抗感冒药山蜡梅叶滴丸及其制备工艺 【技术领域】
本发明涉及一种抗感冒药，尤其涉及一种抗感冒药山蜡梅叶滴丸及其制备工艺。
背景技术
山蜡梅叶为蜡梅科蜡梅属植物山蜡梅(chimonanthus nitens oliv)的干燥叶，民间沿用已久，用于防治感冒及流行性感冒，已作为成药收载于《中华人民共和国药典》1977版。有关山蜡梅叶的化学成分、药化药理临床做过较多研究，抗菌抗流感病毒也做过实验，但都局限于粗提取物，未找到抗病毒单一有效成分。
山蜡梅叶的化学成分包括：
(a)挥发油 为淡黄色澄明油状液体、具有特殊的香气。气相色谱分析，含1，8-桉叶素(1，8-cinceol)，芳樟醇(linalool)，α-蒎烯(α-pinene)，樟脑(camphor)，莰烯(camphene)，龙脑(borneol)等。开花期挥发油含量为1.62％-2.9 0％，营养期1.82％-2.46％，其中54-58％为桉叶素。
(b)总黄酮 含量0.87％-1.27％ 经鉴定为槲皮素(quercetin)，山柰酚(kaempferol)及其与葡萄糖、鼠李糖所成的甙。
(c)生物碱 含量0.1％，已鉴定的有蜡梅碱(calycantine)
(d)鲨肌醇(scyllitol)。
山蜡梅叶中山柰酚、槲皮素有镇咳、祛痰、平喘。1，8-桉叶素有解热、镇痛、缓解鼻塞流涕等症状。挥发油有抗菌消炎作用，对金黄色葡萄球菌(抑制率92-93％)、大肠杆菌、绿脓杆菌均有体外抑菌作用。有报导山蜡梅浸膏对流感病毒有抑制和杀灭作用。
现有的山蜡梅叶颗粒剂主治风热感冒(上呼吸道感染)所致的咽喉疼痛、头痛、发热、鼻塞、流涕等症状。综合疗效，显效率为71.88％，总有效率为90.63％，与对照药银翘解毒片相似，无显著差异，该药无明显的毒副作用及不良反应。但其用量大(10克/次，一日三次)，且挥发油易从颗粒剂中挥发，造成保质期短，质量不稳定。特别所含的蜡梅碱，国际报道，易引起惊厥、抑制心脏。
【发明内容】
本发明的目的在于：为了中药现代化，将传统中医药的优势、特色与现代科学技术相融合，以适应当代社会发展的需要，倡导“全民安全用药”，大力开发纯天然、高效、安全的纯中药系列产品，解决颗粒剂用量大，且挥发油易从颗粒剂中挥发，造成保质期短，质量不稳定的问题，并取其精华，去其糟泊，把一些不必要的物质除掉，特别蜡梅碱，提供一种抗感冒药山蜡梅叶滴丸及其制备工艺。
本发明所述的山蜡梅叶滴丸由山蜡梅叶提取的1，8-桉叶素及黄酮甙元，配以水性或油性基质及赋形剂制得。各成份按重量配比为：1，8-桉叶素1-10份 黄酮甙元1-10份 水性或油性基质7-150份 赋形剂0.01-10份。
本发明所述的水性基质为聚乙二醇4000，聚乙二醇6000，硬脂酸钠，甘油之一或两种以上。
本发明所述的油性基质为硬脂酸，单硬脂酸甘油酯、虫蜡、蜂蜡、氢化油、植物油之一或两种以上。
本发明所述的赋形剂为乳糖或聚山梨酯-80。
本发明所述地抗感冒药山蜡梅叶滴丸的制备工艺：将分散的山蜡梅叶提取的1，8-桉叶素及黄酮甙元固体或液体药物与水性或油性基质及赋形剂，混合均匀，通过滴嘴逐滴进入冷却剂中，滴制成丸、洗涤、干燥、定剂量分装，即得。
本发明从山蜡梅叶提取抗流感病毒有效成分制成滴丸，延长保质期，增加疗效，服用方便。本发明操作过程中主药损耗小，接触空气少，受热时间短，质量稳定，易氧化，易挥发性药物溶于基质后，可增加其稳定性，提高难溶性药物的生物利用度。滴丸形成固态溶液，或微细晶粒，药物以分子状态分布于其中，服后与胃液接触时，基质溶解，药物以分子状态释放出而被迅速吸收。本发明工艺、操作简单，重现性好，且辅料不干扰含量测定，符合中国药典要求。
【具体实施方式】
山蜡梅叶有效成分的抗流感病毒有效部位：其挥发油、石油醚(脱脂)、黄酮甙、蜡梅碱均无抗病毒作用。山蜡梅叶提取的黄酮甙元部份SK-0、SK-I、SK-II具有抗流感病毒有效成分。其化学结构正在测定中。
黄酮甙元(抗病毒有效部位)柱层析：
2克黄酮甙元、用硅胶G柱层析(20cm×2cm)、用氯仿湿法装柱，样品用甲醇溶解拌样，用氯仿∶甲醇(50∶50 V/V)洗脱，分部收集，用薄层层析硅胶GF254(20×10cm2)，苯∶丙酮∶甲醇(65∶30∶5 V/V/V)洗脱，紫外萤光灯检查(或用碘蒸气显色)Rf值相同合并，依洗脱次序得到SK-0(萤光物质)、山柰酚、SK-I(新黄酮元)、槲皮素、SK-II(新黄酮元)。
抗流感病毒试验(国家新药筛选中心代测)
测试项目：抗流感甲、乙型病毒活性筛选。
测试原理：以MDCK(狗肾)细胞为病毒宿主、测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(CPE)。
测试材料和方法：
1、病毒株：流感甲型病毒(济防190-15)，流感乙型病毒(济防197-13)，在鸡胚尿囊腔内培养传代(2004.6)，-80℃保存。
2、样品处理：样品溶于DMSO，再用培养液配成适宜初始浓度，用培养液作3倍稀释，各8个稀释度。
3、对照药：病毒唑(RBV)，浙江康裕药业有限公司(批号960501)。
4、测试方法：MDCK细胞接种96孔培养板，置5％CO2，37℃培养24小时。
MDCK细胞分别加入流感甲型病毒10-4.3(10倍TCID50)，流感乙型病毒10-2.3(10倍TCID50)，37℃吸附2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度药物。设病毒对照和细胞对照，37℃培养36小时，观察结果，记录CPE，计算各样品抗流感病毒半数抑制浓度(IC50)。
测试结果：
样品编号 TC50(μg/ml) 对流感甲型 对流感乙型
IC50(μg/ml) SI IC50(μg/ml) SI
118981 38.52 8.12 4.74 18.52 2.08
118982 166.67 43.11 3.87 - -
118983 115.56 55.56 2.08 - -
RBV ＞1000 2.92 ＞342.46 3.8 ＞263.16
注：
(1)表中“-”表示样品在最大无毒剂量无抗流感病毒活性。
(2)TC50：药物半数有毒浓度；IC50：药物对病毒半数抑制浓度；SI：选择指数，SI TC50/IC50
结论：
(1)以上样品118981(样品名SK-O)，118982(样品名SK-I)，118983(样品名SK-II)有抗流感甲型病毒活性，IC50分别为8.12，43.11，55.56，SI分别为4.74，3.87，2.08；其余样品均无抗流感甲型病毒活性。
(2)以上样品118981(样品名SK-0)有抗流感乙型病毒活性，IC50为18.52，SI为2.08；其余样品均无抗流感乙型病毒活性。
由山蜡梅叶的挥发油提取1，8-桉叶素的分子式为：C10H18O，分子量154.25性状：无色油状液体。沸点176℃，冷时结晶，凝固点大于46℃。微溶于水0.4-0.6％，溶于丙二醇，与乙醇和油类互溶。
制法：可以由山蜡梅叶挥发油分馏(馏程175-180℃)得到，收率54-58％。
质量标准 项目 指标 QB/T2243-96FCC(IV)色状 无色液体无色液体香气 樟脑样特征芳香及尖刺的 凉味特征香气，有刺激和凉的口味相对密度25/25℃ 0.920-0.9250.921-0.924折射率(20℃) 1.4550-1.46001.455-1.460旋光度(25℃) -0.5°～+0.5°-0.5°～+0.5°溶解度 1ml溶于5m160％乙醇中1ml溶于5m160％乙醇中冻点/℃ 0.80
1，8-桉叶素小量纯品制备和检测：
山蜡梅叶挥发油，淡黄色澄明油状液体，nD20 1.4751，d2020 0.9590，减压蒸馏40-66℃/13mmHg馏份，进行硅胶(上海产，100-180目，120℃活化2小时)柱层析，用石油醚(30-60℃)洗脱，定性检测1％香兰醛-浓硫酸溶液显色，定量用气相色谱检测(SP-2305型气相色谱仪；20％阿皮松-L；柱温100℃，石油醚洗脱后，改用石油醚∶乙酸乙酯(95∶5 V/V)洗脱，收集，蒸除溶剂得1，8-桉叶素，折光率nD20 1.4574，红外光谱与1，8-桉叶素谱一致。添加到滴丸中，缓解感冒及流感症状，解热镇痛，减轻鼻塞流涕等症状。
以下结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：(200粒用量)
取山蜡梅叶挥发油中的1，8-桉叶素0.3g，山蜡梅叶提取的黄酮甙元0.7g乳糖1g，聚乙醇4000 3g，聚乙醇6000 3g，聚山梨酯-80 0.06g；将主药与乳糖，按等量递加法混合均匀，制得(a)，另取处方量聚乙二醇4000和6000置100℃水浴中加热熔融，制得(b)；将(a)加入(b)，并加入聚山梨酯-80，搅拌均匀，移入保温至57℃的滴丸仪的贮液瓶中，温度恒定后，控制滴头温度40～45℃以每分钟60丸速度滴至液体石蜡的玻璃柱内，过滤得滴丸，以滑石粉吸附干燥，制得滴丸每粒重约40.0mg。
实施例2：
取山蜡梅叶中提取的1，8-桉叶素和黄酮甙元各0.5g，硬脂酸钠100g，虫蜡25g，混合加热至100℃使全部熔融。滴制时以1％硫酸水溶液为冷凝液。使药液保持在65℃时由滴管口滴出。主药与基质的熔液体由冷凝液的下部滴入冷凝液中，每滴管每分钟约滴出200粒滴丸。丸由滴口处徐徐滴出并浮起，边上升边冷凝，滤出滴丸，浸于冷水中除去附着的酸液，再置于有吸水纸的盘中，使滚动。吸去丸剂表面水迹即得(滴管内径4.9mm，外径8.04mm)。
实施例3：
取山蜡梅叶中提取的1，8-桉叶素0.5g、黄酮甙元1g、硬脂酸钠150g聚乙二醇4000 7g 乳糖2g，按实施例1所述方法制得本发明所述的抗感冒药山蜡梅叶滴丸。
实施例4：
取山蜡梅叶中提取的1，8-桉叶素1g、黄酮甙元10g、硬脂酸80g、虫蜡30g 聚山梨酯-80 0.5g，按实施例2所述方法制得本发明所述的抗感冒药山蜡梅叶滴丸。
实施例5：
取山蜡梅叶中提取的1，8-桉叶素3g、黄酮甙元7g、单硬脂酸甘油酯100g、蜂蜡50g 聚山梨酯-80 6g，按实施例2所述方法制得本发明所述的抗感冒药山蜡梅叶滴丸。
实施例6：
取山蜡梅叶中提取的1，8-桉叶素2g、黄酮甙元8g、硬脂酸100g、乳糖3g，按实施例2所述方法制得本发明所述的抗感冒药山蜡梅叶滴丸。
实施例7：
取山蜡梅叶中提取的1，8-桉叶素5g、黄酮甙元10g、蜂蜡25g 硬脂酸钠70g 乳糖7g，按实施例2所述方法制得本发明所述的抗感冒药山蜡梅叶滴丸。
实施例8：
取山蜡梅叶中提取的1，8-桉叶素5g、黄酮甙元9g、聚乙二醇6000 25g硬脂酸钠100g 甘油20g 乳糖5g，按实施例1所述方法制得本发明所述的抗感冒药山蜡梅叶滴丸。
滴丸的质量检查：
(a)性状、重量差异及溶散时限
按国家药典[注]法检查，制得滴丸为淡黄色，色泽均匀，表面光滑的无味丸。3批滴丸(040508，040510，040512)重量差异分别为±3.93％，±4.00％和±4.60％，溶散时限分别为20，22和24分钟，二项均符合药典规定。
(b)含量测定与含量均匀度
气相色谱 1，8-桉叶素在20％阿皮松-L柱上(柱温100℃)显单一峰，在同一条件下，其保留时间与1，8-桉叶素相同，由峰面积求出含量。
高压液相色谱：GC-10ATVP 柱温(℃)：室温 柱型号：ODS C18梯度方式：恒流 检测器：紫外 波长(nm)：295nm 流动相(甲醇∶水 50∶50)面积归一法测含量。
[注]国家药典委员会，中国药典[S]二部，北京化学工业出版社，2000，782，附录IH、IVA、XE、XC。
(c)回收率试验 精密称取干燥至恒重的桉叶素(或黄酮甙元)对照品20mg，按处方比例加辅料一起研细，用95％乙醇将其分次转移至100ml棕色量瓶中，超声提取15min，冷却至室温用95％乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，精取续滤液，气相色谱测定
结果见表1
表1 收率试验结果
加入量/μgml-1 测得量 回收率％
2.24 2.21 98.66
2.24 2.24 100.00
2.04 2.06 100.98
2.16 2.13 98.61
2.12 2.10 99.06
2.18 2.15 98.62
结果表明平均回收率为99.32％、RSD为0.98％，辅料对测定无干扰、测定重现性较好。
(d)含量测定 取3批滴丸中各10个研细，结果相对标示量分别为104.98％、104.92％、105.01％，RSD为0.044％。
(e)含量均匀度 按药典法 均符合标准。
(f)溶出度测定 按药典法 均符合标准。
根据药典对溶出度的规定，本品暂定45min溶出度不得低于80％。
本发明所述的滴丸，产品剂型新，外观好，球形园整，表面光滑，色泽均匀，质地软硬适中，丸重差异小，剂量准确，产品质量易控制，容易达到《(药品卫生标准》，滴丸成型率较高，适宜自动化大规模生产，高生产效率，能降低成本，使药品保质期长。符合中药现代化的要求。