魔芋悬浮培养体系建立的方法.pdf

本发明公开了一种魔芋悬浮培养体系建立的方法，以魔芋植物芽鞘作为外植体，其步骤是：取外植体，用75％酒精浸泡一定时间，用0.1％氯化汞消毒，用无菌水冲洗；其次是将消毒好的芽鞘接入配制好的培养基中诱导愈伤，培养基的有效成分为MS培养基和附加成分；第三是光照培养，一定强度的散射光照时间；第四是诱导出颗粒状愈伤切割，转接到液体悬浮培养基培养，每天光照、培养一定时间。本发明方法易行，操作方便，增殖速度快。

1、  一种魔芋悬浮培养体系建立的方法，其特征在于：其步骤是：
A、以魔芋植株的芽鞘作为外植体，将芽鞘洗净消毒、自然光照射2～3小时，将芽鞘拨开，用75％酒精浸泡10～30秒钟，用0.1％氯化汞消毒8～10分钟，用无菌水冲洗3～6次；
B、将消毒好的芽接入配制好的培养基中诱导愈伤，培养基的有效成份为：MS培养基和附加成份，附加成份为BA0.5～1.0mg/L、2，4-D 0.2～0.5mg/L、琼脂6000～8000mg/L、糖20000～30000mg/L；
C、光照培养，温度为25～28℃，每天散射光照10～12小时，培养30～40天；
D、将诱导出的颗粒状愈伤切割成0.4～0.6cm，接种到分有30～50ml液体培养基的100～150ml的三角瓶中，每瓶接种30～40个，置于转速为100～130r/分钟的摇床，在温度为25～28℃，10～12小时光照下培养12天，培养基的有效成份为：MS培养基和附加成份，附加成份为BA0.05～0.1mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、蔗糖20000～30000mg/L，PVP0.1～0.2％。

魔芋悬浮培养体系建立的方法
技术领域
本发明属于植物细胞工程技术领域，更具体涉及一种魔芋悬浮培养体系的方法，是利用基本培养基和附加不同成份对魔芋悬浮培养体系建立的方法。
背景技术
魔芋(Amorphophallus)属天南星科魔芋属多年生草本植物，也是重要经济作物之一。我国主要分布于湖北、云南、四川等长江流域。因魔芋地下球茎中含有葡甘露聚糖，目前广泛用于食品、纺织印染、石油钻探、制药、日用化工等领域，有很好的经济效益。但传统上魔芋采用根茎无性繁殖，其繁殖系数极低。而魔芋栽培用种量大(每亩250kg以上)，这种繁殖速度慢和用种量大的矛盾是发展魔芋生产急需解决的问题。
利用植物组织培养技术生产优质种芋为国内魔芋生产省份主要攻关目标，从上世纪九十年代中期至今已经建立了植物组织培养生产种芋的技术体系。但其传统的技术流程为：诱导愈伤-愈伤分化-植株增殖-生根-种芋-生产种芋，需耗费很大的人力、物力，种芋生长周期长，产品的效价比不能被产、需方接受，而且在整个培养过程无法控制因多次继代增殖发生的性状变异，因此到目前为止无法被转化应用。为此，建立系统化，程序化的魔芋组织培养快繁技术，必须寻求新的方法来解决传统快繁技术体系投入大，种芋生长周期长等难题。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种魔芋悬浮体系建立的方法，方法易行，操作方便，增殖速度快，可加快魔芋的快速繁殖。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：
A、以魔芋球茎的芽鞘作为外植体，将芽鞘洗净、自然光照射2～3小时，将芽鞘拨开，用75％酒精浸泡10～30秒钟，用0.1％氯化汞消毒8～10分钟，用无菌水冲洗3～6次；
B、将消毒好的芽接入配制好的培养基中，培养基的有效成份为：MS培养基和附加成份，附加成份为BA 0.5～1.0mg/L、2，4-D0.2～0.5mg/L、琼脂6000～8000mg/L、糖20000～30000mg/L；
C、光照培养，温度为25～28℃，每天散射光照10～12小时，培养30～40天；
D、将诱导出的颗粒状愈伤切割成0.4-0.6cm，接种到分有30～50ml液体培养基的100～150ml的三角瓶中接种材料，每瓶接种30～40个，置于转速为100～130r/min的摇床，在温度为25～28℃，10～12小时光照下培养12天。培养基的有效成份为：MS培养基和附加成份，附加成份为BA0.05～0.1mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、蔗糖20000～30000mg/L，PVP 0.1～0.2％。
MS培养基的成份(单位：mg/L)：
硝酸氨              1650
硝酸钾              1900
七水硫酸镁          370
磷酸二氢钾          170
二水氯化钙          440
乙二胺四乙酸二钠    37.3
碘化钾              0.83
硼酸                6.2
四水硫酸锰          22.3
七水硫酸锌          8.6
二水钼酸钠          0.25
五水硫酸铜          0.025
六水氯化钴          0.025
七水硫酸亚铁        27.8
肌醇                100
烟酸                0.5
甘氨酸              2
盐酸硫胺素          0.1
盐酸吡哆醇          0.5
液体培养基的成份：
MS培养基及附加成份如下：
BA0.05～0.1mg/L
NAA0.1～0.2mg/L
蔗糖20000～30000mg/L
PVP 0.1～0.2％
本发明与常规魔芋组织培养技术相比，具有以下优点和效果：
本发明方法易行，操作方便，繁殖速度快。悬浮培养获得的材料可以大大提高魔芋种苗的繁殖率。有关本发明的效果请见下表：

本发明建立的悬浮体系可用于生物反应器培养，其繁殖率还可提高10倍以上。
具体实施方式
一种魔芋悬浮体系建立的方法，其步骤是：
1.以魔芋植株的芽鞘作为外植体，将芽鞘洗净、自然光照射2～3小时，将芽鞘拨开，用75％酒精浸泡20或24或26或28或30秒钟，用0.1％氯化汞消毒或8或9或10分钟，用无菌水冲洗或3或4或5或6次；
2.将消毒好的芽接入配制好的培养基中，培养基的有效成份为：MS培养基和附加成份，附加成份为BA1.0mg/L、2，4-D 0.5mg/L、琼脂6000mg/L、糖30000mg/L；
3.光照培养，温度为或25或26或27或28℃，每天散射光照10～12小时，培养或30或34或36或38或40天；
4.将诱导出的颗粒状愈伤切割成0.4或0.5或0.6cm，接种到分有30ml液体培养基的100ml的三角瓶中接种材料，每瓶接种30个，置于转速为130r/分钟的摇床，在温度为25～28℃，12小时光照下培养12天。液体培养基的有效成份为：MS培养基和附加成份，附加成份为BA 0.25mg/L、NAA0.2mg/L、蔗糖30000mg/L，PVP 0.1％。