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一种口山酮衍生物的制备方法与应用.pdf

  • 上传人:e2
  • 文档编号:1198323
  • 上传时间:2018-04-05
  • 格式:PDF
  • 页数:4
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  • 摘要
    申请专利号:

    CN200910256560.2

    申请日:

    2009.12.24

    公开号:

    CN101921816A

    公开日:

    2010.12.22

    当前法律状态:

    撤回

    有效性:

    无权

    法律详情:

    发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C12P 17/18申请公布日:20101222|||实质审查的生效IPC(主分类):C12P 17/18申请日:20091224|||公开

    IPC分类号:

    C12P17/18; A61K31/352; A61P35/00; C12R1/645(2006.01)N

    主分类号:

    C12P17/18

    申请人:

    中国海洋大学

    发明人:

    王长云; 邵长伦; 魏美燕; 林永成; 佘志刚

    地址:

    266100 山东省青岛市崂山区松岭路238号

    优先权:

    专利代理机构:

    青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201

    代理人:

    崔清晨

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    内容摘要

    一种xanthone衍生物的制备方法与应用,制备时,先在菌种培养基中对海洋内生真菌进行菌种培养,再在发酵培养基中进行发酵培养,将发酵产生的液体过滤,除掉菌体,得到的发酵液用有机溶剂萃取;所得萃取液浓缩后,进行柱层析或薄层层析色谱分离,将所得洗脱液浓缩,得淡黄色晶体,即为xanthone衍生物。本发明的xanthone衍生物对人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐药株KBV200肿瘤细胞具有强的抑制活性,可用作抗肿瘤药物,并且原料可以进行大规模生产,应用前景广阔。

    权利要求书

    1: 一种 xanthone 衍生物的制备方法, 其特征在于先在菌种培养基中对海洋内生真菌 进行菌种培养, 再在发酵培养基中进行发酵培养, 将发酵产生的液体过滤, 除掉菌体, 得到 的发酵液用有机溶剂萃取 ; 所得萃取液浓缩后, 进行柱层析或薄层层析色谱分离, 将所得洗 脱液浓缩, 得淡黄色晶体, 即为 xanthone 衍生物。
    2: 如 权 利 要 求 1 所 述 的 制 备 方 法, 其特征在于所述的菌种培养基含有葡萄糖 0.1 % -5.0 %、 酵 母 膏 0.01 % -1 %、 蛋 白 胨 0.01 % -1 %、 琼 脂 0.1 % -
    3: 0 %、 氯化钠 0.05% -5%, 其余为水。 3. 如 权 利 要 求 1 所 述 的 制 备 方 法, 其特征在于所述的发酵培养基含有葡萄糖 0.1% -5.0%、 酵母膏 0.01% -1%、 蛋白胨 0.01% -1%、 氯化钠 0.05% -5%, 其余为水。
    4: 如权利要求 1 所述的制备方法, 其特征在于所述的有机溶剂为乙酸乙酯、 正丁醇、 氯 仿或二氯甲烷。 5. 权利要求 1 所述的 xanthone 衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
    5: 0 %、 酵 母 膏 0.01 % -1 %、 蛋 白 胨 0.01 % -1 %、 琼 脂 0.1 % -3.0 %、 氯化钠 0.05% -5%, 其余为水。 3. 如 权 利 要 求 1 所 述 的 制 备 方 法, 其特征在于所述的发酵培养基含有葡萄糖 0.1% -5.0%、 酵母膏 0.01% -1%、 蛋白胨 0.01% -1%、 氯化钠 0.05% -5%, 其余为水。 4. 如权利要求 1 所述的制备方法, 其特征在于所述的有机溶剂为乙酸乙酯、 正丁醇、 氯 仿或二氯甲烷。 5. 权利要求 1 所述的 xanthone 衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

    说明书


    一种口山酮衍生物的制备方法与应用

        技术领域 本发明涉及一种从海洋内生真菌的培养液中提取分离的 xanthone 衍生物的制备 方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。
         背景技术 自从 1929 年从陆地微生物中制备出青霉素以来, 微生物次级代谢产物已成为药 物的丰富来源, 绝大多数临床应用的抗生素都来源于真菌和细菌。微生物中的活性次级代 谢产物还有其他的药用价值, 如抗肿瘤, 治疗心脑血管疾病, 酶抑制剂等。海洋微生物的生 活环境与陆生微生物相比迥然不同, 特别是高压、 高盐度、 贫营养、 低温、 低光照、 缺氧等特 殊环境因素决定了海洋微生物发展出独特的代谢方式, 也提供了陆生微生物无法提供的活 性次级代谢产物, 海洋微生物被认为是高新颖性化学结构和药物先导化合物重要的潜在资 源, 人们对从海洋微生物中寻找新的特效药物寄于极大希望。
         发明内容 本发明的目的在于提供一种从海洋内生真菌的培养液中提取分离的 xanthone 衍 生物的制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用, 它能满足现有技术的上述需求。
         一种 xanthone 衍生物的制备方法, 其特征在于先在菌种培养基中对海洋内生真 菌进行菌种培养, 再在发酵培养基中进行发酵培养, 将发酵产生的液体过滤, 除掉菌体, 得 到的发酵液用有机溶剂萃取 ; 所得萃取液浓缩后, 进行柱层析或薄层层析色谱分离, 将所得 洗脱液浓缩, 得淡黄色晶体, 即为 xanthone 衍生物。
         上述的 xanthone 衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
         本发明制备的 xanthone 衍生物对人鼻咽癌 KB 和人鼻咽癌耐药株 KBV200 细胞具 有强的抑制活性, 可用作抗肿瘤药物, 并且原料可以进行大规模生产, 应用前景广阔。
         具体实施方式
         制备本发明的化合物时, 采取下述各步骤 :
         (1) 先在菌种培养基中对海洋内生真菌进行菌种培养, 所用的培养基含有葡萄糖 1.0% ( 重量百分数, 下同 )、 酵母膏 0.1%、 蛋白胨 0.2%、 琼脂 1.0%、 氯化钠 0.3%, 其余为 水。使用时将上述培养基制成试管斜面, 上述真菌菌株在 30℃下培养 5 天。
         所 述 的 菌 种 培 养 基 含 有 葡 萄 糖 0.1 % -5.0 %、 酵 母 膏 0.01 % -1 %、 蛋白胨 0.01% -1%、 琼脂 0.1% -3.0%、 氯化钠 0.05% -5%, 其余为水。培养温度为 15-35℃, 培 养时间为 3-10 天。
         (2) 上述培养所得的真菌菌种再在发酵培养基中进行发酵培养, 所用的发酵培养 基含有葡萄糖 1.0%、 酵母膏 0.1%、 蛋白胨 0.2%、 氯化钠 0.3%, 其余为水。真菌菌株于 28℃培养 30 天。
         所 述 的 发 酵 培 养 基 含 有 葡 萄 糖 0.1 % -5.0 %、 酵 母 膏 0.01 % -1 %、 蛋白胨0.01% -1%、 氯化钠 0.05% -5%, 其余为水。培养温度为 15-35℃, 培养时间为 7-40 天。
         (3)xanthone 衍生物 5-methoxysterigmatocystin 的提取分离
         将前一步骤产生的发酵液体过滤, 除去菌体, 所得发酵液用有机溶剂乙酸乙酯萃 取 5 次, 将所得萃取液合并浓缩后, 进行柱层析或薄层层析色谱分离, 将所得洗脱液浓缩得 淡黄色晶体, 即为 5-methoxysterigmatocystin。
         所述的有机溶剂乙酸乙酯可改用正丁醇或氯仿或二氯甲烷。
         本实施例制得的 5-methoxysterigmatocystin 的结构式为 :
         本发明的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用 本发明制备的化合物的抗肿瘤活性试验将对数增长期的人鼻咽癌 KB 和人鼻咽癌耐药株 KBV200 肿瘤细胞分别制备成靶 细胞悬液。取 96 孔培养板, 每孔加入 190μL、 含有 3.0×103 个上述靶细胞的悬液, 恒温培 养 24h 后, 加入 10μL 含不同浓度测试样品的培养基, 对照组加等体积的含 10%胎牛血清 (FBS) 的 RPMI-1640 培养液。置 37℃、 5% CO2 条件下培养 68h, 弃上清液, 直接于光学显微 镜下观察细胞形态。然后按 10μL/ 孔加入 3-(4, 5- 二甲基 -2- 噻唑 )-2, 5- 二苯基溴化四 唑 (MTT) 液, 继续培养 4h, 弃去上清液。 加入二甲基亚砜 (DMSO)100μL/ 孔, 吹打, 使样品充 分溶解, 用酶标仪以试验波长为 570nm、 参比波长为 450nm 测定光密度 OD 值。再按
         杀伤率= ( 对照孔 OD 值 - 药物孔 OD 值 )/ 对照孔 OD 值
         计算杀伤率, 绘制剂量反应回归曲线, 计算半数杀伤浓度 IC50。
         实验表明, 本发明的 5-methoxysterigmatocystin 对人鼻咽癌 KB 和人鼻咽癌耐药 株 KBV200 细胞具有明显的抑制活性, 其 IC50 值分别为 0.027μg/mL 和 9.08μg/mL, 可用作 抗肿瘤药物, 并且原料可以进行大规模生产, 应用前景广阔。4

    关 键  词:
    一种 口山酮 衍生物 制备 方法 应用
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