甘草酸二铵粉针制剂及其制备方法.pdf

本发明涉及一种甘草酸二铵粉针制剂及其制备方法，它用甘草酸二铵，加适量无菌注射用水和适量辅料制备成粉针制剂或者是冻干粉针制剂，与现有技术相比：本发明选用无菌分装粉针剂、冻干粉针剂，避免了由于封针抽取注入大输液的中间环节，杜绝了这一用药过程中的交叉污染，使污染的机率下降；而且粉针剂更有利于甘草酸二铵的稳定，在制备过程中不加热灭菌，不会造成药物分解破坏，含水量低，不易氧化，长期贮存不易分解变质，产品中的微粒物质少，提高了用药的安全性，产品可以长期贮存、剂量准确、外观优良、稳定性好、安全性高、疗效显著。

1、  一种甘草酸二铵粉针制剂，其特征在于：它用甘草酸二铵，加适量无菌注射用水和辅料制备成粉针制剂或者是冻干粉针制剂。

2、  按照权利要求1所述的甘草酸二铵粉针制剂，其特征在于：按照重量配比计算：它用3～8g甘草酸二铵、15～25g甘氨酸、1.0mol/L的氢氧化钠溶液适量，加无菌注射用水至1000ml制备成粉针制剂或者是冻干粉针制剂。

3、  按照权利要求1或2所述的甘草酸二铵粉针制剂，其特征在于：它用5g甘草酸二铵、20g甘氨酸、1.0mol/L的氢氧化钠溶液适量，加无菌注射用水至1000ml制备成粉针制剂或者是冻干粉针制剂。

4、  如权利要求1-3所述的甘草酸二铵粉针制剂的制备方法，其特征在于：取甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解；加入甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)经115-120℃活化2小时，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，无菌分装，预冻4时、干燥35小时，即得。

5、  按照权利要求3所述的甘草酸二铵粉针制剂的制备方法，其特征在于：取甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解；加入甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)经115-120℃活化2小时，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，喷雾干燥或在有机溶媒中重结晶，分装，密封即得。

甘草酸二铵粉针制剂及其制备方法
技术领域：本发明涉及一种甘草酸二铵粉针制剂及其制备方法，属于药品的技术领域。
技术背景：甘草酸二铵是中药甘草有效成分的第三代提取物，通过作用于激素受体，影响离子通道，激活或抑制酶活性，调节物质代谢，调节胆碱能神经的兴奋性，具有肾上腺皮质激素样作用，抗炎抗变态反应明显，并有抗病毒、免疫调节、保护膜结构、抗溃疡和解痉作用；具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，药理实验证明，小鼠口服能减轻因四氯化碳、硫代乙酰胺和D-氨基半乳酸引起的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶升高，还能明显减轻D-氨基半乳酸对肝脏的形态损伤和改善免疫因子对肝脏形态的慢性损伤。对其他疾病亦有良好的治疗作用，例如治疗流行性出血热、预防抗痨药的不良反应、治疗婴幼儿毛细支气管炎、佐治有机磷农药中毒、佐治流行性腮腺炎并发脑膜炎、佐治难治性肾病综合征、治疗皮肤病、支气管哮喘等。目前市场上有水针制剂，还有申请号为“02129437”，名称为“一种甘草酸二铵大输液制剂”的申请，但是水针制剂、大输液制剂在制备过程中需加热灭菌，易造成药物分解破坏，长期贮存在水溶液中易氧化、分解变质，产品的不溶性微粒物质较多，而静脉输液中的不溶性微粒，可给患者带来多方面的危害，如肉芽肿、肺水肿、静脉炎、热原样反应、局部组织血栓和坏死等，影响用药的安全性。
发明内容：本发明目的在于提供一种疗效显著且质量稳定的甘草酸二铵粉针制剂及其制备方法，本发明将甘草酸二铵制成无菌分装粉针、冻干粉针可以提高药物的稳定性，避免中间环节，使污染的几率下降，使其更加安全有效并能方便运输，可以解决现有技术存在的问题。
本发明的技术方案是这样实现的：它用甘草酸二铵，加适量无菌注射用水和适量辅料制备成粉针制剂或者是冻干粉针制剂。按照重量配比计算：它用3～8g甘草酸二铵、15～25g甘氨酸、1.0mol/L的氢氧化钠溶液适量，加无菌注射用水至1000ml制备成粉针制剂或者是冻干粉针制剂。优选处方为：它用5g甘草酸二铵、20g甘氨酸、1.0mol/L的氢氧化钠溶液适量，加无菌注射用水至1000ml制备成粉针制剂或者是冻干粉针制剂。本发明的制备方法是：取甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解，加入甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)经115-120℃活化2小时，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，无菌分装，预冻4时、干燥35小时，即得。准确的说：取甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解；加入甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)经115-120℃活化2小时，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，喷雾干燥或在有机溶媒中重结晶，分装，密封即得。
与现有技术相比：本发明选用无菌分装粉针剂、冻干粉针剂，避免了由于封针抽取注入大输液的中间环节，杜绝了这一用药过程中的交叉污染，使污染的机率下降；而且粉针剂更有利于甘草酸二铵的稳定，在制备过程中不加热灭菌，不会造成药物分解破坏，含水量低，不易氧化，长期贮存不易分解变质，产品中的微粒物质少，提高了用药的安全性。在本发明中：冷冻干燥工艺的关键是必须确保干燥后的固体物结晶均匀，色泽一致，固体支架基本上保持原来的体积，并有足够的强度，解决甘草酸二铵粉针剂重新溶解时出现浑浊的关键问题，本申请人在研制过程中发现：赋型剂的种类的选择及用量、冷冻时间的选择、冻干前溶液pH值范围、活性炭用量均直接影响本产品的质量，例如：活性炭的用量，用量少不能除热原，用量大则主药的损失严重；本申请人通过实验发现本产品冻干前溶液如果不调pH值、所得的产品pH值偏低，刺激性强。本申请人通过大量实验研究，选用了甘氨酸作赋型剂并预冻4小时，干燥35小时，冻干前溶液pH值为6.0～7.0时，活性炭的用量0.02％时，所得产品质地疏松，加水后迅速溶解恢复到药液原有的特性，重新溶解时不浑浊；含水量低，不易氧化，有利于产品长期贮存；剂量准确，外观优良；稳定性好，安全性高，疗效显著。
本申请人进行了一系列实验，可以证明本发明制剂有效可控、生产方法简单可行：
实验例1  对小鼠实验性肝损伤的保护作用
动物：昆明种小白鼠，体重18-22g；小鼠肝损伤模型：健康小鼠40只，设正常对照组、CCL₄肝损伤模型组、甘草酸二铵水针剂组、本发明制剂组，共4组，每组小鼠10只，各组均采用腹腔注射给药，每只每次0.2ml，1次/日。正常对照组和模型组给同体积生理盐水。给药第5天，除正常对照组外，各组小鼠均ip0.1％ CCL₄橄榄油200ml/kg^-1 1次，除正常对照组及模型组外，其他各组动物继续给药4次后，摘取小鼠眼球，收集血样，以生化测定仪检测血清ALT水平，并切取肝脏标本作病理检查。
①对CCL₄肝损伤小鼠血清ALT含量的影响
组别          剂量(mg/kg)    小鼠血清ALT(IU·L^-1)
空白对照组    -              18.17±4.25
CCL₄模型组   0.02mlL        251.32±12.81
水针剂组      4              171.25±20.32
本发明制剂组  4              170.07±17.85
②病理组织学检查：于同一部位肝组织取材，中性福尔马林固定，石腊包埋、切片、VW染色、光镜下观察。CCL₄肝损伤模型组小鼠肝细胞带状坏死，小叶结构部分破坏，肝细胞坏死区域波及一个小叶区或连接于中央静脉与汇管区之间，肝细胞并呈弥漫性变性。本发明制剂可使细胞肿胀、脂肪变性及坏死减轻。
实验表明，本发明粉针剂制剂疗效好，不低于市售的甘草酸二铵水针剂。
实验例2：对大鼠酒精性肝损伤组织学影响观察
动物与分组：健康SD大鼠30只，雌雄不拘，体重150～200g，适应饲养1周，随机分为3组：正常组10只，模型组10只，治疗组10只；造模与给药方法：将56度北京红星二锅头酒用蒸馏水配制成酒精40％的白酒。备用，模型组大鼠按10ml/kg每日分2次灌胃造模4周，第5周酒精浓度升至50％，继续每日分2次灌胃4周(共8周)；治疗组在同样方法灌胃2周后每日午后腹腔注射本发明制剂12～15g/kg/d(注射量随体重增加而改变)至实验结束；正常组正常饮水、饮食。实验方法：剖杀前1日断饲，第2日摘眼球取血以备用；；颈椎处死，迅速剖取肝脏，在距肝脏边缘0.5cm处取材，10％甲醛固定5天，取肝脏1.0cm×0.5cm×1.0cm的组织块，逐级酒精脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，采用HE染色方法，光镜观察肝脏的组织形态。
结果：①肉眼观察正常组大鼠肝脏色暗红，被膜光滑；模型组大鼠肝脏色淡黄，质稍软，无光泽，有的与邻近器官轻度粘连。
②光镜观察正常组肝小叶结构清晰，细胞索排列整齐，肝窦正常，肝细胞无明显病变，核结构清晰；模型组肝正常组织结构消失，小叶界限不清，细胞索紊乱，大部分肝窦消失，肝细胞广泛性的空泡变性，表现为细胞体积增大，胞浆疏松、浅染，多数细胞核体积缩小、深染，核膜皱缩；治疗组肝小叶结构清晰，肝细胞索排列整齐，肝细胞内无明显空泡及疏松，部分肝细胞仅呈轻度浊肿，细胞核结构清晰，核膜、核仁、核质着色正常，仅少数肝细胞结构模糊。
实验表明，本发明提供的制剂对酒精性肝损伤的治疗效果好。
实验例3：对哮喘大鼠气道壁胶原合成的影响
健康雄性SD大鼠40只，体重(200±20)克，制备大鼠慢性哮喘模型：参照文献。实验分组：分4组，每组10只，致敏2周后，给予1％OVA雾化吸入激发哮喘，开始连续3天，以后隔日雾化激发一次，每次20分钟。每次雾化吸入激发前半小时给予药物干预，地塞米松组给予腹腔注射0.5mg/只，本发明制剂治疗组分别腹腔注射40mg/kg。哮喘模型对照组腹腔注射等量生理盐水。以上各组均于最后一次激发后24小时内处死，收集肺组织标本。气道壁厚度测定：石蜡切片常规HE染色，分别测定气道壁内径、外径、网状基底膜层厚度以气道横切面0点、3点、6点、9点测4个值，取其均值。胶原含量免疫组化半定量分析：石蜡切片作I、III胶原免疫组化SABC法染色使用计算机图像处理软件测定各组气道壁I、III胶原含量(以免疫组化染色光密度表示)。
①病理学检查：哮喘模型组在致敏激发后出现明显呼吸困难，治疗组有呼吸加快、气喘等表现但较模型组轻。哮喘模型组病理学可见气道壁明显增厚，管腔变窄，气道黏膜皱襞增多，上皮细胞脱落，气道平滑肌层和网状基底膜层增厚，黏膜下及管壁周围见嗜酸性细胞、淋巴细胞浸润。
②气道壁厚度的变化：大鼠气道壁HE染色图像分析测定结果
组别         n      气道壁内/外径    基底膜层厚度(μm)
正常对照组   10     0.815±0.042     9.56±1.53
哮喘模型组   10     0.630±0.035     19.72±1.47
地塞米松组   10     0.772±0.011     10.63±1.24
本发明组     10     0.740±0.003     10.16±1.76
③气道壁胶原沉积的变化：大鼠气道壁胶原免疫组化染色计算机图像定量分析结果(A值，x±s)
组别        n     I型胶原COL-I      III型胶原COL-III     III/I型胶原比值
正常对照组  10    33.56±12.10      19.12±7.24          0.58±0.12
哮喘模型组  10    45.12±8.06       54.37±6.39          1.25±0.27
地塞米松组  10    36.25±12.13      20.86±5.78          0.60±0.23
本发明组    10    35.16±7.06       21.97±6.08          0.60±0.01
实验表明，本发明制剂对哮喘的治疗效果好。
实验例4：赋形剂筛选
样品编号    赋形剂用量g      外观                  溶解状况
1                          类白色、结实     振摇10min溶解、有少量微粒
2  甘氨酸    15           类白色、不饱满    振摇10min溶解
3  甘氨酸    20           类白色、疏松      迅速溶解
4  甘氨酸    25           类白色、疏松      振摇5min溶解
5  甘露醇    15           类白色、疏松      振摇溶解
6  甘露醇    20           类白色、疏松      振摇溶解
7  甘露醇    25           类白色、疏松      振摇溶解
实验表明，本发明产品选用20g甘氨酸作赋形剂制得的产品外观、溶解性能良好。
实验例5：预冻时间的选择
预冻时间(h)           澄明度           成型性
1                       差             欠佳
2                       差             欠佳
3                       差             欠佳
4                      澄明            成型
5                       差             欠佳
实验表明，预冻时间4小时所得的产品质量好。
实验例6：干燥时间的选择
按照冷冻干燥工艺，先将样品溶液进行预冻处理，时间为3～5小时，在低于共熔点温度下进行干燥，干燥时间约为30小时，为了既能保证干燥质量，又能节约时间，我们对干燥时间分别为25小时、30小时和35小时进行试验，结果如下：
干燥时间(h)                        水分％
25                                 3.10
30                                 3.05
35                                 2.55
40                                 2.50
实验表明，干燥25小时水分含量较高，35小时干燥结果和40小时干燥结果差不多，在生产上为节约时间，我们选择干燥35小时。实验例7：冻干前溶液pH值范围的筛选
①PH值       4.5        5.0        5.5        6.0       7.0       7.5
外观性状     深黄色     淡黄色     淡黄色     类白色    类白色    类白色
溶解性       澄清       澄清       澄清       澄清      澄清      浑浊
有关物质％   0.214      0.255      0.262      0.265     0.283     1.14
②冻干原液PH值                                    粉针PH值
不调                               3.55
6.00                               6.03
7.00                               7.02
实验表明，在pH值在6.0以下是外观性状明显改变而7.0以上有关物质明显增多，冻干前后PH值基本不变，通过上面的试验，确定pH值为6.0～7.0。
实验例8：活性炭用量的选择
①含量测定
                          不同浓度活性炭对甘草酸二铵的吸附
活性炭用量％(W/V)           吸收度               平均     甘草酸二铵含量
(％)
                第一次      第二次      第三次
0.01            0.391       0.392       0.393    0.392    101.5
0.02            0.368       0.367       0.365    0.367    99.5
0.03            0.340       0.341       0.342    0.341    89.6
实验表明，在配制注射用甘草酸二铵过程中，活性炭对甘草酸二铵有较强地吸附作用，并且随着活性炭用量的增加，甘草酸二铵含量逐渐降低。
②澄明度检查：
取各样品各5瓶，分别加入水溶解成0.1g/ml的溶液。
照《卫生部澄明度检查细则和判断标准》依法检查，结果见下表。
        不同用量的活性炭对澄明度的影响
活性炭的用量(w/v)  0.01％   0.02％   0.03％
不合格瓶数         2        0        0
实验表明，本处方中加入活性炭的用量是0.03％，在澄明度检查时合格，从中可见加入的活性炭用量越小，甘草酸二铵的含量就越高。经试验：确定本处方中所用的活性炭的用量是0.02％(w/v，经115℃-120℃活化2h)，可起到吸附杂质和热原的作用，又可减少对主药的吸附量，从而降低生产成本。
实验例9：影响因素试验
①高温试验：取样品50瓶，于60℃温度下放置10天，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目外观色泽、甘草酸二铵含量、有关物质等进行检测，结果见表。
                         粉针                           水针
            0天         5天         10天        0天        5天       10天
外观色泽    类白色疏    类白色疏    类白色疏    无色       无色      淡黄色
            松块状固体  松块状固体  松块状固体  澄清溶液   澄清溶液  澄清溶液
含量(％)    100.9       100.6       100.5       99.5       98.0      97.6
有关物质％  0.194       0.322       0.325       0.196      0.357     0.368
②强光照射试验：取样品50瓶，于照度为4500lx±500lx的条件下放置10天，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目外观色泽、甘草酸二铵含量、有关物质等进行检测，结果见表。
                          粉针                               水针
            0天          5天          10天         0天        5天        10天
外观色泽    类白色疏     类白色疏     类白色疏     无色       无色       无色
            松块状固体   松块状固体   松块状固体   澄清溶液   澄清溶液   澄清溶液
含量(％)    100.5        100.2        99.8         99.8       99.0       98.0
有关物质％  0.190        0.203        0.225        0.196      0.236      0.253
③高湿试验：取样品50瓶，开口置于相对湿度90％±5％的环境下放置10天，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目外观色泽、甘草酸二铵含量、有关物质等进行检测，结果见表。
                           粉针                             大输液
            0天            5天           10天          0天        5天        10天
外观色泽    类白色疏       类白色疏      类白色疏      无色       无色       淡黄色
            松块状固体     松块状固体    松块状固体    澄清溶液   澄清溶液   澄清溶液
含量(％)    100.6          100.3         99.7          99.8       98.4       98.0
有关物质％  0.191          0.321         0.343         0.196      0.356      0.378
实验表明，本发明提供的制剂较现有水针剂、大输液稳定性好，质量稳定。
实验例10：不溶性微粒考察
空白微粒数测定：用超净水洗涤所用玻璃器皿。分别取6瓶0.9％氯化钠注射液，混匀后取样，在微粒分析仪上测定，每瓶检测5次，取其平均值，再取6瓶微粒数的平均值，即得每毫升不同粒径的空白微粒数；溶剂的选择：根据文药品说明书，本实验所用水针、粉针剂均能溶于0.9％氯化钠注射液中，故本实验采用0.9％氯化钠注射液为溶剂；针剂微粒的测定：在超净工作台上，取5支加入0.9％氯化钠注射液250ml中，混匀后分别减去空白微粒数。
品  名              ≥2μm    ≥5μm   ≥10μm  ≥25μm
甘草酸二铵水针剂    3502.1    196.3    18.2     0.5
甘草酸二铵大输液    3048.4    117.6    12.3     0.5
甘草酸二铵粉针剂    2982.5    110.3    10.1     0.4
结果表明，本发明制剂不溶性微粒少，用药更安全。
具体的实施方式：
本发明的实施例1：取3g甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解；加入15g甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)(经115-120℃活化2h)，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，无菌分装，预冻4时、干燥35小时，即得。使用方法：一日二次，每次10ml，肌注。
本发明的实施例2：取8g甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解；加入25g甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)(经115-120℃活化2h)，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，无菌分装，预冻4时、干燥35小时，即得。
本发明的实施例3：取5g甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解；加入20g甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)(经115-120℃活化2h)，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，喷雾干燥，分装，密封即得。
本发明的实施例4：取5g甘草酸二铵，加入为600ml的注射用水，搅拌至完全溶解；加入20g甘氨酸，搅拌使溶解，加水至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.0；另加入处方量活性炭0.02％(w/v)(经115-120℃活化2h)，置于不锈钢容器中，在80℃保温搅拌吸附30分钟，粗滤，脱炭；用0.45μm和0.22μm组成的复合滤膜过滤至澄明，在有机溶媒中重结晶，分装，密封即得。