联苯双酯纳米脂质载体及其制备方法.pdf

本发明公开了一种联苯双酯纳米脂质载体，主要是由联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、水溶性乳化剂、脂溶性乳化剂和注射用水组成的，其制备方法如下：(1)将联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、脂溶性乳化剂溶于有机溶剂中，加热使溶解，以构成有机相；(2)将水溶性乳化剂、附加剂溶于注射用水中，加热，以构成水相；(3)在搅拌下将有机相注入水相中，搅拌使有机溶剂完全挥发，得到初乳；(4)将初乳倾入冰水中，搅拌，即制得联苯双酯纳米脂质载体。本发明的联苯双酯纳米脂质载体生物相容性好，易降解，降低了联苯双酯的毒副作用，提高了机体的耐受性。

1.  一种联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：主要是由联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、水溶性乳化剂、脂溶性乳化剂和注射用水组成的，以100ml纳米脂质载体制剂计，其组成如下：
联苯双酯               0.002～0.5g
固态脂质材料           0.05～2g
液态脂质               0～1g
水溶性乳化剂           0.05～5g
脂溶性乳化剂           0.05～5g
附加剂                 0～5g
注射用水余量。

2.  根据权利要求1所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：以100ml纳米脂质载体制剂计，其组成如下：
联苯双酯               0.002～0.2g
固态脂质材料           0.05～1g
液态脂质               0.01～0.5g
水溶性乳化剂           0.05～2g
脂溶性乳化剂           0.1～2g
附加剂                 0～2.5g
注射用水余量。

3.  根据权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：所述固态脂质材料为甘油三酯类、部分甘油酯、脂肪酸类、蜡质类或固醇类中的任一种或任意组合。

4.  根据权利要求3所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：所述甘油三酯类为三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯等；所述部分甘油酯为单硬脂酸甘油酯、含有单、二、三酰甘油酯的合成甘油酯及其混合物；所述脂肪酸为硬脂酸、棕榈酸；所述蜡质类为鲸蜡醇十六酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯；所述固醇类为胆固醇。

5.  根据权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：所述液态脂质为天然植物油、链长在C₈～C₁₀之间的中等链长脂肪酸甘油酯、油酸、亚油酸、维生素E或维生素酯类中的任一种或任意组合。

6.  根据权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：所述水溶性乳化剂为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物类、聚氧乙烯脂肪酸酯类或聚氧乙烯脂肪醇醚类中的任一种或任意组合；
所述脂溶性乳化剂为磷脂类、脂肪酸山梨坦类或聚山梨酯类中的任一种或任意组合；
所述附加剂为渗透压调节剂、金属离子络合剂、抗氧剂或防腐剂中的任一种或任意组合。

7.  一种制备权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、脂溶性乳化剂溶于有机溶剂中，加热至60～100℃使溶解，以构成有机相；
(2)将水溶性乳化剂、附加剂溶于注射用水中，加热至60～100℃，以构成水相；
(3)在60～100℃的温度下，在转速为400～1200r/min搅拌下将有机相注入水相中，搅拌0.5h～6h，使有机溶剂完全挥发，得到初乳；
(4)将初乳倾入0～2℃的冰水中，在转速为400～1200r/min下搅拌0.5h～4h，即制得联苯双酯纳米脂质载体。

8.  根据权利要求7所述的联苯双酯纳米脂质载体的制备方法，其特征在于：还包括以下步骤：
将制得的联苯双酯纳米脂质载体进一步加入冻干保护剂，以制成冻干制剂。

9.  根据权利要求8所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：所述冻干保护剂为乳糖、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、山梨醇中的任一种或任意组合。

10.  根据权利要求7所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于：所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙醇、乙酸乙酯或异丙醇中的任一种或任意组合。

联苯双酯纳米脂质载体及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种联苯双酯纳米脂质载体及其制备方法。
背景技术
联苯双酯(Bifendate，简称DDB)是人工合成五味子丙素的中间体，是我国首创的具有新型结构的高效、低毒的保肝药。其化学名为4，4’-二甲氧基-5，6，5’，6’-二次甲二氧-2，2’-二甲酸甲酯联苯，分子式为：C₂₀H₁₈O₁₀，分子量为：418.36。本品为一种白色结晶性粉末，无臭无味，几乎不溶于水，微溶于甲醇及乙醇，易溶于氯仿、二甲基甲酰胺季吡啶，呈一定的脂溶性。
临床研究表明联苯双酯的主要药理作用有：(1)具有显著的保肝降酶作用：能明显降低血清谷丙转氨酶(glutamic pyrumic transaminase，GPT)和谷草转氨酶(glutamic Oxalictransaminase，GOT)；(2)增强肝脏的解毒功能：在体内可使P-450等肝微粒体的含量显著增加，进而增强肝脏的解毒能力；(3)保护肝脏免受毒物损伤：减轻由四氯化碳、抗癌药、抗结核药等化学物质引起的肝损伤；(4)抗细胞突变、坏死的作用。该药毒性甚低，无致畸胎、致突变作用，是一种比较安全的药物，且价格低廉，易为患者接受，因而具有良好的研究及应用前景。目前该药临床用于慢性迁延性肝炎伴随的谷丙转氨酶活性升高者，也可用于化学毒物、药物引起的谷丙转氨酶活性升高。
联苯双酯几乎不溶于水的性质使其制剂体外溶出差，虽在胃肠道内不被破坏，但口服后严重的肝脏首过效应，导致该药口服生物利用度低，一般只有25％～30％。联苯双酯进入体内后在肝脏迅速被代谢转化，血浆半衰期只有5小时左右，24小时后70％自粪便排出。虽然仅吸收25％左右，却表现出很强的降GPT作用，说明其生物活性很高，是一有研究价值药物。目前使用或研究的制剂主要有联苯双酯片、联苯双酯胶囊、联苯双酯滴丸、复方联苯双酯片、复方联苯双酯冲剂、联苯双酯口服混悬液等，CN 200410070669.4(公开号CN1586472)公开了一种联苯双酯口腔崩解片，CN 03145971.4(公开号CN1476831)公开了一种联苯双酯缓释制剂，由于联苯双酯不溶于水，因此这些制剂普遍存在生物利用度低的缺点。CN 03146030.5公开了一种联苯双酯乳剂，CN 100998561A公开了一种联苯双酯静脉注射乳剂，液体制剂储存和运输不方便，也容易导致药物不稳定。CN 200610038662.3(公开号CN1850071)公开了一种联苯双酯固体分散体，CN 200810234507.8(公开号CN101401788)公开了一种联苯双酯自乳化制剂，以提高其生物利用度和稳定性。
联苯双酯作为一种长期使用的药物，临床需要一种给药次数少、生物利用度高、稳定性好、制备简单的有利于患者使用的制剂。
纳米粒(nanoparticles)是利用天然高分子或合成的化学物质为载体制成的载药微粒，直径10～1000nm。纳米粒具有靶向性，能直接向靶器官、靶细胞或细胞内靶结构输送药物，同时具有缓释、保护药物、提高疗效、降低毒副作用等优点。血管内注射纳米粒后，纳米粒主要被网状内皮系统(RES)吞噬，RES为来自于骨髓吞噬功能很强的单核细胞的统称。肝中有数目众多的网状内皮细胞，且位置固定，被称作Kupffer细胞，因此药物能在肝脏内聚集，然后逐步释放入血液循环，使肝脏药物浓度增加，对其他脏器不良反应减少，对肝脏有被动靶向作用；当纳米粒足够小(100～150nm)且表面覆以特殊包被后，便可逃过Kupffer细胞的吞噬，靠其连接的特异性抗体等物质定位于肝实质细胞发挥作用，从而具有主动靶向作用。因此，纳米粒对于治疗各种肝脏疾病具有特殊意义。
纳米脂质载体(nanostructured lipid carriers，NLC)是由固体脂质纳米粒(solid lipidnanoparticles，SLN)发展而来的一种新型胶体载体系统。固体脂质纳米粒存在的问题在于，SLN是由单一的固态脂质或不同种类的固态脂质混合制成，其高度有序、规则的脂质结晶不仅限制了载药能力，而且会引起被包裹药物的外排。而NLC是将常温下的液态脂质加入到固态脂质中，从而造成晶体的混乱度增加，使载体具有较高的晶体缺陷，因而可以容纳更多的药物分子。正是由于NLC是由固态脂质和与其空间不相容的液态脂质混合组成，使其具有特殊的纳米结构，其优势在于：(1)难溶性药物在液体脂质中的溶解度较固体脂质大，引入液体脂质可以增加药物的包封率和载药量；(2)液态脂质的加入能够延缓固态脂质由α晶形向晶形β的转化，可以延缓药物的泄漏；(3)适量液体脂质的引入不会改变纳米粒固体内核的性质，因此NLC仍具备与SLN相似的缓控释特性。
由此可见，NLC不仅具有SLN物理稳定性高、保护敏感药物不被降解、控制释放、良好的生物相容性、易于大规模生产等优点，还改善了SLN载药能力有限、在贮存过程中药物容易泄露、包封率降低等问题。因此NLC的这种作用特点，不仅克服了传统SLN的不足之处，而且扩大了其应用领域。
综上所述，将联苯双酯制成纳米脂质载体，预期可以达到改变药物体内分布、延长药物作用时间、提高生物利用度等目的。虽然将药物制成纳米脂质载体是常规的技术手段，但要研制出一种具有疗效好、释药可控、生物相容性好、稳定等优点的配方及制备方法并不是很容易的，需要付出创造性劳动，进行大量的试验和条件筛选。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种联苯双酯的新剂型，即：联苯双酯纳米脂质载体，该制剂使联苯双酯具有更高的化学稳定性，不易降解；生物相容性好、稳定、释药可控，并可通过控制纳米粒的粒径达到肝组织被动靶向、提高生物利用度、改善患者顺应性的目的。并且可以克服固体脂质纳米粒放置过程中药物外排、包封率降低的现象，使制剂可稳定贮存。
本发明还提供了该联苯双酯纳米脂质载体的制备方法，该方法可采用常规的工艺设备，适合工业大规模高效益生产。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种联苯双酯纳米脂质载体，主要是由联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、水溶性乳化剂、脂溶性乳化剂和注射用水组成的，以100ml纳米脂质载体制剂计，其组成如下：
联苯双酯                0.002～0.5g
固态脂质材料            0.05～2g
液态脂质                0～1g
水溶性乳化剂            0.05～5g
脂溶性乳化剂            0.05～5g
附加剂                  0～5g
注射用水余量。
优选的，以100ml纳米脂质载体制剂计，其组成如下：
联苯双酯                0.002～0.2g
固态脂质材料            0.05～1g
液态脂质                0.01～0.5g
水溶性乳化剂            0.05～2g
脂溶性乳化剂            0.05～2g
附加剂                  0～2.5g
注射用水余量。
所述固态脂质材料为甘油三酯类、部分甘油酯、脂肪酸类、蜡质类或固醇类中的任一种或任意组合。
所述甘油三酯类包括三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯等；所述部分甘油酯包括单硬脂酸甘油酯、含有单、二、三酰甘油酯的合成甘油酯及其混合物；所述脂肪酸类包括硬脂酸、棕榈酸；所述蜡质类包括鲸蜡醇十六酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯；所述固醇类为胆固醇。
所述液态脂质为天然植物油、链长在C₈～C₁₀之间的中等链长脂肪酸甘油酯、油酸、亚油酸、维生素E或维生素酯类中的任一种或任意组合。优选链长在C₈～C₁₀之间的中等链长脂肪酸甘油酯或维生素E。
所述水溶性乳化剂为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物类(如Poloxammer系列)、聚氧乙烯脂肪酸酯类或聚氧乙烯脂肪醇醚类(如Brij系列)中的任一种或任意组合。
所述脂溶性乳化剂为磷脂类、脂肪酸山梨坦类或聚山梨酯类中的任一种或任意组合。
所述磷脂类包括大豆磷脂、蛋黄磷脂、卵磷脂；所述脂肪酸山梨坦包括Span60和Span80；所述聚山梨酯包括Tween60和Tween80。
为更好地适于静脉用药，乳化剂优选大豆磷脂和泊洛沙姆188的组合。
所述附加剂为渗透压调节剂、金属离子络合剂、抗氧剂或防腐剂中的任一种或任意组合。所述附加剂可起到增加制剂稳定性、调节渗透压、抗氧化等作用。
所述渗透压调节剂包括丙二醇、丙三醇、甘露醇等。
所述金属离子络合剂包括EDTA、乙二铵四乙酸二钠盐等。
所述抗氧剂包括维生素C、维生素E等。
所述防腐剂包括苯扎溴铵、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸等。
联苯双酯纳米脂质载体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、脂溶性乳化剂溶于有机溶剂中，加热至60～100℃使溶解，以构成有机相；
(2)将水溶性乳化剂、附加剂溶于注射用水中，加热至60～100℃，以构成水相；
(3)在60～100℃的温度下，在转速为400～1200r/min搅拌下将有机相注入水相中，搅拌0.5h～6h，使有机溶剂完全挥发，得到初乳；
(4)将初乳倾入0～2℃的冰水中，在转速为400～1200r/min下搅拌0.5h～4h，即制得联苯双酯纳米脂质载体。
还包括以下步骤：将制得的联苯双酯纳米脂质载体进一步加入冻干保护剂，以制成冻干制剂。其中，对所制得的联苯双酯纳米脂质载体进行冻干处理的工艺可为：将1～10wt％(重量比)的冻干保护剂溶于联苯双酯纳米脂质载体的水分散体中，然后分装于西林瓶中，置-80℃的超低温冰箱中预冻24h，取出，迅速移入冷冻干燥机中，冻干48h，加塞密封即可。
所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙醇、乙酸乙酯或异丙醇中的任一种或任意组合。
所述冻干保护剂为乳糖、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷或山梨醇中的任一种或任意组合。
本发明具有以下优点：
(1)本发明的联苯双酯纳米脂质载体生物相容性好，易降解，降低了联苯双酯的毒副作用，提高了机体的耐受性。
(2)本发明的联苯双酯纳米脂质载体粒径在200nm左右，能被动靶向于肝组织，提高疗效，大大降低毒副作用，可提高联苯双酯的生物利用度。且在体内具备缓释功能，可延长药物的体内循环时间。采用透析法测定药物的体外释放度，结果显示纳米脂质载体表现出明显的缓释特点(参见图4)。
(3)本发明采用混合脂质作为联苯双酯的载药材料，通过向固体脂质材料中加入一定比例的液态脂质，在一定程度上破坏了材料的晶型，提高载药量和包封率，且避免了药物在放置过程中外排、包封率降低的现象，使制剂可稳定贮存。
(4)本发明的工艺为改造的微乳技术-乳化蒸发-低温固化法，具有制备工艺简单，成本低，工艺参数易于控制等特点，适合工业大规模高效益生产。
附图说明
图1为联苯双酯纳米脂质载体透射电镜图；
图2为联苯双酯纳米脂质载体透射电镜图；
图3为联苯双酯纳米脂质载体粒径分布图；其中，标题：粒径分布(Size distribution(s)，横坐标：粒径(Diameter)，纵坐标：百分率(％in class)；
图4为联苯双酯纳米脂质载体体外释放的释放百分率-时间曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述，但本发明不局限于这些实施例。
实施例1制备联苯双酯脂质载体
步骤如下：
(1)取联苯双酯10mg、胆固醇160mg、油酸40mg、Tween80450mg溶于10ml丙酮-乙醇(体积比1∶1)中，75℃水浴上加热溶解，构成有机相。
(2)将泊洛沙姆188150mg溶于15ml注射用水，水浴加热至和有机相相同的温度，构成水相。
(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75℃恒温搅拌4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。
(4)将所得初乳倾入45ml 0～2℃的冰水中，冰浴下1000r/min搅拌2h，从而制得联苯双酯纳米脂质载体，4℃密闭保存。
实施例2制备联苯双酯脂质载体
步骤如下：
(1)取联苯双酯50mg、单硬脂酸甘油酯240mg、MCT 60mg、大豆磷脂200mg溶于10ml氯仿中，75℃水浴上加热溶解，构成有机相。
(2)将泊洛沙姆188450mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温度，构成水相。
(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75℃恒温搅拌4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳；
(4)将所得初乳倾入45ml 0～2℃的冰水中，冰浴下1000r/min搅拌2h，从而制得联苯双酯纳米脂质载体，4℃密闭保存。
用水稀释后，以H-7000型透射电子显微镜观测其形态，如图1所示。由图1可知，所得联苯双酯纳米脂质载体大小均一、形态圆整、粒径在200nm左右。
实施例3制备联苯双酯脂质载体
步骤如下：
(1)取联苯双酯20mg、三棕榈酸甘油酯120mg、硬脂酸60mg、大豆油30mg、Span60250mg溶于10ml丙酮-氯仿(体积比1∶1)中，80℃水浴上加热溶解，构成有机相。
(2)将泊洛沙姆188450mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温度，构成水相。
(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，80℃恒温搅拌4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。
(4)将所得初乳倾入45ml 0～2℃的冰水中，冰浴下700r/min搅拌2h，从而制得联苯双酯纳米脂质载体，冻干。
其中，冻干工艺为：取10wt％的甘露醇与右旋糖酐(质量比为1∶1)，溶于联苯双酯纳米脂质载体水分散体中，然后分装于西林瓶中，置-80℃的超低温冰箱中预冻24h，取出，迅速移入冷冻干燥机中，-40℃、0.10mbar冻干48h，加塞密封即可。
实施例4制备联苯双酯脂质载体
步骤如下：
(1)取联苯双酯10mg、单硬脂酸甘油酯160mg、MCT 40mg、大豆磷脂200mg溶于10ml丙酮-乙醇(体积比1∶1)中，75℃水浴上加热溶解，构成有机相。
(2)将泊洛沙姆188300mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温度，构成水相。
(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75℃恒温搅拌4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。
(4)将所得初乳倾入45ml 0～2℃的冰水中，冰浴下1000r/min搅拌2h，从而制得联苯双酯纳米脂质载体，冻干。
其中，冻干工艺为：取5wt％的甘露醇，溶于联苯双酯纳米脂质载体水分散体中，然后分装于西林瓶中，置-80℃的超低温冰箱中预冻24h，取出，迅速移入冷冻干燥机中，-40℃、0.10mbar冻干48h，加塞密封即可。
取适量冻干粉用水稀释后，以H-7000型透射电子显微镜观测其形态，如图2所示。由图2可知所得联苯双酯纳米脂质载体大小均一、形态圆整、成型性好、粒径在200nm左右。
实施例5制备联苯双酯脂质载体
步骤如下：
(1)取联苯双酯30mg、单硬脂酸甘油酯75mg、硬脂酸100mg、MCT 20mg、大豆磷脂200mg溶于10ml丙酮-乙醇(体积比1∶1)中，70℃水浴上加热溶解，构成有机相。
(2)将泊洛沙姆188600mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温度，构成水相。
(3)在转速为600r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，70℃恒温搅拌4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。
(4)将所得初乳倾入45ml 0～2℃的冰水中，冰浴下1000r/min搅拌2h，从而制得联苯双酯纳米脂质载体，4℃密闭保存。
用水稀释后，以Zetasizer 3000HS型激光粒度分布仪测定粒径分布，测得平均粒径为217.0nm，多分散性系数为0.149，如图3所示。
实施例6制备联苯双酯脂质载体
步骤如下：
(1)取联苯双酯20mg、单硬脂酸甘油酯240mg、MCT 40mg、大豆磷脂250mg溶于10ml丙酮-乙醇(体积比1∶1)中，75℃水浴上加热溶解，构成有机相。
(2)将泊洛沙姆188300mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温度，构成水相。
(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75℃恒温搅拌4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。
(4)将所得初乳倾入45ml 0～2℃的冰水中，冰浴下1000r/min搅拌2h，从而制得联苯双酯纳米脂质载体，4℃密闭保存。
采用反向动态透析法测定药物的释放度：以含30％乙醇的PH为7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)200ml为释放介质，搅拌速度为100r/min，温度为37±0.5℃。取样后进样20μl进行HPLC测定，计算累积释放百分率，如图4所示。
实施例7制备联苯双酯脂质载体
步骤如下：
(1)取联苯双酯10mg、单硬脂酸甘油酯80mg、硬脂酸80mg、MCT 60mg、大豆磷脂200mg溶于10ml丙酮-乙醇(体积比1∶1)中，75℃水浴上加热溶解，构成有机相。
(2)将泊洛沙姆188450mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温度，构成水相。
(3)在转速为800r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75℃恒温搅拌4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。
(4)将所得初乳倾入45ml 0～2℃的冰水中，冰浴下1000r/min搅拌2h，从而制得联苯双酯纳米脂质载体，4℃密闭保存。
采用反向动态透析法测定药物的释放度：以含30％乙醇的PH为7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)200ml为释放介质，搅拌速度为100r/min，温度为37±0.5℃。取样后进样20μl进行HPLC测定，计算累积释放百分率，如图4所示。由图可知联苯双酯纳米脂质载体体外释放呈双相动力学，即最初为突释后为缓释；液态脂质占总脂质比重越大，释药越快。