从柿叶提取含量≥ 85-98％的柿叶黄酮的方法 【技术领域】
本发明涉及黄酮类的提取， 特别是一种从柿叶提取含量≥ 85-98％的柿叶黄酮的方法。 背景技术 柿叶中的主要有效成分为黄酮类， 黄酮类在柿子叶中的总含量为 121.3mg/100g， 目前已发现的黄酮化合物有黄芪甙 ( 分子量 ： 446.36)、 异 槲 皮 素 (338.27)、 山萘酚 3-o-β-D- 葡萄糖甙、 山萘酚 (286.24)、 槲皮素 (338.27)、 山萘酚 3-o-α-L- 鼠李糖甙、 山 萘酚 3-β-D- 木糖甙、 山萘酚 3-o-α-L- 阿拉伯糖甙、 槲皮素 3-o-[2 ″ -o-(3.4.5- 三羟 基苯甲酰 )]- 葡萄糖甙、 芦丁 (664.57)、 金丝桃甙 ( 槲皮素 -3- 半乳糖甙 )、 杨梅树皮甙 (464.38)， 紫云英甙等， 其中黄酮甙类结合的糖类均为单糖， 分子量均小于 1000。 因此， 柿叶 黄酮类化学成分的分子量均小于 1000。
柿叶黄酮主要是以甙类的形式存在， 采用不同的提取方法可以得到不同的黄酮类 物质以及不同的含量。目前已公开的柿叶黄酮提取工艺的的文献主要有 ： (1) 用 70％乙醇 提取 2 次， 每次溶剂用量为柿叶重的 10 倍， 每次提取时间为 1.5h， 此提取工艺耗时长， 而且 使用了有机溶剂乙醇， 成本高 ； (2) 用 10-15 倍 PH ＝ 13 的水进行提取， 然后将提取液过 YF-1 树脂。此方法提取率低。此提取采用浓碱在高温下进行， 黄酮苷易水解， 破坏了黄酮成分， 提取溶剂多， 时间长， 成本较高 ； (3) 中国专利 CN 101194921 A 采用水提取， 乙醇沉淀， 乙酸 乙酯萃取， 大孔树脂纯化的工艺。 此方法采用大孔树脂进行纯化， 操作繁琐， 周期长， 且需要 采用蒸汽等加热过程， 生产耗用乙醇量大， 成本高 ； (4) 中国专利 CN 101637492A 采用 70％ 的乙醇水浴回流提取或用浓度为 70％的乙醇于微波加热回流提取或用浓度为 70％的乙醇 于超声波加热回流提取， 用大孔树脂进行纯化， 此方法同样需要采用蒸汽等加热过程， 成本 高， 周期长， 工艺繁琐 ； (5) 中国专利 CN 101322737A 采用低碳醇提取， 大孔树脂进行纯化， 乙酸乙酯萃取的方法， 得到黄酮提取物含量为 80-98％， 但是此方法同样需要采用蒸汽等加 热过程， 耗用乙醇量大， 时间长， 成本高 ； (6) 中国专利 CN 1709542A 采用双水相萃取法， 用 乙醇提取， 双水相萃取， 乙酸乙酯反萃， 得到黄酮的含量为 12.1％， 此方法需要用到硫酸胺 等有机试剂， 而且黄酮含量低， 不适用于人体使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从柿叶中提取黄酮类物质、 工艺简单、 生产成本低， 对 环境污染少， 提取时间短， 提取物黄酮类物质含量≥ 85-98％的柿叶黄酮的方法。
本发明所述从柿叶提取含量≥ 85-98％的柿叶黄酮的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将柿叶破碎 ；
(2) 用柿叶重 2-10 倍的 PH 值＝ 10-14 的碱水微波提取 1-5 次， 每次 10-60min， 所 述的微波功率为 200-2000W， 提取温度为 30-60℃ ；
(3) 合并提取液， 用浓度为 5％的盐酸将提取液的 PH 值调至 5-7 ；(4) 加入絮凝澄清剂， 搅拌、 静置 30-180min， 过滤 ； (5) 滤液过超滤膜纯化， 并经 RO 反渗透膜脱水， 得浓缩液 ； (6) 将浓缩液的 PH 调至 4-5， 用乙酸乙酯萃取 2-6 次 ； (7) 萃取液浓缩、 干燥， 得含量为 85-98％的柿叶黄酮提取物。 所述的 PH ＝ 10-14 碱水是用氢氧化钠溶液或饱和石灰水配制而成的所述的絮凝澄清剂为壳聚糖、 ZTC1+1 澄清剂或 101 澄清剂中的一种
所 述 的 超 滤 膜 超 滤 膜 为 截 留 分 子 量 为 1000-3500Da 的 卷 式 膜， 过程温度为 20-50℃， 压力为 0.1-1.0MPa， 膜通透量为 30-60L/h ；
所述 RO 反渗透膜为复合膜， 过程温度为 20-50℃， 压力为 0.5-15MPa， 膜透过量为 3 0.5-200m /h ；
所述萃取中的乙酸乙酯的用量为浓缩液的 2-5 倍， 萃取时间 15-120min ；
所 述 的 浓 缩 萃 取 液 采 用 真 空 浓 缩，浓 缩 温 度 为 30-70 ℃，真 空 度 为 -0.06MPa ～ -0.1MPa 所述的干燥为微波真空干燥， 温度为 20-60℃， 真空度为 -0.06MPa ～ -0.1MPa。
本发明的优选制备方法是 ：
(1) 将柿叶破碎 ；
(2) 加入 3 倍柿叶重量 PH ＝ 12 的碱水 ( 用氢氧化钠水溶液调节 )， 微波提取 2 次， 提取温度为 40℃， 提取时间为 20min ；
(3) 合并提取液， 用 5％的盐酸将提取液的 PH 调至 6 ；
(4) 加入提取液体积 0.2％的壳聚糖絮凝澄清剂， 搅匀， 静置 60min， 过滤 ；
(5) 滤液经截留分子量为 1000Da 的卷式超滤膜纯化， 并经 RO 复合反渗透膜脱水， 得浓缩液 ；
(6) 将浓缩液的 PH 值调至 4.5， 用 2 倍量的乙酸乙酯萃取 3 次， 每次萃取时间 30min
(7) 萃取液在真空条件下进行浓缩， 温度为 45℃， 真空度为 -0.08MPa
(8) 浓缩液在微波真空干燥条件下干燥， 温度为 45℃， 真空度为 -0.08Mpa， 得含量 为 98％的柿叶黄酮提取物。
本发明相对于现有技术工艺简单， 生产成本低， 提取时间短， 对环境污染小， 提取 物中黄酮类物质的含量高 ：
(1) 本发明采用 2-10 倍 PH ＝ 10-14 的碱水微波提取 1-5 次， 每次 10-60min， 提取 温度 30-60℃， 耗时短， 提取率高， 成本低， 对环境无污染， 生产操作安全。 解决了纯水提取率 低的问题 ； 解决了在高温浓碱条件下提取黄酮类成分易水解的问题 ； 解决了醇提成本高的 问题 ； 解决了上大孔树脂操作繁琐， 耗时长的问题 ；
(2) 本发明采用絮凝澄清剂除掉了大分子物质， 操作简单， 耗时短， 成本低， 有效的 减缓了超滤膜的压力， 延长了超滤膜的寿命 ；
(3) 本发明使用卷式超滤膜进行纯化， 超滤膜的截留分子量为 1000-3500Da， 柿叶 中黄酮的分子量均小于 1000， 能充分的透过超滤膜， 并且操作安全、 简单， 生产耗时短， 操作 过程不需要使用任何溶剂， 大大的降低成本。解决了大孔树脂纯化操作周期长， 洗脱次数 多， 乙醇洗脱、 回收损耗大、 成本高、 操作麻烦的缺陷 ；
(4) 本发明使用 RO 复合反渗透膜进行脱水， 将超滤膜与 RO 反渗透膜串联使用， 操 作安全、 简单， 耗时短， 操作过程不需要使用任何溶剂， 大大的降低成本。 解决了常规浓缩耗 时长， 成本高的缺陷。 具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的阐述， 但本发明的内容完全不局限于此。
实施例 1
一种从柿叶提取含量≥ 85-98％的柿叶黄酮的方法， 包括如下步骤 ：
1、 前处理 ： 取干柿叶， 剔除杂质， 霉变柿叶， 并将柿叶破碎 ；
2、 提取 ： 取破碎好的柿叶， 加入干净的微波提取器中， 并加入 3 倍量已用 5％氢氧 化钠调 PH ＝ 12 的碱水， 开启微波提取器， 设定功率 1500W， 温度 40℃， 提取时间 20min， 提取 次数 2 次， 将提取液过滤， 待用 ；
3、 壳聚糖絮凝澄清剂的配制 ： 用 1％的醋酸配制 1％的壳聚糖醋酸溶液 ；
4、 絮凝澄清剂除杂 ： 用 5％的盐酸调节提取液的 PH ＝ 6， 加入 1％壳聚糖溶液， 使 提取液中壳聚糖浓度为 0.2％， 一边加一边搅拌， 搅拌 10min 后， 静置 60min， 过滤， 收集澄清 液；
5、 滤液过超滤膜纯化和 RO 反渗透膜脱水 ： 所述超滤膜为卷式膜， 截留分子量为 1000Da， 过程温度为 35℃， 压力为 ： 0.6MPa ； 料液流速为 40L/h ； RO 反渗透膜为复合膜， 过程 温度为 35℃， 压力为 10MPa， 料液流速为 80L/h
6、 调节 PH 值 ： 用 5％的盐酸调节浓缩液 PH 值＝ 4.5 ；
7、 乙酸乙酯萃取 ： 将已经调节好 PH 值的浓缩液放入萃取罐， 加入 2 倍浓缩液体积 的乙酸乙酯， 萃取 3 次， 每次萃取时间 30min， 收集乙酸乙酯液 ；
8、 浓缩 ： 将所得的乙酸乙酯液在真空条件下进行浓缩， 浓缩温度为 45℃， 真空度 为： -0.08MPa ；
9、 干燥 ： 将 所 得 的 浓 缩 液 采 用 微 波 真 空 干 燥 器 干 燥， 温 度 为 45 ℃， 真空度 为 -0.08MPa， 得到含量为 98％的柿叶黄酮提取物。
实施例 2
1、 前处理 ： 取干柿叶， 剔除杂质， 霉变柿叶， 并将柿叶破碎 ；
2、 提取 ： 取破碎好的柿叶， 加入干净的微波提取器中， 并加入 2 倍量已用饱和石灰 水调 PH ＝ 10 的碱水， 开启微波提取器， 设定频率 2000W， 温度 50℃， 提取时间 30min， 提取次 数 3 次， 将提取液过滤， 待用 ；
3、 101 絮凝澄清剂的配制 ： 101 絮凝澄清剂用纯水配制成 5％的溶液， 静置 24h， 作 为A液； 助剂用纯水配制成 5％的溶液， 静置 24h， 作为 B 液
4、 絮凝澄清剂除杂 ： 用 5％的盐酸调节提取液的 PH ＝ 7， 加入提取液体积 5％的已 配制好的 101 絮凝澄清剂 A 液， 提取液体积 0.05％的已配制好的 B 液， 一边加一边搅拌， 搅 拌 10 分钟之后， 静置 30min， 过滤， 收集澄清液 ；
5、 过 超 滤 膜 纯 化 和 RO 反 渗 透 膜 脱 水 ： 所 述 超 滤 膜 为 卷 式 膜， 截留分子量为 2500Da， 过程温度为 25℃， 压力为 ： 0.4MPa ； 料液流速为 50L/h ； RO 反渗透膜为复合膜， 过程 温度为 25℃， 压力为 8MPa， 料液流速为 50L/h6、 调节 PH 值 ： 用 5％的盐酸调节浓缩液 PH 值＝ 4 ；
7、 乙酸乙酯萃取 ： 将已经调节好 PH 值的浓缩液放入萃取罐， 加入 3 倍浓缩液体积 的乙酸乙酯， 萃取 2 次， 每次萃取时间 60min， 收集乙酸乙酯液 ；
8、 浓缩 ： 将所得的乙酸乙酯液在真空条件下进行浓缩， 浓缩温度为 55℃， 真空度 为： -0.07MPa ；
9、 干燥： 将 所 得 的 浓 缩 液 采 用 微 波 干 燥 器 干 燥， 温 度 为 55 ℃， 真空度 为： -0.07Mpa， 得到含量为 93％的柿叶黄酮提取物。
实行施例 3
1、 前处理 ： 取干柿叶， 剔除杂质， 霉变柿叶， 并将柿叶破碎 ；
2、 提取 ： 取破碎好的柿叶， 加入干净的微波提取器中， 并加入 7 倍量已用氢氧化钠 调 PH ＝ 14 的碱水， 开启微波提取器， 设定频率 700W， 温度 30℃， 提取时间 60min， 提取次数 4 次， 将提取液过滤， 待用 ；
3、 ZTC1+1 絮凝澄清剂的配制 ： A 组分用纯水配制成 0.5％的溶液， 溶胀 24h， 备用 ； B 组分用 1％的醋酸配制成 1％的溶液， 溶胀 24h， 备用
4、 絮凝澄清剂除杂 ： 用 5％的盐酸调节提取液的 PH ＝ 5， 加入提取液体积 2％的 A 组分， 稍微搅拌， 然后加入提取液体积 2％的 B 组分， 搅拌 10 分钟， 静置的已配制好的 101 絮 凝澄清剂 A 液， 提取液体积 0.05％的已配制好的 B 液， 一边加一边搅拌， 搅拌 10min 后， 静置 150min， 过滤， 收集澄清液 ； 5、 过 超 滤 膜 纯 化 和 RO 反 渗 透 膜 脱 水 ： 所 述 超 滤 膜 为 卷 式 膜， 截留分子量为 3500Da， 过程温度为 45℃， 压力为 ： 0.8MPa ； 料液流速为 60L/h ； RO 反渗透膜为复合膜， 过程 温度为 45℃， 压力为 12MPa， 料液流速为 100L/h
6、 调节 PH 值 ： 用 5％的盐酸调节浓缩液 PH 值＝ 5 ；
7、 乙酸乙酯萃取 ： 将已经调节好 PH 值的浓缩液放入萃取罐， 加入 5 倍量浓缩液体 积的乙酸乙酯， 萃取 5 次， 每次萃取时间 90min， 收集乙酸乙酯液 ；
8、 浓缩 ： 将所得的乙酸乙酯液在真空条件下进行浓缩， 浓缩温度为 65℃， 真空度 为： -0.06MPa ；
9、 干燥 ： 将 所 得 的 浓 缩 液 采 用 微 波 真 空 干 燥 器 干 燥， 温 度 为 35 ℃， 真空度 为： -0.06Mpa， 得到含量为 87％的柿叶黄酮提取物。
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