包含 AURORA 激酶抑制剂和抗肿瘤药的治疗组合 技术领域 本发明一般涉及癌症治疗领域， 更具体地， 提供一种具有协同或加合抗肿瘤效果 的抗肿瘤组合物， 包含 aurora 激酶抑制剂和铂衍生物和 / 或抗代谢药和 / 或拓扑异构酶 I 抑制剂和 / 或抗微管剂。
背景技术 蛋白激酶 (PK) 的功能障碍是很多疾病的标志。大部分癌基因和原癌基因都与 PK 的人癌编码有关。 PK 的活性增强也涉及很多非恶性疾病， 例如良性前列腺增生、 家族性腺瘤 病、 息肉病、 神经纤维瘤病、 银屑病、 与动脉粥样硬化有关的血管平滑细胞增殖、 肺纤维化、 关节炎、 肾小球肾炎及手术后狭窄和再狭窄。
PK 也与炎性疾病以及病毒和寄生虫的繁殖有关。PK 也在神经变性疾病的发病机 制和发生中发挥主要作用。
对于 PK 功能障碍或失调的一般参考， 参见， 例如 Current Opinionin Chemical Biology， 1999， 3， 459-465。
本领域已知的与癌细胞生长有关的几种激酶是 Aurora 激酶， 特别是 Aurora-2。
人们发现， Aurora-2 在很多不同的肿瘤类型中过度表达。在很多癌症包括乳腺癌 [Cancer Res.1999， 59(9)， 2041-4] 和结肠癌中， 其基因位图常在 20q 13( 一个染色体区 ) 处扩增。
20q13 扩增与瘤 - 阴性的乳腺癌患者中预后不良有关， Aurora-2 表达增加表明预 后不良并会减少膀胱癌患者的存活时间 [J.Natl.Cancer Inst.， 2002， 94(17)， 1320-9]。 对 于 Aurora-2 在 癌 症 的 中 心 体 功 能 异 常 中 的 作 用 的 一 般 参 考， 也 可 参 见 Molecular CancerTherapeutics， 2003， 2， 589-595。
本 领 域 已 知 数 种 杂 环 化 合 物 是 蛋 白 激 酶 抑 制 剂， 其 中， 在国际专利申请 WO01/12189、 WO12188、 WO02/48114 和 WO02/70515 中已经披露了 3- 甲酰氨基 - 吡唑和 3- 脲 基 - 吡唑及其衍生物是蛋白激酶抑制剂。
在 WO 00/69846、 WO 02/12242、 WO 03/028720 和 WO 03/97610 中也已经披露了包 含吡唑部分且具有激酶抑制活性的稠合双环化合物。
已 经 披 露， 特 殊 的 四 氢 吡 咯 并 [3， 4-c] 吡 唑 衍 生 物 是 Aurora 激 酶 的 有 效 的 ATP- 竞争性抑制剂 (Fancelli， D. 等人 ： Journal ofMedicinal Chemistry.2005， vol.48， no.8， p.3080-3084.PCT/WO2005005427)。
令人惊奇地， 已经发现， 当与某些抗肿瘤药组合施用时， 可以增强上述四氢吡咯并 [3， 4-c] 吡唑衍生物的抗肿瘤效果， 即， 特别是能延缓增殖性疾病进程或治疗增殖性疾病、 特别是治疗对其他已知为抗肿瘤药的化学治疗药耐受的肿瘤。特别地， 这种组合的抗肿瘤 效果大于单独使用任一组合组分所能达到的效果， 即大于仅用一种组合组分的单一治疗的 效果。
因此， 本发明提供四氢吡咯并 [3， 4-c] 吡唑衍生物与已知药物的新组合， 该组合
特别适合于治疗增殖性疾病， 尤其是癌症。 更具体地， 本发明的组合作为抗肿瘤药在治疗中 是特别有用的， 没有毒性和副作用， 而毒性和副作用正是与当前使用的抗肿瘤药有关的缺 点。 发明内容
在第一个方面， 本发明提供一种治疗组合， 其包含 (a) 式 (A) 的化合物 1 ：
和 (b) 一种或多种选自铂衍生物、 抗代谢药、 拓扑异构酶 I 抑制剂和抗微管剂的抗 肿瘤药， 其中在各情况下活性成分以游离形式或以其药学可接受的盐或任意水合物的形式 存在。
本发明还提供用于同时、 分开或依次使用上述组合的组合制剂。
本发明还提供一种包含上述组合的药物组合物， 所述组合还与药学可接受的载 体、 稀释剂或赋形剂混合。
本发明还提供一种治疗增殖性疾病或延缓增殖性疾病的进程的方法， 包括给有此 需要的患者施用治疗有效量的上述组合。
具体实施方式
在第一个实施方案中， 本发明提供治疗组合， 其包含 (a) 式 (A) 的化合物 1 ：
和 (b) 一种或多种选自铂衍生物、 抗代谢药、 拓扑异构酶 I 抑制剂和抗微管剂的抗肿瘤药， 其中在各情况下活性成分以游离形式或以其药学可接受的盐或任意水合物的形式 存在。
在另一个实施方案中， 本发明的组合是用于同时、 分开或依次使用的组合制剂。
另一个实施方案涉及在治疗增殖性疾病或延缓增殖性疾病的进程的方法中的本 发明的组合， 其中该方法包括给有此需要的受试者同时、 依次或分开地施用该治疗组合。
在再一个实施方案中， 本发明提供一种药物组合物， 包含该治疗组合与药学可接 受的载体、 稀释剂或赋形剂混合。
再一个实施方案涉及如上定义的式 (A) 的化合物 1 在制备治疗增殖性疾病的药物 中的应用， 其中所述治疗包括给受试者同时、 依次或分开地施用如上定义的式 (A) 的化合 物 1 和一种或多种选自铂衍生物、 抗代谢药、 拓扑异构酶 I 抑制剂和抗微管剂的抗肿瘤药。
式 (A) 的化合物 1 具有化学名称 N-{5-[(2R)-2- 甲氧基 -2- 苯乙酰基 ]-1， 4， 5， 6- 四氢吡咯并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 基 }-4-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 苯甲酰胺。它可以如 WO2005/005427( 通过参考引入本文 ) 所述来制备， 具有蛋白激酶抑制活性， 因此可以作为 抗肿瘤药用于治疗。
式 (A) 的化合物 1 的药学可接受的盐包括与无机或有机酸的酸加成盐， 这些酸是 例如， 硝酸、 盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 高氯酸、 磷酸、 乙酸、 三氟乙酸、 丙酸、 羟乙酸、 乳酸、 草酸、 丙 二酸、 苹果酸、 马来酸、 甲磺酸、 酒石酸、 柠檬酸、 苯甲酸、 肉桂酸、 扁桃酸、 甲烷磺酸、 羟乙磺 酸和水杨酸等。
根据本发明一个优选的实施方案， 铂衍生物选自顺铂、 奥沙利铂、 卡铂、 奈达铂、 洛 的商标的市售形式施用。 根据本发明一个更优选的实施方案， 铂衍生物是顺铂或奥沙利铂。 抗代谢药包括但不限于， 5- 氟尿嘧啶 (5-FU)、 卡培他滨、 吉西他滨、 阿糖胞苷 的商标的市售 的商标的市售形式施用。 培美曲塞可以例如以铂和沙铂。奥沙利铂可以例如以如
(Ara-C)、 培美曲塞、 甲氨蝶呤和依达曲沙。卡培他滨可以例如以如 形式施用。 吉西他滨可以例如以如 如
的商标的市售形式施用。 根据本发明一个更优选的实施方案， 抗代谢药是吉西他滨、 5-FU 或 Ara-C。 拓扑异构酶 I 抑制剂包括但不限于， 托泊替康、 伊立替康、 SN-38 和 9- 硝基喜树 的商标的市售形式施用。 托泊替康可以例如以如 的商标的市售形式施用。SN-38 是伊立替康的活性代谢产物， 通过伊立替康的碱。 伊立替康可以例如以如体内水解获得。
根据本发明一个更优选的实施方案， 拓扑异构酶 I 抑制剂是伊立替康或 SN 38。
抗微管剂包括但不限于， 紫杉醇、 多西他赛和埃坡霉素衍生物。 紫杉醇可以例如以 如 施用。
的商标的市售形式施用。 多西他赛可以例如以如的商标的市售形式根据本发明一个更优选的实施方案， 抗微管剂是多西他赛和紫杉醇。 在本发明中， 该组合的各活性成分是以有效产生协同的抗肿瘤效果的量提供的。本发明也提供一种在有此需要的哺乳动物包括人中减轻由采用抗肿瘤药的抗肿 瘤治疗导致的副作用的方法， 该方法包括以有效产生协同抗肿瘤效果的量给所述哺乳动物 施用组合制剂， 该组合制剂包含上述定义的式 (A) 的化合物 1 和一种或多种选自铂衍生物、抗代谢药、 拓扑异构酶 I 抑制剂和抗微管剂的抗肿瘤药。
本文使用的术语 “协同抗肿瘤效果” 是指通过给哺乳动物 ( 包括人 ) 施用有效量 的如上定义的式 (A) 的化合物 1 与铂衍生物、 抗代谢药、 拓扑异构酶 I 抑制剂或抗微管剂的 组合， 抑制肿瘤的生长， 优选使肿瘤完全消退。
本文使用的术语 “组合制剂” 在一定意义上特别定义为 “试剂盒的一部分” ， 如上定 义的组合组分 (a) 和 (b) 可以独立地给药， 或者使用不同量的组合组分 (a) 和 (b) 的不同 固定组合， 即， 同时或在不同时间点给药。 然后可以例如同时或时间交错地施用试剂盒的各 部分的组分， 也就是说， 在不同时间点、 以相同或不同的时间间隔来施用试剂盒的各部分的 任意组分。 最优选地， 选择时间间隔， 使得组合使用各部分对所治疗疾病的治疗效果大于仅 使用组合组分 (a) 和 (b) 的任一种所得到的治疗效果。在该组合制剂中， 所施用的组合组 分 (a) 与组合组分 (b) 的总量的比例可以不同， 例如为了满足所要治疗的患者亚群的需要 或单个患者的需要， 不同的需要可取决于患者的具体疾病、 年龄、 性别、 体重等。优选地， 具 有至少一种有益效果， 例如共同增强作为组合对的 (a) 和 (b) 的效果， 特别是协同效果， 例 如， 大于加合效果， 其他的有益效果， 副作用较小， 毒性较小， 或者在组合组分 (a) 和 (b) 的 一种或两种的非有效剂量下得到组合治疗的效果， 特别优选是组合组分 (a) 和 (b) 的强的 协同作用。 本文使用的术语 “施用” 是指胃肠外和 / 或口服施用。 “胃肠外” 是指静脉内、 皮下 或肌内施用。
在本发明的方法中， 对于施用式 (A) 的化合物， 一般使用的治疗过程是在以体表 2 2 面积计 100mg/m / 日 -1500mg/m / 日的范围， 最多连续 21 天。更优选地， 所使用的治疗过程 2 2 是在以体表面积计约 150mg/m / 日 - 约 350mg/m / 日的范围， 最多连续 21 天。
在 一 个 特 别 优 选 的 方 案 中， 式 (A) 的 化 合 物 以 体 表 面 积 计 190 或 250mg/m2/ 日的剂量， 在三周周期的第 1 和第 8 天输注 3 小时。例如， 在 2008 年 5 月 8 日公开的 WO2008/052931( 通过参考引入本文 ) 中公开了其他可能的治疗方案。
式 (A) 的化合物可以以各种剂型施用， 例如口服施用时， 以片剂、 胶囊、 糖或薄膜 包衣片、 液体溶液或混悬液的形式 ； 直肠施用时， 以栓剂的形式 ； 胃肠外施用时， 例如以肌 内， 或通过静脉和 / 或鞘内和 / 或脊椎内注射或输注的形式。
在本发明的方法中， 对于施用铂衍生物， 优选卡铂， 一般使用的治疗过程取决于全 身暴露 ( 表示为 AUC 值 )、 患者的肾功能和施用方案。一般采用目标为在 1-4 周的治疗计划 中 AUC 为 2-6 的方案。更优选地， 使用目标为在 4 周的治疗计划中 AUC 为 4-6 的方案。对 于施用奥沙利铂， 一般使用的治疗过程是每 2-3 周 10mg/m2/ 日 -100mg/m2/ 日。更优选地， 一般使用的治疗过程是在第 1 天为约 30mg/m2/ 日 -85mg/m2/ 日， 每 2 周 1 次。
对于施用抗代谢药， 优选吉西他滨， 一般使用的治疗过程是每周施用 200mg/m2/ 日 -2000mg/m2/ 日。更优选地， 一般使用的治疗过程是在 21 天周期的第 1 天和第 8 天， 或 2 2 者在 28 天周期的第 1 天、 第 8 天和第 15 天时施用约 800mg/m / 日 -1250mg/m / 日。
对于施用拓扑异构酶 I 抑制剂， 优选托泊替康， 一般使用的治疗过程是每日 2 2 0.1mg/m -2mg/m ， 连续 2-10 天。更优选地， 一般使用的治疗过程是在 21 天周期中每日约 2 2 0.5mg/m -1.5mg/m ， 连续 3-5 天。
对于施用伊立替康， 一般使用的治疗过程是在 6 周周期的第 1、 8、 15 和 22 天， 每日
50mg/m2-350mg/m2。更优选地， 一般使用的治疗过程是在 6 周周期的第 1、 8、 15 和 22 天， 每 2 2 日约 125mg/m -180mg/m 。
对于施用抗微管剂， 优选多西他赛， 一般使用的治疗过程是每 3 周约 50mg/m2/ 日 -100mg/m2/ 日、 或者每周 20mg/m2/ 日 -100mg/m2/ 日。优选地， 施用是在 3 周周期的第 1 天和第 8 天进行 3 小时输注。
本发明的抗肿瘤治疗特别适合于治疗任何形式的癌症， 包括但不限于 ： 癌， 例如膀 胱癌、 乳腺癌、 结肠癌、 肾癌、 肝癌、 肺癌 ( 包括小细胞肺癌 )、 食道癌、 胆囊癌、 卵巢癌、 胰腺 癌、 胃癌、 宫颈癌、 甲状腺癌和皮肤癌 ( 包括鳞状细胞癌 ) ； 淋巴系的造血性肿瘤， 包括白血 病、 急性淋巴细胞性白血病、 急性成淋巴细胞性白血病、 B 细胞淋巴瘤、 T 细胞淋巴瘤、 何杰 金淋巴瘤、 非何杰金淋巴瘤、 外套细胞淋巴瘤、 毛细胞淋巴瘤和 Burkett 淋巴瘤 ； 骨髓系的 造血性肿瘤， 包括急性和慢性髓性白血病、 骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞白血病 ； 多发 性骨髓瘤 ； 间质细胞来源的肿瘤， 包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤 ； 中枢和外周神经系统的肿 瘤， 包括星细胞瘤、 成神经细胞瘤、 神经胶质瘤和神经鞘瘤 ； 其他肿瘤， 包括黑素瘤、 精原细 胞瘤、 畸胎瘤、 骨肉瘤、 着色性干皮病、 角质黄瘤 (keratoxanthoma)、 甲状腺囊癌和卡波西肉 瘤。 如上所述， 本发明的组合的效果显著增强， 同时毒性并没有相应增强。换句话说， 本发明的组合治疗增强了本发明组合的组分 (a) 和 / 或组分 (b) 的抗肿瘤效果， 因此得到 了最有效和毒性较小的肿瘤治疗方法。
本发明的药物组合物可用于抗癌治疗。
本发明还提供一种商业包装， 在适当的容器装置中包含 (a) 如上述定义的式 (A) 的化合物和 (b) 一种或多种选自铂衍生物、 抗代谢药、 拓扑异构酶 I 抑制剂和抗微管剂的抗 肿瘤药， 以及用于同时、 分开或依次使用的说明书， 其中在各情况下活性成分以游离形式或 以其药学可接受的盐或任意水合物的形式存在。
在本发明的包装中， 配对组分 (a) 和 (b) 存在于单个容器装置中或分别存在于不 同的容器装置中。
本发明的另一个实施方案是一种商业包装， 其包含如上所述的药物组合物或产 品。
由于 aurora 激酶蛋白在调节细胞有丝分裂和增殖中的关键作用， 本发明的组合 也可以用于治疗各种细胞增殖性疾病， 例如， 良性前列腺增生、 家族性腺瘤病、 息肉病、 神经 纤维瘤病、 银屑病、 与动脉粥样硬化有关的血管平滑细胞增殖、 肺纤维化、 关节炎、 肾小球肾 炎及手术后狭窄和再狭窄。
本发明的组合作为细胞凋亡的调节剂， 也可以用于治疗癌症、 病毒感染、 在感染 HIV 的个体中防止 AIDS 发生、 自身免疫性疾病和神经变性疾病。
例如， 通过下列的体外和体内试验显示了本发明的组合的活性， 它们是用于解释 而非限制本发明。
实施例 1 ： 体外细胞毒性活性试验的材料和方法
接种指数级生长的人卵巢癌 (A2780) 和 / 或人结肠癌 (HCT-116) 细胞株， 并在 37℃和潮湿的 5％ CO2 的大气下培养。 向实验培养基中加入药物， 并在黑暗中在 37℃下培养 72 小时。 在接种 24 小时后向该培养基中加入数个剂量的上述定义的式 (A) 的化合物 1 和抗
肿瘤药。试验下列治疗方案中的一个或全部 ： 同时施用 ( 两种药物施用于细胞 72 小时 ) 和 依次施用 ( 施用另一种药物 24 小时后施用化合物 1)。 临用前制备药物溶液。 在治疗结束时， 通过细胞内三磷腺苷监测系统 (CellTiterGlo-Promega)， 使用 Envision(PerkinElmer) 作 为读数器来测定细胞增殖。用 Assay Explorer(MDL) 程序比较治疗组和对照组的数据来 评价抑制活性。用 S 型插值曲线来计算抑制 50％细胞生长的剂量。基于用于互不排斥药 物的 Chou-Talalay 方程 (Adv Enzyme Regul1984 ； 22 ： 27-55)， 使用用于多种药物效果分 析的计算机程序来计算组合指数 (C.I.)， 其中 C.I. ＜ 1 表示大于加合效果 (C.I. ＞ 3 表 示强的拮抗作用 ； 1.3 ＜ C.I. ＜ 3， 表示拮抗作用 ； 0.8 ＜ C.I. ＜ 1.3， 表示加合作用 ； 0.3 ＜ C.I. ＜ 0.8， 表示协同作用 ； C.I. ＜ 0.3， 表示强的协同作用 )。
实施例 2 ： 与顺铂的组合的体外细胞毒性活性
表 1 所示的结果表明， 对于人卵巢癌 A2780 和人结肠癌 HCT-116 细胞株， 组合施用 化合物 1 与顺铂产生了协同抗肿瘤效果。
实施例 3 ： 与奥沙利铂的组合的体外细胞毒性活性
表 2 所示的结果表明， 对于人结肠癌 HCT-116 细胞株， 组合施用化合物 1 与奥沙利 铂产生了协同抗肿瘤效果。
实施例 4 ： 与 5-FU 的组合的体外细胞毒性活性
表 3 所示的结果表明， 对于人结肠癌 HCT-116 细胞株， 组合施用化合物 1 与 5-FU 产生了协同抗肿瘤效果。
实施例 5 ： 与 SN38 的组合的体外细胞毒性活性
表 4 所示的结果表明， 对于人卵巢癌 A2780 细胞株， 组合施用化合物 1 与拓扑异构 酶 I 抑制剂 SN 38 产生了协同抗肿瘤效果。
实施例 6 ： 与 AraC 的组合的体外细胞毒性活性
表 5 所示的结果表明， 对于人结肠癌 HCT-116 细胞株， 组合施用化合物 1 与 AraC 产生了协同抗肿瘤效果。
实施例 7 ： 与吉西他滨的组合的体内抗肿瘤效力
将来自 Harlan( 意大利 ) 的 Balb， Nu/Nu 雄性小鼠保持于带有过滤纸覆盖物的笼 中， 将食物和睡具消毒， 并将水酸化。在裸鼠中皮下接种 BX-PC3 人胰腺癌肿瘤片段。选择 该肿瘤模型是因为人们先前已经证明， 它对于吉西他滨是敏感的， 同时也是因为吉西他滨 是胰腺癌的标准治疗药。当肿瘤可触知时， 在接种肿瘤后第 9 天开始用吉西他滨治疗。在 临治疗前制备化合物。
连续 9 天 ( 第 9， 10， 11， 12， 13， 14， 15， 16 和 17 天 )， 以 10ml/kg 的体积， 15mg/kg 的剂量， 每日 2 次 (BI D)， 通过腹腔途径施用式 (A) 的化合物 1。每 4 天 3 次 ( 在第 9、 13、 17 天 )， 以 10ml/kg 的体积， 80mg/kg 的剂量静脉施用吉西他滨。当组合施用这两种化合物 时， 在第 9、 13、 17 天施用吉西他滨， 在施用吉西他滨后的 3 天里施用化合物 1。每 3 天测定 肿瘤生长和体重。通过测径器评价肿瘤生长。记录两个直径， 根据下式计算肿瘤重量 ： 长度 2 (mm)× 宽度 /2。用抑制肿瘤生长的百分比 (TGI％ ) 来评价抗肿瘤治疗的效果。基于体重 减轻来评价毒性。结果在表 6 中报告。化合物 1 与抗代谢药吉西他滨的组合施用产生了加 合 / 协同效果。
* 在第 9-17 天腹膜内治疗 2 次 ** 在第 9、 13、 17 天静脉内治疗 *** 在第 9、 13、 17 天吉西他滨治疗 ； 在第 10， 11， 12， 14， 15， 16， 18， 19， 20 天化合物1 治疗 实施例 8 ： 与顺铂的组合的体内抗肿瘤效力
将来自 Harlan( 意大利 ) 的 Balb， Nu/Nu 雄性小鼠保持于带有过滤纸覆盖物的 笼中， 将食物和睡具消毒， 并将水酸化。A2780 人卵巢癌细胞是从 American Type Culture Collection(Rockville， MD) 购得的， 并在 37℃、 5％ CO2 下保持在体外， 作为在补充有 10％
FBS 的 RPMI 培养基中的连续培养物。为进行体内实验， 在裸鼠中皮下接种 8×106 个 A2780 细胞。选择该肿瘤模型是因为它对于铂衍生物是敏感的， 同时也是基于该药物在治疗卵巢 癌中的应用。
当肿瘤可触知时 ( 第 13 天 ) 开始治疗。在临治疗前制备这两种化合物。
从第 13 天至第 17 天， 以 10ml/kg 的体积， 15mg/kg 的剂量， 每日 2 次 (BID)， 通过 腹腔途径施用式 (A) 的化合物 1。在第 5 天以 10ml/kg 的体积、 8mg/kg 的剂量， 通过静脉内 途径施用顺铂。当组合施用这两种化合物时， 在第 1 至 5 天施用化合物 1， 在第 17 天施用顺 铂。每 3 天测定肿瘤生长和体重。通过测径器评价肿瘤生长。记录两个直径， 根据下式计 2 算肿瘤重量 ： 长度 (mm)× 宽度 /2。在接种肿瘤后第 37 天， 即开始治疗后的第 24 天处死动 物， 将肿瘤称重。用治疗组相对于对照组的抑制肿瘤生长的百分比来评价抗肿瘤治疗的效 果。基于体重减轻来评价毒性。结果在表 7 中报告。
* 在第 13， 14， 15， 16， 17 天 ip 治疗 2 次。
** 在第 17 天通过静脉内途径治疗。
*** 第 17 天 ： 顺铂治疗， 第 13-17 天 ： 化合物 1 治疗。
式 (A) 的化合物 1 与烷化剂顺铂的组合治疗产生了明显的协同效果。并且在任何 治疗组中均未观察到毒性。
实施例 9 ： 与伊立替康的组合的体内抗肿瘤效力
将来自 Harlan( 意大利 ) 的 Balb， Nu/Nu 雄性小鼠保持于带有过滤纸覆盖物的 笼中， 将食物和睡具消毒， 并将水酸化。A2780 人卵巢癌细胞是从 American Type Culture Collection(Rockville， MD) 购得的， 并在 37℃、 5％ CO2 下保持在体外， 作为补充有 10％ FBS 的 RPMI 培养基中的连续培养物。为进行体内实验， 在裸鼠中皮下接种 8×106 个 A2780 细
胞。选择该肿瘤模型是因为它对于铂衍生物是敏感的， 同时也是基于该药物在治疗卵巢癌 中的应用
当肿瘤可触知时 ( 第 13 天 ) 开始治疗。在临治疗前制备这两种化合物。
从第 13 天至第 17 天， 以 10ml/kg 的体积， 30mg/kg 的剂量， 每日 2 次 (BID)， 通过 腹腔途径施用式 (A) 的化合物 1。在第 1 天以 10ml/kg 的体积、 60mg/kg 的剂量， 通过静脉 内途径施用伊立替康。当组合施用这两种化合物时， 在第 1 至 5 天施用化合物 1， 在第 1 天 施用伊立替康。每 3 天测定肿瘤生长和体重。通过测径器评价肿瘤生长。记录两个直径， 根据下式计算肿瘤重量 ： 长度 (mm)× 宽度 2/2。在接种肿瘤后第 37 天， 即开始治疗后的第 24 天处死动物， 将肿瘤称重。用治疗组相对于对照组的抑制肿瘤生长的百分比来评价抗肿瘤治疗的效果。基于体重减轻来评价毒性。结果在表 8 中报告。
* 在第 13， 14， 15， 16， 17 天 ip 治疗 2 次。
** 在第 13 天通过静脉内途径治疗。
*** 第 13 天 ： 伊立替康治疗， 第 13-17 天 ： 化合物 1 治疗。
式 (A) 的化合物 1 与拓扑异构酶 I 抑制剂伊立替康的组合治疗产生了明显的协同 效果。并且在任何治疗组中均未观察到毒性。
实施例 10 ： 与多西他赛的组合的体内抗肿瘤效力
将来自 Harlan( 意大利 ) 的 Balb， Nu/Nu 雄性小鼠保持于带有过滤纸覆盖物的 笼中， 将食物和睡具消毒， 并将水酸化。在裸鼠中皮下注射 2.5×106 个 DU145 前列腺癌 细胞 ( 来自 American Type CultureCollection)。选择该肿瘤模型是因为先前已经证 明， 多西他赛抑制体内模型生长 ( 参见文献 ： Cancer Res.2004Oct 15， (64) ： 7426-31)， 同时也是基于该药物在治疗前列腺癌中的应用 ( 参见文献 ： Approvalsummary ： docetaxel in combination with prednisone for thetreatment of androgen-independent hormone-refractory pros tatecancer ， Clin.Cancer Re s.2004Dec 15 ； 10(24) ： 8147-51)。
当肿瘤可触知时， 在注射肿瘤细胞 10 天后开始治疗。根据化合物已知的稳定性， 多西他赛是在临治疗前制备的， 式 (A) 的化合物 1 是每天制备的。
以 10ml/kg 的体积， 30mg/kg 的剂量， 每日 2 次 (BID)， 通过腹腔途径施用化合物 1， 共 9 天 ( 第 10 至 18 天 )。在细胞注射后的第 10、 14、 18 天， 以 10ml/kg 的体积、 7.5mg/kg 的剂量， 通过静脉内途径施用多西他赛。 当组合施用这两种化合物时， 在多西他赛治疗的间 隔期， 即在第 11， 12， 13， 15， 16， 17， 19， 20 和 21 天， 施用化合物 1。每 3 天测定肿瘤生长和 体重。通过测径器评价肿瘤生长。记录两个直径， 根据下式计算肿瘤重量 ： 长度 (mm)× 宽 2 度 /2。用延迟肿瘤指数式生长的发生来评价抗肿瘤治疗的效果 ( 参见文献 ： Anticancer
drugs7 ： 437-60， 1996)。延迟 (T-C 值 ) 定义为治疗组 (T) 和对照组 (C) 的肿瘤达到预定大 小 (1g) 所需的时间差 ( 单位 ： 天 )。基于体重减轻来评价毒性。结果报告于下表。式 (A) 的化合物 1 与多西他赛的组合施用产生了明显的协同效果 ： 化合物 1 与多西他赛组合施用 时观察到的 T-C(11.5 天 ) 好于预期的单一治疗获得的 T-C 的简单加合 (9 天 )。并且在任 何治疗组中均未观察到毒性。结果报告于表 9。
* 在第 10-18 天腹膜内治疗 2 次。 ** 在第 10， 14， 18 天通过静脉内途径治疗 *** 第 10， 14， 18 天 ： 多西他赛治疗， 第 11， 12， 13， 15， 16， 17， 19， 20 和 21 天 ： 化合物 1 治疗14