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免疫球蛋白.pdf

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文档编号：1199083

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本发明涉及人IL-23的抗原结合蛋白，含有它们的药物制剂，以及涉及此类抗原结合蛋白在治疗和/或预防炎性疾病诸如类风湿性关节炎(RA)中的用途。。

摘要
申请专利号：	CN200880119172.3	申请日：	2008.10.03
公开号：	CN101889026A	公开日：	2010.11.17
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07K 16/24申请公布日:20101117\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07K 16/24申请日:20081003\|\|\|公开
IPC分类号：	C07K16/24; A61K39/395	主分类号：	C07K16/24
申请人：	葛兰素集团有限公司
发明人：	G·P·本布里奇; J·E·克拉克森; J·H·艾利斯; P·A·汉布林; G·科普塞达斯; A·P·路易斯; R·麦克亚当
地址：	英国梅得塞克斯
优先权：	2007.10.05 US 60/977841
专利代理机构：	中国专利代理(香港)有限公司 72001	代理人：	权陆军;郭文洁
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内容摘要

本发明涉及人IL-23的抗原结合蛋白，含有它们的药物制剂，以及涉及此类抗原结合蛋白在治疗和/或预防炎性疾病诸如类风湿性关节炎(RA)中的用途。

权利要求书

1.抗原结合蛋白，其结合人IL-23并且其包含SEQ ID NO：3、SEQID NO：4、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：95或SEQ IDNO：100的CDRH3，或在CDRH3中含有1或2或3个氨基酸替换的其变体。2.根据权利要求1的抗原结合蛋白，其中所述的抗原结合蛋白包括以下CDR：CDRH1：SEQ.I.D.NO：1CDRH2：SEQ.I.D.NO：2CDRH3：SEQ.I.D.NO：4CDRL1：SEQ.I.D.NO：5CDRL2：SEQ.I.D.NO：6CDRL3：SEQ.I.D.NO：7。3.结合与权利要求1或2的抗原结合蛋白相同的表位并且中和人IL-23的抗原结合蛋白。4.根据前述任一项权利要求的抗原结合蛋白，其中和人IL-23和食蟹猴IL-23两者。5.根据前述任一项权利要求的抗原结合蛋白，其中和人IL-23但不中和人IL-12。6.根据前述任一项权利要求的抗原结合蛋白，其中所述的抗原结合蛋白是抗体。7.根据权利要求6的抗体，其中所述的抗体是人源化或嵌合抗体。8.与权利要求1或2的抗原结合蛋白竞争并且中和人IL-23的抗原结合蛋白。9.权利要求6的抗原结合蛋白，其中所述的抗体是IgG同种型。10.权利要求9的抗原结合蛋白，其中所述的人抗体恒定区是IgG1。11.根据前述任一项权利要求的抗原结合蛋白，其包含选自SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：50，SEQ IDNO：52，SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：81，SEQ ID NO：82，SEQ ID NO：83，SEQID NO：84，SEQ ID NO：85，SEQ ID NO：86，SEQ ID NO：87，SEQ ID NO：88，SEQ ID NO：89，SEQ ID NO：90，，SEQ ID NO：103，，SEQ ID NO：104，，SEQ IDNO：105，SEQ ID NO：106，SEQ ID NO：107，SEQ ID NO：108，SEQ ID NO：109，SEQ ID NO：110，SEQ ID NO：111，SEQ ID NO：112，SEQ ID NO：113，SEQ IDNO：114和SEQ ID NO：115的VH结构域，以及选自SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：56，SEQ IDNO：58，SEQ ID NO：96，SEQ ID NO：116，SEQ ID NO：117，SEQ ID NO：118，SEQID NO：119，SEQ ID NO：120，SEQ ID NO：121，SEQ ID NO：122，和SEQ ID NO：123的VL结构域。12.根据权利要求1-5任一项的抗原结合蛋白，其中所述的抗原结合蛋白包含Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv、diabody、triabody、tetrabody、微型抗体、minibody、分离的VH、分离的VL或dAb。13.根据权利要求1-11任一项的抗体，其包含突变的Fc区，使得所述的抗体具有降低的ADCC和/或补体激活。14.包含第一和第二载体的重组转化或转染宿主细胞，其中所述第一载体包含编码根据前述任一项权利要求的抗体的重链的多核苷酸，并且所述第二载体包含编码前述任一项权利要求的轻链的多核苷酸。15.药物组合物，其包含权利要求1-13任一项的抗原结合蛋白以及可药用载体。16.治疗患有免疫系统介导的炎症的人类患者的方法，所述炎症诸如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、神经变性的疾病，例如多发性硬化、嗜中性粒细胞驱动的疾病，例如COPD、Wegeners血管炎、囊性纤维化、Sjogrens综合征、慢性移植排斥、1型糖尿病移植物对抗宿主疾病、哮喘、过敏的疾病atoptic皮炎、湿疹性皮炎、过敏性鼻炎、其它自身免疫疾病，包括甲状腺炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病，所述方法包括施与治疗有效量的1-13的抗原结合蛋白的步骤。17.根据权利要求1-13任一项的抗原结合蛋白在制备治疗或预防免疫系统介导的炎症的药物中的用途，所述炎症诸如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、神经变性的疾病，例如多发性硬化、嗜中性粒细胞驱动的疾病，例如COPD、Wegeners血管炎、囊性纤维化、Sjogrens综合征、慢性移植排斥、1型糖尿病移植物对抗宿主疾病、哮喘、过敏的疾病atoptic皮炎、湿疹性皮炎、过敏性鼻炎、其它自身免疫疾病，包括甲状腺炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病。18.根据权利要求1-13任一项的抗原结合蛋白，用于治疗或预防免疫系统介导的炎症，所述炎症诸如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、神经变性的疾病，例如多发性硬化、嗜中性粒细胞驱动的疾病，例如COPD、Wegeners血管炎、囊性纤维化、Sjogrens综合征、慢性移植排斥、1型糖尿病移植物对抗宿主疾病、哮喘、过敏的疾病atoptic皮炎、湿疹性皮炎、过敏性鼻炎、其它自身免疫疾病，包括甲状腺炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病。

说明书

免疫球蛋白

发明领域

本发明涉及与白介素23(IL-23)结合并中和其活性的抗原结合蛋白，特别是抗体；编码此类抗原结合蛋白的多核苷酸；含有所述抗原结合蛋白的药物制剂；以及涉及此类抗原结合蛋白在治疗和/或预防与炎症相关的疾病，诸如类风湿性关节炎(RA)中的用途。本发明的其它方面、目的和优点将从以下的描述中变得显而易见。

发明背景

白介素23(IL-23)是IL-12异质二聚体细胞因子家族的成员，并且含有p40链(IL-12和IL-13共有)以及p 19链(对IL-23是独特的)。IL-12是p40和其配偶体p35(对IL-12是独特的)的异质二聚体。

之前的研究表明IL-12p35的分泌需要IL-12p40，其还揭示了p 19的分泌依赖于其与p40的配偶能力(Oppmann等.715-25)。一个由与埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)诱导的分子3(EBI3)配偶的p28亚单位组成的其它IL-12家族成员被命名为IL-27(Pflanz等.Immunity.16.6(2002)：779-90)。

区别病原体不同类型的固有能力(通过识别大类病原体之间共有的保守分子模式)提供了合适的信息，所述信息用于使适应性反应适于选择、活化和扩增抗原特异性T和B细胞。由抗原递呈细胞(APC)响应各种病原体而产生的细胞因子IL-12、IL-23和IL-27是使这些反应成形的关键调控分子。

Mosmann和Coffman在1986(Mosmann等.J.Immunol.175.1(2005)：5-14)年的开创性工作描述了鼠类CD4⁺T辅助细胞克隆这样的性质，即可以基于它们产生的细胞因子再分为两个亚群(称为Th1和Th2)，这提供了在感染或接种期间诱发的不同类型免疫反应的基础。诱发合适的Th1或Th2免疫反应的结果是深奥的——不仅在鼠类模型中如此，在人类疾病结果中也如此。因此，由IFNg的产生所表征的Th1CD4+T细胞对于在人类疾病和体内动物模型中恰当地控制由诸如麻风分枝杆菌(Mycobactoerium leprae)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和leshmania donovani的生物体引起的细胞内感染是关键的。相反，优先诱导由IL4、IL5和IL13细胞因子的产生所表征的Th2CD4⁺T细胞与保护不受某些蠕虫感染以及IgE相关的过敏反应(诸如哮喘和过敏性鼻炎)相关。在鼠类模型中，对细胞内病原体易感的小鼠(由于主要是Th2免疫反应)可通过适当地施与IL-12而变得具抗性，以及相反地可通过施与中和抗-p40抗体使抗性小鼠变得易感。此类研究证实IL-12是涉及Th1细胞分化的重要细胞因子。

实际上多年以来，认为由IL-12诱导的Th 1CD4⁺T细胞对许多基于应用中和p40抗体或p40敲除小鼠的自身免疫疾病的诱导负有责任，所述疾病包括实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)、胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)、炎性结肠炎和自免疫葡萄膜炎。尽管此类疾病由高水平的IFNγ(原型Th1细胞因子)表征，这一细胞因子在自身免疫炎症中的实际作用尚不那么清楚。这可通过在EAE期间p40和IFNγ在中枢神经系统系统(CNS)炎症中的作用得以说明。缺乏IFNγ或IFNγ-介导的信号传导的动物(ifn-、ifnr-和stat1-缺陷小鼠)仍然易感并且疾病发生更快、具有更严重的病理(Langrish等.Immunol.Rev.202(2004)：96-105；Langrish等J.Exp.Med.201.2(2005)：233-40；Mosmann等.5-14)。用p40抗体治疗抑制了EAE发生。已提到用CIA模型得到过类似的观察结果。用p40中和抗体治疗预防了疾病，而IFNγ信号传导途径的缺乏导致疾病严重度的升高。此外，IL-12p35缺陷动物对EAE完全易感，这提示了p40的其它功能，即除IL-12之外的其它p40细胞因子。

IL-23的鉴定和对IL-12p40链为这两个细胞因子所共有的认识为所观察到的在自身免疫反应的传播中需要p40而不需要其它Th1促-炎症细胞因子之间的不一致提供了解释。这一假说在应用p 19缺陷小鼠的研究中得以证实。此类动物对EAE和CIA完全易感，其方式与p40缺陷动物类似。此外，在IL-23(但不是IL-12)的存在下记忆T细胞的刺激导致IL-17产生的发现提供了IL-23在调节效应T细胞功能的独特作用的证据。包括基因表达研究的进一步的研究，揭示了IL-23依赖性CD4⁺T细胞群展示了与IL-12衍生的Th1细胞不同的概况。随后的体内研究确立了在EAE中IL-23驱动的产IL-17的细胞的作用，在继承性转移至首次用于试验的受体后，少至10⁵CNS抗原特异性产IL-17的CD4⁺T细胞诱导疾病(Langrish等.233-40)。IL-23缺陷小鼠(p19^-/-)对CIA具有抗性，并且这与缺乏制造IL-17的CD4⁺T细胞相关，其中所述的IL-17是在骨分解代谢中具有主要功能的细胞因子(Murphy等.J.Exp.Med.198.12(2003)：1951-57)。当与IL-23p 19缺陷动物杂交时，IL-10缺陷小鼠中自发性结肠炎的发展得以完全阻止，这证实了这一细胞因子在诱导结肠炎中的专性作用(Yen等.J.Clin.Invest116.5(2006)：1310-16)。尽管在IL-23/IL-17免疫轴功能中的最近发现已解释了它们在自免疫炎症中的作用，其没有解释在IFNγ信号传导缺陷小鼠中观察到了恶化疾病。此类观察暗示IFNγ(或IFNγ-介导的信号传导)是抗衡IL-23效果的调控系统的一部分。

人CD4+T细胞的最近研究还表明了IL-23在CD4+产IL17的T细胞的分化或维持中的作用(Wilson等.Nature Immunology(2007)8950-957)，因为IL-23R阳性T细胞能够比IL-23R阴性细胞产生在数量上更高水平的IL 17A。免疫组织化学分析也证实，在来自牛皮癣患者活组织检查的病损皮肤中，与非病损皮肤相比，由树突状细胞表达的IL-23p19升高了。

其它以IL-23途径为目标的合理化已在基因组范围的相关研究中出现，所述研究已鉴定了IL-23途径和相关的单核苷酸多态性(SNP)为许多炎症疾病的危险因素。随着两个牛皮癣易感基因IL12B和IL-23R的鉴定，已使IL-12/IL-23途径与牛皮癣相关联(Cargill等.Am.J.Hum.Genet.80.2(2007)：273-90)。类似的研究还鉴定了IL-23R的罕见编码变体，其赋予针对克罗恩氏病的强有力的保护(Duerr等.Science 314.5804(2006)：1461-63)。Wellcome Trust病例控制协会(case Control Consortium)在英国人群中证实了此类发现，即在IL-23R中许多之前鉴定的座位(包括SNP)上类似地观察到了关联。在成年人群中赋予针对克罗恩氏病的保护作用的R381Q SNP稀有等位基因与儿童中的炎性肠病(IBD)负相关，将IL-23炎症途径的功能扩展到儿科克罗恩氏病(Dubinsky等.Inflamm.Bowel.Dis.13.5(2007)：511-15)。

易感变体的鉴定和逐渐增加的对IL-23R途径在克罗恩氏病、牛皮癣和其它自身免疫炎症病症中作用的认识应当导致靶向这一途径的改进的治疗介入。支持这一观点，针对IL-12、IL-23共有亚单位p40的单克隆抗体在患有活动克罗恩氏病的患者中诱导临床反应以及缓解(Mannon等.N.Engl.J.Med.351.20(2004)：2069-79)并证实了在牛皮癣中的治疗效果(Gottlieb等.Curr.Med.Res.Opin.23.5(2007)：1081-92；Krueger等.N.Engl.J.Med.356.6(2007)：580-92)。尽管在牛皮癣中用抗-p40mAb的最初研究具有严重的不利事件(包括心肌梗塞(Krueger等.580-92))，但在第二次研究中没有这一证据(Gottlieb等.1081-92)。然而，已假设特异性封闭IL-23R途径可能在封闭没有完全妥协的保护反应的器官特异性炎症中有效(McKenzie，Trends Immunol.27.1(2006)：17-23)。

现有技术中描述了若干种抗-IL-23特异性mAb。这些包括与IL-23的p19亚单位特定部分结合的mAb(WO2007/024846，WO 2007/005955)或与IL-23p40特定序列结合而不结合IL12的p40亚单位的mAb(US2005/0137385A1)。此外，结合p40(对IL12和IL23共有)并中和IL12和IL-23两者的mAb已在牛皮癣(Gottlieb等.Current Med.Res.&Op23(2007)：1081-1092)和克罗恩氏病(Mannon等.N.Eng.J.Med 351(2004)：2069-2079)中显示出临床效果。

尽管现有技术提供了抗IL-23抗体，但仍然高度期望分离和发展治疗上有用的抗原结合蛋白，诸如结合并抑制人IL-23活性的单克隆抗体。

本发明提供了用于治疗上述疾病/病症的抗原结合蛋白，并且在以下详细描述。

发明简述

本发明提供了与IL-23结合的抗原结合蛋白，例如与IL-23结合的抗体。本发明的一些实施方案包括涉及、或衍生自鼠mAb 8C92H6的单克隆抗体(mAb)。8C92H6重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。8C92H6轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。

本发明的重链可变区(VH)包含以下CDR(通过Kabat定义)：

表1：本发明的重链可变区的CDR可包含以下CDR

  CDR
  根据Kabat
  H1
  SYGIT(SEQ ID NO：1)
  H2

  ENY PRSGNTYYNEKFKG
  (SEQ ID NO：2)
  H3

  CEFI STVVAPYYYALDY
  (SEQ ID NO：3)
  H3替代物

  SEFISTVVAPYYYALDY
  (SEQ ID NO：4)

或SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99和SEQ ID NO：100所示的替代CDR。

本发明的轻链可变区包含以下CDR(通过Kabat定义)：

CDR
  根据Kabat
L1

  KASKKVTIFGSISALH
  (SEQ ID NO：5)
L2

  NGAKLES
  (SEQ ID NO：6)
L3

  LQNKEVPYT
  (SEQ ID NO：7)

或SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102所示的替代CDR。

在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白包含重链可变区，其含有选自SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：95和SEQ ID NO：100的CDRH3，所述重链可变区与轻链可变区配对以形成与人IL-23结合并中和人IL-23活性的抗原结合Fv单位。在这一实施方案的一个方面，如SEQ ID NO：1所示的CDRH1和选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：98和SEQ IDNO：99的CDRH2也存在于该重链可变区中。在另一方面，该抗原结合Fv单位以高亲和性与人IL-23结合，所述亲和性如通过Biacore所测定的那样为10nM或更少、以及更特别地2nM或更少，例如约0.8nM至2nM之间，1nM或更少，或100pM或更少。在一个此类实施方案中，这通过Biacore用捕获在生物传感芯片上的抗原结合Fv单位测量，如实施例5所述。

本发明的重链可变区可与轻链可变区以常规免疫球蛋白的方式(例如，人IgG、IgA、IgM等)或以任何其它与人IL-23结合的“抗体样”形式(例如，单链Fv、diabody、Tandabs^TM等(对于替代“抗体”形式的概述参见Holliger和Hudson，Nature B iotechnology，2005，Vol23，No.9，1126-1136))配置在一起，以允许结合人IL-23。

本发明的抗原结合蛋白包括具有如SEQ ID NO：8和SEQ IDNO：10所述可变区的鼠抗体，或其非鼠等价物，诸如其大鼠、人、嵌合或人源化变体。

本说明书通篇关于本发明的抗原结合蛋白所使用的术语“与人IL-23结合”意思是该抗原结合蛋白与人IL-23(此后称为hIL-23)结合，而没有或不显著地与其它人类蛋白质诸如IL-12结合。特别地，本发明的抗原结合蛋白与人IL-23结合，因为可在Biacore测定法中(例如，在实施例5中描述的Biacore测定法)看到它们与人IL-23结合，而在等价的Biacore测定法中它们不或不显著地与人IL-12结合。然而，该术语不排除这样的事实，即本发明的某些抗原结合蛋白可能还与来自其它物种的IL-23交叉反应，例如与食蟹猴IL-23交叉反应。

本文所使用的术语“抗原结合蛋白”指能结合并中和人IL-23的抗体、抗体片段或其它蛋白质构建物。

在本发明的其它方面，提供了结合人IL-23并且包含CDRH3的抗原结合蛋白，例如抗体，其中所述的CDRH3是SEQ ID NO：3所示序列的变体，其中在所述变体的所述CDRH3中一个或两个残基与SEQ ID NO：3相应位置上的残基不同，例如SEQ ID NO：3的第一个残基(半胱氨酸)被不同氨基酸替换，例如，该CDR具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：73或SEQ ID NO：74的序列，和/或例如SEQ ID NO：3的第八个残基(缬氨酸)被不同氨基酸替换，例如如SEQ ID NO：95所示，因此在一个方面，CDRH3的变体具有一个与SEQ ID NO：3的CDRH3不同的残基，例如在位置1或位置8，例如CDRH3位置1上的氨基酸残基选自半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，以及例如CDRH3位置8上的氨基酸残基选自缬氨酸和甲硫氨酸。在另一方面，CDRH3的变体包括在位置1和位置8上的替换，例如，如SEQ ID NO：95所示。

在本发明的其它方面，CDRH3包含SEQ ID NO：3所示序列的变体，其中在所述变体的所述CDRH3中一个、两个或三个残基与SEQ ID

NO：3相应位置上的残基不同，其中SEQ ID NO：3的第四个残基(异亮氨酸)被不同氨基酸替换，例如该CDR具有SEQ ID NO：100的序列，例如CDRH3位置四上的氨基酸残基可以是苏氨酸。此外，此类变体还可以包含在位置一和八上的上述一个或两个替换。

一方面，本发明的抗原结合蛋白，例如抗体，包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH 1，如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：98或SEQ ID NO：99所示的CDRH2，如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：95或SEQ ID NO：100所示的CDRH3，如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：101所示的CDRL1，如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80或SEQ ID NO：102所示的CDRL2，以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3。在一个此类实施方案中，抗原结合蛋白，例如抗体，包含以下CDR：

CDRH1：SEQ.I.D.NO：1

CDRH2：SEQ.I.D.NO：2

CDRH3：SEQ.I.D.NO：4

CDRL1：SEQ.I.D.NO：5

CDRL2：SEQ.I.D.NO：6

CDRL3：SEQ.I.D.NO：7

在本发明的另一方面，提供了与人IL-23结合并且包含以下所示CDR的抗原结合蛋白，例如抗体：

CDRH1：SEQ ID NO：1

CDRH2：SEQ ID NO：2

CDRH3：SEQ ID NO：4

CDRL1：SEQ ID NO：5

CDRL2：SEQ ID NO：6和

CDRL3：SEQ ID NO：7

或这些CDR中任意一个或更多个的变体，其中所述变体的每一CDR序列中的一个或两个残基，或多达三个残基与上述SEQ ID NO中相应位置的残基不同，例如在SEQ ID NO：SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQID NO：95、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：101、SEQID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ IDNO：80和SEQ ID NO：102中所示的那些CDR。

在本说明书通篇中，抗体序列中的氨基酸残基根据Kabat方案编号。类似地，术语“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH 1”、“CDRH2”、“CDRH3”根据如了Kabat等“Sequences ofproteins of Immunological Interest”NIH，1987中所示的Kabat编号系统。

在本发明的另一方面，提供了抗原结合蛋白，诸如人源化抗体或其抗原结合片段，其包含具有SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：48、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114或SEQ ID NO：115所示序列的VH结构域；以及具有SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：56、SEQID NO：58、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：116、SEQ IDNO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ IDNO：121、SEQ ID NO：122或SEQ ID NO：123所示序列的VL结构域。预期VH和VL序列的这一列表具体公开了任意单个VH和任意单个VL序列的所有可能组合。

本发明的重链可变区可以包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH 1、如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：98或SEQ ID NO：99所示的CDRH2以及如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：95或SEQ ID NO：100所示的CDRH3。例如，本发明的重链可变区可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH 1、如SEQ ID NO：2所示的CDRH2和如SEQ ID NO：3所示的CDRH3。替代地，其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：2所示的CDRH2和如SEQ ID NO：4所示的CDRH3；或其可包含如SEQID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：2所示的CDRH2和如SEQ IDNO：73所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH 1、如SEQ ID NO：2所示的CDRH2和如SEQ ID NO：74所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH 1、如SEQ ID NO：72所示的CDRH2和如SEQ ID NO：3所示的CDRH3；或其可包含如SEQ IDNO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：72所示的CDRH2和如SEQ IDNO：4所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH 1、如SEQ ID NO：72所示的CDRH2和如SEQ ID NO：73所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：72所示的CDRH2和如SEQ ID NO：74所示的CDRH3；或其可包含如SEQ IDNO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：2所示的CDRH2和如SEQ IDNO：95所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH 1、如SEQ ID NO：72所示的CDRH2和如SEQ ID NO：95所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：98所示的CDRH2和如SEQ ID NO：3所示的CDRH3；或其可包含如SEQ IDNO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：98所示的CDRH2和如SEQ IDNO：4所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：98所示的CDRH2和如SEQ ID NO：73所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：98所示的CDRH2和如SEQ ID NO：74所示的CDRH3；或其可包含如SEQ IDNO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：98所示的CDRH2和如SEQ IDNO：95所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：98所示的CDRH2和如SEQ ID NO：100所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：99所示的CDRH2和如SEQ ID NO：3所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：99所示的CDRH2和如SEQ ID NO：4所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：99所示的CDRH2和如SEQ ID NO：73所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：99所示的CDRH2和如SEQ ID NO：74所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：99所示的CDRH2和如SEQ ID NO：95所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：99所示的CDRH2和如SEQ ID NO：100所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：2所示的CDRH2和如SEQ ID NO：100所示的CDRH3；或其可包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1、如SEQ ID NO：72所示的CDRH2和如SEQ ID NO：100所示的CDRH3。

本发明的轻链可变区可包含如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：101所示的CDRL1，如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80或SEQ ID NO：102所示的CDRL2，以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3。例如，本发明的轻链可变区可包含如SEQ ID NO：5所示的CDRL1、如SEQ ID NO：6所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：5所示的CDRL1、如SEQ ID NO：76所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQID NO：5所示的CDRL1、如SEQ ID NO：77所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：5所示的CDRL1、如SEQ ID NO：78所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：5所示的CDRL 1、如SEQ IDNO：79所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：5所示的CDRL1、如SEQ ID NO：80所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ IDNO：75所示的CDRL1、如SEQ ID NO：6所示的CDRL2、以及如SEQID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：75所示的CDRL1、如SEQ ID NO：76所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：75所示的CDRL1、如SEQ IDNO：77所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：75所示的CDRL1、如SEQ ID NO：78所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ IDNO：75所示的CDRL1、如SEQ ID NO：79所示的CDRL2、以及如SEQID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：75所示的CDRL1、如SEQ ID NO：80所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：101所示的CDRL1、如SEQID NO：6所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：101所示的CDRL1、如SEQ ID NO：76所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ IDNO：101所示的CDRL1、如SEQ ID NO：77所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：101所示的CDRL1、如SEQ ID NO：78所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：101所示的CDRL 1、如SEQID NO：79所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：101所示的CDRL1、如SEQ ID NO：80所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQID NO：101所示的CDRL1、如SEQ ID NO：102所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：5所示的CDRL1、如SEQ ID NO：102所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3；或其可包含如SEQ ID NO：75所示的CDRL1、如SEQ IDNO：102所示的CDRL2、以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3。

任意的这些重链可变区可以与任意的轻链可变区组合，例如，本发明的抗原结合蛋白可包含与轻链可变区组合的重链可变区，其中所述的重链可变区包含如SEQ ID NO：1所示的CDRH1，如SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：98或SEQ ID NO：99所示的CDRH2，以及如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：73或SEQ ID NO：74所示的CDRH3；所述的轻链可变区包含如SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：101所示的CDRL1，如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：76所示的CDRL2，以及如SEQ ID NO：7所示的CDRL3。

本发明的任意重链可变区可与合适的人恒定区结合以提供全长重链，其中所述的人恒定区诸如SEQ ID NO：92所示。本发明的任意轻链可变区可与合适的人恒定区结合以提供全长轻链，其中所述的人恒定区诸如SEQ ID NO：91所示。

本发明的重链可变区构建物可与轻链配对以形成任意形式的人IL-23结合单位(Fv)，其中所述形式包括常规IgG抗体形式。包含本发明VH构建物的全长(FL)重链序列的实例包括SEQ ID NO：26、60、62、64和66。

与本发明的重链可变区序列形成Fv的轻链可变区序列可以是允许该Fv与人IL-23结合的任意序列。包含本发明本发明VH构建物的全长(FL)轻链序列的实例包括SEQ ID NO：28、30、32、34、68、70、93和94。

在具体的实施方案中，本发明的抗原结合蛋白包含以下可变区对：

A3M0(SEQ ID NO：16+SEQ ID NO：18)

A3M1(SEQ ID NO：16+SEQ ID NO：20)

A3N1(SEQ ID NO：16+SEQ ID NO：22)

A3N2(SEQ ID NO：16+SEQ ID NO：24)

A7M3(SEQ ID NO：52+SEQ ID NO：56)

A10M3(SEQ ID NO：54+SEQ ID NO：56)

A3M4(SEQ ID NO：16+SEQ ID NO：58)

A5M0(SEQ ID NO：48+SEQ ID NO：18)

A6M0(SEQ ID NO：50+SEQ ID NO：18)

A8M3(SEQ ID NO：81+SEQ ID NO：56)

A9M3(SEQ ID NO：82+SEQ ID NO：56)

A10.5M3(SEQ ID NO：85+SEQ ID NO：56)

A11M3(SEQ ID NO：83+SEQ ID NO：56)

A12M3(SEQ ID NO：84+SEQ ID NO：56)

A11.5M3(SEQ ID NO：86+SEQ ID NO：56)

A12.5M3(SEQ ID NO：87+SEQ ID NO：56)

A8M4(SEQ ID NO：81+SEQ ID NO：58)

A9M4(SEQ ID NO：82+SEQ ID NO：58)

A10.5M4(SEQ ID NO：85+SEQ ID NO：58)

A11M4(SEQ ID NO：83+SEQ ID NO：58)

A11.5M4(SEQ ID NO：86+SEQ ID NO：58)

A12M4(SEQ ID NO：84+SEQ ID NO：58)

A12.5M4(SEQ ID NO：87+SEQ ID NO：58)

A13M4(SEQ ID NO：88+SEQ ID NO：58)

A14M4(SEQ ID NO：89+SEQ ID NO：58)

A15M4(SEQ ID NO：90+SEQ ID NO：58)

A3M12(SEQ ID NO：16+SEQ ID NO：121)

A3M13(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：88)

A23M4(SEQ ID NO：110+SEQ ID NO：58)

A10.5M14(SEQ ID NO：85+SEQ ID NO：123)

A24M4(SEQ ID NO：111+SEQ ID NO：58)

在另一实施方案中，本发明的抗原结合蛋白，例如抗体，包含以下全长序列：

A3M0(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：28)

A3M1(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：30)

A3N1(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：32)

A3N2(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：34)

A5M0(SEQ ID NO：60+SEQ ID NO：28)

A6M0(SEQ ID NO：62+SEQ ID NO：28)

A7M3(SEQ ID NO：64+SEQ ID NO：68)

A3M4(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：70)

A3M5(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：93)

A3M6(SEQ ID NO：26+SEQ ID NO：94)

A5M4(SEQ ID NO：60+SEQ ID NO：70)

A6M4(SEQ ID NO：62+SEQ ID NO：70)

A7M4(SEQ ID NO：64+SEQ ID NO：70)

A10M4(SEQ ID NO：66+SEQ ID NO：70)

A10M3(SEQ ID NO：66+SEQ ID NO：68)

在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白可以是包含一个或更多个本发明CDR的多特异性抗体，其能够结合IL-23并且其还能够结合一个或更多个TH17型细胞因子，例如IL-17、IL-22或IL-21。在一个此类实施方案中，提供了包含如本文所定义的CDRH3或抗原结合蛋白的多特异性抗体，并且其包含其它的能够结合IL-17或IL-22或IL-21的抗原结合位点。本发明抗原结合蛋白的一个实例是包含如本文所定义的CDRH3的对IL-23特异的抗体，所述CDRH3与一个或更多个对一个或更多个TH17型细胞因子(例如IL-17、IL-22或IL-21)具有特异性的表位结合结构域连接。

如本文所使用的，术语“结构域”是指具有不依赖于该蛋白其它部分的三级结构的折叠蛋白结构。一般地，结构域负责蛋白质离散的功能特征，并且在许多情况下可以被添加、移除或转移至其它蛋白，而不会使该蛋白剩余部分和/或该结构域的功能丧失。“单抗体可变结构域”是包含抗体可变结构域特征序列的折叠多肽结构域。其因此包括完整的抗体可变结构域和修饰的可变结构域，例如，其中一个或更多个环已被不是抗体可变结构域特征的序列替代，或已被截短或包含N或C端延伸的抗体可变结构域，以及至少保留了全长结构域结合活性及特异性的可变结构域折叠片段。

如本文所用，术语“免疫球蛋白单可变结构域”是指不依赖于不同V区或结构域特异性结合抗原或表位的抗体可变结构域(V_H、V_HH、V_L)。免疫球蛋白单可变结构域可以以与其它不同的可变区或可变结构域的形式(例如，同或异多聚体)存在，其中该其它区或结构域对该单免疫球蛋白可变结构域的抗原结合不是必需的(即，其中该免疫球蛋白单可变结构域不依赖于其它可变结构域结合抗原)。当在本文使用术语“结构域抗体”或“dAb”时，其与能够结合抗原的“免疫球蛋白单可变结构域”相同。免疫球蛋白单可变结构域可以是人抗体可变结构域，但还包括来自其它物种的单抗体可变结构域，诸如啮齿类动物(例如，如在WO 00/29004中公开的那样，铰口鲨和骆驼V_HHdAb)。骆驼V_HH是衍生自包括骆驼、美洲驼、羊驼、单峰驼和南美野生羊驼(guanaco)在内的物种的免疫球蛋白单可变结构域多肽，所述物种产生天然缺乏轻链的重链抗体。此类V_HH结构域可以是根据本领域可获得的标准技术人源化的，并且此类结构域仍然被认为是根据本发明的“结构域抗体”。如本文所用，“V_H”包括骆驼V_HH结构域。

术语“表位结合结构域”是指不依赖于不同V区或结构域特异性结合抗原或表位的结构域，这可以是结构域抗体或可以这样的结构域，即所述结构域是选自CTLA-4、lipocalin、SpA、Affibody、avimer、GroEl、运铁蛋白、GroES和纤连蛋白/adnectin的支架的衍生物，所述结构域已进行了蛋白质工程改造以获得与不同于天然配体的配体结合。

如本文所用，术语“抗原结合位点”是指抗原结合蛋白上能够特异性地与抗原结合的位点，这可以是单结构域，例如表位结合结构域，或单链Fv(ScFv)结构域或其可以是如可在标准抗体中发现的那样的配对的VH/VL结构域。

本发明的其它方面提供了药物组合物，其包含本发明的抗原结合蛋白及药学可接受的稀释剂或载体。

在其它方面，本发明提供了治疗或预防人类中与免疫系统介导的炎症相关的疾病或病症的方法，所述疾病或病症诸如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、神经变性的疾病，例如多发性硬化、嗜中性粒细胞驱动的疾病，例如COPD、Wegeners血管炎、囊性纤维化、Sjogrens综合征、慢性移植排斥、1型糖尿病移植物对抗宿主疾病、哮喘、过敏的疾病atoptic皮炎、湿疹性皮炎、过敏性鼻炎、其它自身免疫疾病，包括甲状腺炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病，所述方法包括给所述需要其的人施与有效量的本发明的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，该病症是类风湿性关节炎。

另一方面，本发明提供了本发明的抗原结合蛋白在制备治疗或预防免疫系统介导的炎症的药物中的用途，所述免疫系统介导的炎症诸如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、神经变性的疾病，例如多发性硬化、嗜中性粒细胞驱动的疾病，例如COPD、Wegeners血管炎、囊性纤维化、Sjogrens综合征、慢性移植排斥、l型糖尿病移植物对抗宿主疾病、哮喘、过敏的疾病atoptic皮炎、湿疹性皮炎、过敏性鼻炎、其它自身免疫疾病，包括甲状腺炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病。在一个实施方案中，该病症是类风湿性关节炎。

本发明的其它方面和优点在详细说明及其优选实施方案中进一步描述。

在一个实施方案中，本发明提供了与包含CDRH3(SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：95或SEQ ID NO：100)的抗体竞争的抗原结合蛋白，例如，本发明的抗原结合蛋白与包含

CDRH1：SEQ.I.D.NO：1

CDRH2：SEQ.I.D.NO：2

CDRH3：SEQ.I.D.NO：4

CDRL1：SEQ.I.D.NO：5

CDRL2：SEQ.I.D.NO：6和

CDRL3：SEQ.I.D.NO：7.

的抗体竞争结合及中和hIL-23，例如如通过抑制IL-23与IL-23RELISA结合(例如如实施例6所示)、或抑制脾细胞产生IL-17或IL-22(例如实施例7所示的生物测定法)所确定的那样。在一个实施方案中，竞争的抗体是与A3M0(SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：28)竞争的抗体。

在另一实施方案中，本发明的抗原结合蛋白是与包含CDRH3(SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQID NO：95或SEQ ID NO：100)的抗体结合相同表位的抗体，例如，该抗体包含：

CDRH1：SEQ.I.D.NO：1

CDRH2：SEQ.I.D.NO：2

CDRH3：SEQ.I.D.NO：4

CDRL1：SEQ.I.D.NO：5

CDRL2：SEQ.I.D.NO：6和

CDRL3：SEQ.I.D.NO：7。

在一个实施方案中，竞争的抗原结合蛋白是与A3M0(SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：28)结合相同的表位的蛋白。可通过本领域技术人员公知的方法确定该表位，例如通过应用相应于人p19序列(SEQ ID NO：37)的肽文库的肽作图，在所述文库中每一肽含有14个氨基酸残基，每一肽的序列与肽重叠。可通过公知的方法鉴定构象和/或不连续表位，例如通过CLIPS^TM(Pepscan Systems)

发明详述

本发明的抗原结合蛋白可以包含本发明的重链可变区和轻链可变区，其可被装配为天然抗体或其功能片段或等价物结构。当与合适的轻链配对时，本发明的抗原结合蛋白因此可以包含装配至全长抗体、(Fab’)₂片段、Fab片段或其等价物(诸如scFV，diabody、triabody或tetrabody，Tandabs等)的本发明的VH区。该抗体可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；或IgM、IgA、IgE或IgD或其修饰变体。可相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链恒定结构域可以是κ或λ恒定结构域。此外，该抗原结合蛋白可包含所有种类的修饰形式，例如，IgG二聚体、不再结合Fc受体或介导C1q结合的Fc突变体。该抗原结合蛋白还可以是WO86/01533中所描述的类型的嵌合抗体，其包含抗原结合区和非免疫球蛋白区。

根据任意需要的功能性选择恒定区。IgG1可通过结合补体而展示溶细胞能力和/或能介导ADCC(抗体依赖性细胞毒性)。如果需要非细胞毒性阻断抗体，IgG4将是优选的。然而，IgG4抗体在生产中展示出不稳定性，并且因此更优选修饰通常更稳定的IgG1。建议的修饰描述于EP0307434，例如在位置235和237上的突变。本发明因此提供了溶胞或非溶胞形式的抗原结合蛋白，例如根据本发明的抗体。

在某些形式中，本发明的抗体是全长(例如，H2L2四聚体)的具有本文描述的任意重链可变区的溶胞或非溶胞IgG 1抗体。

在其它方面，本发明提供了编码本文描述的轻和重链可变区的多核苷酸。

异质二聚体细胞因子IL-23的受体由以下组成：IL-12Rβ1和新细胞因子受体亚单位IL-23R。Parham，C.等J.Immunol.168(11)，5699-5708(2002)(SEQ ID NO：47)。

在本说明书中通篇关于本发明抗原结合蛋白所使用的术语“中和”及其文法变体的意思是，在本发明抗原结合蛋白的存在下，与不存在此类抗原结合蛋白的情况下IL-23的活性相比较，IL-23的生物活性被全部或部分地降低了。中和可以是由于但不限于以下的一种或多种：阻断配体结合、阻止配体活化受体、下调IL-23受体或影响效应物功能性。可通过若干种方法测量中和的水平，例如通过使用如以下实施例所示的测定法，例如测量抑制IL-23与IL-23受体结合的测定法，其例如可如在实施例6中所描述的那样进行。在这一测定法中IL-23的中和通过评估在中和抗原结合蛋白的存在下IL-23与其受体之间降低的结合来测量。

例如还可在IL-17生产测定法中测量中和水平，所述测定法例如可如在实施例7中所描述的那样进行。在这一测定法中，通过评估在中和抗原结合蛋白的存在下IL-17生产的抑制来测量IL-23的中和。

评估中和的其它方法是本领域公知的，例如通过评估在中和抗原结合蛋白的存在下IL-23与其受体之间降低的结合，并且例如包括Biacore测定法。

在本发明可选的方面，提供了抗原结合蛋白，其具有至少基本上与本文例证的抗体等价的中和活性，例如在如分别在实施例6、7和11中所示的IL-23/IL-23受体中和测定法或IL-17/IL-22生产测定法、或pSTAT3信号传导抑制测定法中保留了A3M1、A3N1、A3N2或A3M0中和活性的抗原结合蛋白，

术语Fv、Fc、Fd、Fab或F(ab)₂以它们的标准含义使用(例如，参见Harlow等，Antibodies A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory，(1988))。

“嵌合抗体”是指一类工程化抗体，其含有衍生自供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)，所述可变区与衍生自受体抗体的轻和重链恒定区连接。

“人源化抗体”是指一类工程化抗体，其具有衍生自非人供体免疫球蛋白的其CDR，该分子的其余免疫球蛋白衍生部分衍生自一种(或更多种)人免疫球蛋白。此外，可改变框架支持残基以保留结合亲和性(例如，参见Queen等，Proc.Natl Acad Sci USA，86：10029-10032(1989)，Hodgson等，Bio/Technology，9：421(1991))。合适的人受体抗体可以是通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性选自常规数据库的一种，例如数据库、Los Alamos数据库和SwissProtein数据库。由与供体抗体的框架区同源(基于氨基酸基础)所表征的人抗体可适于提供重链恒定区和/或重链可变框架区，用于插入供体CDR。可以用类似的方法选择能够提供轻链恒定区或可变框架区的合适的受体抗体。应当注意，受体抗体重链和轻链不必要源自相同的受体抗体。现有技术描述了若干种产生此类人源化抗体的方法——例如参见EP-A-0239400和EP-A-054951。

术语“供体抗体”是指这样的抗体(单克隆、和/或重组)，其贡献其可变区、CDR、或其其它功能片段或类似物的氨基酸序列给第一免疫球蛋白配偶体，以提供经改变的免疫球蛋白编码区和导致表达的经改变的具有供体抗体特征性的抗原特异性和中和活性的抗体。

术语“受体抗体”是指与供体抗体异种的抗体(单克隆和/或重组)，其贡献全部(或任意部分，但是在一些实施方案中为全部)编码其重和/或轻链框架区和/或其重和/或轻链恒定区的氨基酸序列给第一免疫球蛋白配偶体。在某些实施方案中，人抗体是受体抗体。

“CDR”定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，其是免疫球蛋白重和轻链的高可变区。例如参见，Kabat等，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第四版，U.S.Department of Health and HumanServices，National Institutes of Health(1987)。在免疫球蛋白的可变部分中存在3个重链和3个轻链CDR(或CDR区)。因此，本文所使用的“CDR”是指所有3个重链CDR，或所有3个轻链CDR(或如果适当地话，所有重链和所有轻链CDR)。抗体的结构和蛋白折叠可以意味着其它残基被认为是抗原结合区的一部分，并且本领域技术人员也将如此理解。例如参见Chothia等，(1989)Conformations ofimmunoglobulin hypervariable regions；Nature 342，p877-883。

可通过用表达载体转染宿主细胞来产生本发明的抗原结合蛋白，例如抗体，其中所述的表达载体包含本发明抗原结合蛋白的编码序列。通过与常规调节控制序列可操作连接地放置抗原结合蛋白的这些编码序列产生表达载体或重组质粒，其中所述的常规调节控制序列能够控制在宿主细胞中的复制和表达，和/或从宿主细胞分泌。调节序列包括启动子序列例如CMV启动子，以及可从其它已知抗体衍生的信号序列。类似地，可以制备第二表达载体，其具有编码互补抗原结合蛋白轻或重链的DNA序列。在某些实施方案中，这一第二表达载体与第一载体除了有关编码序列和可选择标记范围之外都是同一的，以确保尽可能功能地表达每一多肽链。可选地，抗原结合蛋白的重和轻链编码序列可位于单个载体中。

用第一和第二载体通过常规技术共转染(或通过单载体简单转染)所选择的宿主细胞，以产生本发明的包含重组或合成的轻和重链的经转染的宿主细胞。然后通过常规技术培养经转染的细胞以产生本发明的经工程改造的抗原结合蛋白。通过适当的测定法(诸如ELISA或RIA)从培养物中筛选包括重组重链和/或轻链两者的连接物的抗原结合蛋白。可应用类似的常规技术构建其它抗原结合蛋白。

本领域普通技术人员可选择用于用于本发明方法和组合物的构建的克隆和亚克隆步骤的合适载体。例如，可应用常规的pUC系列克隆载体。载体pUC 19可从供应商处商购获得，所述供应商诸如Amersham(Buckinghamshire，United Kingdom)或Pharmacia(Uppsala，Sweden)。此外，任何能够容易地复制、具有丰富的克隆位点和可选择基因(例如，抗生素抗性)、以及易于操作的载体都可用于克隆。因此，对于克隆载体的选择不是本发明的限制因素。

表达载体还可通过适于增强表达异源DNA序列的基因(例如，哺乳动物二氢叶酸还原酶基因(DHFR))来表征。其它优选的载体序列包括诸如来自牛生长激素(BGH)的多聚A信号序列，以及β珠蛋白启动子序列(βglopro)。可用于本文的表达载体可通过本领域技术人员公知的技术合成。

此类载体的组分，例如复制子、选择基因、增强子、启动子、信号序列等，都可从商业或天然来源获得，或可通过公知的方法合成，以用于指导重组DNA的产物在所选择的宿主中表达和/或分泌。还可选择本领域已知的许多用于哺乳动物、细菌、昆虫、酵母和真菌表达的类型的其它合适表达载体用于这一目的。

本发明还包括用含有本发明的抗原结合蛋白编码序列的重组质粒转染的细胞系。用于这些克隆载体的克隆和其它操作的宿主细胞也是常规的。然而，来自大肠杆菌各种菌株的细胞可用于本发明抗原结合蛋白构建中的克隆载体复制和其它步骤。

用于表达本发明抗原结合蛋白的合适的宿主细胞或细胞系包括哺乳动物细胞，诸如NS0、Sp2/0、CHO(例如DG44)、COS、HEK、成纤维细胞(例如3T3)、以及骨髓瘤细胞，例如其可在CHO或骨髓瘤细胞中表达。可以应用人细胞，因此使得该分子可用人糖基化方式进行修饰。替代地，可以应用其它真核细胞系。选择用于转化、培养、扩增、筛选和产生产物和纯化的合适哺乳动物宿主细胞和方法是本领域公知的。例如，参见上面引用的Sambrook等。

细菌细胞可证实可用作适于表达重组Fab或本发明其它实施方案的宿主细胞(例如，参见Plückthun，A.，Immunol.Rev.，130：151-188(1992))。然而，由于在细菌细胞中表达的蛋白质倾向于非折叠或非正确折叠形式，或非糖基化的形式，因此必须对在细菌细胞中产生的任何重组Fab进行抗原结合活性保留的筛选。如果通过细菌细胞表达的分子以正确折叠的形式产生，则该细菌细胞是所期望的宿主；或在替代的实施方案中，该分子可在细菌宿主中表达并随后重折叠。例如，公知用于表达的各种大肠杆菌菌株作为生物技术领域的宿主细胞。这一方法中还可使用枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、链霉菌属、其它杆菌等的各种菌株。

期望时，还可利用本领域技术人员公知的酵母菌株细胞作为宿主细胞，以及昆虫细胞，例如，果蝇属(Drosophila)和鳞翅目(Lepidoptera)以及病毒表达系统。例如参见Miller等，Genetic Engineering，8：277-298，Plenum Press(1986)以及其中引用的参考文献。

构建载体的一般方法、为产生本发明宿主细胞所需的转染方法、以及为从此类宿主细胞中产生本发明的抗原结合蛋白所需的培养方法全部可以是常规的技术。一般地，本发明的培养方法是无血清培养方法，通常通过以悬浮液无血清培养细胞。类似地，一旦产生，则可根据本领域的标准方法从细胞培养组分中纯化本发明的抗原结合蛋白，所述方法包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱层析、凝胶电泳等。此类技术在本领域技术之内并且不限制本发明。例如，经改变的抗体的制备描述于WO 99/58679和WO 96/16990。

表达抗原结合蛋白的另一方法可以利用在转基因动物中的表达，诸如描述于美国专利号4,873,316。这涉及应用动物酪蛋白启动子的表达系统，所述启动子当转基因地整合至哺乳动物时，允许雌性在其乳中产生期望的重组蛋白。

在本发明的其它方面，提供了产生本发明抗体的方法，所述方法包括培养用编码本发明抗体的轻和/或重链的载体转化或转染的宿主细胞、以及回收由此所产生的抗体的步骤。

根据本发明，提供了产生本发明抗-IL-23抗体的方法，其中所述抗体结合并中和人IL-23的活性，其中所述方法包括以下步骤：

(a)提供编码抗体重链的第一载体；

(b)提供编码抗体轻链的第二载体；

(c)用所述第一和第二载体转化哺乳动物宿主细胞(例如，CHO)；

(d)在有助于该抗体从所述宿主细胞分泌至所述培养基的条件下培养步骤(c)的宿主细胞；

(e)回收步骤(d)的分泌的抗体。

一旦通过期望的方法表达，则然后通过应用适当的测定法检查抗体的体外活性。应用目前常规的ELISA测定法形式评估抗体与IL-23的定性及定量结合。此外，还可应用其它体外测试法以在随后人临床研究之前证实中和效果，其中进行所述的人临床研究以评估抗体在体内尽管有正常清除机制的持久性。

治疗的剂量和持续时间与本发明的分子在人体循环中的相对持久性相关，并且可通过本领域技术人员依据待治疗的状况和该患者的一般健康进行调整。设想可能需要在延长时间期间(例如，4至6个月)的重复剂量(例如，每周一次或每两周一次)以达到最大的治疗效果。

施与本发明治疗剂的模式可以是递送该试剂至宿主的任意合适的途径。本发明的抗原结合蛋白以及药物组合物尤其可用于肠胃外施与，即皮下(s.c.)、鞘内、腹膜内、肌内(i.m.)、静脉内(i.v.)或鼻内。

本发明的治疗剂可制备为药物组合物，其含有有效量的本发明的抗原结合蛋白作为可药用载体中的活性组分。在本发明的预防剂中，优选易于注射形式的含有抗原结合蛋白的水性悬浮液或溶液，优选缓冲于生理pH。用于肠胃外施与的组合物将通常包含本发明抗原结合蛋白的溶液，或溶解于可药用载体、优选水性载体中的其混合物。可应用许多水性载体，例如0.9％盐水、0.3％甘氨酸等等。可使这些溶液无菌并且通常没有微粒状物质。可通过常规、公知的灭菌技术(例如过滤)灭菌这些溶液。组合物可含有可药用辅助物质，因为需要接近生理条件，诸如pH调节和缓冲剂等。本发明的抗原结合蛋白在此类药物制剂中的浓度可以在很大的范围内变化，即从按重量计的少于约0.5％，通常为或至少约1％至多达15或20％，并且主要基于流体体积、粘度等，根据所选择的特定施与模式来进行选择。

因此，用于肌内注射的本发明药物组合物可制备为含有1mL无菌缓冲的水，以及约1ng至约100mg，例如约50ng至约30mg或更优选约5mg至约25mg的本发明的抗原结合蛋白，例如抗体。类似地，用于静脉内输注的本发明药物组合物可制备为含有约250ml无菌林格溶液(Ringer′s solution)，以及每ml林格溶液约1至约30且优选5mg至约25mg的本发明的抗原结合蛋白。制备可肠胃外施与的组合物的实际方法是公知的，或者对本领域技术人员人员而言是显而易见的，并且例如更详细地描述于Remington′s PharmaceuticalScience，第15版，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania。对于制备可静脉内施与的本发明的抗原结合蛋白制剂，参见Lasmar U和Parkins D“The formulation of Biopharmaceutical products”，Pharma.Sci.Tech.today，第129-137页，Vol.3(2000年4月3日)；Wang，W“Instability，stabilisation and formulation of liquid proteinpharmaceuticals”，Int.J.Pharm 185(1999)129-188，Stability of ProteinPharmaceuticals Part A and B编辑Ahern T.J.，Manning M.C.，NewYork，NY：Plenum Press(1992)；Akers，M.J.“Excipient-Drug interactionsin Parenteral Formulations”，J.Pharm Sci 91(2002)2283-2300；Imamura，K等“Effects of types of sugar on stabilization of Protein in the driedstate”，J Pharm Sci 92(2003)266-274；Izutsu，Kkojima，S.“Excipientcrystalinity and its protein-structure-stabilizing effect duringfreeze-drying”，J Pharm.Pharmacol，54(2002)1033-1039；Johnson，R，“Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for proteinlyophilization”，J.Pharm.Sci，91(2002)914-922。Ha，E Wang W，WangY.j.“Peroxide formation in polysorbate 80and protein stability”，J.Pharm Sci，91，2252-2264，(2002)，其全文内容在此通过引用并入本文，并且读者可具体地参考。

当本发明的治疗剂在药物制备物中时，优选使其以单位剂量形式存在。合适的治疗有效量将由本领域技术人员很容易地确定。可根据患者的体重计算他们合适的剂量，例如合适的剂量可以是0.1至20mg/kg，例如1至20mg/kg，例如10至20mg/kg，或例如1至15mg/kg，例如10至15mg/kg。为有效地治疗人类的诸如类风湿性关节炎、牛皮癣、IBD、多发性硬化或SLE的状况，合适的剂量可以是0.1至1000mg，例如0.1至500mg，例如500mg，例如0.1至100mg，或0.1至80mg，或0.1至60mg，或0.1至40mg，或例如1至100mg，或1至50mg本发明的抗原结合蛋白，其可以是肠胃外施与，例如皮下、静脉内或肌内。如果需要的话，可以以合适的时间间隔重复此类剂量，其中通过医生选择合适的时间间隔。

可冻干本文描述的抗原结合蛋白用于储存，并在使用之前在适当的载体中重构。这一技术已显示对于常规免疫球蛋白有效，并且可使用本领域公知的冻干和重构技术。

在另一方面，本发明提供了用于治疗或预防免疫系统介导的炎症的药物组合物，其包含本发明的抗原结合蛋白或其功能片段，以及可药用载体，其中所述免疫系统介导的炎症诸如诸如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、神经变性的疾病，例如多发性硬化、嗜中性粒细胞驱动的疾病，例如COPD、Wegeners血管炎、囊性纤维化、Sjogrens综合征、慢性移植排斥、l型糖尿病移植物对抗宿主疾病、哮喘、过敏的疾病例如atoptic皮炎、湿疹性皮炎、过敏性鼻炎、以及其它自身免疫疾病，包括甲状腺炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病。在一个实施方案中，所述病症是类风湿性关节炎。

在再另一方面，本发明提供了用于免疫系统介导的炎症的药物组合物，其包含本发明的抗原结合蛋白和可药用载体，其中所述免疫系统介导的炎症诸如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、神经变性的疾病，例如多发性硬化、嗜中性粒细胞驱动的疾病，例如COPD、Wegeners血管炎、囊性纤维化、Sjogrens综合征、慢性移植排斥、l型糖尿病移植物对抗宿主疾病、哮喘、过敏的疾病例如atoptic皮炎、湿疹性皮炎、过敏性鼻炎、以及其它自身免疫疾病，包括甲状腺炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病。在一个实施方案中，所述病症是类风湿性关节炎。

应当理解，本文描述的序列(SEQ ID NO：8至SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：48至SEQ ID NO：71，SEQ ID NO：81至SEQ ID NO：90，SEQ ID NO：93，SEQ ID NO：94，SEQ ID NO：96，SEQ ID NO：97以及SEQ ID NO：103至SEQ ID NO：123)包括与本文描述的序列基本上同一的序列，例如与本文描述的序列至少90％同一，例如至少91％、或至少92％、或至少93％、或至少94％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％同一的序列。

对核酸而言，术语“基本上同一”表示两个核酸或其指定序列在最佳比对和比较(有适当的核苷酸插入或缺失)时，在至少约80％的核苷酸，通常至少约90％至95％，以及更优选至少约98％至99.5％的核苷酸上是同一的。替代地，当片段在选择性杂交条件下会与该链的互补链杂交时，存在基本上同一。

对于核苷酸和氨基酸序列，术语“同一”表示当最佳比对和比较(有适当的插入或缺失)时两个核酸或氨基酸序列之间同一性的程度。替代地，当DNA片段在选择性杂交条件下会与该链的互补链杂交时，存在基本上同一。

两个序列之间的百分比同一性是由序列共有的同一的位置数目的函数(即，％同一性＝同一位置#/位置总#乘以100)，其中考虑了为最佳比对该两个序列时需要引入的空位的数量、每一空位的长度。可应用如在以下非限制性实施例中描述的数学算法完成两序列之间的序列比较以及百分比同一性的确定。

可应用GCG软件包中的GAP程序确定两个核苷酸序列之间的百分比同一性，其中使用了NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重以及1、2、3、4、5或6的长度权重。还可应用E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.，4：11-17(1988))的算法(已并入ALIGN程序(版本2.0))来确定两个核苷酸或氨基酸序列之间的百分比同一性，其使用了PAM 120权重残基表、12的空位长度罚分以及4的空位罚分。此外，还可应用Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48：444-453(1970))的算法(已并入GCG软件包中的GAP程序)来确定两个氨基酸序列之间的百分比同一性，其使用了Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。

例如，本发明的多核苷酸序列可与SEQ ID NO：17的参考序列同一，即100％同一，或与该参考序列相比较其可包括多达某些整数个核苷酸改变。此类改变选自至少一个核苷酸缺失、替换(包括转换和颠换)或插入，并且其中所述改变可发生在参考核苷酸序列的5’或3’末端位置，或这些末端位置之间的任何位置，在该参考序列中的核苷酸之间单个地，或在该参考序列之内的一个或更多个邻接群中散布。通过将SEQ ID NO：17中的核苷酸总数乘以相应百分比同一性的数值百分数(除以100)，并从SEQ ID NO：17的核苷酸的所述总数中减去得到的结果确定核苷酸改变数目，或：

nn≤xn-(xn·y)

其中nn是核苷酸改变的数目，xn是SEQ ID NO：17中的核苷酸总数，以及y对于50％是0.50、对于60％是0.60、对于70％是0.70、对于80％是0.80、对于85％是0.85、对于90％是0.90、对于95％是0.95、对于97％是0.97或对于100％是1.00，并且其中xn和y的任何非整数结果都在将其从xn中减去之前下舍至最接近的整数。SEQ ID NO：17多核苷酸序列的改变可在这一编码序列中产生无义、错义或移码突变，并在此类改变后由此改变了多核苷酸编码的多肽。

类似地，在另一实例中，本发明的多肽序列可与由SEQ ID NO：16编码的参考序列同一，即100％同一，或与该参考序列相比较其可包括多达某些整数个氨基酸改变，使得％同一性少于100％。此类改变选自至少一个氨基酸的缺失、替换(包括保守和非保守替换)、或插入，并且其中所述改变可发生在该参考多肽序列的氨基或羧基末端位置，或在这些末端位置之间的任何位置，在该参考序列中的氨基酸之间单个地，或在该参考序列之内的一个或更多个邻接群中散布。通过将由SEQ ID NO：16编码的多肽序列中的氨基酸总数乘以相应百分比同一性的数值百分数(除以100)，并从由SEQ ID NO：16编码的多肽序列的所述氨基酸总数中减去得到的结果确定对于给定％同一性的氨基酸改变数目，或：

na≤xa-(xa·y)

其中na是氨基酸改变的数目，xa是由SEQ ID NO：16编码的多肽序列中的氨基酸总数，以及y例如对于70％是0.70、对于80％是0.80、对于85％是0.85等，并且其中xa和y的任何非整数结果都在将其从xa中减去之前下舍至最接近的整数。

以下实施例阐释但并非限定了本发明。

实施例

实施例1

重组鼠、嵌合及人源化抗-IL-23抗体的构建

通过用人IL-23免疫小鼠产生鼠mAb。从发生反应的动物中收集脾，并与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤。针对结合筛选杂交瘤上清物质。应用标准技术单克隆目的杂交瘤。当通过RT-PCR分析时，本文实施例所使用的鼠抗体(8C92H6)显示存在两个重链和一个轻链。以嵌合mAb的形式构建两种组合(HClLC1和HC2LC1)。据信从这一杂交瘤产生并且在以下实验中使用的8C92H6鼠mAb的主要活性结合结构域包含SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：10所示的可变区。

使用来自该小鼠杂交瘤细胞系的RNA通过RT-PCR制备鼠V_H和V_L构建物从而制备嵌合构建物。首先将RT-PCR产物克隆至载体用于序列确定，然后应用包括限制性位点以及人信号序列(SEQ ID NO：36)的寡核苷酸将可变区克隆至Rld和Rln哺乳动物表达载体。这些表达载体含有人恒定区。应用同样包括人恒定区的pTT载体产生可选的构建物。

通过构建包括用于克隆至Rld和Rln哺乳动物表达载体的限制性位点以及人信号序列的重叠寡核苷酸而从头制备人源化V_H和V_L构建物。引入Hind III和Spe I限制性位点以构造出含有信号序列的(SEQID NO：36)的V_H结构域，用于克隆至含有人γ1恒定区的Rld。引入Hind III和BsiWI限制性位点以构造出含有信号序列(SEQ ID NO：36)的V_L结构域，用于克隆至含有人κ恒定区的Rln。应用同样包括人恒定区的pTT载体产生可选的构建物。在合适的情况下，应用点定向诱变(SDM)产生不同的人源化构建物。

人源化

小鼠轻链可变结构域在序列和结构上都非常罕见，因为缺乏在位置46上的亮氨酸，以及从位置69之后开始插入8个氨基酸(RSPFGNQL)。文献综述和cDNA数据库确认了相关小鼠轻链可变区的一个报道。在这一轻链的人源化中，位置46的亮氨酸不存在于小鼠序列中。将这一基序转移至人源化轻链中。

在人源化过程中，对小鼠序列制造了许多改变。这些改变包括以下这些：

从小鼠CDRH3(SEQ ID NO：3)至人源化CDRH3替代物(SEQ IDNO：4、73、74)制造了半胱氨酸至丝氨酸、丙氨酸或缬氨酸的取代。

另外，许多替代CDR序列如在SEQ ID NO：72至80、SEQ ID NO：95和SEQ ID NO：98至102所示的那样构建。

人源化重链A3(SEQ ID NO：16)

为CDR移植选择了合适的框架，在位置27、30和95制造了3个回复突变。

人源化轻链M0(SEQ ID NO：18)

为CDR移植选择了合适的框架。制造了L46的缺失。

人源化轻链M1(SEQ ID NO：20)

为CDR移植选择了合适的框架。制造了L46的缺失。此外，在位置59、64、68、69、70上制造了回复突变，并且在位置69和70之间存在RSPFGNQL的插入。

人源化轻链N1(SEQ ID NO：22)

为CDR移植选择了合适的框架。制造了L46的缺失。此外，在位置59、64、68、69、70上制造了回复突变，并且在位置69和70之间存在RSPFGNQL的插入。

人源化轻链N2(SEQ ID NO：24)

为CDR移植选择了合适的框架。制造了L46的缺失。此外，在位置59和64上制造了回复突变。

通过类似的方法产生了如在SEQ ID NO：48、50、52、54、56、58、81至90、96、97和103至123中所示的许多其它人源化变体。

实施例2

在CHO细胞中表达抗体

将分别编码重链和轻链的Rld和Rln质粒瞬时共转染至CHO细胞中，并且小规模或大规模表达，以产生抗体。替代地，通过电穿孔将相同的质粒共转染至CHO细胞并且应用无核苷培养基选择表达合适抗体的稳定多克隆细胞群。在一些测定法中，从组织培养上清液中直接评估抗体。在其它测定法中，回收重组抗体并且通过在蛋白A琼脂糖上的亲和层析纯化。

构建和表达此类抗体的其它细节根据WO2007/080174和WO2007/068750中所描述的一般方法进行。

在HEK 2936E细胞中表达抗体

将分别编码重链和轻链的pTT质粒瞬时共转染至HEK 2936E细胞中，并且小规模或大规模表达，以产生抗体。在一些测定法中，从组织培养上清液中直接评估抗体。在其它测定法中，回收重组抗体并且通过在蛋白A琼脂糖上的亲和层析纯化。

在通过代号(即，A3M0、A3M1、A3N1、A3N2、HC1LC1)提及抗体时，我们指通过共转染和表达所提及的第一和第二质粒而产生的mAb，例如，“A3M0”涉及通过在合适的细胞系中共转染含有A3序列的质粒和含有M0序列的质粒所产生的mAb。

实施例3

鼠抗-IL-23抗体的Biacore分析

应用胺偶联化学将抗鼠IgG固定在CM5传感芯片上。在表面上注入抗-IL-23杂交瘤抗体样本，并且捕获鼠mAb。随后，以5种不同的浓度(0nM-91nM)使重组人IL-23、重组食蟹猴IL-23或重组人IL-12流经捕获了抗体的表面，以得到结合传感图(sensorgrams)。通过注入0.1M磷酸3分钟从而完成抗体和抗原注入后的表面再生。在所有传感图上使用了应用在抗鼠IgG传感芯片表面注入缓冲液的双重参照。在25℃在HBS-EP缓冲液中进行该实验。应用1∶1结合模型分析得到的传感图数据，其中所述的模型整合至用于Biacore 3000仪器的Biaevaluation软件中。表2显示的数据来自应用取自组织培养瓶的杂交瘤上清液。

表2

实施例4

抗-IL-23嵌合和人源化mAb与人IL-23的结合

通过三明治ELISA评估嵌合和人源化mAb，以确定它们与人IL-23的结合活性。

用1μg/稀释液(碳酸氢盐缓冲液)的抗人IL-12包被板。在4℃温育50μl/孔的这一混合物过夜。用含有0.05％Tween 20的Tris缓冲的盐水(TBST)洗涤该板两次。然后用1％BSA TBST 100μl/孔封闭板，在室温下最少1小时。然后用Tris缓冲的盐水+0.05％Tween 20(TBST)洗涤该板两次。在室温下在独立的板中用恒定浓度的IL-23温育各种浓度的抗体1小时。然后将50ul每一混合物转移至测试板中并且在RT下温育1小时。然后用Tris缓冲的盐水+0.05％Tween 20(TBST)洗涤它们两次。通过以1/1000稀释于1％BSA TBST的山羊抗人IgGγ链HRP(Sigma A6029)检测结合的mAb。加入50μl/孔的检测抗体并且在RT下温育1小时。然后用Tris缓冲的盐水+0.05％Tween 20(TBST)洗涤该板三次。在20ml H₂O中重构邻苯二胺盐酸盐(OPD)，加入50μl/孔并且在RT下温育20min。加入25μl/孔的3MH₂SO₄。应用SOftmaxPRO versamax板读数器在OD490nm处读出该板。结果如图1、2和3所示。

应用如下所述的最优化测定法条件和来自不同制备的抗IL-23抗体材料重复这一实验，结果显示于图1A、1B和3A。因此，图1A、1B和3A中显示的数据被认为比图1、2和3显示的数据更精确。显示于图1A中的8C92H6HC 1LC 1的结合概况与图1B中的不同，这一在结合概况中不同的原因未知。

最优化的测定法条件：用2μg/稀释液(磷酸盐缓冲的盐水)的抗人IL12包被板。在4℃温育50μl/孔的这一混合物过夜。然后用含有0.05％Tween 20的磷酸盐缓冲的盐水(PBST)洗涤该板三次。室温下用4％脱脂奶粉(Fluka BioChemika#70166)PBS 200μl/孔封闭该板最少1小时。然后用磷酸盐缓冲的盐水+0.05％Tween 20(PBST)洗涤该板3次。在室温下在独立的板中用恒定浓度的IL-23温育各种浓度的抗体1小时。将50ul每一混合物转移至测试板中并且在RT下温育1小时。然后用磷酸盐缓冲的盐水+0.05％Tween 20(PBST)洗涤它们三次。通过以1/3000稀释于4％脱脂奶粉(Fluka BioChemika#70166)PBS中的山羊抗人IgGγ链HRP(Serotec STAR 106P)检测结合的mAb。加入50μl/孔的检测抗体并且在RT下温育1小时。然后用磷酸盐缓冲的盐水+0.05％Tween 20(PBST)洗涤该板三次。加入50μl/孔的TMB至该板中，并在RT下温育10min。加入50μl/孔的1MH₂SO₄。应用SOftmaxPRO versamax板读数器在OD450nm处读出该板。

图1、1A和1B显示了纯化的嵌合8C92H6HC 1LC 1与人IL-23结合的能力。

图2显示了组织培养上清嵌合8C92H6HC1LC1与人IL-23结合的能力。

图3显示了组织培养上清人源化mAb与人IL-23结合的能力。

图3A显示了纯化的人源化mAb与人IL-23结合的能力。

所有样本都以一式两份进行，显示了每一重复的平均值。此外，应用上清材料的测定法均使用组织培养上清液的不同制备物进行两次，并且显示了代表性结果。

实施例5

抗IL-23嵌合和人源化mAb的Biacore分析

根据生产商的说明通过伯胺偶联将蛋白A或抗-人IgG(BiacoreBR-1008-39)固定在Biacore CM5芯片上。将抗IL-23抗体捕获在这一表面上，并且稳定一段时间后，使IL 13流过捕获了抗体的表面并且获得结合传感图。通过应用两脉冲的100mM磷酸完成再生，其中所述的磷酸移除捕获的抗体但不显著地影响蛋白A/抗-人IgG表面在随后的结合事件中捕获抗体的能力。所有运行都用在捕获了抗体的表面上注入缓冲液进行双重参照。应用Biacore 3000或T100(依赖于应用哪个机器产生动力学)固有的软件应用1∶1模型分析数据。在25℃应用HBS-EP缓冲液进行分析。除非另外指出，在表3-6中所示的数据都是瞬时表达目的抗体的CHO细胞的组织培养上清液的数据。应用IL-23的浓度(256、64、16、4、1和0.25nM)产生数据。为人源化变体所显示的数据是多个运行的代表。嵌合mAb(8C9H6.HC 1LC 1)在每一实验中仅运行一次，因此这一mAb所示的数据来自这一次运行。

表3

  构建物
  ka(1/Ms)
  kd(1/s)
  KD(nM)
  8C92H6.HC1LC1嵌合体
  2.7e5
  3.9e-4
  1.4

数据在Biacore 3000上应用3种浓度的IL-23(100、10和1nM)产生

表4

  构建物
  Ka(1/Ms)
  kd(1/s)
  KD(nM)
  8C92H6.HC1LC1
  嵌合体
  3.2e5

  2.9e-4

  0.91

数据在T100上应用10种浓度的IL-23(128、64、32、16、8、4、2、1、0.5和0.25nM)产生

表5

  构建物
  ka(1/Ms)
  kd(1/s)
  KD(nM)
  8C92H6.HC1LC1嵌合体
  (经纯化的)
  2.4e5

  4.4e-4

  1.8

  A3M0
  3.0e5
  3.3e-4
  1.1

  构建物
  ka(1/Ms)
  kd(1/s)
  KD(nM)
  A3M1
  2.4e5
  3.6e-4
  1.5
  A3N1
  1.7e5
  3.9e-4
  2.3
  A3N2
  2.8e5
  4.1e-4
  1.5

数据在Biacore 3000上应用4种浓度的IL-23(256、64、16和4nM)产生

表6

  构建物
  ka(1/Ms)
  kd(1/s)
  KD(nM)
  A3M0
  3e5
  2.8e-4
  0.92
  A3M1
  1.3e5
  3.1e-4
  2.4
  A3N1
  8.4e4
  3.5e-4
  4.1
  A3N2
  2.4e5
  3.8e-4
  1.6
  8C92H6.HC1LC1嵌合体
  (瞬时材料)
  2.1e5

  3.8e-4

  1.8

  8C92H6.HC1LC1嵌合体
  (纯化的材料)
  2.0e5

  4.3e-4

  2.2

数据在T100上应用5种浓度的IL-23(256、64、16、4和1nM)产生

实施例5A

纯化的嵌合及人源化mAb的Biacore分析

这基本上是实施例5的重复，但使用了不同来源的IL-23。

应用在CM5芯片上的捕获表面进行Biacore分析。应用抗-人IgG(BR-1008-39)作为捕获剂。通过伯胺偶联将抗-人IgG偶联在CM5生物传感芯片上。将人源化抗体捕获在这一固定的表面上，并且使定义浓度的IL-23流过这一捕获表面。应用在捕获了抗体的表面上注入缓冲液用作双重参照。在每一IL-23注入之后，应用3M MgCl₂再生该捕获表面，该再生移除捕获的抗体但是不显著地影响该表面在下一循环中捕获抗体的能力。使用T 100Biacore机器产生数据，所有运行均在25℃使用HBS EP进行。应用该机器固有的软件分析数据，并且拟合于1∶1结合模型。表7和8详细描述了在两个独立实验中对8C92H6.HC1LC1嵌合体以及所选择的人源化变体进行的IL-23结合分析。表7和表8中展示的数据来自纯化的抗体样本。人源化变体显示的数据是多个运行的代表。在每一实验中，嵌合mAb(8C9H6.HC1LC1)均仅运行了一次，因此对这一mAb所显示的数据来自这一次运行。表8A显示了来自相同的Biacore运行的获自组织培养上清液的数据，其包括了用于比较目的的A3M0。

表7

  ka(M-1.s-1)
  Kd(s-1)
  KD(pM)
  8C92H6.HC1LC1.嵌合体
  9.25e+5
  3.37e-4
  364
  A3M0
  1.27e+6
  2.40e-4
  190

表8

  ka(M-1.s-1)
  kd(s-1)
  KD(pM)
  A3M0
  1.22E+6
  2.37E-4
  194
  A7M3
  1.01E+6
  1.45E-4
  144
  A6M0
  2.95E+6
  2.98E-4
  101
  A9M3
  2.64E+6
  1.71E-4
  65
  A5M0
  1.65E+6
  1.71E-4
  103
  A8M3
  1.67E+6
  1.35E-4
  80

表8A

  Ka(M-1.s-1)
  Kd(s-1)
  KD(pM)
  A3M0
  1.38E+6
  2.34E-4
  170.3
  A3M4
  1.36E+6
  1.06E-4
  77.5
  A3M5
  4.55E+4
  1.20E-3
  26400(26.4nM)
  A3M6
  8.96E+5
  1.10E-3
  1230
  A10.5M3
  1.19E+6
  1.15E-4
  96.2
  A11.5M3
  1.55E+6
  9.38E-5
  60.6
  A12.5M3
  2.70E+6
  1.72E-4
  63.7

  Ka(M-1.s-1)
  Kd(s-1)
  KD(pM)
  A5M4
  1.91E+6
  1.01E-4
  53.0
  A6M4
  3.22E+6
  1.49E-4
  46.5
  A7M4
  1.34E+6
  1.23E-4
  91.8
  A8M4
  2.08E+6
  9.58E-5
  46.2
  A9M4
  2.83E+6
  1.29E-4
  45.6
  A10M4
  1.46E+6
  1.07E-4
  73.3
  A11M4
  2.07E+6
  9.18E-5
  44.4
  A12M4
  2.94E+6
  1.63E-4
  55.3
  A10.5M4
  2.08E+6
  8.64E-5
  41.6
  A11.5M4
  1.45E+6
  9.62E-5
  66.5
  A12.5M4
  3.12E+6
  1.51E-4
  48.3
  A10M3
  1.11E+6
  1.17E-4
  105.6
  A11M3
  1.43E+6
  9.57E-5
  67.1
  A12M3
  2.54E+6
  2.02E-4
  79.4

实施例6

抗IL-23mAb(鼠、嵌合及人源化)的存在下IL-23与IL-23受体结合的抑制

为证实该抗-IL-23mAb是IL-23的特异性中和抗体，测试鼠mAb优先抑制IL-23与IL-23受体的结合，而非抑制IL-12(或IL-23)与IL-12Rβ1的结合。

在以下测定法中测试抗-IL-23鼠8C92H6mAb。当在板上使用单个受体时，以1μg/ml的浓度将重组人IL-23受体(R&D systems1400-IR-050)或IL-12Rβ1(R&D systems 839-B1-100)或IL-12Rβ2(R&Dsystems 1959-B2-050)包被在96孔板上。当联合IL-12Rβ1和β2两者时，在包被至板之前，将两者都稀释为0.5μg/ml。用含有0.05％Tween20的PBS洗涤板，并且然后用含有1％BSA的PBS封闭。在加入到预包被的板上之前，使50ng/ml的人或食蟹猴IL-23或人IL-12(R&Dsystems 219-IL-025)与等体积的滴定的纯化抗体材料预温育1小时。用生物素化的抗人IL-12(R&D systems BAF-219)，以及随后通过抗生蛋白链菌素-HRP(GE Healthcare RPN 4401)进行检测。

如图7所示，IL-23鼠8C92H6mAb能够抑制人IL-23与IL-23受体的结合(图7A)，以及抑制食蟹猴IL-23与IL-23受体的结合(图7B)。与此相反，抗-IL-23mAb没有抑制重组人IL-12与单独的IL12Rβ1或IL12Rβ1和IL12Rβ2的联合体的结合(图7C)。数据表示在用中和mAb处理的条件下，与不相关对照IgG(0％抑制)相比的IL-23与IL-23R的结合的抑制％。

评估了嵌合及人源化mAb中和人IL-23与人IL-23受体结合、以及食蟹猴IL23与人IL23受体结合的能力。用人IL23R Fc嵌合体以1μg/稀释液(碳酸氢盐缓冲液)包被板。在4℃温育50μl/孔的这一混合物过夜。然后用含0.05％Tween 20的Tris缓冲的盐水(TBST)洗涤该板两次。然后用1％BSA TBST 100μl/孔在室温下封闭该板至少1小时。然后用含0.05％Tween 20的Tris缓冲的盐水(TBST)洗涤该板两次。在独立的板中用恒定浓度的IL-23在室温下温育各种浓度的抗体1小时。将50ul每一混合物转移至测定板中并且在RT下温育1小时。然后用含0.05％Tween 20的Tris缓冲的盐水(TBST)洗涤它们两次。通过在1％BSA TBST稀释至100ng/ml的抗人IL 12生物素标记的Ab(R&D systems BAF219)检测结合的IL 23。加入50μl/孔的生物素化的抗体，并且在RT下温育1小时。然后用含0.05％Tween 20的Tris缓冲的盐水(TBST)洗涤该板两次。将ExtrAvidin-过氧化物酶(SigmaE2886)以1/1000稀释于1％BSA TBST中，往该板中加入50μl/孔。然后用含0.05％Tween 20的Tris缓冲的盐水(TBST)洗涤该板三次。往该板中加入50μl/孔的重构于H₂O中的OPD(Sigma P9187)，并且在RT下温育20min。往已经含有OPD的孔中加入25μl/孔的3MH₂SO₄。应用SOftmaxPRO versamax板读数器在OD490nm读出该板。结果显示于图4、5和6。

应用以下所述的最优化的测定条件以及来自与较早测试法中所使用的不同制备物的抗IL-23抗体材料重复这一测试，并且结果显示于图4A和4B、以及图6A、6B和6C。因此，显示于图4A和4B以及图6A、6B和6C中的数据被认为比显示于图4、5和6中的数据更精确。

最优化的方案：用1μg/稀释液(磷酸缓冲盐水)的人IL23R Fc嵌合体包被板。在4℃温育50μl/孔的这一混合物过夜。然后用含有0.05％Tween 20的磷酸盐缓冲的盐水(PBST)洗涤该板三次。室温下用4％脱脂奶粉(Fluka BioChemika#70166)PBST 100μl/孔封闭该板最少1小时。然后用磷酸盐缓冲的盐水+0.05％Tween 20(PBST)洗涤该板3次。在室温下在独立的板中用恒定浓度的IL-23温育各种浓度的抗体1小时。然后将50ul每一混合物转移至测试板中并且在RT下温育1小时。然后用磷酸盐缓冲的盐水+0.05％Tween 20(PBST)洗涤它们三次。通过在4％脱脂奶粉(Fluka BioChemika#70166)PBST中稀释至100ng/ml的抗人IL 12生物素标记的Ab(R&D systems BAF219)检测结合的IL 23。加入50μl/孔的生物素化的抗体，并且在RT下温育1小时。然后用磷酸盐缓冲的盐水+0.05％Tween 20(PBST)洗涤该板三次。将SA HRP(GE healthcare RPN4401)以1/4000稀释于4％脱脂奶粉(Fluka BioChemika#70166)PBS中，往该板中加入50μl/孔。然后用磷酸盐缓冲的盐水+0.05％Tween 20(PBST)洗涤该板三次。向板中加入50ul/孔的TMB，并且在RT下温育15分钟。往已经含有TMB的孔中加入25μl/孔的3MH₂SO₄。应用SOftmaxPRO versamax板读数器在OD450nm读出该板。

图4和4A显示了纯化的嵌合8C92H6HC 1LC 1抑制人IL-23与人IL-23R结合的能力。

图4B显示了纯化的嵌合8C92H6HC 1LC 1抑制食蟹猴IL-23与人IL-23R结合的能力。

图5显示了含有嵌合8C92H6HC 1LC 1的组织培养上清液抑制人IL-23与人IL-23R结合的能力。

图6显示了含有人源化mAb的组织培养上清液抑制人IL-23与人IL-23R结合的能力。

图6A和C显示了纯化的人源化mAb抑制人IL-23与人IL-23R结合的能力。

图6B显示了纯化的人源化mAb抑制食蟹猴IL-23与人IL-23R结合的能力。

所有样本都以一式两份进行，并且显示了每一重复的平均值。此外，应用上清材料的测定法均使用组织培养上清液的不同制备物进行两次，并且显示了代表性结果。

在这一测定法中还测试了在组织培养上清液中的人源化抗体A3M4，A5M4，A6M4，A7M4，A8M4，A9M4，A10M4，A11M4，A12M4，A10.5M4，A11.5M4，A12.5M4，A10.5M3，A11.5M3，A12.5M3，A10M3，A11M3，和A12M3。所有的这些抗体均中和人IL23与人IL23R的结合，IC50值在0.14nM至0.57nM的范围内(数据未给出)。

实施例7

通过抗-IL-23鼠和人源化mAb抑制IL-23的生物活性

用单独的重组人IL-23或在与经滴定的IL-23mAb预温育之后的重组人IL-23处理新鲜分离的鼠脾细胞。培养3天后，收集细胞上清液并且应用IL-17或IL-22ELISA二重装置(duo set)(R&D systems)通过ELISA测定。

抗-IL-23mAb与人重组IL-23温育后抑制从脾细胞中产生鼠IL-17的能力显示于图8、8A、8B和8C。

用三种不同来源的IL-23测试鼠抗体的抑制。一个实例显示于图8。在其它实验中，如图8A-C所示，将鼠mAb与嵌合抗体及人源化变体(A3M0)相比较。该抗体与人重组IL-23温育后抑制了从脾细胞中产生鼠IL-17。

数据(用Grafit作图)显示了与通过包括不相关IgG(即，0％抑制)的条件产生的IL-17水平相比较的，用中和mAb获得的抑制％。

图9、9A、9B和9C显示了抗-IL-23mAb抑制IL-23驱动的从鼠脾细胞中产生IL-22的能力。

图9显示了当与鼠抗体或对照IgG温育时，脾细胞中IL-22的测量量。

图9A-C显示了这一测定法中IL-22产生的抑制％。图9A表示鼠抗体，9B表示人源化抗体A3M0，以及9C表示嵌合抗体。

实施例8

比较抗-IL-23mAb和抗-IL-12/23p40mAb抑制IL-12诱导的从NK92细胞中产生IFNγ的能力

根据ATCC指引繁衍自然杀伤细胞系NK92(ATCC#CRL-2407)。这一细胞系以剂量依赖的方式响应IL-12分泌IFNγ。在培养基的存在下，或1ng单独的IL-12(Peprotech)的存在下，或利用在加入细胞之前与滴定的纯化抗体材料在室温下预温育1h的IL-12培养4x 10⁴/孔的细胞3天。收获细胞培养上清液并且培养3d后分析，并且应用抗-人IFNγ抗体对(Biosource)根据生产商的说明量化IFNγ含量。简而言之，将抗-人IFNγ捕获mAb包被在96孔平底Nunc Maxisorp^TM板上。在加入样本前，用1％BSA封闭板。应用生物素化的检测mAb(Biosource)、以及随后通过抗生蛋白链菌素-HRP和TMB底物进行检测。用单独的IL-12获得的值用作阳性对照，单独的培养基作为阴性对照。

本发明的抗-IL-23mAb对IL-12驱动的IFNγ从NK92细胞中的产生没有影响(见图10)。这证实了本发明的抗-IL-23mAb不抑制IL-12与其受体的结合，因此提示这一抗体识别不由IL 12和IL-23共有的表位。

实施例9

通过抗-IL-23mAb(鼠、嵌合和人源化)抑制内源性人IL-23与IL-23受体的结合

评估了8C92H6小鼠亲本、嵌合抗体HC1LC1和人源化变体A3M0中和内源性人IL-23与人IL-23受体结合的能力。

从经刺激的树突状细胞制备内源性人IL-23。简而言之，将通过阴性选择从外周血单核细胞中纯化的单核细胞在GMCSF/IL-4的存在下培养5天。这一时间之后，洗涤细胞，并且用CD40L和酵母聚糖刺激。再24小时后，从细胞中除去上清液并且在评估IL-23含量(ELISA)和用于受体中和测定法之前进行储存。

将重组人IL-23受体(R&D systems 1400-IR-050)以1μg/ml的浓度包被在96孔板上。在加入预包被的板之前，将3.5ng/ml终浓度的内源性人IL-23与滴定的纯化抗体材料预温育1小时。应用生物素化的抗人IL12(R&D systems BAF-219)和随后通过抗生蛋白链菌素-HRP(GE Healthcare RPN 4401)进行检测。这一中和ELISA使用1％BSA。

鼠mAb(8C92H6)、嵌合mAb(HC1LC1)以及人源化mAb(A3M0)中和了内源性人IL-23，并且抑制了人IL-23与人IL-23受体的结合。代表性结果显示于图11。

实施例10

在25％AB血清的存在下通过抗-IL-23mAb抑制内源性人IL-23与IL-23受体的结合

将重组人IL-23受体(R&D systems 1400-IR-050)以1μg/ml的浓度包被在96孔板上。在加入预包被的板之前，将5ng/ml终浓度的内源性人IL-23与滴定的纯化mAb预温育。应用生物素化的抗人IL12(R&D systems BAF-219)，以及随后通过抗生蛋白链菌素-HRP(GEHealthcare RPN 4401)进行检测。这一中和ELISA使用25％人库AB型血清。

8C92H6、HC1LC1和A3M0在人血清中保持了它们的活性，并且抑制了内源性人IL-23与人IL-23受体的结合。代表性结果显示于图12。

实施例11

通过抗-IL-23mAb抑制人细胞中IL-23驱动的通过内源性受体复合物的pSTAT3信号传导

在这一测定法中通过量化DB人淋巴瘤细胞系(ATCC CCRL-2289)中STAT3的磷酸化从而测量IL-23驱动的通过内源性受体复合物的pSTAT3信号传导。通过针对在mRNA水平上的IL-23R和IL12β1的表达(Taqman)，以及细胞表面受体表达(流式细胞术，数据未给出)筛查细胞系，从而鉴定这一细胞系。DB细胞以剂量依赖的方式对人IL-23起反应，如通过STAT3磷酸化所监测的那样。

在室温下使人IL-23(R&D systems 1290-IL)50ng/ml与各种浓度的纯化的抗体材料预温育30分钟。然后在室温下将IL-23/抗体混合物加入到1.25x10⁶DB细胞中，维持10分钟，然后收集细胞并且在冰上在终浓度为1×的裂解缓冲液(Cell Signaling)中裂解。通过免疫测定法(Mesoscale Discovery kit K110-DID2)量化在这些裂解物中的磷酸-STAT3的表达。IC₅₀值表示在3个独立实验中测定的3个生物平行测定的数据。A5M0、A6M0、A7M3、A8M3和A9M3的IC₅₀值表示在2个独立实验中测定的3个生物平行测定的数据。

确定了亲本抗体8C92H6、嵌合抗体HC1LC1、人源化抗体A3M0、A5M0、A6M0、A7M3、A8M3和A9M3的IC₅₀值。所展示的数据是应用Grafit计算的来自独立测定法(表9)的平均IC₅₀。所有抗体均抑制了由IL-23诱导的STAT3的磷酸化。在这一测定法中，阴性对照mAb对磷酸化的STAT3水平没有影响(数据未给出)。

表9

  IC₅₀值(+/-标准差)
  8C92H6
  (小鼠亲本)
  231.67ng/ml±14.57
  1.545nM±0.097

  HC1LC1
  (8C9嵌合体)
  93.55ng/ml±4.33
  0.624nM±0.029
  A3M0
  (人源化)
  43.93ng/ml±7.33
  0.287nM±0.049
  A5M0

  22.27ng/ml±13.18
  0.148nM±0.086
  A6M0

  21.44ng/ml±13.53
  0.143nM±0.09
  A7M3

  45.85ng/ml±16.76
  0.306nM±0.11
  A8M3

  36.10ng/ml±11.48
  0.241nM±0.077
  A9M3

  27.15ng/ml±17.18
  0.181nM±0.11

序列概述(表10)

序列表：

SEQ ID NO：1

SYGIT

SEQ ID NO：2

ENYPRSGNTYYNEKFKG

SEQ ID NO：3

CEFISTVVAPYYYALDY

SEQ ID NO：4

SEFISTVVAPYYYALDY

SEQ ID NO：5

KASKKVTIFGSISALH

SEQ ID NO：6

NGAKLES

SEQ ID NO：7

LQNKEVPYT

SEQ ID NO：8

QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTSYGITWVKQRTGQGLEWIGE

NYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCARCE

FISTVVAPYYYALDYWGQGTSVTVSS

SEQ ID NO：9

CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGACTTC

AGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTA

TAACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAG

AATTATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAATTCAAGGGCAA

GGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCC

GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGATGCGAA

TTTATTAGTACGGTAGTAGCTCCCTATTACTATGCTCTGGACTACTGGGG

TCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA

SEQ ID NO：10

DIVLTQSPASLAVSLGQKATISCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK

LIYNGAKLESGVSARFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTIDPVEADDAATYYC

LQNKEVPYTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO：11

GACATTGTACTAACCCAATCTCCAGCATCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCA

GAAGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCAAAAAAGTCACTATATTTGGCT

CTATAAGTGCTCTGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAA

CTCATCTATAATGGAGCCAAACTAGAATCTGGGGTCAGTGCCAGGTTCAG

TGACAGTGGGTCTCAGAACCGCTCACCATTTGGAAATCAGCTCAGCTTCA

CCCTCACCATTGATCCTGTGGAGGCTGATGATGCAGCAACCTATTACTGT

CTGCAAAATAAAGAGGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGA

AATAAAA

SEQ ID NO：12

QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTSYGITWVKQRTGQGLEWIGE

NYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCARCE

FISTVVAPYYYALDYWGQGTSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA

ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS

SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV

FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK

PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK

GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN

YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS

LSLSPGK

SEQ ID NO：13

CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGACTTC

AGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTA

TAACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAG

AATTATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAATTCAAGGGCAA

GGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCC

GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGATGCGAA

TTTATTAGTACGGTAGTAGCTCCCTATTACTATGCTCTGGACTACTGGGG

TCAAGGAACCTCACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCA

GCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCC

GCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTC

CTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGC

TGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGC

AGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAG

CAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCC

ACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTG

TTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCC

CGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGA

AGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAG

CCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGAC

CGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGT

CCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAG

GGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGA

GCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACC

CCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAAC

TACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTA

CAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCA

GCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGC

CTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG

SEQ ID NO：14

DIVLTQSPASLAVSLGQKATISCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK

LIYNGAKLESGVSARFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTIDPVEADDAATYYC

LQNKEVPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN

FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK

HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO：15

GACATTGTACTAACCCAATCTCCAGCATCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCA

GAAGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCAAAAAAGTCACTATATTTGGCT

CTATAAGTGCTCTGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAA

CTCATCTATAATGGAGCCAAACTAGAATCTGGGGTCAGTGCCAGGTTCAG

TGACAGTGGGTCTCAGAACCGCTCACCATTTGGAAATCAGCTCAGCTTCA

CCCTCACCATTGATCCTGTGGAGGCTGATGATGCAGCAACCTATTACTGT

CTGCAAAATAAAGAGGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGA

AATAAAACGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCG

ATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAAC

TTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCA

GAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCA

CCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAG

CACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGT

GACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC

SEQ ID NO：16

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE

NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE

FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO：17

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAG

CGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCA

TCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAG

AACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAG

GGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGA

GCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGAGCGAG

TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGG

CCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC

SEQ ID NO：18

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK

LIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY

TFGGGTKVEIK

SEQ ID NO：19

GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGA

GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCA

GCATCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAG

CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAG

CGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGG

CCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC

ACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAG

SEQ ID NO：20

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK

LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTISSLQAEDVAVYYC

LQNKEVPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO：21

GACATCGTGATGACTCAGTCTCCCGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGA

GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGGA

GCATCTCCGCCCTGCACTGGTATCAGCAGAAACCCGGACAGCCCCCCAAG

CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAAAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCAG

CGATAGCGGCAGCCAGAACAGGAGCCCTTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA

CCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGGCCGAGGACGTCGCAGTGTACTACTGC

CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGA

GATTAAG

SEQ ID NO：22

DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ

LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLKISRVEAEDVGVYYC

LQNKEVPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO：23

GATATCGTGATGACCCAGACCCCCCTGAGCCTGAGCGTGACTCCAGGCCA

GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA

GCATTAGCGCCCTCCACTGGTACCTGCAGAAACCCGGGCAGCCCCCCCAG

CTGATCTATAACGGCGCTAAGCTGGAGAGCGGCGTGTCCGACAGGTTCAG

CGACTCTGGAAGCCAGAACAGGAGCCCCTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA

CCCTGAAGATCAGCAGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGC

CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGAGGCGGCACCAAGGTCGA

GATCAAG

SEQ ID NO：24

DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ

LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQNKEVPY

TFGGGTKVEIK

SEQ ID NO：25

GACATCGTGATGACCCAGACTCCCCTGTCCCTGAGCGTGACCCCCGGACA

GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA

GCATCAGCGCCCTGCACTGGTACCTCCAGAAGCCCGGGCAGCCCCCACAG

CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCTC

TGATAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATTAGCAGGGTGGAGG

CCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC

ACCTTCGGCGGCGGCACCAAAGTCGAGATCAAG

SEQ ID NO：26

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE

NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE

FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA

LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS

SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVF

LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP

REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG

QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY

KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL

SLSPGK

SEQ ID NO：27

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAG

CGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCA

TCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAG

AACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAG

GGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGA

GCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGAGCGAG

TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGG

CCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCG

TGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCC

CTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTG

GAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGC

AGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGC

AGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAA

CACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACA

CCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTC

CTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGA

GGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGT

TCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCC

AGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGT

GCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCA

ACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGC

CAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCT

GACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCA

GCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTAC

AAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAG

CAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCT

GCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTG

AGCCTGTCCCCTGGCAAG

SEQ ID NO：28

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK

LIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY

TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV

QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV

THQGLS S PVTKSFNRGEC

SEQ ID NO：29

GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGA

GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCA

GCATCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAG

CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAG

CGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGG

CCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC

ACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCC

CAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCG

CCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTG

CAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGT

GACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA

CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTG

ACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGA

GTGC

SEQ ID NO：30

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK

LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTISSLQAEDVAVYYC

LQNKEVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN

FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK

HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO：31

GACATCGTGATGACTCAGTCTCCCGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGA

GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGGA

GCATCTCCGCCCTGCACTGGTATCAGCAGAAACCCGGACAGCCCCCCAAG

CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAAAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCAG

CGATAGCGGCAGCCAGAACAGGAGCCCTTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA

CCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGGCCGAGGACGTCGCAGTGTACTACTGC

CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGA

GATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCG

ATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAAC

TTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCA

GAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCA

CCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAG

CACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGT

GACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC

SEQ ID NO：32

DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ

LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLKISRVEAEDVGVYYC

LQNKEVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN

FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK

HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO：33

GATATCGTGATGACCCAGACCCCCCTGAGCCTGAGCGTGACTCCAGGCCA

GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA

GCATTAGCGCCCTCCACTGGTACCTGCAGAAACCCGGGCAGCCCCCCCAG

CTGATCTATAACGGCGCTAAGCTGGAGAGCGGCGTGTCCGACAGGTTCAG

CGACTCTGGAAGCCAGAACAGGAGCCCCTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA

CCCTGAAGATCAGCAGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGC

CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGAGGCGGCACCAAGGTCGA

GATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCG

ATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAAC

TTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCA

GAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCA

CCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAG

CACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGT

GACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC

SEQ ID NO：34

DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ

LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQNKEVPY

TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV

QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV

THQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO：35

GACATCGTGATGACCCAGACTCCCCTGTCCCTGAGCGTGACCCCCGGACA

GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA

GCATCAGCGCCCTGCACTGGTACCTCCAGAAGCCCGGGCAGCCCCCACAG

CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCTC

TGATAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATTAGCAGGGTGGAGG

CCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC

ACCTTCGGCGGCGGCACCAAAGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCC

CAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCG

CCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTG

CAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGT

GACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA

CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTG

ACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGA

GTGC

SEQ ID NO：36

MGWSCIILFLVATATGVHS

SEQ ID NO：37

MLGSRAVMLLLLLPWTAQGRAVPGGSSPAWTQCQQLSQKLCTLAWSAHPLV

GHMDLREEGDEETTNDVPHIQCGDGCDPQGLRDNSQFCLQRIHQGLIFYEK

LLGSDIFTGEPSLLPDSPVGQLHASLLGLSQLLQPEGHHWETQQIPSLSPS

QPWQRLLLRFKILRSLQAFVAVAARVFAHGAATLSP

SEQ ID NO：38

ATGCTGGGGAGCAGAGCTGTAATGCTGCTGTTGCTGCT

GCCCTGGACAGCTCAGGGCAGAGCTGTGCCTGGGGGCAGCAGCCCTGCCTG

GACTCAGTGCCAGCAGCTTTCACAGAAGCTCTGCACACTGGCCTGGAGTGC

ACATCCACTAGTGGGACACATGGATCTAAGAGAAGAGGGAGATGAAGAGAC

TACAAATGATGTTCCCCATATCCAGTGTGGAGATGGCTGTGACCCCCAAGG

ACTCAGGGACAACAGTCAGTTCTGCTTGCAAAGGATCCACCAGGGTCTGAT

TTTTTATGAGAAGCTGCTAGGATCGGATATTTTCACAGGGGAGCCTTCTCT

GCTCCCTGATAGCCCTGTGGGCCAGCTTCATGCCTCCCTACTGGGCCTCAG

CCAACTCCTGCAGCCTGAGGGTCACCACTGGGAGACTCAGCAGATTCCAAG

CCTCAGTCCCAGCCAGCCATGGCAGCGTCTCCTTCTCCGCTTCAAAATCCT

TCGCAGCCTCCAGGCCTTTGTGGCTGTAGCCGCCCGGGTCTTTGCCCATGG

AGCAGCAACCCTGAGTCCC

SEQ ID NO：39

MCHQQLVISWFSLVFLASPLVAIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCD

TPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLL

LLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLT

FSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEE

SLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVS

WEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASI

SVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

SEQ ID NO：40

ATGTGTCAC

CAGCAGTTGGTCATCTCTTGGTTTTCCCTGGTTTTTCTGGCATCTCCCCTC

GTGGCCATATGGGAACTGAAGAAAGATGTTTATGTCGTAGAATTGGATTGG

TATCCGGATGCCCCTGGAGAAATGGTGGTCCTCACCTGTGACACCCCTGAA

GAAGATGGTATCACCTGGACCTTGGACCAGAGCAGTGAGGTCTTAGGCTCT

GGCAAAACCCTGACCATCCAAGTCAAAGAGTTTGGAGATGCTGGCCAGTAC

ACCTGTCACAAAGGAGGCGAGGTTCTAAGCCATTCGCTCCTGCTGCTTCAC

AAAAAGGAAGATGGAATTTGGTCCACTGATATTTTAAAGGACCAGAAAGAA

CCCAAAAATAAGACCTTTCTAAGATGCGAGGCCAAGAATTATTCTGGACGT

TTCACCTGCTGGTGGCTGACGACAATCAGTACTGATTTGACATTCAGTGTC

AAAAGCAGCAGAGGCTCTTCTGACCCCCAAGGGGTGACGTGCGGAGCTGCT

ACACTCTCTGCAGAGAGAGTCAGAGGGGACAACAAGGAGTATGAGTACTCA

GTGGAGTGCCAGGAGGACAGTGCCTGCCCAGCTGCTGAGGAGAGTCTGCCC

ATTGAGGTCATGGTGGATGCCGTTCACAAGCTCAAGTATGAAAACTACACC

AGCAGCTTCTTCATCAGGGACATCATCAAACCTGACCCACCCAAGAACTTG

CAGCTGAAGCCATTAAAGAATTCTCGGCAGGTGGAGGTCAGCTGGGAGTAC

CCTGACACCTGGAGTACTCCACATTCCTACTTCTCCCTGACATTCTGCGTT

CAGGTCCAGGGCAAGAGCAAGAGAGAAAAGAAAGATAGAGTCTTCACGGAC

AAGACCTCAGCCACGGTCATCTGCCGCAAAAATGCCAGCATTAGCGTGCGG

GCCCAGGACCGCTACTATAGCTCATCTTGGAGCGAATGGGCATCTGTGCCC

TGCAGT

SEQ ID NO：41

MWPPGSASQPPPSPAAATGLHPAARPVSLQCRLSMCPARSLLLVATLVLLD

HLSLARNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEE

IDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFM

MALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQAL

NFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

SEQ ID NO：42

ATGTGGCCCCCTGGGTCAGCCTCCCAGCCACCGCCCTCAC

CTGCCGCGGCCACAGGTCTGCATCCAGCGGCTCGCCCTGTGTCCCTGCAGT

GCCGGCTCAGCATGTGTCCAGCGCGCAGCCTCCTCCTTGTGGCTACCCTGG

TCCTCCTGGACCACCTCAGTTTGGCCAGAAACCTCCCCGTGGCCACTCCAG

ACCCAGGAATGTTCCCATGCCTTCACCACTCCCAAAACCTGCTGAGGGCCG

TCAGCAACATGCTCCAGAAGGCCAGACAAACTCTAGAATTTTACCCTTGCA

CTTCTGAAGAGATTGATCATGAAGATATCACAAAAGATAAAACCAGCACAG

TGGAGGCCTGTTTACCATTGGAATTAACCAAGAATGAGAGTTGCCTAAATT

CCAGAGAGACCTCTTTCATAACTAATGGGAGTTGCCTGGCCTCCAGAAAGA

CCTCTTTTATGATGGCCCTGTGCCTTAGTAGTATTTATGAAGACTTGAAGA

TGTACCAGGTGGAGTTCAAGACCATGAATGCAAAGCTTCTGATGGATCCTA

AGAGGCAGATCTTTCTAGATCAAAACATGCTGGCAGTTATTGATGAGCTGA

TGCAGGCCCTGAATTTCAACAGTGAGACTGTGCCACAAAAATCCTCCCTTG

AAGAACCGGATTTTTATAAAACTAAAATCAAGCTCTGCATACTTCTTCATG

CTTTCAGAATTCGGGCAGTGACTATTGATAGAGTGATGAGCTATCTGAATG

CTTCC

SEQ ID NO：43

MLGSRAVMLLLLLSWTAQGRAVPGGSSPAWAQCQQLSQKLCTLAWSAHPLV

GHMDLREEGDEETTNDVPHIQCGDGCDPQGLRDNSQFCLQRIRQGLIFYEK

LLGSDIFTGEPSLLPDSPVGQLHASLLGLSQLLQPEGHHWETQQIPSPSPS

QPWQRLLLRFKILRSLQAFVAVAARVFAHGAATLSP

SEQ ID NO：44

ATGCTGGGGAGCAGAGCTGTAATGCTGCTGTTGCTGCTGTCCTGGACAGCT

CAGGGCAGGGCTGTGCCTGGGGGCAGCAGCCCTGCCTGGGCTCAGTGCCAG

CAGCTTTCACAGAAGCTCTGCACACTGGCCTGGAGTGCACATCCACTAGTG

GGACACATGGATCTAAGAGAAGAGGGAGATGAAGAGACTACAAATGATGTT

CCCCATATCCAGTGTGGAGATGGCTGTGACCCCCAAGGACTCAGGGACAAC

AGTCAGTTCTGCTTGCAAAGGATTCGCCAGGGTCTGATTTTTTACGAGAAG

CTACTGGGATCGGATATTTTCACAGGGGAGCCTTCTCTGCTGCCTGATAGC

CCTGTGGGCCAGCTTCATGCCTCCCTACTGGGCCTCAGCCAACTCCTGCAG

CCTGAGGGTCACCACTGGGAGACTCAGCAGATTCCAAGCCCCAGTCCCAGC

CAGCCATGGCAGCGCCTCCTTCTCCGCTTCAAAATCCTTCGCAGCCTCCAG

GCCTTTGTGGCTGTAGCTGCCCGGGTCTTTGCCCATGGAGCAGCAACCCTG

AGTCCC

SEQ ID NO：45

MCHQQLVISWFSLVFLASPLMAIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCD

TPEEDGITWTLDQSGEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEALSHSLL

LLHKKEDGIWSTDVLKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLT

FSVKSSRGSSNPQGVTCGAVTLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEE

RLPIEVMVDAIHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVS

WEYPDTWSTPHSYFSLTFCIQVQGKSKREKKDRIFTDKTSATVICRKNASF

SVQAQDRYYSSSWSEWASVPCS

SEQ ID NO：46

ATGTGTCACCAGCAGCTGGTCATCTCTTGGTTTTCCCTGGTTTTTCTGGCA

TCTCCCCTCATGGCCATATGGGAACTGAAGAAAGACGTTTATGTTGTAGAA

TTGGACTGGTACCCGGATGCCCCTGGAGAAATGGTGGTCCTCACCTGTGAC

ACCCCTGAAGAAGATGGTATCACCTGGACCTTGGACCAGAGTGGTGAGGTC

TTAGGCTCTGGCAAAACCCTGACCATCCAAGTCAAAGAGTTTGGAGATGCT

GGCCAGTACACCTGTCACAAAGGAGGCGAGGCTCTAAGCCATTCACTCCTG

CTGCTTCACAAAAAGGAAGATGGAATTTGGTCCACTGATGTTTTAAAGGAC

CAGAAAGAACCCAAAAATAAGACCTTTCTAAGATGCGAGGCCAAAAATTAT

TCTGGACGTTTCACCTGCTGGTGGCTGACGACAATCAGTACTGATCTGACA

TTCAGTGTCAAAAGCAGCAGAGGCTCTTCTAACCCCCAAGGGGTGACGTGT

GGAGCCGTTACACTCTCTGCAGAGAGGGTCAGAGGGGACAATAAGGAGTAT

GAGTACTCAGTGGAGTGCCAGGAGGACAGTGCCTGCCCAGCCGCTGAGGAG

AGGCTGCCCATTGAGGTCATGGTGGATGCCATTCACAAGCTCAAGTATGAA

AACTACACCAGCAGCTTCTTCATCAGGGACATCATCAAACCCGACCCACCC

AAGAACTTGCAGCTGAAGCCATTAAAGAATTCTCGGCAGGTGGAGGTCAGC

TGGGAGTACCCTGACACCTGGAGTACTCCACATTCCTACTTCTCCCTGACA

TTCTGCATCCAGGTCCAGGGCAAGAGCAAGAGAGAAAAGAAAGATAGAATC

TTCACAGACAAGACCTCAGCCACGGTCATCTGCCGCAAAAATGCCAGCTTT

AGCGTGCAGGCCCAGGACCGCTACTATAGCTCATCTTGGAGCGAATGGGCA

TCTGTGCCCTGCAGT

SEQ ID NO：47

MNQVTIQWDAVIALYILFSWCHGGITNINCSGHIWVEPATIFKMGMNISIYCQAAIKNCQ

PRKLHFYKNGIKERFQITRINKTTARLWYKNFLEPHASMYCTAECPKHFQETLICGKDIS

SGYPPDIPDEVTCVIYEYSGNMTCTWNAGKLTYIDTKYVVHVKSLETEEEQQYLTSSYIN

ISTDSLQGGKKYLVWVQAANALGMEESKQLQIHLDDIVIPSAAVISRAETINATVPKTII

YWDSQTTIEKVSCEMRYKATTNQTWNVKEFDTNFTY

VQQSEFYLEPNIKYVFQVRCQETGKRYWQPWSSLFFHKTPETVPQVTSKAFQHDTWNSGL

TVASISTGHLTSDNRGDIGLLLGMIVFAVMLSILSLIGIFNRSFRTGIKRRILLLIPKWL

YEDIPNMKNSNVVKMLQENSELMNNNSSEQVLYVDPMITEIKEIFIPEHKPTDYKKENTG

PLETRDYPQNSLFDNTTVVYIPDLNTGYKPQISNFLPEGSHLSNNNEITSLTLKPPVDSL

DSGNNPRLQKHPNFAFSVSSVNSLSNTIFLGELSLILNQGECSSPDIQNSVEEETTMLLE

NDSPSETIPEQTLLPDEFVSCLGIVNEELPSINTYFPQNILESHFNRISLLEK

SEQ ID NO：48

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYY

NEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGT

LVTVSS

SEQ ID NO：49

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTG

AGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCC

CCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTAC

AACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTAC

ATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGGCTGAG

TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACA

CTAGTGACCGTGTCCAGC

SEQ ID NO：50

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGI TWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYY

NEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGT

LVTVSS

SEQ ID NO：51

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTG

AGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCC

CCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTAC

AACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTAC

ATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGGTGGAG

TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACA

CTAGTGACCGTGTCCAGC

SEQ ID NO：52

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYY

NEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGT

LVTVSS

SEQ ID NO：53

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTG

AGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCC

CCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGGACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTAC

AACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTAC

ATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGAGCGAG

TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACA

CTAGTGACCGTGTCCAGC

SEQ ID NO：54

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYY

NEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGT

LVTVSS

SEQ ID NO：55

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTG

AGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCGCCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCC

CCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTAC

AACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTAC

ATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTATGTACTACTGCGCCAGGAGCGAG

TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACA

CTAGTGACCGTGTCCAGC

SEQ ID NO：56

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPKLIYNGAKLES

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO：57

GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACC

ATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCAGCACCTCCGCCCTGCACTGG

TACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAGCTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGC

GGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGC

AGCCTGCAGGCCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC

ACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAG

SEQ ID NO：58

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPKLIYNGAKPES

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO：59

GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACC

ATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCAGCACCTCCGCCCTGCACTGG

TACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAGCTGATCTACAACGGCGCCAAGCCCGAGAGC

GGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGC

AGCCTGCAGGCCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC

ACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAG

SEQ ID NO：60

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYY

NEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGT

LVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP

AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA

PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP

REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL

PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT

VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO：61

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTG

AGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCC

CCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTAC

AACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTAC

ATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGGCTGAG

TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACA

CTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGC

AGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCC

GAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCC

GCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGC

AGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCC

CCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTG

ATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCT

GAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCC

AGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAG

GATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCT

ATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTG

CCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGC

TTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTAC

AAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACC

GTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCC

CTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG

SEQ ID NO：62

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYY

NEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGT

LVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP

AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA

PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP

REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL

PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT

VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ D NO：63