新三萜化合物五内酯H及其提取分离方法.pdf

本发明提供一种新三萜化合物五内酯H及其提取分离方法，新三萜化合物五内酯H是从华中五味子果实中分离得到的，其结构新颖，提取分离方法简易，且所得化合物含量相对较高，有利于对其进行进一步的药理研究，为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤及抗HIV药物创造了条件。新三萜化合物五内酯H具有如上结构式。

1.  一种新三萜化合物五内酯H，其化学结构式如下：


2.  一种如权利要求1所述化合物的制备方法，其特征是经过下列步骤：
A、将五味子原料粉碎后，按五味子∶丙酮水溶液＝1∶2～4的质量/体积比，将五味子放入浓度为70％的丙酮水溶液中，室温下浸泡15～30小时后，得提取液，如此重复提取2～3次，合并提取液；
B、将上述A步骤所得提取液减压蒸馏至无丙酮味后，按提取液∶乙酸乙酯＝1∶1的体积比，于室温下，用乙酸乙酯对上述A步骤的提取液进行2～3次的萃取，得乙酸乙酯浸膏；
C、将上述B步骤的乙酸乙酯浸膏上硅胶柱进行层析分离，用氯仿∶丙酮＝1～0∶1的体积比的洗脱剂进行洗脱，除去杂质后，得粗分离物；
D、将上述C步骤的粗分离物先后以石油醚∶丙酮＝30∶1的体积比的洗脱剂、氯仿∶丙酮＝50∶1的体积比的洗脱剂进行硅胶柱层析和洗脱2～5次，除去杂质后，得化合物五内酯H。

新三萜化合物五内酯H及其提取分离方法
技术领域
本发明涉及一种新三萜化合物及其提取分离方法，属于植物化学领域。
背景技术
由于五味子科(Schisandraceae)植物中富含具有广泛生物活性的木脂素类化合物，因此其研究倍受关注。近年来，研究者从该科植物中发现了一系列三萜类化合物，许多三萜类化合物具有抗肿瘤和抗HIV活性。
从长梗南五味子(Kadsura longipedunculata)中分离得到的Kadlongilactone A和B，均能显著抑制人体K562肿瘤细胞生长，其IC₅₀值分别为1.40和1.71μgmL^-1，与阳性对照顺铂的活性相当；从该植物中分离得到的Longipedlactone A、B、C、F和H对A549，HT-29和K562均表现出明显的细胞毒作用，其IC₅₀值在0.84-11.38μgmL^-1之间。
从长叶五味子(Schisandra lancifolia)中分离得到的三萜化合物lancifodilactone F和H均表现出抗HIV-1活性，其EC₅₀分别为20.69，16.6μgmL^-1，同时具有对C8166细胞的最低细胞毒作用(CC₅₀>200μgmL^-1)。从球蕊五味子(Schisandra sphaerandra)的茎叶中分离得到的nigranoic acid，是一个具有显著抑制HIV-1逆转录酶、聚合酶活性的三萜化合物。从五味子(Schisandra chinensis)中分离得到的6个高氧化度降三萜，五味子二内酯(wuweizidilactone)A-F表现出不同程度的抗HIV-1活性，其中五味子二内酯A和B的EC₅₀分别为26.81和28.86μgmL^-1(阳性对照：AZT的EC₅₀＝2.26μgmL^-1)。从红花五味子(Schisandra rubriflora)中分离得到的rubriflordilactone A和B表现出不同程度的抗HIV-1活性，前者活性相对较弱，而后者能抑制HIV-1复制，其EC₅₀值为9.75μgmL^-1，同时具有较低的细胞毒性；从该植物中分离得到的三萜化合物rubriflorins A-C也表现出不同程度的抗HIV-1活性，其EC₅₀分别为10.0，16.2和81.3μgmL^-1，同时CC₅₀值(C8166细胞)分别为89.1，100.3，以及>200μgmL^-1。
迄今为止，本发明所涉及的新三萜化合物尚未发现有专利或文献报道。
发明内容
本发明之目的在于提供一种新三萜化合物，具体是一种新三萜化合物五内酯H，以期寻找抗肿瘤或抗HIV活性强的化合物。
本发明地另一个目的在于提供上述新三萜化合物的提取分离方法。
本发明提供的新三萜化合物五内酯H(schisanlactone H)，其化学结构式如下：

本发明提供的新三萜化合物五内酯H(schisanlactone H)是从华中五味子Schisandrasphenanthera的果实中提取分离出来的，其工艺步骤是：
A、将五味子原料粉碎后，按五味子∶丙酮水溶液＝1∶2～4的质量/体积比，将五味子放入浓度为70％的丙酮水溶液中，室温下浸泡15～30小时后，得提取液，如此重复提取2～3次，合并提取液；
B、将上述A步骤所得提取液减压蒸馏至无丙酮味后，按提取液∶乙酸乙酯＝1∶1的体积比，于室温下，用乙酸乙酯对上述A步骤的提取液进行2～3次的萃取，得乙酸乙酯浸膏；
C、将上述B步骤的乙酸乙酯浸膏上硅胶柱进行层析分离，用氯仿∶丙酮＝1～0∶1的体积比的洗脱剂进行洗脱，除去杂质后，得粗分离物；
D、将上述C步骤的粗分离物先后以石油醚∶丙酮＝30∶1的体积比的洗脱剂、氯仿∶丙酮＝50∶1的体积比的洗脱剂进行硅胶柱层析和洗脱2～5次，除去杂质后，得化合物五内酯H。
本发明具有下列优点和效果：本发明提供的化合物结构新颖，提取分离方法简易，且所得化合物含量相对较高，有利于对其进行进一步的药理研究，为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤及抗HIV药物创造了条件。
附图说明
图1为五内酯H(1)的结构；
图2为五内酯H的HMBC图；
具体实施方式
实施例
以华中五味子(Schisandra sphenanthera)果实(干重8kg)为原料，按五味子∶丙酮水溶液＝1∶3的质量/体积比，用浓度为70％的丙酮水液于室温静置提取三次，每次24小时，丙酮用量为25L×3，合并三次提取液，减压浓缩至无丙酮味；按提取液∶乙酸乙酯＝1∶1的体积比，用乙酸乙酯对提取液进行3次萃取，回收后得浸膏145.9g；浸膏上硅胶柱层析后，用氯仿∶丙酮分别为：1∶0，9∶1，8∶：2，7∶3，6∶4，5∶：5，0∶1体积比的洗脱剂，进行七个梯度洗脱，分别得到A-H八个极性段，B段(即用氯仿∶丙酮＝9∶1洗脱的部分)先后以石油醚∶丙酮＝30∶1的体积比的洗脱剂、氯仿∶丙酮＝50∶1的体积比的洗脱剂进行硅胶柱层析，得化合物五内酯H(18mg)。
五内酯H(schisanlactone H)为白色粉末。HR-ESI-MS测定其[M+Na]⁺(C₃₁H₄₈O₅Na⁺)峰的分子量为523.3398(计算值为523.3399)，从而确定其分子式为C₃₁H₄₈O₅，不饱和度为8。从化合物1的¹H-NMR谱中可以观察到：一个仲甲基(δ 0.98，d，J＝6.4Hz)，六个叔甲基(δ 0.69，0.72，1.29，1.26，1.21，1.92)，两个烯烃质子(δ 5.39，6.61)以及一个甲氧基(δ3.70)信号。化合物1的¹³C-NMR，DEPT以及HSQC数据揭示分子中含有一个羧甲基，一个α，β-不饱和羰基，六个季碳(包括一个含氧的和两个烯烃碳)，七个次甲基(包括两个不饱和的)，八个亚甲基，以及七个甲基。综合化合物1的核磁共振数据，除两个双键以及两个羰基外，导致该化合物不饱和的其他因素应该是一个四元环骨架。仔细对比化合物1以及五内酯(schisanlactone)F的¹H-和¹³C-NMR数据，发现这两个化合物具有相同的D环和E环，同时两个化合物的A环均经历了在C-3和C-4位之间的氧化断裂。对化合物1的¹H-¹HCOSY，HSQC以及HMBC数据的分析进一步证实了以上推断。因此认为化合物1属于3，4-断裂的羊毛甾烷衍生物。
Me-27(δ1.92，s)与C-24，C-25和C-26的HMBC相关，以及阳离子FAB-MS中的碎片m/z111[C₆H₇O₂⁺]揭示了分子中六元α-甲基-α，β-不饱和-δ-内酯环的存在。Me-30(δ 1.26，s)与C-4，C-5和C-29之间的HMBC相关以及Me-29(δ 1.29，s)与C-4，C-5，C-30之间的HMBC相关，要求Me-29与Me-30连在同一个含氧季碳(δ 75.5，s，C-4)上。甲氧基(δ 3.70，s)和H-2(δ 2.44，m，H-2a；2.35，m，H-2b)与C-3之间的HMBC相关，以及阳离子FAB-MS中的碎片m/z440[M-HCOOCH₃]说明羧甲基与C-2相连。δ 5.41(d，J＝5.8Hz，H-11)的质子信号表现出与C-9，C-12，C-10和C-13的HMBC相关，说明双键位于C-9和C-11之间。这一点被Me-19，H-12以及H-7与C-9之间的HMBC相关峰进一步证实。
化合物1的ROESY数据所揭示的相对立体构型与化合物五内酯F一致。表1列出了化合物1的¹H-和¹³C-NMR数据。
表1.五内酯H的¹H-NMR(400MHz)和¹³C-NMR(100MHz)数据(ppm，in CDCl₃)