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1、10申请公布号CN104255110A43申请公布日20150107CN104255110A21申请号201410447455822申请日20140904A01C1/0020060171申请人兰州大学地址730000甘肃省兰州市天水南路222号72发明人吕昕培韩庆庆张金林李静葛静李惠茹王锁民74专利代理机构北京天奇智新知识产权代理有限公司11340代理人朱海江54发明名称促进紫花苜蓿种子萌发的方法57摘要本发明涉及一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其是将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液中进行浸泡处理，浸泡处理后取出紫花苜蓿种子进行萌发。采用上述方案对紫花苜蓿种子进行处理，可有效显著提高紫。
2、花苜蓿种子的发芽势和发芽率，缓解紫花苜蓿播种后不出苗或晚出苗，出苗不整齐，缺苗断垄的现象，提高单位面积牧草的产量。同时，枯草芽孢杆菌具有对人畜无毒无害、不污染环境、非致病性和抗逆性强等特点。本发明提供的促进紫花苜蓿种子萌发的方法操作简单，可广泛应用于牧场牧草的播种，具有重要的经济价值。51INTCL权利要求书1页说明书5页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图2页10申请公布号CN104255110ACN104255110A1/1页21一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其是将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液进行浸泡处理，浸泡处理后取出紫花苜蓿。
3、种子进行萌发。2根据权利要求1所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在于枯草芽孢杆菌GB03菌液中OD600为0810。3根据权利要求1所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在于浸泡处理的时间为560MIN。4根据权利要求1或2或3所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在于，具体操作步骤为S1对紫花苜蓿种子进行消毒处理，消毒处理后置于无菌水中进行初级浸泡处理；S2配制枯草芽孢杆菌GB03菌液；S3将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液中进行浸泡处理；S4对浸泡处理后的紫花苜蓿种子进行萌发处理。5根据权利要求4所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在于步骤S1中消毒处理为先用6072。
4、的乙醇处理0812MIN，再用1822的NACLO消毒911MIN后，然后用无菌水搅动漂洗78次，每次2832MIN。6根据权利要求4所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在于步骤S1中初级浸泡处理是将消毒处理后的紫花苜蓿种子在避光条件下置于无菌水中浸泡235245H。7根据权利要求4所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在于，配制枯草芽孢杆菌GB03菌液的具体操作为配制LB液体培养基，灭菌冷却后在每100ML的LB液体培养基中加入50100L的枯草芽孢杆菌GB03菌液，然后进行菌株培养，当菌液浓度OD600为0810时，取出备用。8根据权利要求4所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在。
5、于紫花苜蓿种子萌发处理的温度为2425，并进行遮光处理。9根据权利要求1或3所述的促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其特征在于浸泡处理的时间为510MIN。权利要求书CN104255110A1/5页3促进紫花苜蓿种子萌发的方法技术领域0001本发明涉及林草种植领域，具体涉及一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法。背景技术0002紫花苜蓿，是一种多年生草本，其根粗壮，根颈发达，是优良的豆科牧草，冠有牧草之王之美称。随着我国草地农业的迅速发展，近年来，紫花苜蓿作为主要牧草被大面积发展种植，使得紫花苜蓿的产量日渐提升。由于，紫花苜蓿属豆科作物，其种子硬实率较高，在萌发时种子硬实不透水或吸水较晚，从而影响种子的发芽。
6、率和出苗率，播种后不出苗或晚出苗，从而导致作物出苗不整齐，出现缺苗断垄的现象，也对杂草的根除带来了较大的困难。随着我国牧草需求量的大幅增长，提高单位面积优质牧草的产量成为亟待解决的问题。发明内容0003本发明的目的就是提供一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其可有效提高紫花苜蓿种子的发芽势及发芽率，保证紫花苜蓿种子的可靠萌发。0004为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案0005一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其是将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液进行浸泡处理，浸泡处理后取出紫花苜蓿种子进行萌发处理。0006具体的操作为0007S1对紫花苜蓿种子进行消毒处理，消毒处理后置于无菌水中进行初。
7、级浸泡处理；0008S2配制枯草芽孢杆菌GB03菌液；0009S3将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液中进行浸泡处理；0010S4对浸泡处理后的紫花苜蓿种子进行萌发处理。0011详细的方案为0012步骤S1中消毒处理为先用6072的乙醇处理0812MIN，再用1822的NACLO消毒911MIN后，然后用无菌水搅动漂洗78次，每次2832MIN。步骤S1中初级浸泡处理是将消毒处理后的紫花苜蓿种子在避光条件下置于无菌水中浸泡235245H。0013配制枯草芽孢杆菌GB03菌液的具体操作为配制LB液体培养基，灭菌冷却后在每100ML的LB液体培养基中加入50100L的枯草芽孢杆菌GB03菌液。
8、，然后进行菌株培养，当菌液浓度OD600为0810时，取出备用。0014浸泡处理的时间为560MIN，优选浸泡处理的时间为510MIN。0015紫花苜蓿种子萌发处理的温度为2425，并进行遮光处理。萌发处理可与传统紫花苜蓿种子的萌发操作一至。0016采用上述方案对紫花苜蓿种子进行处理，其可有效显著提高紫花苜蓿种子的发芽势和发芽率，缓解紫花苜蓿播种后不出苗或晚出苗，出苗不整齐，缺苗断垄的现象，提高单说明书CN104255110A2/5页4位面积牧草的产量。同时，枯草芽孢杆菌具有对人畜无毒无害、不污染环境、非致病性和抗逆性强等特点。本发明提供的促进紫花苜蓿种子萌发的方法操作简单，可广泛应用于牧场牧。
9、草的播种，具有重要的经济价值。附图说明0017图1、2为紫花苜蓿种子在枯草芽孢杆菌GB03菌液中不同浸泡时长对种子发芽势的影响；0018图3为紫花苜蓿种子在枯草芽孢杆菌GB03菌液中不同浸泡时长对种子发芽率的影响；0019图1中11实施例6浸泡时间为0MIN，12实施例1浸泡时间为5MIN，13实施例2浸泡时间为10MIN，14实施例3浸泡时间为20MIN，15实施例4浸泡时间为30MIN，16实施例5浸泡时间为60MIN；0020图2、3中”表示与处理0MIN实施例6的对照比较达到显著水平P005。具体实施方式0021为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体说明。。
10、应当理解，以下文字仅仅用以描述本发明的一种或几种具体的实施方式，并不对本发明具体请求的保护范围进行严格限定。0022实施例10023对紫花苜蓿种子消毒处理精选一批紫花苜蓿种子，先用70的乙醇处理1MIN，然后使用2NACLO消毒10MIN后，再用无菌水漂洗7次，每次3MIN，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡24H。0024枯草芽孢杆菌GB03菌液制备先配制溶菌肉汤LB液体培养基按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为121配制，溶剂为蒸馏水；调PH到72，高温为132灭菌，待冷却温度为20后，每100ML的LB液体培养。
11、基加入100L的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为250R/MIN下，温度为30的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为10时，取出备用；0025种子菌液处理在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时5MIN，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24H后统计发芽率，计算发芽势；0026将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八。
12、天的统计结果。0027实施例20028对紫花苜蓿种子消毒处理精选一批紫花苜蓿种子，先用70的乙醇处理1MIN，然后使用2NACLO消毒10MIN后，再用无菌水漂洗8次，每次3MIN，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置说明书CN104255110A3/5页5于无菌水中浸泡24H。0029枯草芽孢杆菌GB03菌液制备先配制溶菌肉汤LB液体培养基按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为121配制，溶剂为蒸馏水；调PH到72，高温为115灭菌，待冷却温度为20后，每100ML的LB液体培养基加入50L的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180。
13、R/MIN下，温度为30的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为08时，取出备用；0030种子菌液处理在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时10MIN后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24H后统计发芽率，计算发芽势；0031将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。0032实施例30033对紫花苜蓿种子。
14、消毒处理精选一批紫花苜蓿种子，先用68的乙醇处理12MIN，然后使用22NACLO消毒9MIN后，再用无菌水漂洗8次，每次32MIN，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡235H。0034枯草芽孢杆菌GB03菌液制备先配制溶菌肉汤LB液体培养基按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为121配制，溶剂为蒸馏水；调PH到72，高温为115灭菌，待冷却温度为20后，每100ML的LB液体培养基加入50L的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180R/MIN下，温度为30的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为08时，。
15、取出备用；0035种子菌液处理在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时20MIN后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于24黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24H后统计发芽率，计算发芽势；0036将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。0037实施例40038对紫花苜蓿种子消毒处理精选一批紫花苜蓿种子，先72的乙醇处理08MIN，然后使用22NACLO消毒1。
16、1MIN后，再用无菌水漂洗8次，每次32MIN，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡255H。0039枯草芽孢杆菌GB03菌液制备先配制溶菌肉汤LB液体培养基按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为121配制，溶剂为蒸馏水；调PH到72，高温为115灭菌，待冷却温度为35后，每100ML的LB液体培养基加入100L的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180R/MIN下，温度为25的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为说明书CN104255110A4/5页610时，取出备用；0040种子菌液处理在灭菌的离心管。
17、中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时30MIN后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于26黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24H后统计发芽率，计算发芽势；0041将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。0042实施例50043对紫花苜蓿种子消毒处理精选一批紫花苜蓿种子，先用70的乙醇处理1MIN，然后使用2NACLO消毒11MIN后，再用无菌水漂洗8次，每次32MIN。
18、，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡235H。0044枯草芽孢杆菌GB03菌液制备先配制溶菌肉汤LB液体培养基按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为121配制，溶剂为蒸馏水；调PH到72，高温为132灭菌，待冷却温度为20后，每100ML的LB液体培养基加入50L的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180R/MIN下，温度为30的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为08时，取出备用；0045种子菌液处理在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时60MIN后。
19、，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24H后统计发芽率，计算发芽势；0046将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。0047实施例60048对紫花苜蓿种子消毒处理精选一批紫花苜蓿种子，先用70的乙醇处理1MIN，然后使用2NACLO消毒10MIN后，再用无菌水漂洗8次，每次3MIN，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑。
20、暗条件下置于无菌水中浸泡24H。0049种子菌液处理将消毒处理后的紫花苜蓿种子平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24H后统计发芽率，计算发芽势；0050将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。0051对结果进行统计记录，如附图1、2、3所示00521枯草芽孢杆菌GB03菌液浸泡处理紫花苜蓿种子5MIN和10MIN，可显著P005提高紫花苜蓿种子的发芽势，分别显著P005提高发芽势678和368；说明书CN104255110A5/5页700532枯草芽孢杆菌GB03菌液浸泡处理紫花苜蓿种子5MIN和10MIN，发芽率较对照组实施例6分别显著P005提高163和125。0054以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在获知本发明中记载内容后，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对其作出若干同等变换和替代，这些同等变换和替代也应视为属于本发明的保护范围。说明书CN104255110A1/2页8图1图2说明书附图CN104255110A2/2页9图3说明书附图CN104255110A。