii)CDI、Et3N、THF/1，2-二氯乙烷；iii)0℃，NaBH4、MeOH；iv)-78℃，DAST或三氟化[双(2-甲氧基乙基)氨基]硫，10分钟，然后室温下直至完成反应；v)Boc2O、DMAP、MeCN；vi)Cs2CO3、MeOH。
将化合物18保护为异亚丙基衍生物19，使后者转变为硼酸23(流程3)。将化合物18、19、22和23用于Suzuki交叉偶联反应。化合物23的用途最广，因为其可与任何芳基溴或芳基碘进行交叉偶联，并且保护基团在温和条件下易于除去。化合物22作为Suzuki交叉偶联反应的参与者很引人注目，因为这种偶联反应直接生成需要的氟苯尼考类似物，而无需脱保护和二卤乙酰化。然而，用22进行交叉偶联的收率低于用23。用21进行交叉偶联生成需要的产物，但被乙酸酯和一氯乙酸酯类似物所污染。
外消旋化合物20的光谱与以半合成的化合物11为原料，通过水解裂解和碱后处理合成的样品的光谱相同。这提供了确凿的证据，即已经发生了具有适宜的相对苏型或顺式立体选择性的苯基丝氨酸6的缩合反应。
流程3
i)9∶1 TFA、H2O，如果需要游离碱，然后NaOH后处理；ii)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；iii)2-甲氧基丙烯、p-TsOH·H2O；iv)二氟乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；v)二氟乙酰氯、Et3N、随后1∶8∶1 Et3N、MeOH、H2O；vi)先-78℃，n-BuLi，然后B(OMe)3，-78℃至室温。
用化合物11和12制备化合物28和29(流程4)。使化合物11与3-吡啶硼酸在标准两相的Suzuki条件下进行交叉偶联反应，生成被保护的中间体26。N-C交叉偶联产物27按照Lam和其同事最近报道的方法(Lam，P.Y.S.等，Synlett，2000，674；Lam，P.Y.S.，Tetrahedron，Lett.，1998，39，2941；Lam，P.Y.S.，Tetrahedron Lett，2001，42，3415)制备。使26和27脱保护和二氯乙酰化，生成28和29。
流程4
i)间吡啶硼酸、Na2CO3、Pd(PPh3)4、THF、H2O、Δ；ii)6 N HCl水溶液，密封管100℃，然后碱后处理；iii)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；iv)Cu(OAC)2、吡啶、CH2Cl2、室温、敞口、40小时。
使化合物23与2-溴-1，3，4-噻二唑(24)反应，生成48(流程5)。经Suzuki交叉偶联反应生成杂联芳25。用9∶1 TFA/H2O使化合物25脱保护，同时除去Boc和异亚丙基基团，然后进行二氟乙酰化，生成48。
流程5
i)Cs2CO3，PdCl2(dppf)，THF，DMF，H2O；ii)9∶1 TFA/H2O；iii)Et3N、二氟乙酸甲酯、Δ
虽然衍生物例如11的对溴官能团和相应的硼酸例如12作为氟苯尼考类似物的合成中间体具有想当的实用性，但是对氰基化合物也可作为重要的中间体。应用文献方法(Morris，D.S.；Smith，S.D.，(参见上文))，已将中间体如30制成纯对映体(流程6)。更大量的中间体使用外消旋的全合成中间体如35制备。用经改进的文献方法(Pines，S.H.和Kazlowski，M.A.，J.Org.Chem.，1972，37，292)，使对氰基苯甲醛与甘氨酸甲酯进行羟醛缩合生成32。
流程6
i)文献方法-见原文；ii)文献方法-见原文；iii)CDI、TEA、THF或1，2-二氯乙烷；iv)NaBH4、MeOH、0℃；v)DAST或三氟化[双(2-甲氧基乙基)氨基]硫、-78℃，10分钟，然后在室温下直至完成。
化合物41(流程7)用中间体36制备，用30制备36的方法已有介绍(von Strandtmann，M.等，J.Med.Chem.，1967，10，888)。化合物36用H2SO4水溶液脱保护，然后区域选择性地保护为苯基噁唑啉38。38经DAST处理，得到化合物39，然后脱保护和二氯乙酰化，生成41。
流程7
i)MeLi、THF，然后H2O；ii)10％H2SO4水溶液，Δ；iii)Et3N、苯甲亚氨酸乙酯盐酸盐，Δ；iv)DAST，-78℃至室温；v)6N HCl，Δ；vi)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH，Δ。
化合物47通过以下方法制备：用盐酸羟胺处理中间体35，随后用原甲酸三乙酯处理生成43，使其脱保护生成46，然后二氯乙酰化。
流程8
i)NH2OH·HCl、EtOH，Δ；ii)原甲酸三乙酯、Δ；iii)Boc2O、DMAP、MeCN；iv)Cs2CO3、MeOH；v)TFA/H2O 9∶1；vi)二氯乙酸甲酯、Et3N、Δ。
对酰基衍生物可通过使被保护的中间体(流程9，化合物87和88)与酰氯进行Stille偶联反应制得。通过用六甲基二锡进行由Pd催化的反应，引入三甲基甲锡烷基。
流程9
i)Me3SnSnMe3、Pd(PPh3)4、Δ、C6H6或PhMe
以87为原料经过Stille偶联反应生成中间体89(流程10)，使后者脱保护和二氯乙酰化，制得环丁基衍生物73。
尝试使89的相应环丙基衍生物脱保护，导致发生HCl催化的开环。因此，为制备91，需使用boc/异亚丙基方法，因为脱保护在不影响环丙基的条件下进行。
流程10
i)Pd2dba3、K2CO3、Et3N、环丁烷甲酰氯，室温，3小时；ii)6N HCl密封管，Δ；iii)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；iv)Pd2dba3、K2CO3、Et3N、环丙烷甲酰氯，室温，3小时；v)TFA/H2O
如果需要，被保护的苯尼考(phenicol)中间体的对羧基苯基衍生物可按两种方法制备。例如，水解17的p-腈类似物生成相应的羧酸。然而，腈通常不象溴衍生物那样容易获得。因此，优选的羧化方法为置换溴基团。例如羧酸衍生物102(流程11)可通过锂化17，随后用CO2处理和用酸后处理制得。将化合物102转变为甲酯103，使其与肼反应生成104。用原甲酸三乙酯环化104得到噁二唑105，使105脱保护和二卤乙酰化，生成106和107。
流程11
i)-78℃，n-BuLi、THF，然后通入干燥CO2气泡，然后升温至室温，然后加H3O+；CH2N2；iii)肼、EtOH、Δ；iv)原甲酸三乙酯、Δ；v)TFA/H2O；vi)制备106，Et3N、二氟乙酸乙酯，室温；制备107的条件同106，但需用二氯乙酸甲酯替换二氟乙酸乙酯。
102的羧酸衍生物也用于制备化合物如109(流程12)，方法为使其还原为醇108，随后脱保护和二氯乙酰化。
流程12
i)DCC、五氟苯酚、EtOAc；ii)NaBH4、MeOH；iii)TFA/H2O；iv)二氯乙酸甲酯、Et3N、Δ。
生物学评价
预期本发明的所有化合物都有抗微生物活性，其抗菌谱与氯霉素家族的其它成员相同。此外，还预期其可对抗一些对现有氯霉素抗生素产生耐药的细菌有效，具体地说其对氟苯尼考耐药的细菌有效。还预期现有氯霉素类抗生素对其无活性的一些种、属的细菌，本发明化合物可能对其有活性。
还要说明的是，就生物活性而言，化合物的一种对映体可能比另一种对映体的活性更强。在这种情况下，不管是否说明，活性更强的异构体应被看作本发明的优选实施方案。本文中任何化合物的具有1-(R)-2(S)绝对构型的活性最强的对映体为特别优选的实施方案。
为确定本发明化合物的活性范围和水平，可使用以下方案。本领域技术人员根据本文公开的资料，将会明了其它的这类方案，而这类方案也包括在本发明的范围内。预期本文中的某些化合物不仅具有相当的抗菌活性，而且对目前氯霉素耐药机理较少敏感。本文的筛选方案也可用于检测这类特征。
药敏试验
用肉汤微量稀释测定法评估化合物抗一组细菌菌株的活性，测定按照NCCLS(National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)2000，Methods for Dilution of Antimicrobial SusceptibilityTests for Bacteria That Grow Aerobically(针对需氧菌的抗微生物药物敏感性试验的稀释方法)，第五版，Approved Standard，NCCLSDocument M7-A5，第20卷，第2期)推荐的方法操作。最小抑菌浓度(MIC)定义为化合物抑制细菌生长的最小浓度。
以下10种微生物构成主要的测评组：
表2 细菌 菌株 流出泵 表型 大肠杆菌 ECM 1194 AcrABa 野生型 大肠杆菌 ECM 1694 无 ΔacrAB∷Tn903kmr 大肠杆菌 ECM 1642 AcrAB MarR 大肠杆菌 ECM 1888 MdfA tolC∷Tn mdfR 大肠杆菌 ECM 1750 CmIAΔacrAB∷Tn903kmr/pL Q821 大肠杆菌 ECM 1958 FloΔacrAB∷Tn903kmr/p1 956 大肠杆菌 ECM 1970 AcrAB+Flo marR/p1956 大肠杆菌 ECM 1197 AcrABa EMR∷Cm(cat) 或ECM 2024 AcrABaECM1197acrAB∷Kan多杀巴斯德氏菌ATCC43134 野生型MannhemiahaemolyticaATCC33396 野生型
aAcrAB以低水平表达的流出泵
在经阳离子调整的Mueller-Hinton肉汤(CAMHB)中进行测定，细菌接种浓度为5×105CFU/ml，终体积为100μl。将氟苯尼考和氯霉素对照及试验化合物制成需要的终浓度的4倍。用多道吸液器在板上按2倍连续稀释度直接稀释至需要的浓度。稀释后，向各孔中加入25μl的CAMHB。
细菌接种物如下制备。对于每一菌株，用一个分离菌落接种5ml的CAMHB。将培养物在振荡培养箱中于35℃培养过夜(20小时)。然后用无菌盐水稀释至相当于0.5 McFarland悬浮液(约108CFU/ml)的密度。用CAMHB将该悬浮液再稀释至约5×105CFU/ml。向各孔中加入体积50μl的接种物。在每一个板上都包括阳性和阴性生长对照。在TSA板上应用几个10μl的10倍稀释液测定原始接种物。将琼脂板在35℃保温过夜，统计菌落形成单位(CFU)。将微量滴定板于35℃保温20小时，用微量滴定板读数器(Molecular Devices)在650nm处读数并通过用微量滴定板读数镜肉眼观察，测定MIC。
药用组合物
本发明化合物及其前体药物、或本发明化合物或其前体药物的生理上可接受的盐，可以直接给予患者或以药用组合物给予患者，在药用组合物中，将述物质与合适的赋形剂混合。制剂技术及给药方法可在Remington′s Pharmacological Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版中查找。在Remington中讨论的制剂及技术主要是供人类患者使用；然而，通过用兽医领域技术人员熟知的技术很容易将其改进为适合非人类患者使用。
给药途径
本文所用的“给药”是指将本发明的化合物、盐或前体药物，或将含本发明的化合物、盐或前体药物的药用组合物给予生物体，以治疗或预防微生物感染。
合适的给药途径可以包括但不限于口服、直肠内、经粘膜、肌内、皮下、脊髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、玻璃体内、腹膜内、鼻腔内、耳朵或眼睛内给药。优选的给药途径为口服和胃肠外给药。
另外，患者可以局部而非全身性方式使用所述化合物，例如通过将制剂如药膏直接涂在感染部位，或将所述化合物直接注射到感染组织。在任一情况下，都可使用缓释制剂。
组合物/制剂
可按本领域众所周知的方法制备本发明的药用组合物，例如使用多种众所周知的混和、溶解、制粒、包糖衣、粉碎、乳化、灌装胶囊、包埋(entrapping)或冻干方法。该组合物可与一种或多种生理上可接受的载体一起配制，所述载体包括赋形剂和助剂，其可促使活性化合物制成可药用的制剂。合适的制剂取决于所选择的给药途径。
对于注射给药，包括但不限于静脉内、肌内和皮下注射，本发明化合物可用水溶液配制，优选用生理相容性缓冲液配制，如Hanks氏溶液、林格氏溶液、生理盐水缓冲液；或用极性溶剂配制，包括但不限于N-甲基-2-吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、其它吡咯烷酮、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、丙酮和甘油缩甲醛。对于经粘膜给药，在制剂中使用适于穿越屏障的渗透剂。这种渗透剂在本领域通常是已知的。
对于口服给药，可通过将活性化合物与本领域众所周知的药学上可接受的载体混合，来配制所述化合物。这类载体可使本发明化合物配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣丸剂、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、糊剂、结晶浆液剂、溶液剂、混悬剂、可用患者的饮用水稀释的浓缩溶液剂和混悬剂、可用患者食物稀释的预混物等，供患者口服摄入。口服给药的药用制剂可按以下方法制备：使用固体赋形剂，任选将生成的混合物粉碎，处理颗粒的混合物，如果需要，加入其它合适的助剂，得到片剂或糖丸芯。可使用的赋形剂具体地说为填充剂如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制品例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉和马铃薯淀粉；及其它物料如明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸之类的崩解剂。还可使用如藻酸钠之类的盐。
需给糖丸芯提供合适的包衣。为此目的，可使用浓糖溶液，其可任选含阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。在片剂或糖丸芯包衣中可加入染料或色素，以便鉴别或给活性化合物不同剂量的组合标记特征。
可口服的药用组合物包括由明胶制成的推入配合(push-fit)胶囊、以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨醇制成的密封软胶囊。推入配合胶囊中可含有活性成分并混有填充剂例如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁以及任选的稳定剂。在软胶囊中，活性化合物可溶于或悬浮于合适液体例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。在这些制剂中也可加入稳定剂。
对于吸入给药，本发明化合物可方便地以气雾剂的形式递药，此时使用压力容器或喷雾器及合适的抛射剂例如但不限于二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷或二氧化碳。就压缩气雾剂而论，可通过提供阀门以给予计量的量来控制剂量单位。可制成例如用于吸入器或吹入器的明胶胶囊和药筒，其含有所述化合物和合适粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
所述化合物也可配制成例如通过大剂量注射或连续输注的胃肠外给药制剂。注射用制剂可制成例如安瓿或多剂量容器的单位剂型。有用的组合物包括但不限于含有油性或水性溶媒的混悬剂、溶液剂或乳剂，并且可含辅料如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。胃肠外给药用药用组合物包括活性化合物的水溶性形式的水性溶液剂，例如但不限于活性化合物盐的水性溶液剂。另外，活性化合物的混悬剂可用亲脂性溶媒制备。合适的亲脂性溶媒包括脂肪油例如芝麻油、合成脂肪酸酯例如油酸乙酯和甘油三酯或脂质体等物质。水性注射混悬剂可含有增加混悬剂粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖酐。任选所述混悬剂还可含有合适的稳定剂和/或增加化合物溶解性的物质，以制备高浓度溶液剂。或者，所述活性成分也可为粉末形式，临用前用合适的溶媒例如无菌无热原的水重建。
所述化合物也可使用常规的栓剂基质如可可脂或其它的甘油酯配制成直肠给药组合物，例如栓剂或滞留型灌肠剂。
除了上述制剂外，所述化合物也可配制成贮库制剂(depotpreparation)。这种长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射给药。为了适合该给药途径，本发明化合物可与合适的聚合物或疏水性物质(例如含药理上可接受的油的乳液)一起配制，与离子交换树脂一起配制，或制成微溶衍生物例如但不限于微溶盐。
可使用用于相对疏水性药物的其它递药系统。脂质体和乳剂为众所周知的疏水药物的递药溶媒或载体的实例。另外，尽管通常存在较大的毒性风险，但也可使用二甲亚砜等有机溶剂。
此外，所述化合物还可用缓释系统递药，例如含治疗药物的固体疏水聚合物半渗透骨架。已确定了多种缓释物质，这是本领域技术人员所熟知的。缓释胶囊根据其化学性质可在几周至高达100多天内释放所述化合物。根据具体化合物的化学性质及生物稳定性，还可使用其它的稳定性策略。
本文所用的药用组合物也可以包括固体或凝胶相载体或赋形剂。这类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖类、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚乙二醇等聚合物。
剂量
治疗有效量是指能够有效预防、缓解或改善微生物感染症状的化合物的量。治疗有效量的确定足以在本领域技术人员判断能力范围之内，尤其根据本文公开的资料判断。
对于本发明方法中使用的任何化合物，其治疗有效量可首先根据细胞培养试验估计。然后，可配制成用于动物模型的剂量，以便达到包括在细胞培养中测得的MIC在内的循环浓度。然后将所得信息用于更准确地测定适用于患者的剂量。
本文介绍的化合物的毒性和治疗功效可按标准药学方法在细胞培养或实验动物中测得。例如某个具体化合物的MIC和LD50可按本领域众所周知的方法测得。得到的数据可用于配制可用于患者的剂量范围。当然，剂量可能因剂型及给药途径的不同而不同。主治医师可根据患者的状况选择确切的制剂、给药途径和剂量。(参见例如Fingl等，1975，“The Pharmacological Basis of Therapeutics”，第1章，第1页)。然而，一般而言，本发明化合物目前优选的全身给药剂量范围为约1mg/kg至约100mg/kg。目前优选的局部用药的剂量范围通常为约0.1mg至约1g。
可对剂量及给药间隔进行个别调整，以使该化合物的血浆水平足够维持与MIC或任何其它需要的水平相等的浓度。这种血浆浓度通常称为最小有效浓度(MEC)。每种化合物的MEC都不相同，但可通过体外数据进行估计，例如达到微生物80％以上抑制所需的浓度可通过本文介绍的试验来确定。达到MEC所需剂量取决于个体特征和给药途径。可用HPLC分析或生物分析测定血浆浓度。
也可用MEC值测定给药间隔。应使用某种控制方法给药，所述方法使化合物在10-90％的给药时间内，优选在30-90％的时间内，最优选在50-90％时间内，在血浆中的水平能够维持在MEC以上。
就局部用药或选择性摄取而论，有效局部药物浓度可能与血浆浓度无关，可使用本领域其它已知方法测定正确的剂量及给药间隔。
当然，组合物的给药量取决于待治疗患者、感染的严重程度、给药方式、主治医师的判断等。
包装
如果需要，组合物可以装入小包装或分配器中，例如FDA批准的药盒，其可包括含活性成分的一种或多种单位剂型。该小包装例如可包含金属或塑料箔膜，例如水泡眼包装。该包装或分配器带有使用说明书。该包装或分配器还可附有有关的公告，该公告为监管药品生产、使用或销售的政府部门出具的附表，该公告反映了政府部门对组合物的剂型或允许人用或兽用的批准情况。这种公告例如可以是美国食品及药品管理局批准的处方药标签或批准的产品插页。也可制备包含配制于相容的药物载体的本发明化合物的组合物，将其放入适当的容器中并贴上标签，供适应症的治疗用。
实施例
下面提供的实施例用以阐明本发明的某些实施方案，既不意味着也不应认为以任何方式限制本发明的范围。
原料从市售供应商处购得，除非另有说明，无需进一步纯化就可直接使用。化学药品供应商包括Aldrich、Fluka和Lancaster。Pd(PPh3)4得自Lancaster或Strem，并立即在N2手套包中将其转移到充有N2的小瓶中(每个小瓶装入10-100mg)。小瓶用铝箔包裹，在-20℃下，将其储存在充N2的拉锁袋中。PdCl2(dppf)得自Aldrich，从瓶中取出就可使用。使用的溶剂为标准试剂级，使用时其不一定为无水的。无水溶剂购自化学药品供应商并直接使用。
用300MHz Varian FT-NMR光谱仪记录1H NMR光谱图，以“化学位移”(多重性、积分、偶合常数)的形式报告结果。偶合常数用Hz单位报告。质谱图从配有电喷雾电离(ESI)的Micromass Platform II单四极质谱仪上获得。
以下为使用的三种Suzuki交叉偶联方法：
方法A：使芳基硼酸(0.167mmol)和芳基溴(0.334mmol)在Na2CO3水溶液(3ml的10％(w/w)溶液)和THF(5ml)的混合物中混合。该混合物中通入N2。加入Pd(PPh3)4(10mol％，0.0167mmol)，混合物中通入N2，然后回流16小时。反应混合物用乙酸乙酯(EtOAc)稀释，用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，浓缩。然后残余物用色谱法纯化。
方法B：在室温下，使芳基硼酸(0.301mmol)、芳基溴(0.602mmol)和Cs2CO3(0.903mmol)在THF(2.0ml)、DMF(2,0ml)和H2O(0.5ml)中混合。该混合物中通入N2达5分钟，加入二氯[1，1’-双(二苯膦基)二茂铁]合钯(II)二氯甲烷络合物(0.0301mmol)。该混合物中通入N2达5分钟，然后在55℃下搅拌16小时。真空浓缩该混合物，用EtOAc稀释，用盐水洗涤。EtOAc层经无水Na2SO4干燥并浓缩。残余物用色谱法纯化。
方法C：使芳基硼酸(0.934mmol)、芳基溴(2.34mmol)和Cs2CO3(2.80mmol)悬浮于甲苯(4ml)、正丁醇(4ml)和H2O(2ml)的混合物中。在室温下，该混合物中通入N2，然后加入Pd(PPh3)4(0.280mmol)。该混合物中再通入N2达5分钟，然后加热至75℃。12小时后，使该混合物冷却至室温，真空浓缩。使残余物在H2O(75ml)和EtOAc(75ml)之间分配。EtOAc层用盐水(2×50ml)洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物用色谱法纯化。
实施例1：化合物3
将8.13g(32.0mmol)氯霉素碱的N-乙酸酯溶于80ml的甲醇中，N-乙酸酯按文献方法(Rebstock，M.C.等，(参见上文)，Crooks H.M.等，(参见上文)；Evans，D.D.；Morris，D.S.等，(参见上文))制备。通入N2后，加入Pd/C，将该混合物在H2(1atm)下搅拌16小时。然后通过Celite过滤除去Pd/C。真空浓缩溶液，残余物用硅胶色谱法纯化，用15％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到3(7.13g，31.7mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.92(s，3H)，3.40(dd，1H，J＝11.1，6.0)，3.61(dd，1H，J＝11.1，5.7)，4.01(m，1H)，4.73(d，1H，J＝5.4)，6.69(d，2H，J＝8.4)，7.11(d，2H，J＝8.4)。
实施例2：化合物4
在0℃下，将NaNO2水溶液(1.27g，18.5mmol，50ml H2O)滴加到3(3.76g，16.8mmol)的35ml 48％HBr水溶液中。加入结束后，将该混合物在0℃下搅拌30分钟。然后将该混合物滴加到CuBr(2.65g，18.45mmol)的15ml 48％HBr水溶液中。将该混合物升温至室温，再搅拌16小时。用3 MNaOH水溶液中和该反应混合物，通过Celite垫过滤，用EtOAc(3×100ml)萃取。合并的有机部分经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到1.2g(4.17mmol)的粗产物，无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.87(s，3H)，3.48(dd，1H，J＝11.0，5.9)，3.69(dd，1H，J＝11.0，6.5)，4.01(m，1H)，4.91(d，1H，J＝3.6)，7.30(d，2H，J＝8.3)，7.45(d，2H，J＝8.3)。
实施例3：化合物6
在2L圆底烧瓶中，将4-溴苯甲醛(100g，0.540mol)溶于乙醇(EtOH)中。在快速搅拌下，加入甘氨酸(0.5摩尔当量，20.3g，0.270mol)，然后一次性加入KOH(30.3g，0.540mol)。必需同时加入KOH。因此，当该反应大规模进行时，为控制放热，应该使用冰浴。加入KOH后，该混浊的混悬液变为黄色均相溶液。约15分钟后，开始形成粘稠的白色沉淀。将该混合物在室温、N2下搅拌12小时。加入足量的2N HCl水溶液(～400ml)，使测试溶液的pH试纸变红。然后在约60℃下，搅拌该混合物直至其再次变为均相的黄色溶液。真空除去EtOH，得到含白色沉淀的水性混悬液。滤出沉淀，剩余水溶液用EtOAc洗涤3次。然后用浓NH3水将水溶液碱化至pH约9，真空除去过量的氨。除去NH3后，开始沉淀出产物6。继续蒸发至开始出现沉淀时溶液体积的1/4。然后在真空过滤器上收集产物，将产物真空干躁至恒重(51.3g)。如果NMR显示有不需要的反式立体异构体存在，可通过在H2O/EtOH中重结晶除去。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.64(d，1H，J＝3.6)，5.25(d，1H，J＝3.6)，7.41(d，2H，J＝8.4)，7.53(d，2H，J＝8.4)。
实施例4：化合物7
将化合物6(32.60g，12.53mmol)溶于10％K2CO3水溶液(10％w/v；500ml)中。将二碳酸二叔丁酯(34.2g，157mmol)溶于1，4-二氧六环(500ml)中并加入到上述水溶液中，之后将该混合物在室温下搅拌72小时。真空浓缩该混合物，再溶于100ml 1N NaOH水溶液中，用Et2O(2×100ml)洗涤。水层用1N HCl水溶液酸化，产物用EtOAc(3×200ml)萃取。合并的EtOAc萃取液经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。分离出产物(26.7g，74.0mmol)，无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.32(s，9H)，4.37(d，1H，J＝2.7)，5.23(d，1H，J＝2.7)，7.32(d，2H，8.4)，7.46(d，2H，J＝8.4)。
实施例5：化合物8
将化合物7(5.29g，14.7mmol)和N-羟基琥珀酰亚胺(1.69g，14.7mol)溶于EtOAc(200ml)中，使该混合物冷却至0℃。加入N，N′-二环己基碳二亚胺(3.04g，14.7mmol)，将该混合物搅拌30分钟，升温至室温，再搅拌30分钟。然后冷却至0℃，过滤除去N，N′-二环己基脲副产物沉淀。真空浓缩滤液，将残余物溶于THF(100ml)中。将溶液冷却至0℃，加入NaBH4(5.6g，150mmol)，将该混合物搅拌2分钟。然后向该混合物中滴加水直至气泡产生停止，然后在30分钟内加入与THF等体积的水，之后将混合物升温至室温，搅拌5小时。真空除去二氧六环，加入EtOAc(200ml)，随后用1N HCl水溶液逐步酸化水层。EtOAc层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤，之后真空浓缩，得到4.31g(12.4mmol)8，无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.32(s，9H)，3.46-3.51(m，1H)，3.63-3.73(m，2H)，4.88(br s，1H)，7.29(d，2H，J＝8.3)，7.45(d，2H，J＝8.3)。
实施例6：化合物9(以4为原料)
将化合物4(1.0g，3.5mmol)溶于10％H2SO4水溶液(10％v/v，总共15ml)中，使该溶液回流10小时。用3M NaOH水溶液碱化该反应混合物，用EtOAc(3×50ml)萃取。合并的EtOAc部分经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到710mg(2.9mmol)4，无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 2.80-2.90(br m，1H)，3.30-3.39(br m，1H)，3.40-3.50(br m，1H)，4.52-4.58(m，1H)，7.30(d，2H，J＝8.1)，7.49(d，2H，J＝8.1)。
实施例7：化合物9(以8为原料)
将化合物8(4.31g，12.4mmol)溶于三氟乙酸(TFA，40ml)中。将该混合物在室温下搅拌3小时，真空浓缩。使TFA盐在50ml的2NNaOH水溶液和等体积的EtOAc之间分配。分离各层，水层用EtOAc(50ml)洗涤。合并的EtOAc部分用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到蜡状固体(2.72g，11.1mmol)，其无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300Hz，CD3OD)：δ 2.83-2.90(m，1H)，3.30-3.35(m，1H)，3.46(dd，1H，J＝10.8，4.8)，4.56(d，1H，J＝6.6)，7.29(d，2H，J＝8.6)，7.49(d，2H，J＝8.6)。
实施例8：化合物10
将化合物9(710mg，2.89mmol)、苯甲亚氨酸乙酯盐酸盐(533mg，2.89mmol)和三乙胺(Et3N，0.40ml，2.89mmol)在25ml 1，2-二氯乙烷中混合。在N2下，将该混合物回流搅拌16小时，此时TLC显示出现一种主要产物。冷却至室温后，该混合物用EtOAc稀释，用饱和NH4Cl水溶液洗涤2次，用饱和NaHCO3水溶液洗涤2次，然后经无水Na2SO4干燥。过滤该溶液，真空除去EtOAc，得到885mg(2.66mmol)10，其无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.74-3.89(m，2H)，4.13-4.18(m，1H)，5.59(d，1H，J＝6.6)，7.30(d，2H，J＝8.4)，7.46-7.57(m，5H)，7.99-8.02(m，2H)。
实施例9：化合物11
将化合物10(885mg，2.66mmol)悬浮于CH2Cl2(15ml)中，冷却至-78℃。通过注射器加入三氟化二乙氨基硫(DAST，0.53ml，4.00mmol)，在1小时内将该混合物升温至室温，然后在N2下，搅拌16小时。通过缓慢加入H2O猝灭过量的DAST，之后再用CH2Cl2稀释该混合物。有机层用H2O、饱和NaHCO3水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物(950mg)用硅胶色谱法纯化，用15∶85 EtOAc/己烷洗脱，得到油状物11(420mg，1.25mmol)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ4.23-4.35(m，1H)，4.45-4.75(m，2H)，5.43(d，1H，J＝6.9)，7.17(d，2H，8.3)，7.36-7.47(m，5H)，7.96(d，2H，J＝8.3)。
实施例10：化合物12
在经火焰干燥的圆底烧瓶中，将化合物11(807mg，2.41mmol，由氯霉素的纯对映体或由(+/-)-苏-对溴苯基丝氨酸外消旋体制备)溶于无水THF(10ml)中，冷却至-78℃。在剧烈搅拌下，加入n-BuLi(1.6M的己烷溶剂，3.02ml，4.83mmol)。10分钟后，加入硼酸三甲酯(0.55ml，4.83mmol)，在1小时内将该混合物升温至室温，然后搅拌6小时。该混合物用1N HCl水溶液猝灭，用EtOAc萃取3次。合并的EtOAc部分用盐水洗涤3次，经无水Na2SO4干燥。真空除去EtOAc，得到805mg产物，用快速柱色谱法纯化，开始用1∶1己烷/EtOAc洗脱除去杂质，随后用1∶9 MeOH/CH2Cl2洗脱，得到油状产物(285mg，0.953mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 4.29-4.39(m，1H)，4.69(dd，2H，J＝47.1，4.2)，5.64(d，1H，J＝6.6)，7.37(d，2H，J＝8.1)，7.47-7.52(m，2H)，7.56-7.62(m，1H)，7.67(d，1H，J＝7.5)7.74-7.82(m，1H)，8.01(d，2H，J＝7.2)。
LRMS(ESI-)m/z：298.0(M-H+C16H14BFNO3的计算值：298.1)。
实施例11：化合物13
将化合物6(20.6g，0.079mol)悬浮于400ml的无水MeOH中。快速搅拌该混合物，在冰浴中冷却至0℃。缓慢通入无水HCl气体。10分钟后，所有的固体均溶解。继续酸化10分钟直至混合物变为均相，此时该MeOH溶液使pH试纸变得很红。在反应仪器上安装干燥管，将反应混合物回流8小时，随后在室温下搅拌12小时。真空浓缩该混合物，然后将其悬浮于300ml EtOAc和100ml水的混合物中。在快速搅拌下，极缓慢地加入3N NaOH直至悬浮物溶解。继续加入碱直至pH达到10。分离各层，EtOAc部分用盐水洗涤(2x)，经无水Na2SO4干燥。真空浓缩，得到白色粉末13(15.3g)，其无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHZ，CD3OD)：δ 3.59(d，1H，J＝4.5)，3.66(s，3H)，4.92(d，1H，J＝4.5)，7.29(d，2H，J＝8.3)，7.49(d，2H，J＝8.3)。
实施例12：化合物14
在室温下，将1，1′-羰基二咪唑(23.6g，0.146mol)溶于250ml的无水1，2-二氯乙烷中，随后加入三乙胺(Et3N，12.2g，16.8ml)。在另一烧瓶中，将13(33.26g，0.121mol)溶于125ml的无水四氢呋喃(THF)和等当量的三乙胺中。用125ml的1，2-二氯乙烷稀释THF溶液，然后在N2下，在2小时内加入到1，1’-羰基二咪唑溶液中。加入结束后，将混合物在室温、N2下搅拌2小时。真空浓缩该反应混合物，残余物用300ml EtOAc稀释，用5×200ml的2N HCl、3×300ml的饱和NaHCO3和2×200ml的盐水洗涤。EtOAc层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到34.27g的14，1H NMR测定其纯度为80-90％。化合物14无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.83(s，3H)，4.34(d，1H，J＝5.0)，5.65(d，1H，J＝5.0)，7.36(d，2H，J＝8.7)，7.60(d，2H，J＝8.7)。
实施例13：化合物15
将化合物14(55.3g，0.184mmol)溶于375ml MeOH中。将该溶液冷却至0℃，分批加入NaBH4(2当量，13.9g，0.369mol)，注意勿使温度超过20℃。加入最后一份后，停止冷却，搅拌混合物2小时。缓慢加入冰乙酸直至达到pH 7。该混合物通过Celite过滤并真空浓缩。使残余物在EtOAc(375ml)和2N HCl(500ml)之间分配。有机层用2N HCl(2×300ml)、饱和NaHCO3水溶液(2×250ml)和盐水(250ml)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。使产物在己烷/EtOAc中结晶，得到26.3g的15。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 3.64-3.72(m，3H)，5.38(d，1H，J＝5.1)，7.32(d，2H，J＝8.6)，7.57(d，2H，J＝8.6)。
实施例14：化合物16
将化合物15(7.57g，0.0278mol)悬浮于275ml的CH2Cl2中。在N2和快速搅拌下，将该两相混合物在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。用注射器在2-3分钟内滴加DAST(5.51ml，6.72g，0.0417mol)。30分钟后，将该混合物转移至冰水浴，并搅拌30分钟，在此期间混合物中的固体溶解。再加入1ml的DAST，以确保反应完全。将该混合物在0℃下搅拌20分钟，然后升温至室温。将该混合物在室温下搅拌20分钟，然后冷却至0℃。在极快搅拌下，在30分钟内滴加饱和NaHCO3水溶液猝灭过量的DAST。气泡生成停止后，水层略显碱性(7＜pH＜9)。用足量的EtOAc(～600ml)稀释该CH2Cl2，使用水萃取时有机层处于溶液上部。有机层用饱和NaHCO3水溶液(1×300ml)、1NHCl(2×200ml)、饱和NaHCO3水溶液(3×200ml)和盐水(1×150ml)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤，真空浓缩该混合物，得到8.13g棕色油。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 3.87-3.98(dm，1H，J＝20(F-CHN))，4.54(dd，2H，J＝46.7(CH2-F)，4.2)，5.42(d，1H，J＝5.1)，7.34(d，2H，J＝8.4)，7.59(d，2H，J＝8.4)。
实施例15：化合物17
将化合物16(8.13g或0.0297)溶于200ml的CH3CN中。然后加入Boc2O(9.71g，1.5当量，0.0445mol)和DMAP(362mg，0.00297mol，0.1当量)。将该混合物在室温、N2下搅拌2小时。真空浓缩该混合物，随后使其在200ml的EtOAc和200ml的1N HCl之间分配。EtOAc层用2N HCl(3×100ml)、饱和NaHCO3水溶液(2×100ml)和盐水洗涤。过滤EtOAc层，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物在己烷/EtOAc中重结晶2次。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.53(s，9H)，4.29-4.40(dm，1H，J＝24.6)，4.63-4.98(m，2H)，5.53(d，1H，J＝4.2)，7.34(d，2H，J＝8.4)，7.61(d.2H，J＝8.4)。
实施例16：化合物18
将化合物17(0.050g，0.134mmol)悬浮于5ml的CH3OH中。在快速搅拌条件下，在室温下加入Cs2CO3(8.7mg，20mol％，0.0267mmol)。混合物中的固体在约10分钟内溶解，之后继续搅拌10分钟，此时TLC(3∶1己烷/EtOAc)检测表明反应完成。真空浓缩该反应混合物，使残余物在20ml的EtOAc和10ml的H2O之间分配。H2O层用1N HCl水溶液轻微酸化，剧烈振摇该混合物，分离各层。EtOAc层用饱和NaHCO3水溶液(1×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤。EtOAc层经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到43.4mg(0.124mmol)为白色泡沫状物的18。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.33(s，9H)，3.90-4.57(m，4H)，7.29(d，2H，J＝8.1)，7.46(d.2H，J＝8.1)。
实施例17：化合物22
在室温下，将化合物18(0.740g，2.13mmol)在10ml TFA/H2O(9/1，v/v)中搅拌1小时。真空浓缩该混合物，使其在30ml的EtOAc和30ml的1N NaOH水溶液之间分配。剧烈振摇该混合物，让各层分离。有机层用盐水(2x)洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到0.484g(1.95mmol，92％)的产物，将其溶于20ml的CH2Cl2中。向该溶液中加入1ml的Et3N和1ml的二氟乙酰氯，其按文献方法(Yu，K.-L.等，J.Med.Chem.，1996，39，2411-2421.)制备。1小时后，真空浓缩该混合物。将残余物放入10ml的1∶8∶1(v/v/v)Et3N/MeOH/H2O溶液，在室温下搅拌1小时，以使苄基氧上的任何二氟乙酰基裂解。然后真空浓缩该混合物，使其在EtOAc(50ml)和1N HCl(50ml)之间分配。EtOAc层用20ml的1N HCl洗涤2次，用20ml饱和NaHCO3水溶液洗涤2次，用20ml盐水洗涤2次。然后经无水Na2SO4干燥EtOAc萃取液，过滤，真空浓缩。化合物22(584mg，1.79mmol)无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.25-4.67(m，3H)，4.90(d，1H，J＝3.9)，5.98(t，1H，J＝53.9)，7.30(d.2H，J＝8.6)，7.48(d，2H，J＝8.6)。
实施例18：化合物19
在50ml的圆底烧瓶中，将化合物18(1.03g，2.94mmol)溶于CH2Cl2(30ml)中。用注射器加入2-甲氧基丙烯(339μl，3.54 mmol)，随后加入对甲苯磺酸(p-TsOH)水合物单晶体。约1分钟后，该混合物变黄。TLC(4∶1己烷/EtOAc)显示还存在一些18。再加入5滴2-甲氧基丙烯，2分钟后再加入5滴，此时TLC表明反应完成。真空除去CH2Cl2，使残余物在EtOAc(75ml)和饱和NaHCO3水溶液(50ml)之间分配。分别用50ml NaHCO3和盐水将EtOAc层各洗涤2次。EtOAc层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到黄色油(1.08g，2.78mmol)，其固化为蜡质固体，无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.49(s，9H)，1.55(s，3H)，1.67(s，3H)，3.70-3.85(m，1H)，4.34-4.53(m，2H)，5.08(d.1H，J＝7.5)，7.37(d，2H，J＝8.6)，7.54(d，2H，J＝8.6)。
实施例19：化合物23
将化合物19(309mg，0.796mmol)放入用微波炉干燥的、装有磁力搅拌棒的50ml圆底烧瓶中。立即用橡皮塞塞紧瓶口，充入干燥N2。用注射器加入无水THF(15ml)，用长套管充入含N2溶剂达10分钟。然后将该混合物冷却至-78℃。在剧烈搅拌下，用注射器在3分钟内滴加n-BuLi(850μl，0.995mmol)，得到澄清的橙色溶液。20分钟后，用微波炉干燥的气密注射器在1分钟内滴加B(OMe)3(158μl，1.39mmol，经活化的4_分子筛共贮存至少48小时)。将该混合物升温至室温，并在N2下搅拌16小时。在剧烈搅拌下，加入约20ml饱和NH4Cl水溶液，其导致生成的白色沉淀分散于两液相中。再将该混合物搅拌90分钟，然后用EtOAc和H2O稀释，直至所有沉淀都溶解。分离有机层，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤，真空除去EtOAc，得到328mg黄色油。该产物用硅胶色谱法纯化，得到23(163mg)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.49(s，9H)，1.56(s，3H)，1.67(s，3H)，3.74-3.88(m，1H)，4.33-1.52(m，2H)，5.10(d，1H，J＝7.5)，7.43(d，2H，J＝8.1)，7.64(d，2H，J＝8.1)。LRMS(ESI-)m/z：352.2(M-H+C17H24BFNO5的计算值：352.7)。
实施例20：化合物28
该实施例为Suzuki偶联方法A的实例。将化合物11(47mg，0.14mmol)和吡啶-3-硼酸(21mg，0.17mmol)溶于5.0ml的THF中。加入Pd(PPh3)4(11mg，0.0098mmol)和3.0ml的10％(w/v)Na2CO3水溶液。使该反应混合物回流16小时，冷却，用EtOAc稀释，分别用10％(w/v)Na2CO3水溶液和盐水各洗涤2次。然后EtOAc层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用1∶1己烷/EtOAc洗脱)，得到47mg(0.14mmol)26。在一密封管中，将中间体26和6M HCl水溶液加热至105℃，并在此温度下保持16小时。使该混合物冷却至室温，用3N NaOH碱化至pH 10。产物用EtOAc萃取，萃取液经Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到42mg的脱保护的游离胺，估计其被与苯甲酸有关的副产物所污染，该副产物是由保护基团的裂解而产生的。按29的合成中的方法，使该粗残余物二氯乙酰化。用硅胶色谱法纯化(用7.5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱)，得到10mg产物。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 4.31-4.74(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.49-7.56(m，3H)，7.64(d，2H，J＝8.4)，8.09(ddd，1H，J＝8.0，2.3，1.5)，8.50(br d，1H，J＝3.9)，8.78(br s，1H)。LRMS(ESI+)m/z：356.9(M+H+C16H16Cl2FN2O2的计算值：357.0)。
实施例21：化合物27
使硼酸12(43mg，0.144mmol)、咪唑(15mg，0.215mmol)和4_粉状分子筛(110mg)在CH2Cl2(4.0ml)和吡啶(23μl)中混合。在快速搅拌下，加入Cu(OAc)2(26mg，0.144mmol)，搅拌该混合物，在室温下在空气中暴露40小时。用3ml的2M NH3的MeOH溶液猝灭该混合物。该混合物通过Celite过滤并真空浓缩。该产物用快速柱色谱法纯化(19∶1 CH2Cl2/MeOH)。尽管1H NMR显示有明显的副产物与需要的产物一起被洗脱出来，但是该混合物无需进一步纯化就可直接使用。LRMS(ESI+)m/z：321.9(M+H+C19H17FN3O的计算值：322.1)。
实施例22：化合物29
在封闭管中，将化合物27(27mg，0.084mmol)和6N HCl(3.0ml)一起加热至100℃并保持16小时。将该混合物冷却至室温，用3NNaOH水溶液碱化，用EtOAc萃取3次。合并的EtOAc部分经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到9mg残余物。LRMS(ESI+)m/z：236.1(M+H+C12H15FN3O的计算值：236.1)。
使该残余物在含Et3N(26μl 0.189mmol)和二氯乙酸甲酯(13μl，0.126mmol)的MeOH(5.0ml)中回流3小时。真空浓缩该混合物，用硅胶色谱法纯化(7.5％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到29(6.0mg，0.017mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 4.33-4.75(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.26(s，1H)，7.13(s，1H)，7.51-7.58(m，5H)，8.10(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z：345.8(M+H+C14H15Cl2FN3O2的计算值：346.0)。
实施例23：化合物34
化合物32按Pines等的方法(参见上文)制备。将1，1′-羰基二咪唑(CDI，5.06g，31.2mmol)与Et3N(2.17ml，15.6mmol)的1，2-二氯乙烷(50ml)溶液放入250ml的圆底烧瓶中。将化合物32(4.00g，15.6mmol)加入盛有1，2-二氯乙烷(50ml)的烧杯中。向烧杯中加入Et3N(4.34ml，31.2mmol)，立即形成浓悬浮液。再加入1，2-二氯乙烷(20ml)和THF(50ml)以使该悬浮液变稀。在30分钟内，使该混合物分批加入到CDI悬浮液。将大致均相和变黄的混合物搅拌12小时。真空除去溶剂，使残余物在2N HCl水溶液和EtOAc之间分配。EtOAc层用2N HCl(2×45ml)、饱和NaHCO3水溶液(2×30ml)和盐水洗涤。经无水Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到3.27g的黄色蓬松固体33，其无需进一步纯化就可直接使用。
将化合物33(1.00g，4.06mmol)溶于MeOH(50ml)中，在冰浴中冷却至0℃。在5分钟内，分批加入NaBH4(308mg，8.13mmol)。停止生成泡沫后，TLC(5％MeOH的CH2Cl2溶液)显示仍有原料存在，所以再加入100mg的NaBH4。泡沫生成停止后，用冰HOAc猝灭该混合物，直至pH约至7。真空浓缩该混合物，使其在EtOAc和1N HCl之间分配。EtOAc层用饱和NaHCO3水溶液(2×40ml)和盐水(40ml)洗涤，经无水Na2SO4干燥。该产物用硅胶色谱法分离(2％→3％→4％→10％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到128mg的油34。另外一部分产物通过蒸发水层，随后用热EtOAc研磨获得(153mg，总共281mg)。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ3.69(br s，3H)，5.50(br s，1H)，7.58(d，2H，J＝7.8)，7.79(d，2H，J＝7.8)。
实施例24：化合物35
与化合物11的合成相同，用DAST进行氟化反应。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.89-3.97(m，1H)，4.49-4.66(m，2H)，5.55(d，1H，J＝4.8)，7.59(d，2H，J＝8.1)，7.80(d，2H，J＝8.4)。
实施例25：化合物38
化合物36(2.12g)按照von Strandtmann(参见上文)的方法制备。在密封管中，使化合物36与10％H2SO4水溶液一起加热至100℃，保持4小时。冷却至室温后，该混合物用1M NaOH碱化，用正丁醇萃取3次。合并正丁醇部分，经无水Na2SO4干燥。蒸发溶剂，得到1.61g的37。
将化合物37(1.61g，7.70mmol)溶于1，2-二氯乙烷(100ml)、苯甲亚氨酸乙酯盐酸盐(1.42g，7.70mmol)和Et3N(1.06ml，7.70mmol)中。使该混合物回流12小时，冷却至室温，用EtOAc稀释。该溶液用饱和NH4Cl水溶液(3x)和饱和NaHCO3(1x)洗涤，经无水Na2SO4干燥。冷却，加入几滴己烷，产物从EtOAc中沉淀析出，得到0.62g的38(2.1mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.60(s，3H)，3.79(dd，1H，J＝11.3，5.9)，3.89(dd，1H，J＝11.3，4.1)，4.14-4.20(m，1H)，5.70(d，1H，6.3)，7.47-7.61(m，5H)，8.01-8.05(m，4H)。
实施例26：化合物39
将化合物38(0.62g，2.1mmol)悬浮于CH2Cl2(15ml)，冷却至-78℃。用注射器加入DAST(0.42ml，3.1mmol)，将该溶液搅拌过夜，在此期间随着冷浴升温，使其升至室温。真空除去溶剂，所得产物用硅胶色谱法分离(1∶4 EtOAc/己烷)，得到0.17g的39。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.60(s，3H)，4.30-4.40(m，1H)，4.63-4.67(m，1H)，4.79-4.81(m，1H)，5.74(d，1H，6.9)，7.48-7.63(m，5H)，8.01-8.07(m，4H)。
实施例27：化合物40
在密封管中，将化合物39(0.17g，0.58mmol)悬浮于6N HCl水溶液(5ml)中。将混合物加热至100℃，保持12小时。将该混合物冷却至室温，用3N NaOH碱化，产物用CH2Cl2(3x)萃取。合并的CH2Cl2部分经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到40(0.113g，0.541mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.60(s，3H)，3.04-3.15(m，1H)，4.09-4.48(m，3H)，4.71(d，1H，J＝6.0)，7.52(d，2H，J＝8.1)，7.90(d，2H，J＝8.1)。
实施例28：化合物41
用使27转变为29的方式，使化合物40二氯乙酰化生成41。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ 2.57(s，3H)，4.31-4.78(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.23(s，1H)，7.53(d，2H，J＝8.6)，7.95(d，2H，J＝8.6)。
实施例29：化合物43
将化合物35(100mg，0.454mmol)溶于3ml的EtOH，移入25ml圆底烧瓶。加入盐酸羟胺(38mg，0.545mmol)，随后加入Et3N(127μL，0.909mmol)。将该混合物搅拌回流3小时，此时TLC显示原料已完全耗尽。真空浓缩该混合物，得到232mg黄色油，其无需进一步纯化就可直接使用。将一部份油(115mg)溶于10ml原甲酸三乙酯。在N2下，将该混合物在120℃下搅拌2小时，然后在室温下搅拌48小时。TLC(10％MeOH的CH2Cl2溶液)上出现一个新的大斑点。真空除去原甲酸三乙酯，使残余物在EtOAc和1N NaOH水溶液之间分配。有机层用1N NaOH水溶液(2x)和盐水(2x)洗涤。EtOAc层经无水Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到84mg油。该产物用chromatotron纯化(1mm硅胶板，60∶40→50∶50→40∶60己烷/EtOAc)。再用chromatotron纯化(2％MeOH的CH2Cl2)，得到白色固体43(20mg)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.93-4.04(m，1H)，4.49-4.67(m，2H)，5.53(d，1H，J＝5.1)，7.59(d，2H，J＝8.3)，8.17(d，2H，J＝8.3)，9.28(s，1H)。
实施例30：化合物45
将化合物43(20mg，0.076mmol)溶于CH3CN(2ml)中。加入Boc2O(25mg，0.114mmol)，随后加入DMAP单晶体(约1mg，0.008mmol)。2小时后，TLC(1∶1己烷/EtOAc)显示反应完成。真空除去CH3CN，将所得白色固体溶于EtOAc中，其用1N HCl水溶液(2x)洗涤，随后用NaHCO3(2x)、盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到白色固体44(28mg)。
将化合物44(0.026mg，0.072mmol)溶于MeOH(2ml)中，一次性加入Cs2CO3(5mg，0.014mmol)。1小时后，TLC(1∶1己烷/EtOAc)显示为单一产物。真空除去溶剂，加入EtOAc，在室温下快速搅拌该混合物。然后加入H2O，随后滴加0.5M HCl直至固体溶解。有机相用0.5N HCl洗涤，随后用饱和NaHCO3水溶液(2x)和盐水洗涤。然后有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油，用chromatotron纯化(1mm硅胶板，4∶1己烷/EtOAc-1∶1己烷/EtOAc)，得到45(13mg，0.039mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.31(s，9H)，4.01-4.63(m，3H)，4.94(d，1H，J＝2.7)，7.55(d，2H，J＝8.4)，8.05(d，2H，J＝8.4)，9.24(s，1H)。
实施例31：化合物47
在10ml烧瓶中，将化合物45溶于2.5ml的9∶1 TFA/H2O中。将该混合物在室温下搅拌30分钟，此时TLC显示反应完成。真空浓缩该混合物，在快速搅拌条件下，使浓缩物在1N NaOH水溶液和EtOAc之间分配。EtOAc层用盐水(1x)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到11mg的油46。
在盛有6mg(0.025mmol)46的10ml圆底烧瓶中，加入MeOH(2ml)，随后加入Et3N(3.5μl，0.025mmol)和二氯乙酸甲酯(13.1μL，0.025mmol)。使该混合物回流4小时，此时TLC显示未发生反应。再加入26.2μl的二氯乙酸甲酯，随后加入7μl Et3N。使该混合物回流20小时，之后TLC显示反应完成。该产物用chromatotron纯化(1mm硅胶板，99∶1 CH2Cl2/MeOH)，得到5mg 47。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 4.32-4.72(m，3H)，5.03(d，1H，J＝2.7)，6.25(s，1H)，7.56(d，2H，J＝8.3)，8.05(d，2H，J＝8.3)，9.24(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z：346.0(M-H+C13H11Cl2FN3O3的计算值：346.0)。
实施例32：化合物24
在200ml圆底烧瓶中，将2-氨基-1，3，4-噻二唑(1.00g，9.89mmol)加入到10ml的48％HBr水溶液中。加入水(10ml)，生成黄色溶液，大部分固体在该溶液中溶解。使该混合物冷却至0℃，加入CuBr(142mg，0.989mmol)，生成具有一些沉淀的不透明棕色溶液。将NaNO2(682mg，9.89mmol)溶于25ml的H2O，在45分钟内将其滴加到噻二唑混合物。加入第一滴NaNO2溶液后，该混合物变为不透明的深绿色。该溶液缓慢变为棕黄色并产生棕色气体。从气体开始出现时起，将该混合物在0℃下再搅拌10分钟。在30分钟内将该混合物升温至室温。滴加饱和NaHCO3水溶液，直至气泡产生停止，pH为8.5。向该混合物中加入50ml的EtOAc，快速搅拌该双相混合物。该混合物用Celite垫过滤除去固体，然后分离各层。有机层用盐水洗涤(2x)。水层用EtOAc萃取，用盐水洗涤(1x)。合并的有机层经Na2SO4干燥。剩余的水溶性物质用EtOAc(50ml)通过剧烈搅拌12小时再萃取一次。该EtOAc层用盐水洗涤，与经Na2SO4干燥的EtOAc层合并。将该溶液过滤，真空蒸发，得到棕褐色固体24(1.22g，7.36mmol)，其无需进一步纯化就可直接使用。
实施例33：化合物25
该实施例为Suzuki偶联方法B的实例。将化合物23(19mg，0.0538mmol)溶于THF(1ml)、DMF(1ml)和H2O(0.5ml)中。将该混合物在室温下搅拌直至所有的物料都溶解，然后加入2-溴-1，3，4-噻二唑(24：5.0mg，0.027mmol)。该溶液中通过长针通入N2达5分钟。加入PdCl2(dppf)，然后该溶液中通入N2达5分钟。然后，在N2下，将该混合物在55℃下搅拌18小时，然后在室温下再搅拌30小时。真空浓缩所得澄清棕色溶液。用chromatotron纯化(硅胶，1mm板，1∶9 EtOAc/己烷-1∶4 EtOAc/己烷)，得到为黄色油状物的化合物25(5.4mg，0.0137mmol)。
试验中发现，通过换用偶联方法C能显著提高收率。将化合物23(0.330g，0.934mmol)和24(0.385g，2.34mmol)溶于甲苯、正丁醇和H2O(8ml∶8ml∶2ml)的混合物，加入Cs2CO3(0.912g，2.80mmol)。该混合物中通入N2，加入Pd(PPh3)4。该混合物再次中通入N2达5分钟，然后将该混合物在70℃、N2下快速搅拌12小时。真空浓缩该混合物，使残余物在H2O(75ml)和EtOAc(75ml)之间分配。分离各层，EtOAc层用盐水(2×50ml)洗涤。EtOAc层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到0.720g黄色油。用硅胶色谱法纯化(用5∶1→2∶1→1∶1己烷/EtOAC洗脱)，得到化合物25(0.220g)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.50(s，9H)，1.58(s，3H)，1.70(s，3H)，3.80-3.94(m，1H)，4.42-4.61(m，2H)，5.20，(d.1H，J＝7.5)，7.64(d，2H，J＝8.3)，8.05(d，2H，J＝8.3)，9.45(s，1H)。
实施例34：化合物48
将化合物25(5.4mg，0.014mmol)移至25ml圆底烧瓶，加入2.5ml的9∶1 TFA/H2O(v/v)。将生成的鲜黄色混合物在室温下搅拌18小时。真空除去溶剂，将残余物溶于MeOH和甲苯的混合物3次，每次溶解后蒸发近干。所回收的产物为油状物(4.9mg，0.013mmol)，其无需进一步纯化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.59-3.70(m，1H)，4.30-4.71(m，2H)，4.92(d，1H，J＝8.1)，7.64(d，2H，J＝8.3)，8.08(d，2H，J＝8.3)，9.47(s，1H)。
在10ml圆底烧瓶中，将上述产物溶于2ml的MeOH。在该混合物中加入Et3N(9.7μL，0.070mmol)，随后加入二氟乙酸甲酯(3.0μL，0.035mmol)。使该混合物回流16小时，此时TLC显示部分原料仍未反应。再加3滴Et3N，随后加2滴二氟乙酸甲酯。3小时后，所有的原料均被消耗。使该混合物冷却至室温，真空蒸发至干。用chromatotron纯化(硅胶，1mm板)，得到化合物48(4.1mg，012mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 4.31-4.72(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.9)，5.98(t，1H，J＝53.9)，7.58(d，2H，J＝8.3)，7.99(d，2H，J＝8.3)，9.43(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z：330.1 (M-H+C13H11F3N3O2S的计算值：330.1)。
实施例35：化合物49
按照Suzuki偶联方法A，用18和合适的硼酸制备联芳中间体。通过用90/10(v/v)TFA/H2O简略处理，除去Boc基团。如同29的合成一样进行二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.31-4.80(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.6)，6.26(s，1H)，7.52(d，2H，8.3)，7.65(d，2H，J＝8.3)，7.79(s.4H)。LRMS(ESI-)m/z：379.0(M-H+C18H14Cl2FN2O2379.0)。
实施例36：化合物50
按照Suzuki偶联方法A，用22和合适的硼酸制备联芳中间体。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.27-4.68(m，3H)，4.99(d，1H，J＝4.5)，6.00(t，1H，J＝53.9)，7.52(d，2H，J＝8.1)，7.67(d，2H，J＝8.1)，7.76-7.82(m，2H)。LRMS(ESI-)m/z：347.1(M-H+C18H14F3N2O2的计算值：347.1)。
实施例37：化合物51
按照Suzuki偶联方法A，用22和合适的硼酸制备联芳中间体。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.14(s，3H)，4.30-4.68(m，3H)，5.00(d，1H，J＝4.5)，6.00(t，1H，J＝54)，7.53(d，2H，J＝8.3)，7.70(d，2H，J＝8.3)，7.88(d，2H，J＝8.6)，8.00(d，2H，J＝8.6)。LRMS(ESI-)m/z：400.1(M-H+C18H17F3NO4S的计算值：400.1)。
实施例38：化合物52
按照Suzuki偶联方法B，用22与合适的硼酸制备联芳中间体。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.26-4.64(m，3H)，4.93(d，1H，J＝4.8)，6.01(t，1H，J＝53.9)，7.40-7.45(m，4H)，7.60-7.66(m，3H)。LRMS(ESI-)m/z：328.1(M-H+C15H13F3NO2S的计算值：328.1)。
实施例39：化合物53
按照Suzuki偶联方法B，用22和合适的硼酸制备联芳中间体。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.25-4.65(m，3H)，4.92(d，1H，J＝4.5)，6.01(t，1H，J＝53.9)，7.06-7.08(m，1H)，7.36-7.42(m，4H)，7.61(d，2H，J＝8.4)。LRMS(ESI+)m/z：352.0(M+Na+C15H14F3NNaO2S的计算值：352.1)。
实施例40：化合物54
按照Suzuki偶联方法B，用18和该硼酸制备联芳中间体。通过用9/1(v/v)TFA/H2O简略处理，除去Boc基团。如同29合成中一样进行二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.33-4.79(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.26(s，1H)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.69-7.75(m，4H)，8.56(d，2H，J＝5.7)。LRMS(ESI+)m/z：357.1(M+H+C16H16Cl2FN2O2的计算值：357.1)。
实施例41：化合物55
按照Suzuki偶联方法B，用硼酸23和化合物24制备联芳中间体。通过用9/1(v/v)TFA/H2O简略处理，除去保护基团。如同29合成中一样进行二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.34-4.76(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.0)，6.24(s，1H)，7.58(d，2H，J＝8.3)，7.97(d，2H，J＝8.3)，9.42(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z：362.0(M-H+C13H11Cl2FN3O2S的计算值：362.0)。
实施例42：化合物56
将化合物54(29.4mg，0.0824mmol)溶于5ml CH2Cl2。将混合物冷却至0℃，加入间氯过苯甲酸(m-CPBA，38mg，0.16mmol)并搅拌。5分钟后，使混合物温度升至室温，搅拌12小时。真空浓缩该混合物，产物用硅胶色谱法纯化，用2％、3％、4％、6％和10％MeOH的CH2Cl2溶液顺序洗脱。得到白色固体化合物56(22.5mg，0.060mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.32-4.75(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.25(s，1H)，7.56(d，2H，J＝8.4)，7.74(d，2H，J＝8.4)，7.84(d，2H，J＝7.2)，8.34(d，2H，J＝7.2)。LRMS(ESI-)m/z：371.0(M-H+C16H14Cl2FN2O3的计算值：371.0)。
实施例43：化合物57
按照Suzuki偶联方法B，用18和合适的硼酸制备联芳中间体。通过用9/1(v/v)TFA/H2O简略处理，除去保护基团。如同48合成中一样进行二氟乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.28-4.68(m，3H)，5.00(d，1H，J＝4.2)，5.99(t，1H，J＝53.9)，7.55(d，2H，J＝8.1)，7.70-7.77(m，4H)，7.84(d，2H，J＝7.2)，8.56(d，2H，J＝6.3)。LRMS(ESI+)m/z：325.2(M+H+C16H16F3N2O2的计算值：325.1)。
实施例44：化合物58
由68制备化合物58，如同由54制备56。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.30-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.25(s，1H)，7.55-7.67(m，5H)，7.87(d，1H，J＝8.1)，8.30(d，1H，J＝7.2)，8.58(br s，1H)。LRMS(ESI-)m/z：371.0(M-H+C16H14Cl2FN2O3的计算值：371.0)。
实施例45：化合物59
按照Suzuki偶联方法A，用11和合适的硼酸制备联芳中间体。除去苯基噁唑啉保护基团，引入如同29的合成中的二氯乙酸酯基团。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.30-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.26(s，1H)，7.54-8.70(m，8H)。LRMS(ESI-)m/z：354.8(M-H+C16H14Cl2FN2O2的计算值：355.0)。
实施例46：化合物60
化合物60用59制备，其制备方式与这些实施例中从相应吡啶制备吡啶N-氧化物的方法相同。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.33-4.78(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.25(s，1H)，7.57(d，2H，J＝8.4)，7.75(d，2H，J＝8.4)，7.87(d，2H，J＝7.5)，8.38(d，2H，J＝7.5)。LRMS(ESI-)m/z：370.8(M-H+C16H14Cl2FN2O3的计算值：371.0)。
实施例47：化合物61
按照Suzuki偶联方法A，用11和合适的硼酸制备联芳中间体。裂解苯基噁唑啉保护基团，按29的合成方法引入二氯乙酸酯。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.14(s，3H)，4.36-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.54(d，2H，J＝8.3)，7.68(d，2H，J＝8.3)，7.87(d，2H，J＝8.7)，8.01(d，2H，J＝8.7)。LRMS(ESI-)m/z：431.8(M-H+C18H17Cl2FNO4S的计算值：432.0)。
实施例48：化合物62
游离胺中间体的制备与合成28中的方法相同。用氯乙酰氯使氮一氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.00-4.03(m，2H)，4.27-4.70(m，3H)，5.00(d，1H，J＝3.9)，7.49-7.55(m，3H)，7.66(d，2H，J＝8.4)，8.09(d app t，1H，J＝7.8，2.4)，8.50(dd，1H，J＝4.8，1.5)，8.78(br d，1H，J＝2.4)。LRMS(ESI+)m/z：321.0(M+H+C16H15ClFN2O2的计算值：357.1)。
实施例49：化合物63
按28的合成方式，用氯氟乙酸乙酯制备。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.31-4.70(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，主要非对映体6.49(d，1H，J＝49.8)，次要非对映体6.51(d，1H，J＝49.8)，7.49-7.56(m，3H)，7.63-7.67(m，2H)，8.07-8.11(m，1H)，8.49-8.51(m，1H)，8.78(br d，1H，J＝1.5)。LRMS(ESI)m/z：338.9(M-H+ C16H14ClF2N2O2的计算值：339.1)。
实施例50：化合物64
按照Suzuki偶联方法A，用12和2-溴吡啶制备联芳中间体。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ4.28-4.74(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.33-7.37(m，1H)，7.53(d，2H，J＝8.1)，7.18-7.93(m，4H)，8.58-8.60(m，1H)。LRMS(ESI-)m/z：354.8(M-H+C16H14Cl2FN2O2的计算值：355.0)。
实施例51：化合物65
化合物65按与59相同的方式用氯氟乙酸乙酯制备。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 4.32-4.70(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，主要非对映体6.48(d，1H，J＝49.8)，次要非对映体6.50(d，1H，J＝50.1)，7.55-7.58(m，2H)，7.73-7.78(m，4H)8.57(br d，2H，J＝5.7)。LRMS(ESI)m/z：338.8(M-H+C16H14ClF2N2O2的计算值：339.1)。
实施例52：化合物66
按照Suzuki偶联方法A，用12和合适的溴化物制备联芳中间体。如同合成29中一样进行除去保护基团和二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.34-4.72(m，3H)，5.01(d，1H，J＝2.4)，6.25(s，1H)，7.52(d，2H，J＝6.3)，7.57(d，1H，J＝2.6)7.84(d，1H，J＝2.6)，7.90(d，2H，J＝6.3)。LRMS(ESI-)m/z：360.7(M-H+C14H12Cl2FN2O2S的计算值：361.0)。
实施例53：化合物67
按照Suzuki偶联方法A，用12和合适的溴化物制备联芳中间体。如同合成29中一样进行除去保护基团和二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.32-4.75(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.6)，6.26(s，1H)，7.59(d，2H，J＝8.3)，7.70(d，2H，J＝8.3)9.06(s，2H，)，9.13(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z：357.8(M+H+C15H15Cl2FN3O2的计算值：358.0)。
实施例54：化合物68
按照Suzuki偶联方法A，用溴化物11和合适的硼酸制备联芳中间体。如同合成29中一样进行除去保护基团和二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.31-4.74(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.48-7.51(m，1H)，7.54(d，2H，J＝8.3)，7.64(d，2H，J＝8.3)8.08(ddd，1H，J＝8.0，2.4，1.8)，8.50(dd，1H，4.8，1.5)，8.77(dd，1H，J＝2.4，0.9)。LRMS(ESI-)m/z：354.8(M-H+C16H14Cl2FN2O2的计算值：355.0)。
实施例55：化合物69
按照Suzuki偶联方法A，用溴化物11和合适的硼酸制备联芳中间体。如同合成29中一样进行除去保护基团和二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.63(s，3H)，4.31-4.74(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，6.27(s，1H)，7.51(d，2H，J＝8.3)，7.67(d，2H，J＝8.3)，7.75(d，2H，J＝8.6)8.06(d，2H，J＝8.6)。
实施例56：化合物71
该化合物按照类似41的方式，用氯氟乙酸乙酯替换二氯乙酸甲酯制备。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.58(s，3H)，4.31-4.71(m，3H)，5.03(br d，1H，J＝3.9)，主要非对映体6.46(d，1H，J＝49.8)，次要非对映体(d，1H，J＝50.1)，主要非对映体7.53(d，2H，J＝8.1)，次要非对映体7.51(d，2H，J＝8.1)，7.94-7.96(m，2H)。LRMS(ESI-)m/z：304.1(M-H+C13H13ClF2NO3的计算值：304.1)。
实施例57：化合物72
初始，使化合物11的对氰基类似物按照制备11本身的类似方法制备。尝试除去苯基噁唑啉保护基团(如在合成29中介绍的)，导致出现某些需要的脱保护腈中间体。然而，回收的大部分物质是腈官能团酸水解生成的相应的脱保护的对羧酸。该物质按照29合成中相同的方法进行二氯乙酰化，然后用CH2N2使该产物转变为其甲酯。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ 3.83(s，3H)，4.25-4.66(m，3H)，4.98(d，1H，J＝3)，6.17(s，1H)，7.46(d，2H，J＝8.3)，7.91(d，2H，J＝8.3)。
实施例58：化合物73
在N2下，将化合物87(36.5mg，0.0873mmol)溶于THF(5ml无水)。加入无水K2CO3粉末(24mg，0.175mmol)，该混合物中通入N2。加入Et3N(31ml，0.218mmol)和环丁烷甲酰氯(13ml，0.113mmol)，该混合物中通入N2并缓慢通入达5分钟。加入Pd2dba3，该混合物中再次通入N2。然后在N2下，将该混合物搅拌3小时，之后用EtOAc和H2O稀释，经过棉花筛过滤。EtOAc层用1N HCl水溶液(x2)洗涤、盐水(x2)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤该混合物，除去溶剂，得到16.9mg，0.0501mmol产物，该产物用chromatotron纯化(1mm板，用4∶1己烷/EtOAc洗脱)。使所得被保护的中间体经过29合成中的苯基噁唑啉裂解和二氯乙酰化，得到73。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.73-1.85(m，1H)，1.99-2.11(m，1H)，2.20-2.27(m，4H)，3.97-4.09(m，1H)，4.23-4.67(m，3H)，4.95(d，1H，J＝3.3)，6.16(s，1H)，7.45(d，2H，J＝8.4)，7.81(d，2H，J＝8.4)。LRMS(ESI-)m/z：360.0(M-H+C16H17Cl2FNO3的计算值：360.0)。
实施例59：化合物74
按照29的合成方法，使72合成中的羧酸中间体二氯乙酰化。使生成的中间体(95.8mg，0.297mmol)溶于2ml的MeOH，加入几滴H2O，然后滴加20％(w/v)Cs2CO3水溶液直至该溶液达到pH 7。真空浓缩该混合物。加入1滴Et3N和10ml 2-氯乙醇，将该混合物在135℃搅拌2小时。真空除去残留的氯乙醇，残余物用色谱法纯化。化合物74(13.3mg)为主要产物，而75(9.2mg)为次要产物。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.78-3.82(m，2H)，4.23-4.68(m，5H)，4.97(d，1H，J＝3.0)，6.17(s，1H)，7.46(d，2H，J＝8.3)，7.93(d，2H，J＝8.3)。LRMS(ESI+)m/z：407.9(M+Na+C14H15Cl3FNNaO4的计算值：408.0)。
实施例60：化合物75
1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.83-3.39(m，2H)，4.31-4.74(m，5H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.23(s，1H)，7.52(d，2H，J＝8.4)，8.02(d，2H，J＝8.4)。LRMS(ESI-)m/z：366.0(M-H+C14H15Cl2FNO5的计算值：366.0)。
实施例61：化合物76
中间体89的环丙基类似物通过与类似于合成89的Stille偶联方法制备。苯基噁唑啉基团的酸性裂解导致HCl催化的环丙基环的开裂。使该产物脱保护和二氯乙酰化，得到76。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.10-2.19(m，2H)，3.19(t，2H，J＝7.1)，3.66(t，2H，J＝6.6)，4.31-4.74(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.23(s，1H)，7.53(d，2H，J＝8.3)，7.96(d，J＝8.3)。LRMS(ESI-)m/z：381.9(M-H+C15H16Cl3FNO3的计算值：382.0)。
实施例62：化合物77
该类似物的噻唑环通过以下方法形成：通过在吡啶中与H2S反应，使被保护的腈中间体转化为相应的硫代酰胺。然后使硫代酰胺与适当保护的α-卤基羰基化合物反应，形成所示的取代噻唑。脱保护和二氯乙酰化按本发明其它化合物的相关方法操作。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.32-4.75(m，5H)，5.01(d，1H，J＝3.3)，6.27(s，1H)，7.38(s，1H)，7.51(d，2H，J＝8.3)，7.91(d，2H，J＝8.3)。LRMS(ESI-)m/z：390.9(M-H+C15H14Cl2FN2O3S的计算值：391.0)。
实施例63：化合物79
按照Suzuki偶联方法A，该化合物由其中的伯羟基未转变为氟的中间体形成。脱保护和二氯乙酰化按本发明其它化合物的相关方法操作。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.55(dd，1H，J＝11.0，5.9)，3.77(dd，1H，J＝11.0，6.5)，4.07-4.11(m，1H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，5.96(s，2H)，6.29(s，1H)，6.86(d，1H，J＝8.4)，7.05-7.07(m，2H)，7.40-7.50(m，4H)。LRMS(ESI-)m/z：395.9(M-H+C18H16Cl2NO5的计算值：396.0)。
实施例64：化合物80
将化合物41(11.5mg，0.0346mmol)和盐酸羟胺(2.8mg，0 0415mmol)在EtOH(3ml)中搅拌12小时，然后再回流12小时。真空除去溶剂，使产物分离为单一异构体(未确定该异构体是顺式肟还是反式肟)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.21(s，3H)，4.26-4.68(m，3H)，4.95(d，1H，J＝3.9)，6.27(s，1H)，7.39(d，2H，J＝8.3)，7.61(d，2H，J＝8.3)。
实施例65：化合物81
将游离胺37(4.7mg，0.0224mmol)溶于MeOH(1ml)，使该混合物冷却至0℃。加入氯乙酸酐(5滴)和三乙胺(5滴)，将该混合物升至室温，并搅拌2小时。真空除去溶剂，该产物用硅胶色谱法纯化(2∶3EtOAC/己烷)，得到3.3mg(0.011mmol)产物。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.59(s，3H)，3.92-4.03(m，2H)，4.29-4.68(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，7.53(d，2H，J＝8.4)，7.96(d，2H，J＝8.4)。
实施例66：化合物82
按照Suzuki偶联方法A，用22和合适的硼酸制备联芳中间体。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.28-4.68(m，3H)，5.00(d，1H，J＝4.2)，6.01(t，1H，J＝54)，7.49-7.60(m，3H)，7.66(d，2H，J＝8.4)，8.07-8.11(m，1H)，8.50(dd，1H，J＝4.8，1.5)，8.79-8.79(m，1H)。LRMS(ESI-) m/z：322.9(M-H+C16H14F3N2O2的计算值：323.1)。
实施例67：化合物84
该化合物按照类似流程2和3中介绍的方法制备。6的4-(1，2，4-三唑-1-基)苯基丝氨酸类似物按照合成6的相同方法制备。需要的4-(1，2，4-三唑-1-基)苯甲醛按照文献(Tanaka，A.等，J.Med.Chem.1998，41，2390-2410)介绍的方法制备。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.33-4.76(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.3)，6.26(s，1H)，7.59(d，2H，J＝8.6)，7.78(d，2H，J＝8.6)，8.14(s，1H)，9.05(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z：345.0(M-H+C13H12Cl2FN4O2的计算值：345.0)。
实施例68：化合物85
该联芳中间体由硼酸12和2-碘吡嗪制备。按照合成29的方法完成脱保护和二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.32-4.75(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.3)，6.27(s，1H)，7.57(d，2H，J＝8.4)，8.05(d，2H，J＝8.4)，8.51(d，1H，J＝2.7)，8.65-8.66(m，1H)，9.08(d，1H，J＝1.8)。LRMS(ESI-)m/z：355.8(M-H+C15H13Cl2FN3O2的计算值：356.0)。
实施例69：化合物86
与68的合成方法相同。1H NMR(300MHZ，CD3OD)：δ4.29-4.73(m，3H)，5.01(br d，1H，J＝3.9)，主要非对映体6.49(d，1H，J＝49.8)，次要非对映体6.51(d，1H，J＝49.8)，7.48-7.56(m，3H)，7.64-7.67(m，2H)，8.06-8.10(m，1H)，8.49-8.51(m，1H)，8.78-8.79(m，1H)。LRMS(ESI-)m/z：338.9(M-H+C16H14ClF2N2O2的计算值：339.1)。
实施例70：化合物87
将化合物11(0.496g，1.48mmol)在N2下溶于无水苯(15ml)。将回流冷凝管固定在烧瓶上，将长针头通过冷凝管投入溶液，溶液中通入和缓的干燥N2流达5分钟。加入六甲基二锡(0.58g，1.78mmol)，该化合物中再通入N2达5分钟。加入Pd(PPh3)4(0.171g，0.148mmol)，继续通入N2，5分钟后，移去针头，将N2送气口放置在回流冷凝管的顶端。在N2下，将该混合物回流约2小时。在整个反应过程中，该混合物从橙色变黄色，再变至黑色。真空除去溶剂，该产物用chromatotron纯化(硅胶，1mm板)，得到440mg澄清油状产物。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ0.27(s，9H-该共振峰含明显的附属峰，其由于锡的活性同位素的NMR所致)，4.27-4.41(m，1H)，4.59-4.76(m，2H)，5.60(d，1H，J＝6.9)，7.33(d，2H，J＝8.1)，7.45-7.31(m，5H)，7.99-8.02(m，2H)。
实施例71：化合物88
该化合物按与87相同的方式制备。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ0.027(s，9H，具有明显的附属峰，其由于锡的活性同位素的NMR所致)，1.49(s，9H)，1.55(s，3H)，1.67(s，3H)，3.73-3.83(m，1H)，4.30-4.49(m，2H)，5.06(d，2H，J＝7.5)，7.36-7.51(m，4H)。
实施例72：化合物89
将化合物87(36.5mg，0.0873mmol)在N2下溶于无水THF。在搅拌条件下，加入K2CO3(24mg，0.16mmol)。该混合物中通入和缓的N2流达5分钟。加入Et3N(31μL，0.22mmol)和环丁烷甲酰氯(13μL，0.11mmol)，该混合物中通入N2达5分钟。加入Pd2dba3，该混合物通入N2达5分钟，然后在N2下搅拌3小时。该混合物用EtOAc(25ml)和H2O(25ml)稀释，经棉花塞过滤，除去固体。EtOAc萃取液用1NHCl(2x)和盐水(2x)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。该产物用chromatotron纯化(1mm硅胶板，1∶4 EtOAc/己烷)，得到16.9mg(0.050mmol)产物。LRMS(ESI+)m/z：338.2(M+H+C21H21FNO2的计算值：338.2)。
实施例73：化合物90
与89的合成方法相同。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ0.027(s，9H，具有明显的附属峰，其由于锡的活性同位素的NMR所致)，1.49(s，9H)，1.55(s，3H)，1.67(s，3H)，3.73-3.83(m，1H)，4.30-4.49(m，2H)，5.06(d，2H，J＝7.5)，7.36-7.51(m，4H)。
实施例74：化合物91
用9/1 TFA/H2O简略处理90，使化合物91脱保护。按照合成29的方法，引入二氯乙酰基。LRMS(ESI-)m/z：345.8(M-H+C15H16Cl2FNO3的计算值：346.0)。
实施例75：化合物92
与合成56使用的方法相同。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.28-4.74(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，5.98(t，1H，J＝53.8)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.76(d，2H，J＝8.4)，7.86(d，2H，J＝7.1)，8.35(d，2H，J＝7.1)。
实施例76：化合物93
按照Suzuki偶联A方法，通过使23与合适的溴化物反应制备该联芳中间体。按照上述合成29的方法进行脱保护和二氯乙酰化。LRMS(ESI-)m/z：433.0(M-H+C17H16Cl2FN2O4S的计算值：433.0)。
实施例77：化合物94
按照Suzuki偶联方法B，该联芳中间体通过使23与2-氨基-4-环丙基-1，3，4-噻二唑反应制备(制备方法同24的合成)。通过用90/10TFA/H2O简略处理被保护的联芳中间体完成脱保护，二氯乙酰化按照29合成中的方法操作。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.12-1.31(m，4H)，2.46-2.52(m，1H)，4.30-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.24(s，1H)，7.54(d，2H，J＝8.4)，7.87(d，2H，J＝8.4)。
实施例78：化合物95
与94合成方法相同，用二氟乙酸甲酯替换二氯乙酸甲酯。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.13-1.15(m，2H)，1.28-1.32(m，2H)，2.47-2.52(m，1H)，4.29-4.70(m，3H)，5.01(d，1H，J＝4.2)；5.98(t，1H，J＝53.7)，7.54(d，2H，J＝8.7)，7.88(d，2H，J＝8.7)。LRMS(ESI-)m/z：370.0(M-H+C16H15F3N3O2S的计算值：370.1)。
实施例79：化合物97
化合物96按照与制备24类似的方式制备。化合物97按照与制备48类似的方式制备。使用Suzuki偶联方法B，随后脱保护和二氟乙酰化。LRMS(ESI-)m/z：376.0(M-H+C14H13F3N3O2S2的计算值：376.0)。
实施例80：化合物98
在搅拌条件下，将化合物97(11.1mg或0.0294mmol)在室温下溶于5ml的CH2Cl2中。加入m-CPBA(36mg，0.147mmol)。将该混合物搅拌23小时。尝试用chromatotron纯化(1mm板)，用己烷/EtOAc(80∶20→70∶30→50∶50)洗脱，无法除去与m-CPBA有关的物质。因此，使从chromotron上洗脱的产物经过C-8反相HPLC处理，得到8.8mg(.021mmol)98。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 3.52(s，3H)，4.34-4.72(m，3H)，5.05(d，1H，J＝3.6)，5.97(t，1H，J＝53.9)，7.61(d，2H，J＝7.61)，8.05(d，2H，J＝8.1)。
实施例81：化合物100
化合物99按与制备24类似的方式制备，100按与制备48类似的方式制备。使用Suzuki偶联方法B，随后脱保护和二氟乙酰化。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ2.80(s，3H)，4.30-4.70(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.6)，5.98(t，1H，J＝53.9)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.91(d，2H，J＝8.3)。
实施例82：化合物101
化合物101按与合成100相同的方法制备，但需用二氯乙酸甲酯替换二氟乙酸甲酯。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ2.79(s，3H)，4.31-4.75(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.0)，6.24(s，1H)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.89(d，2H，J＝8.4)。
实施例83：化合物102
将化合物17(100mg，0.258mmol)放入装有搅拌棒的干燥圆底烧瓶中。向烧瓶中加入5ml干燥THF，在N2下，将内容物冷却至-78℃。在快速搅拌条件下，加入n-BuLi(1.30M的己烷溶液，0.322mmol，0.248ml)，其产生澄清的棕色/黄色溶液。再将该混合物搅拌10分钟。使干冰升华产生的过量CO2通过燥石膏干燥管直接进入-78℃的混合物产生气泡，为防止CO2压力升高，在烧瓶塞中安装排气针头。使该混合物升温至室温，再搅拌30分钟，此时该混合物为澄清黄色，TLC显示有产物生成。加入10％(v/w)NH4Cl水溶液(5滴)猝灭该混合物，生成混浊黄色混悬液。真空浓缩该混合物，使其在EtOAc(50ml)中重新悬浮，加入足够量的10％柠檬酸水溶液使产生pH 2.5的两相混合物。分离各层，EtOAc层用盐水(1×10ml)洗涤。该混合物经Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到105mg的黄色油。该产物通过chromatotron(1mm板，用4∶1己烷/EtOAc→65∶35己烷/EtOAc→1∶1己烷/EtOAc→2％MeOH的CH2Cl2溶液→5％MeOH的CH2Cl2溶液，最后用加有几滴乙酸的10％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱)分离。合并合适的部分，用甲苯稀释，蒸发，得到67.5mg(0.191mmol)102。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ1.49(s，9H)，1.57(S，3H)，1.69(s，3H)，3.77-3.90(m，1H)，4.39-4.57(m，1H)，4.90-5.10(br s，1H)，5.18(d，1H，J＝7.2)，7.56(d，2H，J＝8.1)，8.04(d，2H，J＝8.1)。LRMS(ESI-)m/z：352(M-H+C18H23FNO5的计算值：352)。
实施例84：化合物106
将化合物102(106mg，0.299mmol)溶于EtOAc，滴加重氮甲烷(用Aldrich Chemical Company重氮甲烷试剂盒生成)直至微黄色持续不变。在通风性能良好的通风厨中彻夜蒸发过量的重氮甲烷，真空浓缩剩余的EtOAc溶液。将残余物溶于Et2O，用NaHCO3水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。分离各层，有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到0.087g(0.24mmol，79％)甲酯103，其无需进一步纯化或表征就可直接使用。
将化合物103(0.037g，0.136mmol)溶于1ml的EtOH中。向其中加入水合肼(.007g，0.177mmol)。将该混合物回流12小时。真空除去溶剂，产物用chromatotron纯化(1mm板，10％MeOH的CH2Cl2溶液)。分离出化合物104(40.0mg，0.109mmol)，其无需进一步表征就可直接使用。LRMS(ESI-)m/z：366(M-H+C18H25FN3O4的计算值：366)。
将化合物104(0.050g，0.133mmol)溶于5ml原甲酸三乙酯中，在120℃下，搅拌24小时。蒸发该混合物，得到26mg的105粗品，其无需进一步表征或纯化就可直接使用。
将化合物105(0.0051g，0.014mmol)在室温下与10ml(9∶1)TFA/H2O一起搅拌10分钟。真空浓缩该混合物，在MeOH/甲苯混合物中溶解3次，每次溶解后蒸去溶剂，干燥至恒重，得到0.5mg脱保护的物料。在敞口容器中将该残余物溶于1ml MeOH，加5滴二氟乙酸甲酯和15滴Et3N。将该混合物在室温下搅拌12小时。12小时后，TLC显示为单一产物。真空浓缩该混合物，产物用硅胶色谱法分离(用20∶1 CH2Cl2/CH3OH洗脱)，得到2.3mg 106。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.31-4.74(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.9)，5.96(t，1H，J＝53.9)，7.61(d，2H，J＝8.4)，8.05(d，2H，J＝8.4)，8.99(d，1H)。LRMS(ESI-)m/z：314(M-H+C13H11F3N3O3的计算值：314)。
实施例85：化合物107
用二氯乙酸甲酯化合物替换二氟乙酸甲酯，按类似于106的方法制备化合物107。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.32-4.80(m，3H)，5.06(d，1H，J＝3.0)，6.23(S，1H)，7.62(d，2H，J＝8.4)，8.03(d，2H，J＝8，4)，8.98(s.1H)。LRMS(ESI-)m/z：346(M-H+C13H11Cl2FN3O3的计算值：346)。
实施例86：化合物108
将化合物102(32.7mg，0.0925mmol)溶于EtOAc(8ml)中，搅拌，冷却至0℃。加入五氟苯酚(17mg，0.093mmol)。所有固体溶解后，立即加入DCC(19mg，0.093mmol)，在0℃下，将混合物搅拌1.25小时。将该混合物蒸发至原体积的1/4，此时生成DCU沉淀。过滤除去DCU，通过蒸发分离五氟苯酯。将残余物溶于4ml MeOH，在搅拌条件下，冷却至0℃。分批加入NaBH4(18mg，0.46mmol)。气泡停止后，使该混合物升至室温。2小时后，加入4滴冰HOAc猝灭NaBH4。将该混合物蒸发至干，使残余物在1N HCl水溶液和EtOAc之间分配。分离EtOAc层，分别用1N HCl水溶液(2×15ml)、饱和NaHCO3水溶液(2×10ml)、最后用盐水(1×25ml)洗涤。EtOAc层经无水Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到50mg黄色油。用chromatotron纯化(1mm板，用5％EtOAc的己烷溶液-10％EtOAc的己烷溶液洗脱)，得到108(10.3mg，0.030mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.49(s，9H)，1.57(s，3H)，1.68(s.3H)，3.75-3.89(m，1H)，3.90(s，2H)，4.39-4.58(m，1H)，4.90-5.05(br s，1H)，5.19(d，1H，J＝7.2)，7.57(d，2H，J＝8.3)，8.04(d，2H，J＝8.3)。
实施例87：化合物109
将化合物108(10mg，0.30mmol)溶于5ml的9∶1 TFA/H2O，在室温下搅拌1小时。真空浓缩该混合物，得到约9mg的脱保护的TFA盐。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.54-3.68(m，1H)，3.91(s，2H)，4.24-4.67(m，2H)，4.90(d，1H，溶剂干扰)，7.57(d，2H，J＝8.4)，8.07(d，2H，J＝8.4)。
在开口容器中，将9mg产物(0.03mmol)溶于2ml MeOH。向其中加入15滴Et3N和15滴二氯乙酸甲酯。将该混合物在室温下搅拌56小时。反应结束时，溶剂完全蒸发。将残余物在chromatotron(1mm板上样，用2％MeOH的CH2Cl2溶液→4％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到7.5mg 109。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ3.88(s，2H)，4.28-4.73(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.22(s，1H)，7.51(d，2H，J＝8.4)，7.97(d，2H，J＝8.4)。
实施例88：化合物110
按类似于本文中制备其它含吡啶的联芳化合物的方法制备。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ2.54(s，3H)，4.30-4.68(m，3H)，4.99(d，J＝3.3)，5.98(t，1H，J＝40.5)，7.35(d，1H，J＝6.0)，7.49(d，2H，J＝6.2)，7.61(d，2H，J＝6.2)，7.95(dd 1H，J＝6.0，1.7)，8.61(d，1H，J＝1.7)。LRMS(ESI-)m/z：336.9(M-H+C17H16F3N2O2的计算值：337.1)。
实施例89：化合物111
按类似于本文中制备其它含吡啶的联芳化合物的方法制备。1HNMR(300MHz，CD3OD)：δ2.56(s，3H)，4.30-4.74(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，6.27(s，1H)，7.36(d，1H，J＝8.1)，7.56(d，2H，J＝8.4)，7.61(d，2H，J＝8.4)，7.96(1H，dd，J＝8.1，2.3)，8.62(d，1H，J＝2.31)。
实施例90：化合物112
将化合物111(0.0185g，0.0499mmol)在0℃下溶于10mlCH2Cl2。加入m-CPBA(0.246g，0.0997mmol)。搅拌该混合物，直至冰浴融化和混合物温度升至室温，约需12小时。真空浓缩该混合物，用制备板硅胶色谱(15％MeOH的CH2Cl2溶液)分离112，随后用硅胶塞(plug)(3％MeOH的CH2Cl2溶液)分离。LRMS(ESI-)m/z：385(M-H+C17H16Cl2FN2O3的计算值：385.1)。
实施例91：化合物113
用化合物110合成化合物113，其方法与用111合成112相同。LRMS(ESI-)m/z：353(M-H+C17H16Cl2FN2O3的计算值：353.1)。
实施例92：化合物114
按本文中制备其它联芳的相同方法制备该化合物。LRMS(ESI-)m/z：324(M-H+C15H13F3N3O2的计算值：324.1)。
实施例93：化合物115
制备方式同化合物48。需要的芳基溴按两步制备：用Br2溴化2-氨基-1，3，4-噻二唑，随后进行乙酰化。LRMS(ESI-)m/z：419(M-H+C15H14Cl2FN4O3S的计算值：419.0)。
实施例94：化合物116
化合物116按流程2和3阐述的方式合成。通过使4-溴-2-氟苯甲醛与甘氨酸缩合，制得苯基丝氨酸类似物。按Suzuki偶联方法B，使溴化物中间体与间吡啶硼酸偶联。按本文上述方法，进行脱保护和二氟乙酰化。LRMS(ESI+)m/z：343(M+H+C16H15F4N2O2的计算值：343.1)。
实施例95：化合物117
与116合成的方法相同。LRMS(ESI+)m/z：375(M+H+C16H15F4N2O2的计算值：375.1)。
实施例96：化合物118
将化合物19(100mg，0.258mmol)、乙酸钾(38mg，0.386mmol)和2ml的N，N′-二甲基乙酰胺(DMAC)在玻璃压力管中混合。用注射器加入噻唑(112mg，1.31mmol)，再用1ml DMAC冲洗注射器，冲洗液加入压力管。在室温下搅拌该混合物，同时通入N2达10分钟。加入Pd(PPh3)4(15mg，0.013mmol)，该混合物中通入N2达5分钟，在防护罩下，将该管封闭并加热至150℃，并在此温度下保持12小时。该混合物变为深棕色。冷却至室温后，通过Celite垫过滤管中内容物，将滤液蒸发至干。将残余物溶于40ml的3∶1 EtOAc/己烷，用H2O(2×15ml)和盐水(2×15ml)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤干燥的有机层，除去干燥剂，真空浓缩，得到109mg棕色油。化合物119用硅胶色谱法纯化(用(80∶20→50∶50)己烷/EtOAc洗脱)(54mg，0.14mmol)。LRMS(ESI+)m/z：393.1(M+H+C20H26FN2O3S的计算值：393.2)。
将所有的化合物119溶于9∶1(v/v)TFA/H2O(7.5ml)，在室温下搅拌30分钟。然后真空浓缩该混合物，残余物在甲苯和甲醇的混合物中溶解2次，每次溶解后蒸发溶剂。使一部分产物(9.7mg，0.027mmol)溶于2ml的MeOH，加入10滴Et3N和12滴二氟乙酸甲酯。使该混合物暴露在空气中，快速搅拌16小时。将该混合物蒸发至干，残余物用chromatotron纯化(1mm板)，用3％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到118(6.0mg，0.018mmol。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.27-4.69(m，3H)，4.97(d，1H，J＝4.2)，5.99(t，1H，J＝53.9)，7.47(d，2H，J＝8.3)，7.65(d，2H，J＝8.3)，8.16(s，1H)，8.94(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z：331.1(M+H+C14H14F3N2O2S的计算值：331.1)。
实施例97：化合物120
按类似于制备118的方式制备化合物120，用二氯乙酰化替换二氟乙酰化。LRMS(ESI+)m/z：363.0(M+H+C14H14Cl2FN2O2S的计算值：363.0)。
实施例98：化合物121
按照Suzuki偶联方法B，用23和3-氯-6-甲基哒嗪合成该被保护的联芳中间体。如同本发明其它化合物中一样进行脱保护和二氯乙酰化。LRMS(ESI+)m/z：372.0(M+H+C16H17Cl2FN3O2的计算值：372.1)。
实施例99：化合物122
按类似于121的方式制备。LRMS(ESI+)m/z：340.1(M+H+C16H17F3N3O2的计算值：340.1)。
实施例100：化合物123
按照Suzuki偶联方法B，用硼酸23和合适的芳基溴制备该保护的联芳中间体。然后按合成29介绍的方法，用9∶1(v/v)TFA/H2O简略处理该中间体使其脱保护和二氯乙酰化。LRMS(ESI+)m/z：380.0(M-H+C17H13Cl2FN3O2的计算值：380.0)。
实施例101：化合物124
按与123类似方式制备。如同本发明其它化合物中一样进行二氟乙酰化。LRMS(ESI+)m/z：348.0(M+H+C17H13F3N3O2的计算值：348.1)。
实施例102：化合物125
按Suzuki偶联方法，用硼酸23制备该联芳中间体。LRMS(ESI+)m/z：392.0(M-H+C15H13Cl3FN3O2的计算值：392.0)。
实施例103：化合物126
按照类似溴中间体19的制备方法，用35制备原料腈。用Ph2P(S)SH处理，生成硫代苯甲酰胺，其通过与二甲基甲酰胺缩二甲醇反应转变为硫代苯甲脒中间体。在甲醇/吡啶中，用羟胺-O-磺酸进行环化，得到该联芳中间体。LRMS(ESI+)m/z：364.0(M-H+C13H12Cl2FN3O2S的计算值：364.0)。
实施例104：化合物127
在-78℃下，通过用正丁基锂的THF溶液处理中间体19制备该苯基锂中间体。使该中间体与哒嗪反应，用DDQ氧化生成的2-和3-位加合物的混合物。用色谱法分离需要的3-哒嗪基(pyridazyl)区域异构体。LRMS(ESI+)m/z：326.0(M-H+C15H14F3N3O2的计算值：326.0)。
实施例105：化合物128
化合物128用实施例104的方法合成。LRMS(ESI+)m/z：358.0(M-H+C15H14Cl2FN3O2的计算值：358.0)。
实施例106：化合物129
使用实施例104中讨论的方法。LRMS(ESI+)m/z：358.0(M-H+C15H14Cl2FN3O2的计算值：358.0)。
实施例107：化合物130
使用实施例104的方法。LRMS(ESI+)m/z：326.0(M-H+C15H14F3N3O2的计算值：326.0)。
实施例108：化合物131
使该苯基锂中间体与N-甲氧基-N-甲基乙酰胺反应，在吡啶存在下，使生成的苯乙酮与溶于甲醇二甲基甲酰胺缩二甲醇和羟胺-O-磺酸反应，得到异噁唑。LRMS(ESI+)m/z：347.0(M-H+C14H13Cl2N2O3的计算值：347.0)。
实施例109：化合物132
用实施例108的方法，合成化合物132。LRMS(ESI+)m/z：315.0(M-H+C14H13F3N2O3的计算值：315.0。
实施例110：化合物133
使该苯基锂中间体与二甲基甲酰胺反应，生成甲酰基中间体，然后使其与从(甲氧甲基)三苯基溴化鏻产生的内鎓盐反应。用溴溴化生成的烯醇醚，得到该溴乙醛，用硫脲环化生成该氨基噻唑。LRMS(ESI+)m/z：378.0(M-H+C14H14Cl2FN3O2S的计算值：378.0)。
实施例111：化合物134
用实施例110的方法，合成化合物134。LRMS(ESI+)m/z：346.0(M-H+C14H14F3N3O2S的计算值：346.0)。
实施例112：化合物135(非对映体混合物)
用实施例108的方法，合成化合物135。LRMS(ESI+)m/z 331.0(M-H+C14H13F2N2O3的计算值：331.0)。
实施例113：化合物136
使实施例108的原料与Lawesson′s试剂反应，在吡啶存在下，用溶于甲醇的羟胺-O-磺酸使该产物环化为联芳中间体。LRMS(ESI+)m/z：363.0(M-H+C14H13Cl2FN2O2S的计算值：363.0)。
实施例114：化合物137
用实施例113的方法，合成化合物137。LRMS(ESI+)m/z：331.0(M-H+C14H13F3N2O2S的计算值：331.0)。
实施例115：化合物138(非对映体混合物)
用实施例113的方法，合成化合物138。LRMS(ESI+)m/z：347.0(M-H+C14H13ClF2N2O2S的计算值：347.0)。
实施例116：化合物139
用实施例96的方法，用需要的中间体19的对映体合成化合物139。LRMS(ESI+)m/z：331.0(M-H+C14H13F3N2O2S的计算值：331.0)。
实施例117：化合物140(非对映体混合物)
用实施例41的方法，合成化合物140。LRMS(ESI+)m/z：348.0(M-H+C13H12ClF2N3O2S的计算值：348.0)。
实施例118：化合物141
在碘化铜和PdCl2(PPh3)2存在下，使中间体19与三甲基甲硅烷基乙炔反应。通过用碳酸钾的甲醇溶液处理该产物除去甲硅烷基。使乙炔与正丁基锂反应，然后与氰化甲苯磺酰反应，生成氰基乙炔中间体。通过用羟胺的乙醇溶液处理该氰基乙炔，进行环化，得到3-氨基异噁唑。LRMS(ESI+)m/z：330.0(M-H+C14H14F3N3O3的计算值：330.0)。
实施例119：化合物142
用实施例118的方法合成化合物142。LRMS(ESI+)m/z：362.0(m-H+C14H14Cl2FN3O3的计算值：362.0)。
实施例120：化合物143
在二氯1，1’-双(二苯膦基)二茂铁合钯(II)二氯甲烷存在下，使需要的中间体19的对映体与双戊烯二硼反应。用Suzuki反应使该硼酸频哪醇酯(Pinacolboronate ester)与5-溴-2-氰基吡啶偶联。LRMS(ESI+)m/z：350.0(M-H+C17H14F3N3O2的计算值：350.0)。
实施例121：化合物144
用实施例120的方法合成化合物144。LRMS(ESI+)m/z：382.0(M-H+C17H14Cl2FN3O2的计算值：382.0)。
实施例122：化合物145(非对映体混合物)
使中间体19与正丁基锂反应，然后与二甲基甲酰胺反应。使该甲酰基中间体与甲基溴化镁反应，得到该苯甲醇的非对映体混合物。LRMS(ESI+)m/z：324.0(M-H+C13H16Cl2FNO3的计算值：324.0)。
实施例123：化合物146
使(用实施例118介绍的方法制备)乙炔原料与正丁基锂反应，随后加入二氧化碳，用重氮甲烷的乙酸乙酯/乙醚溶液将生成的酸酯化。通过使该酯与羟胺反应得到3-羟基异噁唑，然后用重氮甲烷的乙酸乙酯/乙醚溶液使其甲基化。LRMS(ESI+)m/z：377.0(M-H+C15H15Cl2FN2O4的计算值：377.0)。
实施例124：化合物147
用实施例120的方法，使用Suzuki偶联反应中的2-溴-1，3，4-噻二唑，合成化合物147。LRMS(ESI+)m/z：364.0(M-H+C13H12Cl2FN3O2S的计算值：364.0)。
实施例125：化合物148
用实施例118介绍的方法制备乙炔原料。3-甲酰乙氧基(carboethoxy)异噁唑中间体通过用硝基乙酸乙酯、二碳酸二叔丁酯和4-二甲氨基吡啶原位产生的氧化腈的环加成反应制得。通过使3-甲酰乙氧基异噁唑中间体水解成酸，酸转化为酰氯，然后与氨反应制得该酰胺。LRMS(ESI+)m/z：358.0(M-H+C15H14F3N3O4的计算值：358.0)。
实施例126：化合物149
用实施例108的方法，用需要的中间体19的对映体合成化合物149。LRMS(ESI+)m/z：347.0(M-H+C14H13Cl2FN2O3的计算值：347.0)。
实施例127：化合物150
用Vilsmeyer试剂的二甲基甲酰胺溶液，使用实施例125介绍方法得到的3-羧基异噁唑中间体转变为酰氯。用四丁基硼氢铵的THF溶液将该粗产物还原为3-羟甲基异噁唑中间体。LRMS(ESI+)m/z：377.0(M-H+C15H15Cl2FN2O4的计算值：377.0)。
实施例128：化合物151
用实施例127方法合成化合物151。LRMS(ESI+)m/z：345.0(M-H+C15H15F3N2O4的计算值：345.0)。
实施例129：化合物152
用实施例125的方法合成化合物152。LRMS(ESI+)m/z：390.0(M-H+C15H14Cl2FN3O4的计算值：390.0)。
实施例130：化合物153
用实施例40的方法合成化合物153。使用EDC/HOBT和氰基乙酸酰化氨基中间体。LRMS(ESI+)m/z：314.0(M-H+C17H16FN3O2的计算值：314.0)。
实施例131：化合物154
用实施例130的方法合成化合物154。LRMS(ESI+)m/z：330.0(M-H+C16H16FN5O2的计算值：330.0)。
实施例132：化合物155
用实施例118介绍的方法制备乙炔原料。通过进行由硝基乙烷、二碳酸二叔丁酯和4-二甲氨基吡啶原位产生的氧化腈环加成制备该3-甲基异噁唑中间体。LRMS(ESI+)m/z：329.0(M-H+C15H15F3N2O3的计算值：329.0)。
实施例133：化合物156
用实施例132的方法合成化合物156。LRMS(ESI+)m/z：361.0(M-H+C15H15Cl2FN2O3的计算值：361.0)。
实施例134：化合物157
在铜粉存在下，使中间体19与4-甲基咪唑在回流的二甲基甲酰胺溶液中反应。LRMS(ESI+)m/z：3460.0(M-H+C14H14Cl2FN3O2的计算值：346.0)。
实施例135：化合物158
用实施例134的方法合成化合物158。LRMS(ESI+)m/z：328.0(M-H+C15H16F3N3O2的计算值：328.0)。
实施例136：化合物159
用实施例126的方法合成化合物159。LRMS(ESI+)m/z：315.0(M-H+C14H13F3N2O3的计算值：315.0)。
实施例137：化合物160
将需要的中间体19的对映体的混合物(1g，2.5mmol)、碳酸钾(712mg，5mmol)和丙炔酰胺(1.07g，15mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(4ml)溶液在室温下搅拌，与此同时通入N2达10分钟。加入Pd(PPh3)4催化剂(15mg，0.013mmol)，混合物中再通入N2达5分钟。将生成的混合物在100℃下搅拌9小时。冷却至室温后，所得粗品用快速硅胶色谱法纯化，得到偶联产物(601mg)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.49(s，9H)，1.59(s，3H)，1.70(s，3H)，3.75-3.90(m，1H)，4.35-4.60(m，2H)，5.15(d，1H，J＝7.5)，5.65(s，1H)，5.85(s，1H)，7.45(d，2H，J＝8.4)和7.55(d，2H，J＝8.4)。
在0℃下，在二甲基甲酰胺(dimethylformamamide)(2ml)中，缓慢加入亚硫酰氯(2ml)，在此温度下，将反应混合物搅拌30分钟。然后0℃下，用套管将该溶液导入丙炔酰胺中间体(600mg)的DMF(4ml)溶液中。在室温下搅拌30分钟后，将该混合物倾入到冰/水(50ml)中。用饱和碳酸氢钠将pH调至7。该溶液用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，用柱色谱法纯化，得到丙炔腈中间体(326mg)。1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ1.49(s，9H)，1.59(s，3H)，1.70(s，3H)，3.75-3.90(m，1H)，4.35-4.60(m，2H)，5.15(d，1H，J＝7.5)，7.49(d，2H，J＝8.4)和7.63(d，2H，J＝8.4)。
向氢氧化钠(206mg，7当量)的水溶液(2ml)中，加入盐酸羟胺(256mg，5当量)。将该溶液加入丙炔腈中间体(263mg)的乙醇(7ml)中。在室温下，搅拌生成的混合物6小时。加入乙酸乙酯，分离有机层，用水洗涤，经无水硫酸钠干燥。该粗品用柱色谱法纯化，得到保护的3-氨基异噁唑，然后将其溶于THF(6ml)和4N HCl(6ml)，在80℃下搅拌2.5小时。将该反应混合物减压蒸发至干。使该残余物与甲醇共蒸发两次，真空干燥过夜。向该粗品的甲醇(2ml)溶液中，加入三乙胺(2ml)，随后加入二氯乙酸甲酯(1ml)。将该混合物在室温下搅拌24小时。蒸发溶剂，该混合物用快速柱色谱法纯化，得到化合物160(167mg)。1H NMR(300MHz，CDCl3+CD3OD)：δ4.35-4.70(m，3H)，5.05(m，1H)，5.85(s，1H)，6.16(s，1H)，7.44(d，2H，J＝8.1)和7.65(d，2H，J＝8.1)。LRMS(ESI+)m/z：362.0(M-H+C14H14Cl2FN3O3的计算值：362.0)。
实施例138：化合物161
用实施例132的方法，以需要的中间体19的对映体为原料合成化合物161。LRMS(ESI+)m/z：361.0(M-H+C15H15Cl2FN2O3的计算值：361.0)。
实施例139：化合物162
用实施例138的方法合成化合物162。LRMS(ESI+)m/z：329.0(M-H+C15H15F3N2O3的计算值：329.0)。
实施例140：化合物163
用实施例120的方法合成化合物163。用二环己基碳二亚胺和氰基乙酸酰化所述氨基中间体。LRMS(ESI+)m/z：339.0(M-H+C18H15FN4O2的计算值：339.0)。
实施例141：化合物164
用实施例120的方法合成化合物164。用二环己基碳二亚胺和叠氮乙酸酰化所述氨基中间体。LRMS(ESI+)m/z：355.0(M-H+C17H15FN6O2的计算值：355.0)。
实施例142：化合物165
用实施例120的方法合成化合物165。所示氨基中间体用乙酸酐酰化。LRMS(ESI+)m/z：314.0(M-H+C17H16FN3O2的计算值：314.0)。
实施例143：化合物166
用实施例120的方法合成化合物166。LRMS(ESI+)m/z：350.0(M-H+C13H11F4N3O2S的计算值：350.0)。
实施例144：化合物167
用实施例120的方法合成化合物167。用二环己基碳二亚胺和N-Boc-甘氨酸酰化所述氨基中间体，用盐酸的甲醇溶液使生成的甘氨酰胺脱保护。LRMS(ESI+)m/z：329.0(M-H+C17H17FN4O2的计算值：329.0)。
实施例145：化合物168
用实施例144的方法合成化合物168。LRMS(ESI+)m/z：343.0(M-H+C18H19FN4O2的计算值：343.0)。
实施例146：化合物169
将需要的中间体19的对映体(1.16g，3mmol)、碳酸钾(1.659g，12mmol)、咪唑(1.225g，18mmol)和铜粉(191mg，3mmol)的20ml DMF溶液回流下剧烈搅拌4小时。使该反应混合物冷却至室温，倒入水(100ml)中。用乙酸乙酯萃取，有机萃取液用水洗涤(3x)，使有机层通过硅胶和无水硫酸钠塞。蒸发溶剂，得到该咪唑(1.06g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.45(s，9H)，1.60(s，3H)，1.75(s，3H)，3.75-3.85(m，1H)，4.35-4.55(m，2H)，5.20(d，1H，J＝7.5)，7.22(s，1H)，7.28(s，1H)，7.41(d，2H，J＝8.4)，7.58(d，2H，J＝8.4)和7.89(s，1H)。
将该咪唑中间体(2.77g)溶于THF(20ml)和4N HCl(20ml)中，在80℃下搅拌2.5小时。将该反应混合物减压蒸发至干。将残余物与甲醇共蒸发2次，真空干燥过夜。将粗品溶于甲醇(20ml)中，加入三乙胺(5ml)，随后加入二氯乙酸甲酯(5ml)。将该混合物在室温下搅拌20小时。蒸发溶剂，混合物用快速柱色谱法纯化，得到白色固体化合物169(1.1g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ4.30-4.75(m，3H)，5.21(d，1H，J＝7.5)，5.86(s，1H)，7.05(d，1H，J＝7.5)，7.10(s，1H)，7.28(s，1H)，7.39(d，2H，J＝8.4)，7.52(d，2H，J＝8.4Hz)和7.81(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z：360.0(M-H+C15H16Cl2FN3O2的计算值：360.0)。
实施例147：化合物170
用实施例106的方法，用需要的中间体19的对映体合成化合物170。LRMS(ESI+)m/z：358.0(M-H+C15H14Cl2FN3O2的计算值：358.0)。
实施例148：化合物171
用实施例147的方法合成化合物171。LRMS(ESI+)m/z：326.0(M-H+C15H14F3N3O2的计算值：326.0)。
实施例149：化合物172
用实施例110的方法，用需要的中间体19的对映体合成化合物172。LRMS(ESI+)m/z：346.0(M-H+C14H14F3N3O2S的计算值：346.0)。
实施例150：化合物173
按实施例137的方法合成化合物173。LRMS(ESI+)m/z：330.0(M-H+C14H14F3N3O3的计算值：330.0)。
实施例151：化合物174
用实施例146的方法合成化合物174。LRMS(ESI+)m/z：314.0(M-H+C14H14F3N3O2的计算值：314.0)。
实施例152：化合物175
用实施例28化合物的方法合成化合物175。LRMS(ESI+)m/z：290.0(M-H+C13H14F3NO3的计算值：290.0)。
实施例153：化合物176
用实施例149的方法合成化合物176。LRMS(ESI+)m/z：378.0(M-H+C14H14Cl2FN3O2S的计算值：378.0)。
实施例154：化合物177
通过实施例33的方法，用溴吡啶衍生物和硼酸23合成化合物177。LRMS(ESI+)m/z：372.0(M-H+C16H16Cl2FN3O2的计算值：372.0)。
实施例155：化合物178
用实施例33的方法，用溴嘧啶衍生物和硼酸23合成化合物178。LRMS(ESI+)m/z：373.0(M-H+C15H15Cl2FN4O2的计算值：373.0)。
实施例156：化合物179
用实施例33的方法，用溴嘧啶衍生物和硼酸23合成化合物179。使用标准条件除去保护基团，引入二氯乙酰胺官能团。LRMS(ESI+)m/z：373.0(M-H+C15H15Cl2FN4O2的计算值：373.0)。
实施例157：化合物180
用实施例33的方法，用需要的氯哒嗪衍生物和硼酸23合成化合物180。使用标准条件除去保护基团，引入二氯乙酰胺官能团。LRMS(ESI+)m/z：373.0(M-H+C15H15Cl2FN4O2的计算值：373.0)。
结论
因此，人们将会认识到，本发明提供了新型氟苯尼考类化合物及其在治疗或预防动物或人类细菌感染中的使用方法。
尽管已经用某些实施方案和实施例描述了本发明，但对本领域技术人员而言显而易见，在不偏离本发明范围的前提下，可以对所述实施方案和实施例进行各种变化。