2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物及其衍生物，制备方法和用途 【技术领域】
本发明属有机化学和药物领域，具体涉及化合物2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物及其开环二硫化衍生物，制备方法和在抑制血管内皮生长因子(VEGF)活性中的用途。
背景技术
血管生成在肿瘤的生长和扩散中起着重要的作用，新生血管为肿瘤细胞提供氧和营养物质，促使癌细胞生长，侵袭周围组织，向身体其他部位播散并形成新生癌灶。研究表明，血管生成过程可以由体内多种特定的化学物质所调控，其中某些化学物质能促使受损血管细胞修复或形成新的血管，某些称为血管生成抑制因子的化学物质则促使上述活动停止。血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)是肿瘤血管生成的重要刺激因子，抑制VEGF可以使实体肿瘤离开新生血管的支持不能生长或播散，所以通过抑制新生血管生成达到抑制肿瘤成为当前广为关注的研究课题。目前国内外抗血管生成治疗肿瘤的方法包括基因治疗、抗血管生成重组蛋白、单克隆抗体以及其他各种化学药物，但还都处于临床试验阶段。因此寻找显示良好抗VEGF活性新结构类型的化合物仍然是临床迫切需要和具有社会价值。
【发明内容】
本发明的目的是提供2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物及其衍生物，及其制备方法。
本发明的进一步目的是提供上述方法制备的2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物及其衍生物在制备抑制血管内皮生长因子(VEGF)活性药物中的用途。
本发明的所述的化合物及其衍生物具有下述A或B的结构式：
其中，A结构式为2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物，B类为开环二硫化衍生物，即邻-(N-甲基-N-芳酰胺基)苯基二硫化合物。
所述的A或B的结构式中：R基为：硝基、羟基、1-3个碳的烷氧基、卤素、苄氧基、1-3个碳的烷基、三氟甲基、1-3个碳的酰氧基、取代氨基，
本发明以N-甲基邻氨基苯硫酚和芳醛为原料，在乙醇/浓盐酸中，室温下反应半小时，以内高收率制备2-芳基取代苯并噻唑啉类似物；2-芳基取代苯并噻唑啉类似物在丙酮，乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，环己烯或四氢呋喃等不含羟基的有机溶剂中，室温下得到取代苯甲酰胺基苯邻硫基二硫化合物。
本发明通过下述式(I)的反应式制备所述A类化合物：以邻甲氨基苯硫酚(1)和芳醛类化合物(2)为起始原料，在乙醇浓盐酸催化下，高收率得到2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物(A)；
本发明通过下述式(II)的反应式制备所述的B类化合物：在丙酮，乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，环己烯或四氢呋喃等溶剂中，室温条件下，按上述式(I)的反应得到2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物(A)发生游离基二聚化反应，得到相应的开环二硫化衍生物，即邻-(N-甲基-N-芳酰胺基)苯基二硫化合物(B)。
本发明以上述方法中制得的化合物进行体外生物活性测定，结果显示，所述的化合物具有良好的VEGF抑制活性，生物活性测试显示其抑制VEGF活性高于目前已进入II临床研究的新生血管抑制剂2-甲氧基雌二醇(2-ME)。
本发明公开的2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物及其在特定溶剂中发生游离基反应形成的开环二硫衍生物为新结构化合物，不同于现有技术的抗VEGF的其他药物或临床研究中的药物。本发明的(A)和(B)二类化合物的合成反应条件温和、简便易进行，反应完全，且时间短，收率和产物纯度高。化合物(A)和(B)具有显著抗VEGF活性，作用靶点明确，可进一步制备血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂，对研发抗VEGF创新药物具有显著的科学意义及应用前景。本发明对2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物及其开环二硫衍生物构效关系的研究结果，对抗肿瘤治疗药物及新生血管抑制作用的基础药理研究具有显著的科学意义。
【具体实施方式】
实施例1合成2-芳基取代苯并噻唑啉类似物A
6.1mM邻胺基硫酚和6.0mM醛基化合物溶解于5mL乙醇中，室温反应，加8滴浓盐酸，立刻有固体析出，30min后停止反应，滤出固体，得产物A，收率90-98％。其中，
A1：2-(2-硝基)-苯基-3-甲基-2，3-二氢-苯并噻唑
收率：98％。1H-NMR：8.04，7.84，7.65，7.47，7.05，7.00，6.73，6.55，6.50，2.81。mp：148-149℃。
A2：2-[2-苄基-3甲氧基]-苯基-3-甲基-2，3-二氢-苯并噻唑
收率：90％。1H-NMR：7.55-6.60(11芳氢)，6.39，6.37，5.17，5.00，3.92，2.55。mp：115-116℃。
实施例2合成邻-(N-甲基-N-芳酰胺基)苯基二硫化合物B
2.0mM化合物A溶于15mL二氯甲烷中，室温搅拌反应0.5-45天至原料全部消失。拉干溶剂，甲醇溶解后，活性炭脱色，过滤后用甲醇结晶或硅胶柱层析，得产物B，收率50-95％。其中，
B2：收率：74％。1H-NMR：7.60-6.70(24芳氢)，5.17(2H)，5.03(2H)，3.85(6H)，3.39(6H)。mp：76-83℃。
实施例3测定VEGF生物活性
溶剂：以蒸馏水或0.5％DMSO为溶剂配制不同浓度的化合物A或B的样品，
细胞株：人乳腺癌细胞系MDA-MB-231，
培养液：1640细胞培养液+10％胎牛血清，
测定试剂盒：人VEGF定量ELISA试剂盒(深圳依诺金生物科技有限公司产品)，
1、接种细胞：用培养液配制成浓度为103-104个/100ul浓度的单细胞悬液，以每孔90ul量接种到96孔板，分别加入待测样品10ul，以样品配制溶剂10ul组作为空白对照组；
2、培养细胞：于37℃、5％的CO2培养箱中培养3天；
3、检测：培养3天后，每孔吸取培养液50ul。用VEGF检测试剂盒测定细胞中VEGF的含量；
4、将药品2倍稀释成不同的浓度，按上述1-3步骤测定抑制率，然后以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，根据坐标图计算50％抑制率时的药品浓度，即得EC50。
结果显示，本发明的化合物具有良好的VEGF抑制活性，其抑制VEGF活性高于目前已进入II临床研究的新生血管抑制剂2-甲氧基雌二醇(2-ME)。
本发明实验所采用的实验试剂及实验用细胞株均为市购。
表1是所述2-芳基取代苯并噻唑啉类化合物及其开环二硫化衍生物的VEGF抑制活性数据。
表1
其中：EC50(mM)为半数抑制浓度；IC50(mM)为正常细胞半数抑制浓度；
TI为治疗指数，A1，A2和B2为代表化合物。