皮肤外用组合物 【技术领域】
本发明涉及一种皮肤外用制剂，其含有从开菲乳(Kefir)开菲乳颗粒获得的发酵乳制品。尤其是，本发明涉及一种皮肤外用制剂，其中含有从中开菲乳颗粒得到的发酵乳制品开菲乳(Kefir)和/或开菲乳清(Kefir whey)开菲乳颗粒。本发明的皮肤外用制剂非常适于用作化妆产品，用于头皮和毛发的组合物，用于清洁皮肤的组合物，用于皮肤病的治疗用组合物等，其具有出色的细胞活化功效，抗皮肤老化的功效，增白功效，抑制黑色素生成的功效等等。
背景技术
皮肤活性不仅受诸如老化的内环境的显著影响，也受诸如紫外射线和各种刺激的外环境的影响，，由此容易引起一些皮肤问题，诸如皮肤粗糙，皱纹，斑点，皮肤黯淡。为了缓解这些问题，人们检测了大量的皮肤活化成分。其中，专门针对细胞活化成分和增白成分作了大量研究。细胞活化成分可刺激细胞分裂，增强新陈代谢并对维持肌体健康起到很好的效果。并且，所述成分可活化表皮角质细胞，促使老化角质细胞脱落并促进被称作皮肤更新的角质化过程，从而改善皮肤至健康、美观地状态。
开菲乳是高加索地区的一种传统发酵乳制品。它是一种类似于酸乳的饮料，通过采用一种称为开菲乳颗粒的种子菌株作为菌母发酵哺乳动物奶乳而得到。尤其是，这种类似于酸乳的发酵乳制品的透明液体部分称为开菲乳清。开菲乳可以是几乎所有水分都去除的干态，也可以是含有相对较多水分的凝胶态。生产干态开菲乳的方法公开于诸如JP-83842/1987公报中并且生产开菲乳清的方法则公开于JP-219538/1990公报中。上述文献的公开内容均在此引入作为参考。
此外，很多人热衷于开菲乳的研究，不仅为得到健康食品，也因为集中在其出色健康功效的药物应用(JP-320069/1993公报，JP-211668/1994公报，JP-37711/1997公报，JP-191852/1997公报等)。所进行的大部分研究和开发目标均在于口服摄入含有开菲乳的食品或药物组合物。
尽管开菲乳具有出色的效果，但是由于最初是作为发酵乳饮料，并且具有独特口味和pH特征(约4.20-4.40)，因而与其它常见酸乳产品相比很难用于除口服产品外的其它方面，诸如皮肤外用制剂，尤其是当使用时需要更好触感的化妆品方面。
另一方面，健康的概念正在向多方面扩展并且开始不仅包括精神和身体方面而且也包括属于美容领域的外貌，诸如皮肤。为了维护扩展意义上的健康，除了预料具有快速效果的药物外，在日常生活中也需要各种显效慢但是安全并且使用简便的产品。
【发明内容】
鉴于这些情况，本发明人一直专注于从开菲乳颗粒得到的传统增进健康的食品发酵乳制品的功能，即安全，热稳定性和对皮肤诸如细胞活化的效果，并且通过克服上述缺陷并利用所述发酵乳制品的特性完成了本发明。
换句话说，本发明涉及一种皮肤外用制剂的组合物，其含有从开菲乳颗粒获得的发酵乳制品，及其药用和化妆品用载体。同样地，本发明涉及一种皮肤外用制剂的组合物，例如化妆品组合物，用于头皮和毛发的组合物，以及用于皮肤清洁剂的组合物，进一步地含有一种或多种选自如下的成分：自由基清除成分，抗氧化剂成分，消炎成分，紫外线防护成分及保湿成分。此外，本发明涉及含有本发明发酵乳制品的细胞活化剂，抗老化剂，皮肤增白剂或黑色素生成抑制剂。
同样，本发明涉及通过将从开菲乳颗粒获得的有效量发酵乳制品施用于皮肤从而活化皮肤细胞，抗皮肤老化，抑制皮肤黑色素生物合成，和/或增白皮肤的方法。本发明方法的优选实施例包括用于化妆或清洁皮肤的方法，用于化妆或清洁头皮和/或毛发的方法，用于治疗皮肤病患者皮肤的方法等。
此外，本发明涉及从开菲乳颗粒获得的发酵乳制品在生产皮肤外用制剂组合物中的应用。
【附图说明】
图1.是作为显示实验实施例1结果示图的照片。
图2.是显示实验实施例1结果的示图(hMLH1)。
图3.是显示实验实施例1结果的示图(hPMS1)。
图4.是显示实验实施例1结果的示图(hPMS2)。
图5.是作为显示实验实施例2结果示图的照片。
图6.是显示实验实施例2结果的示图(hMLH1)。
图7.是作为显示实验实施例3结果示图的照片。
图8.是显示实验实施例3结果的示图。
图9.是作为显示实验实施例4(1)结果示图的照片。
图10.是显示实验实施例4(1)结果的示图。
图11.是作为显示实验实施例4(2)结果示图的照片。
图12.是显示实验实施例4(2)结果的示图。
图13.是作为显示实验实施例4(3)结果示图的照片。
图14.是显示实验实施例4(3)结果的示图。
图15.是显示实验实施例5结果的示图。
实施本发明的最佳方式
用于本发明的从开菲乳颗粒得到的发酵乳制品可通过对哺乳动物奶乳，大豆奶，粉状脱脂奶等由颗粒状细菌进行发酵而得到，所述颗粒状细菌为称作开菲乳颗粒的种子菌株，其含有诸如乳酸，酵母等的至少5-6种组合功能等。当将开菲乳颗粒接种于哺乳动物奶诸如牛奶或山羊奶，大豆奶，脱脂奶等中时，可发生乳酸杆菌的乳酸发酵和酵母的乙醇发酵。开菲乳颗粒的发酵奶制品有别于只通过乳酸杆菌发酵而成的酸乳，有一股酸味，并且除了由酵母释放的二氧化碳气体引起的轻微酒精味道外，还有一种刺激性气味。同样，所述的发酵奶制品富含养分，诸如乳糖，肽，氨基酸，乳酸，维生素，矿物质给我们的身体带来很好的效果。
本发明中采用的发酵奶制品可以通过普通哺乳动物奶乳发酵得到。哺乳动物奶乳的实例包括牛奶，马奶，绵羊奶，山羊奶，水牛奶等等。从哺乳动物奶生产发酵产品的方法不限于但可以是传统方法，诸如采用普通牛奶为原料并用开菲乳颗粒进行发酵，或者采用东欧较常见的马奶。然而，优选的是以牛奶为原料，用开菲乳颗粒发酵得到的产物(见JP-83842/1987公报)。
另外，可以采用普通大豆奶，粉状脱脂奶等等通过开菲乳颗粒生产得到发酵奶制品。
对于本发明中的开菲乳和开菲乳清而言，上文提及的发酵奶制品中类似于酸乳的物质或其干态成分即称为开菲乳，而从类似于酸乳的物质得到的透明液体成分即称为开菲乳清。本发明中采用的从开菲乳颗粒得到的发酵乳制品的优选实施例可以是开菲乳或开菲乳清，或者二者的混合物。
本发明中采用的从开菲乳颗粒得到的发酵乳制品，开菲乳表现出多方面的用途，包括保湿效果，紫外线防护效果，抑制黑色素生成的效果，自由基去除效果以及细胞活化效果等等。由于它还表现出热稳定性并且可进行过滤除菌，因而可用于皮肤的稳定外用制品，特别是用于化妆品材料。虽然它具有由酵母发酵和乳酸发酵而产生的独特气味和4.20-4.40的pH特征，通过与其它化妆品原料或载体混合，其可望能在使用中获得更好的感觉，并能表现出有益效果和效用。
本发明中采用的开菲乳可以是类似于酸乳的形态，或者是通过干燥(冷冻干燥等)类似于酸乳的开菲乳而得到的粉末状，或者是对粉末状开菲乳进一步处理而得到的颗粒状。也可以是用水，缓冲液，酒精，油等等处理而得到的液态。
当所述开菲乳用于皮肤外用制剂时，以外用制剂总重计其优选地包含0.01-3.00wt％的开菲乳，优选地包括1.00-3.00wt％的开菲乳。
另外，本发明中采用的开菲乳清是从上述类似于酸乳的发酵奶制品中得到一种透明液体成分，又称作“乳血清”。其富含诸如乳糖，肽，氨基酸，乳酸，维生素，矿物质的养分；并且认为含有原料奶中约一半的养分。在开菲乳清中，固体含量约6％，其余为水含量。开菲乳清比普通酸乳含有更多的L-乳糖，并且乳酸杆菌的抗菌效果正在引起人们的关注。并且，已经发现开菲乳清可保持皮肤湿度并调节pH至理想的温和酸度，因为开菲乳清的结构与皮肤角蛋白细胞中的NMF(天然保湿因子)结构类似。此外，鉴于其抗过敏效果及出色的保湿效果，开菲乳被认为可以保护皮肤免受外部刺激或细菌侵害。
尽管具有这些有利特性，开菲乳清一直只是被看作废弃物。只是最近其有效利用才引起人们的讨论。
本发明中采用的通过开菲乳颗粒发酵得到的乳制品开菲乳清显示出各种有用功效诸如与上述开菲乳相同的保湿效果，紫外线防护效果，抑制黑色素生成的效果，自由基清除效果以及细胞活化效果。同时它还表现出热稳定性，可进行过滤除菌，从而使其可以用作稳定的化妆品原料。它具有由酵母发酵和乳酸发酵而产生的独特气味，以及4.20-4.40的独特pH，然而，将开菲乳与其它化妆品原料或载体混合，其可望在应用中能达到更好的感觉，并能表现出有益效果和效用。
当所述的开菲乳清用于皮肤外用制剂时，以外用制剂总重计其优选含量为0.01-3.00的wt％，特别地，优选含量为0.01-3.00wt％。
上述从开菲乳颗粒得到的发酵乳制品，无论是开菲乳或开菲乳清均可用作细胞活化剂，因为其具有如上文所述的细胞活化效果。除此以外，由于其紫外线防护效果，抑制黑色素生成的效果，以及自由基清除效果，它也可用作抗皮肤老化剂和增白剂，并且它显然可用作黑色素生成抑制剂。
本发明的皮肤外用制剂组合物当用作为药品时，是一种含有从开菲乳颗粒得到的发酵乳制品和可作药用的载体的组合物。当用作化妆产品或清洁剂时，它是一种含有从开菲乳颗粒得到的发酵乳制品和化妆品用载体的组合物。本发明的皮肤外用制剂组合物可含有通常化妆产品、准药物或药物中用于皮肤外用制剂的任何其它所需成分，例如选自如下的一种或多种成分：含量范围不会干扰本发明效果的自由基清除成分，抗氧化剂成分，消炎成分，紫外线防护成分和保湿成分。
本发明的皮肤外用制剂组合物可通过与各种所需载体，含油物，润湿剂，表面活性剂，抗菌剂，香料，水，醇类，其他碱，增稠剂等以通常方式适当混合进行生产，所述载体包括例如，诸如凡士林或微晶蜡的碳氢化合物，诸如霍霍巴油或鲸蜡，诸如牛脂或橄榄油的甘油三酯，诸如硬脂酸或油酸的脂肪酸，诸如甘油或1，3-丁二醇的多元醇。
本发明的皮肤外用制剂组合物中含有的自由基清除成分的实例包括一种或多种如下成分：超氧化物歧化酶(SOD)，甘露醇，类胡萝卜素，虾青素，芸香苷及其衍生物，胆红素，胆固醇，色氨酸，组氨酸，五羟黄酮，儿茶素及其衍生物，五倍子酸及其衍生物，谷胱甘肽及其衍生物，黄芩提取物，银杏提取物，鸡血藤提取物，野山楂提取物，玫瑰提取物，虎耳草提取物，香蜂草提取物，Geranium thunbergii提取物，牡丹提取物，岩芹提取物，Potentilla tormentilla提取物，Siraitiagrosvenori提取物，Yashajitsu提取物，枸杞根提取物(Lycium chineseroot)，甜菊(Stevia rebaudiana)提取物以及Rosa multiflora thunberg提取物。
本发明皮肤外用制剂组合物中含有的抗氧化成分的实例包括一种或多种如下成分：甘露醇，芸香苷及其衍生物，栎精，磷脂，吡哆素，类黄酮，多元酚化合物，银杏提取物，虎耳草提取物，维生素A族及其衍生物，维生素B族及其衍生物，维生素C族及其衍生物，维生素D族及其衍生物，维生素E族及其衍生物，二丁基羟甲苯和丁基羟基苯甲醚。
本发明的皮肤外用制剂组合物中含有的消炎成分的实例包括一种或多种如下成分：甘草酸及其衍生物，甘草亭酸及其衍生物，甲芬那酸(mefenamic acid)及其衍生物，苯基丁氮酮及其衍生物，indomethacin及其衍生物，布洛芬(ibuprofen)及其衍生物，酮洛芬(ketoprofen)及其衍生物，尿囊素及其衍生物，愈创木薁及其衍生物，ε-氨基己酸，双氯芬酸钠(diclofenac sodium)，凝血酸及其衍生物，明日叶(Angelicakeiskei)提取物，山金车提取物，芦荟提取物，蓼提取物，姜黄提取物，小连翘提取物，黄柏提取物，德国洋甘菊(Matricaria chamomilla)提取物，甘草提取物，金银花提取物，水芥菜提取物，康复力(Symphytumofficinale)提取物，五加提取物，鼠尾草提取物，紫草根提取物，紫苏提取物，白桦提取物，茶提取物，金盏花提取物，接骨木花提取物，香蒲(Typha latifolia)提取物，无患子(Sapindus mukurossi)提取物，蒿提取物，桉树提取物，日本当归提取物以及紫云英提取物。
本发明的皮肤外用制剂组合物中含有的紫外线防护组分的实例包括一种或多种如下成分：对氨基苯甲酸(PABA)，乙基PABA，甘油基PABA，N，N-二甲基PABA-戊基，N，N-二甲基PABA-2-乙基己基，2-乙基己基水杨酸酯，乙二醇水杨酸酯，高薄荷基水杨酸酯，2-乙基己基-4-甲氧基-肉桂酸酯，乙氧基乙基-4-甲氧基-肉桂酸酯，4-甲氧基-肉桂酸钾，甲基-4-5-二异丙基肉桂酸酯，甘油基单-2-乙基-己酸酯，二-p-甲氧基肉桂酸酯，2-羟基-4-甲氧基-二苯甲酮，2-羟基-4-甲氧基-二苯甲酮磺酸酯，2-羟基-4-甲氧基-二苯甲酮磺酸钠，2，2’-二羟基-4，4’-二甲氧基-二苯甲酮，2，2’-二羟基-4，4’-二甲氧基-二苯甲酮-5-磺酸钠，2-4-二羟基二苯甲酮，2，2’，4，4’-四羟基-二苯甲酮，2-(2-羟基-5-甲基苯基)-苯并三唑，咪唑丙烯酸，乙基咪唑丙烯酸酯，4-叔-丁基-4，-甲氧基-二苯甲酰甲烷，二氧化钛，氧化锌，氧化铁，氧化铈以及氧化锆。
本发明的皮肤外用制剂组合物中含有的保湿成分的实例包括一种或多种选自如下的成分：选自透明质酸的粘多糖及其衍生物，硫酸软骨素，硫酸皮肤素，硫酸乙酰肝素，硫酸肝素和角质素；选自胶原、弹性蛋白、纤连蛋白和角质蛋白的蛋白及其衍生物和水解物；选自甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、羟赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、茶氨酸、orthinine、瓜氨酸、以及吡咯烷酮羧酸酯的氨基酸及其衍生物；选自山梨糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖、麦芽糖醇、木糖醇、木糖、海藻糖、肌醇、葡萄糖、季戊四醇、果糖、蔗糖及其酯、以及糊精及其衍生物的糖类；粘蛋白，D-泛醇及其衍生物，尿素，磷脂，糖脂和N-脂酰鞘氨醇，深海水，蜂蜜，红糖提取物，芦荟提取物，海藻提取物，榅桲(Cydonia oblonga)提取物，北美金缕梅提取物，丝瓜提取物，锦葵提取物，苹果提取物，葡萄柚(Citrus paradisi)提取物，欧州李(Prunusdomestica)提取物，Citrus aurantifolia提取物，香橙(Citrus junos)提取物，南京椴(Tilia miqueliana)提取物，悬钩子提取物，苦参(Sophoraflavescens)提取物，大枣(Zizyphus jujuba)提取物，麦芽提取物，茵陈蒿(Artemisia capillaris)，白百合(Lilium candidum)提取物，啤酒花提取物，薄荷(Mentha piperita)提取物，鱼腥草提取物，芍药提取物，薏苡提取物，熏衣草提取物，燕麦提取物，假叶树(Ruscus aculeatus)提取物，药蜀葵提取物，茯苓(Wolfiporia cocos)提取物，荨提取物，茴香提取物，猕猴桃(Actinidia chinensis)提取物，黄瓜提取物，葡萄提取物，仙人掌提取物，地黄根提取物，问荆提取物，Cnidium officinale提取物，桑提取物，百里香提取物，马栗树提取物，桃花(Prunus persica)提取物，Rosa damascena提取物，杏树提取物，玉米提取物，姜提取物，酸柠檬提取物，酸橙提取物，草莓提取物，黄龙胆提取物，锦葵提取物，堇菜提取物，牛蒡提取物，羽扇豆提取物，长角豆提取物，常春藤提取物，松树提取物，Rodgersia podophylla提取物，地榆提取物，芒柄花提取物，黄龙胆提取物，八仙花提取物，Fukutanpopodandelion提取物，Cydonia种子提取物，甘油和1，3-丁二醇。
本发明的皮肤外用制剂组合物可进一步的与其它具有诸如增白效果和细胞活化效果的成分适当混合。
上述的具有增白效果的成分的实例包括：维生素C及其衍生物和盐，胎盘提取物，甘草提取物，薏苡提取物，芦笋提取物，蔷薇果实提取物，悬钩子提取物，Sophora radix提取物，鸡血藤(Millettia reticulata)提取物，五加提取物，米糠提取物，麦芽提取物，堇菜提取物，野山楂提取物，(白百合)Lilium candidum提取物，芍药提取物，大豆提取物，茶叶提取物例如绿茶提取物，茶叶提取物和乌龙茶提取物，糖蜜提取物，白蔹提取物，山毛榉芽提取物，葡萄提取物，啤酒花提取物，玫瑰提取物，枣提取物，Siraitia grosvenori提取物，黄芩提取物，海藻提取物等等。
进一步地，上述具有细胞活化效果的组分的实例包括：维生素A及其衍生物，柠檬酸，乳酸，酒石酸，苹果酸，乙醇酸，琥珀酸，丝氨酸，谷氨酸，羟脯氨酸，茶氨酸，吡咯烷酮羧酸酯，酵母提取物，乳酸杆菌提取物，双歧杆菌提取物，发酵代谢物提取物等等。在这些细胞活化剂中，尤其优选的是维生素A及其衍生物，柠檬酸，乳酸，苹果酸，丝氨酸和吡咯烷酮羧酸酯。
此外，本发明的皮肤外用制剂组合物可广泛应用于诸如用于皮肤外部表层的化妆产品，用于头皮和毛发的组合物，用于皮肤清洁剂的组合物，药物，准药物。同样，其剂型可以是用于传统皮肤外用制剂的任一形式，只要其可适用于皮肤，例如溶液体系，诸如皮肤洗液的增溶体系，诸如乳液和乳膏的乳化体系，粉末分散体系，水-油两相体系，水-油-粉末三相体系，分散液体，软膏，凝胶，气雾剂等等。制备这些皮肤外用组合物时，其成分的类型和用量是可调节的，调节范围由本领域技术人员根据传统方法可合适地确定。
另外，本发明的皮肤外用制剂组合物除了用作面部化妆产品诸如皮肤洗液，乳液，乳膏及面膜或粉底外，其使用形式也可任选地为粉底，擦面粉，口红，润唇剂，其它妆饰用化妆产品，用于特殊目的的化妆产品，用于身体的化妆产品，用于防晒或防晒癍的化妆产品，用于头皮和毛发的化妆产品，用于香料的化妆产品，面部清洁剂，用于头发的化妆产品(用于头皮和用于毛发)，身体清洁剂，头发清洁剂(用于头皮和用于毛发)，用于修面的化妆产品，用于洗浴的化妆产品等等。
同样，本发明的皮肤外用制剂的形式和用途并不受上述实例的限制。
实施例
本发明将通过如下的非限制性检测实实施例和实施例进行更详细的说明。
下述检测目的在于检验由开菲乳颗粒得到的发酵乳制品所含成分对细胞的各种效果。首先，制备各个检测的样品。对发酵乳制品的固体物开菲乳进行离心，并去除沉淀。然后，用0.45μm滤膜进行过滤，并将其进样至NAP-25微型柱中，分子量为5000或以上的部分是流通组分，而分子量5000或以下的部分则被分成1，2，3和4组分。
实验实施例1：通过开菲乳(1)检测细胞活化作用
DNA常由于DNA复制错误或重组而导致错配突变，并且修复这种错配突变的错配修复基因(hMLH1，hPMS1，hPMS2，hMSH2，hMSH3和hMSH6)是已知的。当这些错配修复基因发生突变时，基因组会变得不稳定，并且有出现细胞恶性转化的危险。
将分子量5000或以上组分和组分3样品加入人恶性黑色素瘤细胞系HIV-I，并培养15小时。通过RT-PCR技术分析错配修复基因hMLH1，hPMS1和hPMS2的mRNAs表达量。结果证实了加入样品的细胞中表达量有增长。结果如图1到图4所示。
实验实施例2：通过开菲乳(2)检测细胞活化作用
将实验实施例1中制备的组分3加入人恶性黑色素瘤细胞系HIV-I，培养5小时，并通过蛋白质印迹技术分析错配修复基因之一的hMLH1的蛋白表达量。结果，证实了加入开菲乳的细胞中表达量的增长。结果如图5和图6所示。
实验实施例3：通过开菲乳检测PCNA增长
已经知道PCNA(增殖细胞核抗原)是一种与细胞增殖或修复有很大关联的分子，并且在缺失PCNA的细胞中，其修复功能会严重缺乏。
将组分3加入人恶性黑色素瘤细胞系HIV-I，并培养15小时。通过蛋白质印迹技术分析PCNA蛋白的表达量。结果证实了加入开菲乳的细胞中表达量有增长。结果如图7和图8所示。
实验实施例4：检测错配修复基因hMLH1表达的增强
(1)将组分3(3ml)进样至3ml的阴离子交换树脂DEAE柱中。将被吸附的物质用NaCl进行洗脱，脱盐，然后加入人恶性黑色素瘤细胞系HIV-I中，并培养15小时。通过RT-PCR技术证实了错配修复基因hMLHl的mRNAs表达量有一个增强效果。洗脱过程如下所示。
流通组分
50mM磷酸钠缓冲液 6ml
淋洗 50mM磷酸钠缓冲液 6ml
组分1 50mM磷酸钠缓冲液 6ml
组分2 50mM磷酸钠缓冲液0.15M NaCl 6ml
组分3 50mM磷酸钠缓冲液0.15M NaCl 6ml
组分4 50mM磷酸钠缓冲液1M NaCl 6ml
组分5 50mM磷酸钠缓冲液1M NaCl 6ml
将对照结果赋值为1，则每个样品的相对值如下，所作的图如图10所示。
表1 对照流通组分 淋洗 组分1 组分2 组分3 组分4 组分5 1.00 0.97 1.06 0.79 1.02 1.64 1.94 2.5
(2)将组分3(3ml)进样至3ml的阳离子交换树脂DEAE柱中。将被吸附的物质用NaCl进行洗脱，脱盐，然后加入人恶性黑色素瘤细胞系HIV-I中，并培养15小时。通过RT-PCR技术证实了错配修复基因hMLH1的mRNA表达量有一个增强效果。洗脱过程如下所示。
流通组分
50mM磷酸钠缓冲液 6ml
淋洗 50mM磷酸钠缓冲液 6ml
组分1 50mM磷酸钠缓冲液 6ml
组分2 50mM磷酸钠缓冲液0.15M NaCl 6ml
组分3 50mM磷酸钠缓冲液0.15M NaCl 6ml
组分4 50mM磷酸钠缓冲液1M NaCl 6ml
组分5 50mM磷酸钠缓冲液1M NaCl 6ml
将对照结果赋值为1，每个样品的相对值如下，所作的图如图12所示。
表2 对照流通组分 淋洗 组分1 组分2 组分3 组分4 组分5 1.00 1.46 1.61 1.29 1.38 1.98 1.93 1.83
(3)将组分3改为进样至疏水柱中。将被吸附的物质用NaCl进行洗脱，脱盐，然后加入人恶性黑色素瘤细胞系HIV-I中，并培养15小时。通过RT-PCR技术证实了错配修复基因hMLH1的mRNA表达量有一个增强效果。洗脱过程如下所示。
流通组分
100mM磷酸钠缓冲液
1.8M硫酸铵 6ml
淋洗 100mM磷酸钠缓冲液
1.8M硫酸铵 6ml
组分1 100mM磷酸钠缓冲液
1.8M硫酸铵 6ml
组分2 100mM磷酸钠缓冲液
1.44M硫酸铵 6ml
组分3 100mM磷酸钠缓冲液
1.44M硫酸铵 6ml
组分4 100mM磷酸钠缓冲液 6ml
组分5 100mM磷酸钠缓冲液 6ml
将对照结果赋值为1，则每个样品的相对值如下，所作的图如图14所示。
表3 对照流通组分 淋洗 组分1 组分2 组分3 组分4 组分5 1.00 1.05 1.15 1.05 1.73 1.41 1.31 1.17
实验实施例5：检测开菲乳清的黑色素生成抑制效果
对源自开菲乳发酵液的开菲乳清对人黑色素细胞系SK-MEL的黑色素生成的抗氧化剂作用效果进行了研究。考虑到开菲乳清将用于培养细胞体系，采用的样品为中和作用后在渗透压为0.300osmol/kg条件下制备得到。
<实验方法>
将SK-MEL细胞以4×105细胞/毫升的细胞密度接种于5ml皿中。预培养后，将培养基更换为相对于培养基组分含0％(对照)，0.1％和1％开菲乳清的培养基，并继续培养24小时。用胰蛋白酶处理回收细胞，在所有条件下均稀释至总细胞数为3×106个细胞，并回收至1.5ml管中。将该管离心(5000rpm，10min)，将400μl的1M NaOH加入细胞沉淀中，100℃下煮沸10分钟。将溶胞产物充分混合，在每种条件下将三等份(100μl)置于96孔板中。然后通过板读数器检测405nm下的吸光度，并确定黑色素的量。
<结果>
结果见于表4和图15。从结果可以看出当黑色素瘤在加入开菲乳清的培养基中培养时，其黑色素生成被明显抑制。
表4 样品 平均吸光度 相对值(％) 对照 0.255 100 0.1％ 0.219 85.9 1.0％ 0.214 83.9
实验实施例6：检测改善头皮和毛发的效果
20名健康受试者(12名男性，8名女性)连续1个月使用含有发酵乳制品开菲乳的护发产品。通过每天洗发后施用该产品于头皮和毛发上，主要在发痒部位，观察头发光泽，头皮屑，毛发脱落和头皮瘙痒进行检测。
结果如下。
头发光泽：
改善：12例，无改变：6例，恶化：0例，未知：2例
头皮屑：
显著减少：8例，无改变：10例，恶化：0例未知：2例
毛发脱落：
减少：5例，无改变：12例，恶化：1例，未知：2例
头皮瘙痒：
减少：9例，无改变：8例，恶化：1例，未知：2例
结果表明含有开菲乳的护发产品作为用于头皮和毛发的组合物是有效果的，可以改善毛发光泽，减少头皮屑，减少毛发脱落，并可预防头皮瘙痒。
实验实施例7：采用了含发酵乳制品开菲乳的一种凝胶(商标名：kefran)，结果如下。
(1)26岁女性：我所用过的几乎所有皮肤洗液等中，每次我将它们倒入手掌时，它们一接触我手指上由于特异反应性而形成的伤口时，都痛的直跳，直至现在也这样。因此当我姐姐推荐kefran时，我很担心它会以同样的方式伤害我，然而事实上根本没有。当然，我可以将它施用于脸上，没有任何痛感，因此从今以后我可以没有任何担心的使用它了。
(2)34岁女性：我的第二个孩子出生后，我产生特异反应性，并且我的皮肤变得非常敏感。部分由于我的年龄的原因，过去我对使用时具有温和触感的护肤产品不满意，一直寻求好的产品，自从买了kefran后我现在一直用它。真的非常好。
(3)23岁女性：以前我一直为寻找一种适合我的特异反应性皮肤的基础护肤产品而苦恼，但是自从我用了kefran后，我的皮肤得到了显著改善。
(4)45岁女性：我对日光敏感。我的脸等等可以通过化妆、戴帽子等避免日光的伤害。然而，如果我的手背和胳膊时不时暴露于太阳底下，到晚上皮肤就会变得象goosebump似的，并且剧烈的瘙痒令我痛苦不堪。当我注意到这个问题时，如果及早使用kefran，我的皮肤会很快得到恢复，并且剧烈的瘙痒也会得到缓解。
实施例1：乳膏
<配方(重量％)>
(1)聚氧乙烯(40E.O.)一硬脂酸 2.00
(2)甘油一硬脂酸酯(自乳化型) 5.00
(3)硬脂酸 5.00
(4)二十二烷醇 0.50
(5)角鲨烯 15.00
(6)十六烷基异辛酸酯 5.00
(7)抗菌剂 适量
(8)1，3-丁二醇 5.00
(9)开菲乳滤液 1.00
(10)纳豆提取物 1.00
(11)大豆提取物 0.20
(12)虎耳草提取物 0.10
(13)黄瓜提取物 0.10
(14)甘草提取物 0.10
(15)甘草酸二钾 0.05
(16)桑提取物 0.05
(17)黄芩提取物 0.05
(18)角蛋白水解液 1.00
(19)香料 适量
(20)纯化水 余量
<制备过程>
上述成分(1)至(7)在70℃加热条件下溶解。然后，将(8)和一部分(20)加热至70℃并加入前面的溶解成分中，然后，待冷却时将成分(9)至(18)，(19)和剩余部分的(20)加入，从而得到乳膏。
实施例2：洗液
<配方(重量％)>
(1)甘油 5.00
(2)1，3-丁二醇 6.50
(3)聚氧乙烯(20mol)脱水山梨醇一月桂酸酯 1.20
(4)乙醇 8.00
(5)开菲乳滤液 1.00
(6)纳豆提取物 1.00
(7)抗菌剂，抗氧化剂 适量
(8)香料 适量
(9)纯化水 余量
<制备过程>
首先，将上述成分(3)，(4)，(7)和(8)混合并溶解，然后将(1)，(2)，(5)，(6)和(9)混合并溶解。将这些混合并溶解的成分进一步均匀混合，这样即得到洗液。
实施例(3)：乳液
<配方(重量％)>
(1)硬脂酸 1.50
(2)十六烷醇 0.50
(3)蜂蜡 2.00
(4)聚氧乙烯(20mol)一油酸酯 1.00
(5)甘油一硬脂酸酯 1.00
(6)乙醇 10.00
(7)熊果苷 20.00
(8)亚硫酸氢钠 0.03
(9)丙二醇 5.00
(10)开菲乳滤液 1.00
(11)纳豆提取物 1.00
(12)大豆提取物 0.20
(13)虎耳草提取物 0.10
(14)黄瓜提取物 0.10
(15)甘草提取物 0.10
(16)甘草酸二钾 0.05
(17)桑提取物 0.05
(18)黄芩提取物 0.05
(19)香料 适量
(20)抗菌剂，抗氧化剂 适量
(21)纯化水 余量
<制备过程>
将上述成分(7)、(9)和(10)至(18)加入(21)中，加热条件下溶解，并保持70℃以形成水相。将成分(19)加入(6)中并溶解以形成醇相。将成分(1)至(5)，(8)和(20)混合，加热条件下溶解，并保持70℃以形成油相。将油相加入水相进行初乳化，然后通过均匀搅拌机进行均匀乳化作用。于搅拌时将醇相加入，然后搅拌时将所得到的混合物冷却至30℃，这样即得到乳液。
实施例4：凝胶剂
<配方(重量％)>
(1)1，3-丁二醇 5.00
(2)海藻糖溶液 3.00
(3)开菲乳滤液 1.00
(4)纳豆提取物 1.00
(5)海藻提取物 1.00
(6)尿素 0.80
(7)聚羧乙烯 0.80
(8)甘油 0.50
(9)L-抗坏血酸-磷酸镁 0.50
(10)氢氧化钾 0.50
(11)苯氧基乙醇 0.30
(12)羧甲基纤维素钠 0.20
(13)大豆提取物 0.20
(14)虎耳草提取物 0.10
(15)黄瓜提取物 0.10
(16)甘草提取物 0.10
(17)甘草酸二钾 0.05
(18)桑提取物 0.05
(19)黄芩提取物 0.05
(20)纯化水 84.75
<制备过程>
将上述成分(3)至(8)和(13)至(19)均匀溶解于(20)中以形成水相。另一面，将(1)、(2)、(9)和(11)溶解并加入水相中。然后，将混合物用(10)和(12)进行中和和增稠，这样即得到凝胶。
实施例5：剥离型面膜
<配方(重量％)>
(1)95％乙醇 10.00
(2)聚氧乙烯(15mol)油醇醚 2.00
(3)抗菌剂，抗氧化剂 适量
(4)香料 适量
(5)乳清 1.00
(6)海藻提取物 1.00
(7)甘草酸二钾 0.05
(8)聚乙烯醇 12.00
(9)甘油 3.00
(10)聚乙二醇 1.00
(11)纯化水 余量
<制备过程>
从上述成分(5)至(11)在80℃下制备水相，并冷却至50℃。然后，在室温下将成分(1)至(4)制备生成一个醇相，将该醇相加入水相中，并均匀混合。然后将混合物冷却，这样即得到面膜。
实施例6：液体粉底
<配方(重量％)>
(1)羊毛脂 7.00
(2)液体石蜡 5.00
(3)硬脂酸 2.00
(4)十六烷醇 1.00
(5)2-乙基己基对-甲氧基肉桂酸酯 3.00
(6)甘油 5.00
(7)三乙醇胺 1.00
(8)羧甲基纤维素 0.70
(9)纯化水 余量
(10)二氧化钛 8.00
(11)微粒化二氧化钛 2.00
(12)氧化锌 5.00
(13)云母 15.00
(14)滑石 6.00
(15)色素 6.00
(16)开菲乳滤液 0.50
(17)桑提取物 0.05
(18)黄芩提取物 0.05
(19)香料 适量
<制备过程>
首先，将上述成分(1)至(5)混合并溶解。然后，加入成分(10)至(15)，均匀混合，并保持温度70℃。随后，将(6)至(9)均匀溶解，保持在70℃，并加入前面的溶解混合物中，并进行均匀乳化。
待所得混合物冷却后，加入成分(16)至(19)，这样即得到液体粉底。
对本发明的皮肤外用制剂的感觉评测
邀请了20名女性使用含有用开菲乳颗粒得到的发酵乳制品的皮肤外用制剂，每天早晚洗脸后将制剂施用于整个面部，连用3个月，其效力由一名医生进行评测。
I.干性皮肤
1.非常有效 11例
2.有效 6例
3.无变化 5例
4.恶化 0例
II.对面部黄褐斑的效力
1.非常有效 6例
2.有效 9例
3.无变化 4例
4.恶化 1例
III.硬性肤质
1.非常有效 3例
2.有效 8例
3.无变化 8例
4.恶化 1例
从上述评测可以明显看出，根据本发明的皮肤外用制剂对于干性皮肤，斑点和硬性肤质是安全和有效的，并且可以提高皮肤细胞活性。
工业实用性
从开菲乳颗粒得到的发酵乳制品具有广泛用途，包括保湿效果，紫外线防护效果，黑色素生成抑制效果和自由基清除效果。同时它还具有热稳定性，并可进行过滤除菌，这就使其有可能用作稳定的皮肤外用制剂，特别是化妆品原料。然而，它具有独特的酵母发酵和乳酸发酵气味，以及4.20-4.40的pH。因而可以认为，通过与其他化妆品原料适当混合，证实当使用时具有舒适的触感，并且具有由开菲乳颗粒得到的发酵乳制品所表现出来的最初效果和效力。