猛水蚤的杀灭剂.pdf

本发明公开一种猛水蚤的杀灭剂，其特征在于：所述的杀灭剂由下列重量百分比的原料组成：远志提取物有效成分含量≥90%的远志皂甙元30%，分散剂 16%，润湿剂24%，载体30%，所述的分散剂为MorwetD-400，所述的润湿剂为MorwetEFW，所述的载体为硅藻土。这是一种操作简单、方便，对养殖动物毒性低，且能够一次性彻底杀灭猛水蚤的杀灭剂。

1.  一种猛水蚤的杀灭剂，其特征在于：所述的杀灭剂由下列重量百分比的原料组成：
远志提取物有效成分含量≥90%的远志皂甙元    26-42%，
分散剂                                                                       12-25%，
润湿剂                                                                       20-30%，
载体                                                                           10-42%，
所述的分散剂为Morwet D-400，
所述的润湿剂为Morwet EFW，
所述的载体为硅藻土。

猛水蚤的杀灭剂
技术领域
本发明涉及一种蚤类的杀灭剂，特别是一种猛水蚤的杀灭剂。
背景技术
猛水蚤是甲壳纲猛水蚤目(Harpacticoida)一些种类的统称，为海洋小型底栖动物中的优势类群。在鲍鱼、海参、虾蟹育苗生产中，有些种类大量繁殖，给苗种前期生产带来严重的敌害。一是猛水蚤在水体中过度孳生，不但消耗大量氧气，致使水体缺氧，而且与养殖鲍苗、参苗竞争饵料，同时由于单胞藻的缺乏，氨氮无法被利用，造成养殖苗种中毒；二是猛水蚤大量繁殖，对鲍苗、参苗、蜕皮虾蟹苗均咬食伤害，造成苗种培育过程大量死亡。因此，在生产中，对猛水蚤的杀灭是苗种培育中关键环节之一。目前，生产中，一是通过对养殖水体的过滤进行阻断，不但生产成本高，而且也不适应苗种的大规模培育对大水量的要求；二是国内主要是采用药物杀灭。多采用农药如敌百虫、菊酯类进行海水苗种池中猛水蚤的杀灭，这些农药不仅对养殖鲍、海参、虾、蟹等造成毒害，关键还对水环境造成严重污染，也威胁人类食品安全。目前渔业生产中，滥用药物对鱼类健康养殖、生态环境和人类健康的影响受到极大的关注。因此水产病害防治不但要注重消除水产品质量安全的隐患，而且还要避免药物对水环境的污染因素，应用绿色无公害渔药来控制病害的发生将是今后渔业重大病害控制的研究重点。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种操作简单、方便，对养殖动物毒性低，且能够一次性彻底杀灭猛水蚤的杀灭剂。
本发明的技术解决方案是：一种猛水蚤的杀灭剂，其特征在于：所述的杀灭剂由下列重量百分比的原料组成：
远志提取物有效成分含量≥90%的远志皂甙元    30%，
分散剂                                                                       16%，
润湿剂                                                                       24%，
载体                                                                           30%，
所述的分散剂为Morwet D-400，
所述的润湿剂为Morwet EFW，
所述的载体为硅藻土。
本发明同现有技术相比，具有如下优点：
中草药作为天然产物在自然界中大多易降解、对非靶标生物毒性低，不易产生耐药性，因此，使用中草药防治水产病害，对保护水环境、生产绿色水产品具有重要的意义。药用植物远志（Polygala tenuifolia Willd.）隶属远志科（Polygalaceae）远志属（Polygala）。远志皂甙元（tenuigenin）是远志中的主要活性成分，从远志根皮通过提取分离并水解获得。而本发明则为远志皂甙元发掘了新的用途，开拓了新的应用领域，利用远志皂苷元为主要有效成分制备而成的猛水蚤杀灭剂，对于养殖物和养殖水体均无毒害作用，是一种无公害绿色渔药，并且它能够一次性彻底杀灭养殖水体中的猛水蚤，效果十分显著；同时它的操作和制备也都十分简便，特别适合于在本领域中推广应用，其市场前景十分广阔。
具体实施方式
下面将说明本发明的具体实施方式。
远志皂甙元对海参急性毒性试验
1  材料与方法
1.1  材料
1.1.1  供试样品
试验所用远志皂甙元纯度为90%（由西北农林科技大学动物科技学院水产系实验室制备提供）。精确称取1.0 g远志皂甙元单体，用去离子水充分溶解，定容于100 mL容量瓶中，配成浓度为10.0 mg/mL，4℃冰箱保存备用。
1.1.2  试验动物
试验所用海参选取于大连海宝渔业有限公司养殖基地，体质健壮，规格均匀，平均体重1.47 g。在水箱中暂养7 d左右，每天投喂1次。待适应环境条件后再进行毒性试验。
1.1.3  试验仪器
ALC-1100.2百分之一电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；KQ-500E型超声波清洗器；5～10 μL，20～200 μL移液器：VoluMate。Made in Germany等。
1.2  试验方法
1.2.1  试验条件
采用静水式试验法，每个塑料水箱（规格60×60×80 cm）加入经过滤的海水100 L，pH 7.9，控制水温为16±1℃。先加入试验药液充分混匀后再加入试验用海参，每水箱放养100头。放养海参后，要求保持水中溶氧在5 mg/L以上。为了保持恒定的药物浓度，每隔24 h换水重新加药。
1.2.2  试验药物浓度的设定
首先，反复进行预试验基础上，确定正式试验药液浓度的大致范围，即试验海参在24 h内全部中毒死亡的药液浓度（0.2 mg/L）和96 h内不发生死亡的药液浓度(0.05 mg/L)。在药液浓度0.2～0.05 mg/L范围内按浓度对数等差（公差d=0.02 mg/L）插入七个浓度试验组和设立一个空白对照组，进行正式试验，观察各浓度下试验海参的中毒死亡情况。试验重复3次。
试验期间统计在12 h、24 h、48 h和72 h内各药物浓度下试验海参的死亡情况。试验期间应保持安静，尽可能避免对试验海参的任何干扰。当对照组的死亡率小于5％，各时间段内试验海参的死亡率可不予校正；若对照组的死亡率大于5％，则应予校正，校正公式采用Abbott公式；如果对照组死亡率达20％以上，则在查找原因后，重新进行毒性试验。
Abbott公式:  p=p′- C/1- C
P: 校正死亡率，即纯属药物引起的死亡率
P′:试验组死亡率，即自然因素和药物引起的死亡率
C: 对照组死亡率，即自然因素引起的死亡率
1.2.3远志皂甙元最低致死浓度范围、半数致死浓度（LC₅₀）
观察记录试验海参在第12 h、24 h、48 h和72 h内的死亡情况，试验海参各时间段开始出现死亡的最低浓度和下一个浓度为该时间段的最低致死浓度范围，并计算致死率。利用直线回归法，用直线回归方程                                                （-药物浓度的浓度对数；-死亡率转换成的概率单位；，分别为直线的截距与斜率。），求出与，与的计算公式为：


:药物浓度的组数（死亡率为0和100％的浓度不计算在内）
求出a、b后，便可确定出回归方程，然后再将50％死亡率的概率单位带入方程，求出，取其反对数，便得出该时间内的LC₅₀，并计算其95％的可信限，公式为：
LC₅₀的95％可信限
式中：=
N:供试的动物总数（死亡率为0和100％的浓度不计算在内）
x：LC₅₀值的对数
1.2.4远志皂甙元安全浓度的计算
根据Turbell公式计算安全浓度：安全浓度= 
2 结果与分析
2.1 远志皂甙元半数致死浓度（LC₅₀）
2.1.1 远志皂甙元各试验浓度在不同时间内对海参致毒情况
各试验药物浓度在第12 h、24 h、48 h、72 h内的海参死亡情况见表1。在药物浓度为0.18 mg/L的高浓度试验组，海参中毒反应非常明显，用药后3 h左右出现异常表现，海参沿箱壁爬出水面，随后脱落到水体中，附着能力降低甚至丧失，部分吐肠子，最后死亡、化皮。在浓度为0.06 mg/L的低浓度试验组中，海参表现较安静，无异常活动。
表1  远志皂甙元对海参的中毒死亡结果

2.1.2 最低致死浓度范围、半数致死浓度（LC₅₀）
统计不同浓度试验药液在第12 h、24 h、48 h和72 h内的死亡情况，结果见表2。
将各试验浓度取其对数，得其浓度对数，并将各时间段试验海参中毒死亡的百分率查表得其概率值，将各时间段的药物浓度对数及其对应的死亡率的概率值代入公式，求出回归方程，可计算出各时间段的半数致死浓度（LC₅₀），和其LC₅₀的95%可信限。
表2  远志皂甙元对海参的急性毒性结果

 表3 各时间段的LC₅₀及其95%的可信限

由表3可知，第24 h内所得的回归方程为：y= -3.35+22.49x ，LC₅₀=0.15 mg/L，95%的可信限为0.14~0.17 mg/L；第48 h内所得的回归方程为：
y= -3.79+33.86x ，LC₅₀=0.11 mg/L，95%的可信限为0.10~0.12 mg/L；第72 h内所得的回归方程为：y=-5.05+54.29x，LC₅₀=0.09 mg/L，95%的可信限为0.08~0.10 mg/L。
2.1.3 安全浓度计算结果
根据Turbell公式计算出远志皂甙元对海参的安全浓度。
安全浓度==（0.11×0.3）÷（0.15÷0.11）²
                           =0.02 mg/L
从结果显示，远志皂甙元对海参的安全浓度不是很高，但是，实际中，浓度在0.06 mg/L的情况下，48 h没有发生海参死亡现象。综合考虑，远志皂甙元作为猛水蚤杀灭剂仍然具有很好的推广价值。
远志皂甙元对猛水蚤杀灭效果
1 材料与方法
1.1 试验动物
试验所用猛水蚤采集于大连海宝渔业有限公司养殖基地水域。
1.2 试验药物
试验所用远志皂甙元纯度为90%。（远志皂甙元是远志根皮经过提取、多级硅胶柱层析分离获得。由西北农林科技大学动物科技学院水产系鱼病实验室制备提供。）
1.3试验方法
使用容积为300 mL的锥形瓶，盛入充分曝气海水100 mL，微量充气，保持水温16±1℃，pH 7.8～7.9。试验开始时，确定正式试验药液浓度的大致范围，即试验猛水蚤在12 h内全部中毒死亡的药液浓度（0.032 mg/L）和48 h内不发生死亡的药液浓度(0.0005 mg/L)。在药液浓度0.2～0.05 mg/L范围内按浓度对数等比插入六个浓度试验组和设立一个空白对照组，进行正式试验。根据上述试验所设立的浓度分别加入到水体中，搅拌均匀。随后每组放入采集到的猛水蚤300只。然后分别在6、12、24、48、72 h时，吸出锥形瓶底死亡猛水蚤，放入培养皿中观察计数。猛水蚤沉在培养皿底部没有活动的认为已经死亡，吸出死亡个体，活动的猛水蚤放回原锥形瓶内。试验重复3次，并设对照组。
 
在设定时间统计瓶底死亡的猛水蚤数量，计算平均值，并与对照组进行对比，计算杀灭率，以此来评价杀灭效果。
结果
远志皂甙元杀灭猛水蚤效果显著，由表4可知，当浓度从0.001 mg/L开始，经过72 h，猛水蚤的杀灭率达100％；当远志皂甙元的浓度从0.004 mg/L开始，48 h对猛水蚤的杀灭率达100％，对照组中猛水蚤的48 h死亡率低于5%。
表4 远志皂甙元48 h对猛水蚤的杀灭活性
 远志皂甙元猛水蚤杀灭剂的效果试验
1  材料与方法
1.1  材料
1.1.1试验动物
试验用海参选取于大连海宝养殖基地，体质健壮，规格均一，与上述试验相同规格，平均体重1.[a1]  g。在水箱中暂养7 d左右，每天投喂1次。
试验所用猛水蚤采集于大连海宝养殖基地水域。
1.1.2  供试药品
含30%远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，由西北农林科技大学动物科技学院水产系鱼病实验室制备提供。
1.1.3  仪器设备
XH-B旋涡混合器：姜堰市康健医疗器具有限公司；BX41光学显微镜：OLYMPUS。Made in Japan；Satorius万分之一电子天平；水族箱与控温装置。
试验方法
采用静水式试验法，每个塑料水箱（规格30×30×40 cm）加入过滤海水20 L，pH 7.9，控制水温为16±1℃。试验开始时，首先根据试验所设立的浓度（0、0.007、0.008、0.009、0.01、0.011、0.012、0.013 g/m³）分别加入到水体中，搅拌均匀。每组加入试验用海参20头和猛水蚤约4000只，试验过程要求保持水中溶氧在5 mg/L以上。48 h后统计猛水蚤杀灭率和海参死亡率，海参统计死亡率方法如前所述。猛水蚤统计死亡率方法为：取样时，要搅拌充分混合水体后，立即随机取1L水至烧杯中，统计死亡猛水蚤数量，大约计算出每组试验的猛水蚤死亡率。试验重复3次，并设对照组。


2  结果
30%远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，在48 h杀灭猛水蚤的结果见表5。从表5可以看出，当浓度为0.007g/m³时，杀灭率为90.3%；当浓度大于0.01 g/ m ³时，其杀灭率可达100%；在试验浓度范围内（0.007-0.013 g/m³），试验海参48 h内均没有出现中毒现象，对照组中猛水蚤从第6 h开始出现死亡，在48 h内死亡率小于5%。以上结果表明该制剂是一种猛水蚤杀灭效果良好且对海参安全的具有良好应用前景的生物渔药。 
表5  含30%远志皂甙元猛水蚤杀灭剂在48 h对猛水蚤杀灭效果

 为了更好的理解本发明的实质。以下结合发明人给出的具体实施例来详细说明本发明公开的远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，这些仅是本发明较好的实施例，但不限于这些实施例。
实施例1  
称取远志皂甙元28 g，加入分散剂（Morwet D-400、主要成分为烷基萘磺酸盐甲醛缩合物）14g、润湿剂（Morwet EFW，主要成分为烷基萘磺酸盐和阴离子润湿剂的混合物）20 g、硅藻土38 g，充分混合均匀，即得远志皂甙元猛水蚤杀灭剂。 
实施例2   
远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，质量百分比为：远志皂甙元26 g，加入分散剂（Morwet D-400、主要成分为烷基萘磺酸盐甲醛缩合物）12 g，润湿剂（Morwet EFW，主要成分为烷基萘磺酸盐和阴离子润湿剂的混合物）24 g、硅藻土38 g。
实施例3：
远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，质量百分比为：远志皂甙元32 g，加入分散剂（Morwet D-400、主要成分为烷基萘磺酸盐甲醛缩合物）18 g、润湿剂（Morwet EFW，主要成分为烷基萘磺酸盐和阴离子润湿剂的混合物）26 g、硅藻土24 g。
实施例4：
远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，质量百分比为：远志皂甙元34 g，加入分散剂（Morwet D-400、主要成分为烷基萘磺酸盐甲醛缩合物）20 g、润湿剂（Morwet EFW，主要成分为烷基萘磺酸盐和阴离子润湿剂的混合物）25 g、硅藻土21g 。
实施例5：
远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，质量百分比为：远志皂甙元40 g，加入分散剂（Morwet D-400、主要成分为烷基萘磺酸盐甲醛缩合物）20 g、润湿剂（Morwet EFW，主要成分为烷基萘磺酸盐和阴离子润湿剂的混合物）30 g、硅藻土10 g 。
实施例6：
远志皂甙元猛水蚤杀灭剂，质量百分比为：远志皂甙元42 g，加入分散剂（Morwet D-400、主要成分为烷基萘磺酸盐甲醛缩合物）25 g、润湿剂（Morwet EFW，主要成分为烷基萘磺酸盐和阴离子润湿剂的混合物）23 g、硅藻土10 g。