一种复方丹参片的检测方法 【技术领域】
本发明涉及药物检测领域， 具体涉及一种复方丹参片的检测方法。背景技术 复方丹参片是由丹参、 三七、 冰片为原料加辅料制成的中药制剂， 收载于 《中华人 民共和国药典》 2010 年版一部第 904 页。复方丹参片一般分为三种规格， 其中规格 (1) 为 薄膜衣小片， 每片重 0.32g， 相当于饮片 0.6g ； 规格 (2) 为薄膜衣大片， 每片重 0.8g， 相当于 饮片 1.8g ； 规格 (3) 为糖衣片， 相当于饮片 0.6g。
在 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部第 904 页收载了复方丹参片的质量标准。 其中， 复方丹参片的鉴别方法包括 ： 取本品 5 片 [ 规格 (1) 和规格 (3)] 或 2 片 [ 规格 (2)]， 糖衣片除去糖衣， 研碎， 加乙醚 10ml， 超声处理 5 分钟， 滤过， 药渣备用， 滤液挥干， 残渣加乙 酸乙酯 2ml 使溶解， 作为供试品溶液。另取丹参酮Ⅱ A 对照品、 冰片对照品， 分别加乙酸乙 酯制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 作为对照品溶液。照薄层色谱法 ( 附录Ⅵ B) 试验， 吸取上 述三种溶液各 4μl， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以苯 - 乙酸乙酯 (19 ∶ 1) 为展开剂， 展 开， 取出， 晾干。供试品色谱中， 在与丹参酮Ⅱ A 对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑 点； 喷以 1％香草醛硫酸溶液， 在 110℃加热数分钟， 在与冰片对照品色谱相应的位置上， 显 相同颜色的斑点。
在上述鉴别方法中， 存在如下缺点 ： 首先， 使用的展开剂中含有剧毒化学物质苯， 对检测人员的危害大 ； 其次， 按照上述方法进行检测， 供试品色谱中， 在与丹参酮Ⅱ A 对照品 色谱相应的位置上， 斑点的颜色明显不一致， 说明该检测方法并不能准确检测供试品中的 丹参酮Ⅱ A。
发明内容
有鉴于此， 本发明要解决的技术问题在于， 提供一种复方丹参片的检测方法， 该检 测方法对人体无害， 并且能准确的检测出复方丹参片中的活性成分。
为了解决上述技术问题， 本发明提供一种复方丹参片的检测方法， 包括 ：
提供待测复方丹参片的供试品溶液 ；
取选自二氢丹参酮Ⅰ、 隐丹参酮、 丹参酮Ⅰ、 丹参酮Ⅱ A、 冰片中的一种溶解在乙酸 乙酯内作为对照品溶液 ；
以石油醚和丙酮的混合物作为展开剂， 采用薄层色谱法对所述供试品溶液进行检 测。
优选的， 所述展开剂中石油醚和丙酮的体积比为 7 ～ 10 ∶ 1 ～ 3。
优选的， 所述展开剂中石油醚和丙酮的体积比为 8 ∶ 2。
优选的， 所述待测复方丹参片的供试品溶液采用如下方法制备 ：
取待测复方丹参片的待测部分加入乙醚超声处理， 滤过， 弃去滤渣， 所得滤液蒸 干， 残渣加乙酸乙酯使溶解， 得到供试品溶液。优选的， 所述待测复方丹参片中的待测成分采用如下方法获得 ： 取待测复方丹参片， 糖衣片除去糖衣， 磨碎、 研细， 即得。 优选的， 所述取待测复方丹参片的待测部分在乙醚中超声处理的时间为 2 分钟以上。 优选的， 所述取待测复方丹参片的待测部分在乙醚中超声处理的时间为 5 分钟。
本发明提供一种复方丹参片的检测方法， 与现有技术相比， 本发明使用石油醚和 丙酮的混合物作为展开剂， 采用薄层色谱法对复方丹参片进行检测， 由于石油醚和丙酮的 混合物无毒， 不含剧毒化合物苯， 因此该检测方法对人体无害。检测结果进一步表明， 以石 油醚和丙酮的混合物作为展开剂， 采用薄层色谱法能准确检测出复方丹参片的活性成分。
附图说明
图 1 为本发明实施例 1 得到的显色前的薄层色谱图 ；
图 2 为本发明实施例 1 得到的显色后的薄层色谱图。
图 3 为本发明实施例 2 得到的显色前的薄层色谱图 ；
图 4 为本发明实施例 2 得到的显色后的薄层色谱图。
图 5 为本发明实施例 3 得到的显色前的薄层色谱图 ； 图 6 为本发明实施例 3 得到的显色后的薄层色谱图。 图 7 为本发明实施例 4 得到的显色前的薄层色谱图 ； 图 8 为本发明实施例 4 得到的显色后的薄层色谱图。 图 9 为本发明比较例 1 得到的显色前的薄层色谱图 ； 图 10 为本发明比较例 1 得到的显色后的薄层色谱图。具体实施方式
为了进一步了解本发明， 下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述， 但是 应当理解， 这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点， 而不是对本发明权利要求的 限制。
本发明提供的复方丹参片的检测方法的一个实施方案， 包括 ：
提供待测复方丹参片的供试品溶液 ；
取选自二氢丹参酮Ⅰ、 隐丹参酮、 丹参酮Ⅰ、 丹参酮Ⅱ A、 冰片中的一种溶解在乙酸 乙酯内作为对照品溶液 ；
以石油醚和丙酮的混合物作为展开剂， 采用薄层色谱法对所述供试品溶液进行检 测。
按照本发明， 所述复方丹参片指收载于 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部第 904 页的由丹参、 三七、 冰片为原料加辅料制成的中药制剂。本发明采用薄层色谱法对待测 复方丹参片进行检测。薄层色谱法 (thin-layer chromatography) 也称为薄层层析， 本发 明采用的薄层色谱法参照 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部附录Ⅵ B， 其中， 使用的展 开剂为石油醚和丙酮的混合物。按照本发明， 所述展开剂中石油醚和丙酮的体积比优选为 7 ～ 10 ∶ 1 ～ 3， 更优选为 8 ∶ 2。
由于复方丹参片中含有二氢丹参酮Ⅰ、 隐丹参酮、 丹参酮Ⅰ、 丹参酮Ⅱ A、 冰片等多种有效成分， 现有技术中使用苯和乙酸乙酯按照体积比 19 ∶ 1 混合作为展开剂， 采用薄层 色谱法进行检测， 上述几种有效成分不能得到彻底分离， 因此使得供试品色谱和对照品色 谱对应位置的斑点的颜色不一致， 其原因在于供试品色谱中丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ A 的斑点 极易发生重叠。本发明使用石油醚和丙酮的混合物作为展开剂， 分别对以上几种有效成分 使用薄层色谱法进行检测， 结果表明， 可对以上几种有效成分进行有效分离， 因此能够准确 检测复方丹参片的有效成分。
按照本发明， 所述待测复方丹参片的供试品溶液可以采用如下方法制备 ：
取待测复方丹参片中的待测部分加入乙醚进行超声处理， 超声处理的目的在于使 所述待测复方丹参片的有效成分溶解在乙醚中， 超声处理的时间优选为 2 分钟以上， 更优 选为 5 分钟。超声处理后， 将溶解有复方丹参片有效成分的乙醚液过滤， 弃去滤渣， 滤液挥 干， 得到的残渣溶解在乙酸乙酯中， 得到供试品溶液。 所述待测复方丹参片中的待测部分优 选为取待测复方丹参片， 糖衣片除去糖衣， 磨碎、 研细， 即得。
按照本发明， 使用选自二氢丹参酮Ⅰ、 隐丹参酮、 丹参酮Ⅰ、 丹参酮Ⅱ A、 冰片中的 一种溶解在乙酸乙酯内作为对照品溶液。检测时， 分别吸取供试品溶液和对照品溶液分别 点于同一硅胶薄层板上， 用展开剂展开， 取出， 晾干， 观察供试品色谱与对照品色谱中斑点 的颜色和位置。然后喷以香草醛硫酸溶液， 加热进行显色。如果供试品色谱与对照品色谱 在相应的位置显示相同颜色斑点， 则表明供试品为复方丹参片 ； 如果供试品色谱与对照品 色谱在相应的位置不能显示相同颜色的斑点， 则表明供试品不是复方丹参片。
以下以具体实施例说明本发明的效果， 但是本发明的保护范围并不受以下实施例 的限制。
以下实施例和比较例的检测环境相同， 环境温度为 20℃， 环境相对湿度为 63％。
实施例 1
按照 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部复方丹参片的规格要求， 取 2 批规格 (1)( 每批 5 片， 分别编号为 6、 7)、 2 批规格 (3)( 每批 5 片， 分别编号为 8、 9)、 1 批规格 (2) (2 片， 编号为 10)。
将以上 2 批规格 (1) 每批 5 片、 2 批规格 (2) 每批 5 片及 1 批除去糖衣的规格 (3)2 片分别研碎， 各加乙醚 10ml， 超声处理 5 分钟， 滤过， 弃去滤渣， 滤液挥干， 残渣加乙酸乙酯 2ml 使溶解， 分别作为供试品溶液 ( 对应编号依次为 6、 7、 8、 9、 10)。另取二氢丹参酮Ⅰ对照 品 ( 编号为 1)、 隐丹参酮对照品 ( 编号为 2)、 丹参酮Ⅰ对照品 ( 编号为 3)、 丹参酮Ⅱ A 对照 品 ( 编号为 4)、 冰片对照品 ( 编号为 5)， 分别加乙酸乙酯制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 分别 作为对照品溶液 ( 对应编号依次为 1、 2、 3、 4、 5)。照薄层色谱法 (《中华人民共和国药典》 2010 年版一部附录Ⅵ B) 试验， 吸取上述 10 种溶液各 4μl， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以石油醚和丙酮按照 7 ∶ 2 的体积比混合作为展开剂， 展开， 取出， 晾干。供试品色谱中， 在 与二氢丹参酮Ⅰ对照品、 隐丹参酮对照品、 丹参酮Ⅰ对照品、 丹参酮Ⅱ A 对照品色谱相应的 位置上， 均显相同颜色的斑点， 如图 1 所示 ； 然后喷以 1wt％香草醛硫酸溶液， 在 110℃加热 5 分钟进行显色， 供试品色谱与各对照品色谱相对应的位置上， 均显相同颜色的斑点， 如图 2 所示。
实施例 2
按照 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部复方丹参片的规格要求， 取 2 批规格(1)( 每批 5 片， 分别编号为 6、 7)、 2 批规格 (3)( 每批 5 片， 分别编号为 8、 9)、 1 批规格 (2) (2 片， 编号为 10)。
将以上 2 批规格 (1) 每批 5 片、 2 批规格 (2) 每批 5 片及 1 批除去糖衣的规格 (3)2 片分别研碎， 各加乙醚 10ml， 超声处理 5 分钟， 滤过， 弃去滤渣， 滤液挥干， 残渣加乙酸乙酯 2ml 使溶解， 分别作为供试品溶液 ( 对应编号依次为 6、 7、 8、 9、 10)。另取二氢丹参酮Ⅰ对照 品 ( 编号为 1)、 隐丹参酮对照品 ( 编号为 2)、 丹参酮Ⅰ对照品 ( 编号为 3)、 丹参酮Ⅱ A 对照 品 ( 编号为 4)、 冰片对照品 ( 编号为 5)， 分别加乙酸乙酯制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 分别 作为对照品溶液 ( 对应编号依次为 1、 2、 3、 4、 5)。照薄层色谱法 (《中华人民共和国药典》 2010 年版一部附录Ⅵ B) 试验， 吸取上述 10 种溶液各 4μl， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以石油醚和丙酮按照 8 ∶ 2 的体积比混合作为展开剂， 展开， 取出， 晾干。供试品色谱中， 在 与二氢丹参酮Ⅰ对照品、 隐丹参酮对照品、 丹参酮Ⅰ对照品、 丹参酮Ⅱ A 对照品色谱相应的 位置上， 均显相同颜色的斑点， 如图 3 所示 ； 然后喷以 1wt％香草醛硫酸溶液， 在 110℃加热 5 分钟进行显色， 供试品色谱与各对照品色谱相对应的位置上， 均显相同颜色的斑点， 如图 4 所示。
实施例 3 按照 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部复方丹参片的规格要求， 取 2 批规格 (1)( 每批 5 片， 分别编号为 6、 7)、 2 批规格 (3)( 每批 5 片， 分别编号为 8、 9)、 1 批规格 (2) (2 片， 编号为 10)。
将以上 2 批规格 (1) 每批 5 片、 2 批规格 (2) 每批 5 片及 1 批除去糖衣的规格 (3)2 片分别研碎， 各加乙醚 10ml， 超声处理 5 分钟， 滤过， 弃去滤渣， 滤液挥干， 残渣加乙酸乙酯 2ml 使溶解， 分别作为供试品溶液 ( 对应编号依次为 6、 7、 8、 9、 10)。另取二氢丹参酮Ⅰ对照 品 ( 编号为 1)、 隐丹参酮对照品 ( 编号为 2)、 丹参酮Ⅰ对照品 ( 编号为 3)、 丹参酮Ⅱ A 对照 品 ( 编号为 4)、 冰片对照品 ( 编号为 5)， 分别加乙酸乙酯制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 分别 作为对照品溶液 ( 对应编号依次为 1、 2、 3、 4、 5)。照薄层色谱法 (《中华人民共和国药典》 2010 年版一部附录Ⅵ B) 试验， 吸取上述 10 种溶液各 4μl， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以石油醚和丙酮按照 9 ∶ 2 的体积比混合作为展开剂， 展开， 取出， 晾干。供试品色谱中， 在 与二氢丹参酮Ⅰ对照品、 隐丹参酮对照品、 丹参酮Ⅰ对照品、 丹参酮Ⅱ A 对照品色谱相应的 位置上， 均显相同颜色的斑点， 如图 5 所示 ； 然后喷以 1wt％香草醛硫酸溶液， 在 110℃加热 5 分钟进行显色， 供试品色谱与各对照品色谱相对应的位置上， 均显相同颜色的斑点， 如图 6 所示。
实施例 4
按照 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部复方丹参片的规格要求， 取 2 批规格 (1)( 每批 5 片， 分别编号为 6、 7)、 2 批规格 (3)( 每批 5 片， 分别编号为 8、 9)、 1 批规格 (2) (2 片， 编号为 10)。
将以上 2 批规格 (1) 每批 5 片、 2 批规格 (2) 每批 5 片及 1 批除去糖衣的规格 (3)2 片分别研碎， 各加乙醚 10ml， 超声处理 5 分钟， 滤过， 弃去滤渣， 滤液挥干， 残渣加乙酸乙酯 2ml 使溶解， 分别作为供试品溶液 ( 对应编号依次为 6、 7、 8、 9、 10)。另取二氢丹参酮Ⅰ对照 品 ( 编号为 1)、 隐丹参酮对照品 ( 编号为 2)、 丹参酮Ⅰ对照品 ( 编号为 3)、 丹参酮Ⅱ A 对照 品 ( 编号为 4)、 冰片对照品 ( 编号为 5)， 分别加乙酸乙酯制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 分别
作为对照品溶液 ( 对应编号依次为 1、 2、 3、 4、 5)。照薄层色谱法 (《中华人民共和国药典》 2010 年版一部附录Ⅵ B) 试验， 吸取上述 10 种溶液各 4μl， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以石油醚和丙酮按照 10 ∶ 2 的体积比混合作为展开剂， 展开， 取出， 晾干。供试品色谱中， 在与二氢丹参酮Ⅰ对照品、 隐丹参酮对照品、 丹参酮Ⅰ对照品、 丹参酮Ⅱ A 对照品色谱相应 的位置上， 均显相同颜色的斑点， 如图 7 所示 ； 然后喷以 1wt％香草醛硫酸溶液， 在 110℃加 热 5 分钟进行显色， 供试品色谱与各对照品色谱相对应的位置上， 均显相同颜色的斑点， 如 图 8 所示。
比较例 1
按照 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部复方丹参片的规格要求， 取 2 批规格 (1)( 每批 5 片， 分别编号为 6、 7)、 2 批规格 (3)( 每批 5 片， 分别编号为 8、 9)、 1 批规格 (2) (2 片， 编号为 10)。
将以上 2 批规格 (1) 每批 5 片、 2 批规格 (2) 每批 5 片及 1 批除去糖衣的规格 (3)2 片分别研碎， 各加乙醚 10ml， 超声处理 5 分钟， 滤过， 弃去滤渣， 滤液挥干， 残渣加乙酸乙酯 2ml 使溶解， 分别作为供试品溶液 ( 对应编号依次为 6、 7、 8、 9、 10)。另取二氢丹参酮Ⅰ对照 品 ( 编号为 1)、 隐丹参酮对照品 ( 编号为 2)、 丹参酮Ⅰ对照品 ( 编号为 3)、 丹参酮Ⅱ A 对照 品 ( 编号为 4)、 冰片对照品 ( 编号为 5)， 分别加乙酸乙酯制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 分别 作为对照品溶液 ( 对应编号依次为 1、 2、 3、 4、 5)。照薄层色谱法 (《中华人民共和国药典》 2010 年版一部附录Ⅵ B) 试验， 吸取上述 10 种溶液各 4μl， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以苯和乙酸乙酯按照 19 ∶ 1 的体积比混合作为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 观察供试品色谱 与对照品色谱中斑点的颜色和位置。然后喷以 1wt％香草醛硫酸溶液， 在 110℃加热 5 分钟 进行显色。显色前的薄层色谱图如图 9 所示， 显色后的薄层色谱图如图 10 所示。 将实施例 1 ～ 4 显色前与显色后得到的薄层色谱图与比较例 1 显色前与显色后得 到的薄层色谱图进行比较， 可以看出， 将对照品、 供试品用苯和乙酸乙酯的混合物作为展开 剂， 按 《中华人民共和国药典》 2010 年版一部第 904 页中的薄层色谱法进行检测， 供试品色 谱中， 在与丹参酮Ⅱ A 对照品色谱相应的位置上， 斑点的颜色明显不一致， 原因在于丹参酮 Ⅰ和丹参酮Ⅱ A 的斑点相互重叠， 因此检测效果不准确。本发明公开的方法则很好地解决 了上述问题。
此外， 丹参是复方丹参片的君药， 其活性成分中， 含量较高的除丹参酮Ⅱ A 外， 还有 二氢丹参酮Ⅰ、 隐丹参酮、 丹参酮Ⅰ等， 本发明进一步增加二氢丹参酮Ⅰ、 隐丹参酮、 丹参酮 Ⅰ作为指标成分， 可以更全面地反映复方丹参片的质量情况。 最后， 本发明所用的展开剂为 石油醚和丙酮的混合物， 与现有技术相比， 不含剧毒化合物苯， 因此检测条件得到改善。
以上对本发明提供的复方丹参片的检测方法进行了详细的介绍。 本文中应用了具 体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述， 以上实施例的说明只是用于帮助理解本发 明的方法及其核心思想。 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明 原理的前提下， 还可以对本发明进行若干改进和修饰， 这些改进和修饰也落入本发明权利 要求的保护范围内。