芸薹属核心SSR引物组合.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102154277 A (43)申请公布日 2011.08.17 CN 102154277 A *CN102154277A* (21)申请号 201110050078.0 (22)申请日 2011.03.02 C12N 15/11(2006.01) (71)申请人 西南大学 地址 400716 重庆市北碚区天生路 216 号 (72)发明人 付东辉 魏丽娟 李加纳 高才华 (74)专利代理机构 重庆华科专利事务所 50123 代理人 康海燕 (54) 发明名称 芸薹属核心 SSR 引物组合 (57) 摘要 本发明公开了芸薹属核心 SSR 引物组合， 属 于分子遗传技术

2、领域。该组合包括芸薹属 A 和 C 基因组 19 条染色体的核心 SSR 引物 190 对， 每条 染色体上均匀分布有 10 对多态性较高、 退火温度 基本一致、 扩增带型清楚的 SSR 引物。运用该核 心 SSR 引物组合在不增加工作成本的前提下， 可 将分子标记的效率提高到 3-5 倍， 特别适合芸薹 属种质资源的鉴定、 遗传多样性分析、 缺体等异常 染色体单株的鉴定和种子纯度鉴定等方面。具有 操作简单， 稳定性和重复性好等优点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 10 页 附图 1 页 CN 102154278

3、 A1/2 页 2 1. 芸薹属核心 SSR 引物组合， 包含 19 条染色体即 A1-A10 和 C1-C9 核心 SSR 引物， 其特 征在于， 包括以下引物 ： A1 CB10369 ENA15 CB10097 NIAB096 Ra2E04 BRAS026 Na12C06 CNU397 Ol10D03 CB10597 A2 Ol10F04 Ol09A03 NIAB105SR6293 CB10416 Na12A07 CB10093 Ni2C12B Na14H11C BRAS083 A3 SR6688 BRMS071 NIAB120 CNU482 CNU409 BRMS176 Ol10B08

4、 SN1919 Ol13D02A Na12C07 A4 FITO066 SN13034 sNRD71 ENA3 Ol13D02A CNU254 BRAS003 CB10196 CB10335 CB10493 A5 sNRD03 BRMS034 FITO130 BRAS063 NIAB082 SR9222ENA10 CB10080 SR9477 CB10487 A6 CB10330 CB10143 BRAS014 BRMS227 BRMS221 CB10065 BRMS226 BRMS261 CNU400 EJU5 A7 Ra2G08 SR0282R FITO066 NIAB082 BRMS29

5、8 NIAB030 Ol12E03 Ra2A05 CB10211 CB10278 A8 CNU090 BRMS342 BRMS246 BRMS176 BRMS185 EJU4 KBRH143D22 Ra2E12 EJU3 CB10193 A9 EJU2 CB10347 BRMS324 FITO100 Ol12F02 CB10255 Ol10D08 CB10103 BRAS055 MR013A A10 Ol10A02 NIAB015 BRMS186 SN8502 SN8474 NIAB103 ENA18 BRMS019 CB10109 CB10124 C1 CB10587 CB10369 CB1

6、0277 FITO094 NIAB091 CB10206 Na10H06 Ol10F11 Ni4B10 Na10H03 C2 Ol11H09 CB10316 SR6293 CB10026 CB10530 FITO081 Ol09A06 Ol09A03 Ol12B03 Na12C03 C3 Ra2E11 BN12A CB10036 BRAS120 MR049 Na10C01 BRAS065 MR061B MR049B CB10003 C4 SN0464 SS2277 BRMS166 Na10F06 Ol12D02 SN11516 CB10288 CB10493 BRAS072 Ol11E03A

7、C5 CB10124 sORH13 BRMS030 BRMS049 CB10623 Ra2F11 MR129 MR097 CB10229 CB10487 C6 CB10502 CB10234 CB10010 BRMS015 SR12387 CB10526 FITO146 CB10544 SS2486 CB10211 C7 SN0706 sNRH63 Ol10B01 Ra3C04 BRMS050 FITO088 BRMS040 CB10299 CB10534 CB10431 权 利 要 求 书 CN 102154277 A CN 102154278 A2/2 页 3 C8 CB10139 FIT

8、O040 SN11670 SR5795Ol12G04 CB10106 FITO424 SN12352 CB10602 BRAS031 C9 BRAS002 FITO088 SR12384I CB10288 BRAS050 Ol11H05 FITO016 sNRG42 Ra2F11 Ol11H06。 权 利 要 求 书 CN 102154277 A CN 102154278 A1/10 页 4 芸薹属核心 SSR 引物组合 技术领域 0001 本发明涉及分子遗传技术领域， 特别是涉及一种芸薹属核心 SSR 引物组合。 背景技术 0002 分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记

9、， 是 DNA 水平 遗传多态性的直接反映。DNA 由于信息含量大， 在同种内具有高度的遗传稳定性， 且不受外 界环境因素和生物个体发育阶段及器官组织差异的影响。分子标记技术是继形态学标记、 生化免疫遗传标记和细胞遗传学标记后的一种新的标记技术， 实现了从表型选择到基因型 选择的飞跃。随着分子生物学技术的发展， DNA 分子标记技术已在玉米、 大豆、 鸡、 猪等动 植物育种和生产中有许多应用研究， 广泛应用于遗传图谱构建、 基因定位、 物种亲缘关系鉴 别、 基因库构建、 基因克隆和分子标记辅助选择等方面。自 20 世纪 80 年代以来， 出现了多 种分子标记方法， 如 RAPD、 RFLP、

10、AFLP、 简单序列重复 （SSR） 和 SNP 等。 0003 目前由于 RAPD 重现性较差 ； AFLP 操作较复杂、 稳定性较差， 除 QTL 初步定位后在 目标区域加密标记有独特的优势外， 其它方面的应用逐步淡化出各种研究 ； RFLP 操作过程 繁琐， 效率低， 成本高， 除在鉴定转基因是否成功外， 在其它方面的研究地位越来越低。 然而 SSR 广泛分布在真核生物整个基因组上， 具有多态性高、 稳定性强、 操作简便、 DNA 用量少、 表现为共显性孟德尔遗传等优点， 已经广泛用于各项标记技术中， 并且已成为最有应用价 值和应用最广泛的分子标记技术。 0004 芸薹属(Brassic

11、a )属于十字花科， 是一类具有极高经济价值的作物， 其包含有许 多重要的蔬菜、 油料、 饲料作物和调味品， 如甘蓝类 ( B. oleracea) 的结球甘蓝、 花椰菜、 青花菜、 芥蓝和苤蓝 ； 白菜类( B. campestris) 的大白菜、 白菜、 乌塌菜、 菜薹等， 它们都在 中国有广泛的栽培。自 Song 等人 （1988） 开辟了芸薹属植物分子标记研究的新领域以来， 经过近 20 年多的研究， 分子标记技术在芸薹属作物中得到了广泛的应用。尽管目前已经开 发了数千多个芸薹属作物 SSR 引物 , 然而不是所有的 SSR 引物都具有同等的应用价值， 包 括扩增效果、 多态性信息含量

12、、 多态性水平高低、 是否为共显性遗传、 多位点拷贝数和是否 被定位在遗传图谱上等。 当我们利用SSR引物做标记时， 通常做法是将目前所有已知的SSR 进行筛选， 然后从中选择自己所需要的引物， 结果会对标记整体效果把握不准， 造成较大的 浪费， 费时费力。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种芸薹属核心 SSR 引物组合， 特别适合芸薹属作物种质 资源鉴定、 遗传多样性分析、 品种纯度检测和缺体等异常染色体组成的鉴定等研究工作。 0006 本发明的芸薹属 19 条染色体 （A1-A10 和 C1-C9） 核心 SSR 引物组合， 包括以下引 物 ： A1 CB10369 ENA15

13、CB10097 NIAB096 Ra2E04 BRAS026 Na12C06 CNU397 Ol10D03 CB10597 说 明 书 CN 102154277 A CN 102154278 A2/10 页 5 A2 Ol10F04 Ol09A03 NIAB105SR6293 CB10416 Na12A07 CB10093 Ni2C12B Na14H11C BRAS083 A3 SR6688 BRMS071 NIAB120 CNU482 CNU409 BRMS176 Ol10B08 SN1919 Ol13D02A Na12C07 A4 FITO066 SN13034 sNRD71 ENA3 O

14、l13D02A CNU254 BRAS003 CB10196 CB10335 CB10493 A5 sNRD03 BRMS034 FITO130 BRAS063 NIAB082 SR9222ENA10 CB10080 SR9477 CB10487 A6 CB10330 CB10143 BRAS014 BRMS227 BRMS221 CB10065 BRMS226 BRMS261 CNU400 EJU5 A7 Ra2G08 SR0282R FITO066 NIAB082 BRMS298 NIAB030 Ol12E03 Ra2A05 CB10211 CB10278 A8 CNU090 BRMS34

15、2 BRMS246 BRMS176 BRMS185 EJU4 KBRH143D22 Ra2E12 EJU3 CB10193 A9 EJU2 CB10347 BRMS324 FITO100 Ol12F02 CB10255 Ol10D08 CB10103 BRAS055 MR013A A10 Ol10A02 NIAB015 BRMS186 SN8502 SN8474 NIAB103 ENA18 BRMS019 CB10109 CB10124 C1 CB10587 CB10369 CB10277 FITO094 NIAB091 CB10206 Na10H06 Ol10F11 Ni4B10 Na10H

16、03 C2 Ol11H09 CB10316 SR6293 CB10026 CB10530 FITO081 Ol09A06 Ol09A03 Ol12B03 Na12C03 C3 Ra2E11 BN12A CB10036 BRAS120 MR049 Na10C01 BRAS065 MR061B MR049B CB10003 C4 SN0464 SS2277 BRMS166 Na10F06 Ol12D02 SN11516 CB10288 CB10493 BRAS072 Ol11E03A C5 CB10124 sORH13 BRMS030 BRMS049 CB10623 Ra2F11 MR129 MR

17、097 CB10229 CB10487 C6 CB10502 CB10234 CB10010 BRMS015 SR12387 CB10526 FITO146 CB10544 SS2486 CB10211 C7 SN0706 sNRH63 Ol10B01 Ra3C04 BRMS050 FITO088 BRMS040 CB10299 CB10534 CB10431 C8 CB10139 FITO040 SN11670 SR5795Ol12G04 CB10106 FITO424 SN12352 CB10602 BRAS031 C9 BRAS002 FITO088 SR12384I CB10288 B

18、RAS050 Ol11H05 FITO016 sNRG42 Ra2F11 Ol11H06 本发明的芸薹属核心 SSR 引物组合， 通过以下技术方案筛选得到 ： 1) 从 NCBI 数据库中下载芸薹属所有的连锁图谱， 根据 A 和 C 基因组连锁群的类别， 对 图谱上的标记进行分类， 共 19 小类 ； 说 明 书 CN 102154277 A CN 102154278 A3/10 页 6 2 ) SSR 核心引物的挑选 ： 选择在 3 个以上遗传图谱上都存在的、 引物之间退火温度变 化范围在 5以内、 在连锁群上等距离分布的引物组合， 筛选出一套核心 SSR 引物， 平均每 条连锁群分布 10

19、 对 ； 3) 多重 PCR 体系建立和反应引物的优化 ： 按染色体顺序， 将每条连锁群上所有选中的 SSR 引物放在一个 PCR 反应管中进行 PCR 扩增， 根据每个多重 PCR 体系扩增带型的清晰程 度、 片段大小的适宜范围 （150-600bp） 和多态性标记的数目进行调节， 即增加部分扩增效果 较好的引物和去掉部分扩增效果较差的引物 ； 4） 多重 PCR 产物的检测 ： 利用 6% 的 PAGE 胶进行分离， 选择带型清楚、 多态性的带分布 均匀、 片段大小在 150-600bp、 多态性的位点在 5-10 个的引物组合， 最终确定每条连锁群上 引物的类型。 0007 本发明具有如

20、下的优点 ： （1） 本发明共挑选出 190 对核心 SSR 引物， 均匀分布在芸薹属 A 和 C 基因组的每条连锁 群上。筛选出的 SSR 引物可以直接使用， 改变了通常在使用 SSR 引物时需要进行大量筛选 引物的过程， 大大提高了做标记的效率和显著提高 SSR 引物利用率。 0008 （2） 芸薹属 A 和 C 基因组多重 PCR 体系的成功建立， 在成本没有增加的前体下， 每 个多重 PCR 体系扩增出的多态性位点可以达到 5-10 个， 是普通 PCR 效率的 3-5 倍， 可以大 幅度降低成本和加快分子标记工作。 0009 （3） 芸薹属 A 和 C 基因组多重 PCR 体系是建立

21、在 PCR 直接扩增的基础上， 继承了普 通SSR的一切优点， 即不需要酶切， 稳定性和重复性好， 检测和操作简单等， 较普通SSR标记 大幅度提高了效率。 附图说明 0010 图 1 为 A6 连锁群上多重 PCR 电泳图。20 份材料从左到右分别为 ： 浠水油菜白、 德 清金菜籽、 五峰红杆子、 榕江苏州油菜、 青麻叶、 羽衣甘蓝、 结球甘蓝、 球茎甘蓝、 抱子甘蓝、 皱叶甘蓝、 华双 2 号、 泸油 15 号、 湘油 13 号、 扬油 16 号、 中双 4 号、 中油 821、 矮架早、 宁油 10 号、 花油 6 号、 陇油 2 号， 均为现有油菜品种。 具体实施方式 0011 芸薹属

22、各染色体核心引物挑选和多重 PCR 体系建立 1. 从 NCBI 网站下载芸薹属作物 36 个连锁图谱， 整理各图谱各连锁群上的 SSR 引物 及标记信息， 包括引物的序列、 位于染色体的位置和连锁图谱名称 ； 2. 核心SSR引物挑选 ： 挑选在3个以上遗传图谱上都存在的、 引物之间退火温度变化 范围在5以内、 在连锁群上等距离分布的引物进行组合， 每条连锁群上选取10对核心SSR 引物 ； 3. 多重 PCR 体系和程序优化 ： 多重 PCR 体系为 : Buffer (10) 2.5ul， primer (10umol/L) 2ul, dNTPs (10mM) 0.5uL, Taq DN

23、A polymerase (5U/ul) 0.25ul, DNA template (50-100ng/ul) 2.0 uL,， 共25ul反应体积。 多重PCR程序为 ： 94预变性5min ； 94变性 45 s， 53 退火 45 s， 72 延伸 1 min， 35 个循环 ； 72延伸 30 min， 16保存 10min ； 说 明 书 CN 102154277 A CN 102154278 A4/10 页 7 4凝胶电泳检测 ： 将 PCR 产物在 6% 的变性丙烯酰胺凝胶中进行电泳检测， 按照分子克 隆实验指南第三版 （J. 萨姆布鲁克） （2005） 的方法进行硝酸银方法进行

24、银染 ： 配胶灌胶 凝固取梳子电泳固定第一此水洗硝酸银染色第二次水洗显影终止反 应 ； 5选择带型清楚、 多态性的带分布均匀、 片段大小在 150-600bp、 多态性的位点在 5-10 个的引物组合， 最终确定了如前所述的芸薹属 A 和 C 基因组核心 SSR 引物组合。 0012 6 将建立的多重 PCR 体系在白菜、 甘蓝、 甘蓝型油菜、 人工合成甘蓝型油菜中进行 验证， 结果表明， 19条染色体的多重PCR体系效果极佳， 扩增的片段平均在120-600之间， 带 型清晰和多态性丰富， 多态性信息含量一般在 0.55 以上。 0013 附表 190 对核心 SSR 引物信息表 说 明 书

25、 CN 102154277 A CN 102154278 A5/10 页 8 LinkagegroupPrimerMappositionForwardprimerReverseprimer A1CB103690CATTCACAGGACCAGAGCCAAAGCCAAGACAACCAT A1ENA159TAAACGGGAACTACCTCTATGCTCTGCTCTTTCTTCTGACTG A1CB1009721.69ACTTCGGTGGTTCTATTTCTCGACGGTTAATCAAGTTTCT A1NIAB09636.89CAAAAAGAGCGTTACCTCCAGATGAAGCTCTGAAGACC

26、GA A1Ra2E0453.18ACACACAACAAACAGCTCGCAACATCAAACCTCTCGACGG A1BRAS02673.3ATTACAAAAATGCCCTGACTAAGTGATCTTCTCTCCAACA A1Na12C0695.2AACGGATGAAGAACACATTGCTAGGGCCTGTTATTCGATGG A1CNU397106.58TCTTCAAGTCAAAATACTCACATTCAAAACGACAAATACATATGACAGTTTTA A1Ol10D03145GCCAAAGACCTCAAAGATGGAAGCCACGTGAAGAAAGTCC A1CB10597154A

27、AGCGCGCATAACTACACAACACTGCTCCTTTCCCT A2Ol10F040AATTGGCTTGGTAGCTGTCGATAGGAATGGGATGCACAGG A2Ol09A0319.3CTGGTTTTCTCCTTCATCAGCTGTGTAGCTTTTAGTCTTT A2NIAB10540.18GACGAAGGAGCGTATGAAAAAATGCAATCTCAACAAAGGT A2SR629363CCAAACGCTTTTCTTTCTGCCCAATGACGCTCCAAGATTT A2CB1041676.6GCTGTTGCTGTAGGTTTGAGAGCCAGCGTTGATAAGA A2

28、Na12A07112.6TCAAAGCCATAAAGCAGGTGCATCTTCAACACGCATACCG A2CB10093129GACTTGGGAGAGATTAAACAGGCGATGGTGATTTCCTAGA A2Ni2C12B151ACATTCTTGGATCTTGATTCGAAAGGTCAAGTCCTTCCTTCG A2Na14H11C175GGATGTTTTCACAGACCCTGCTTTGCAGGTATGAACACGC A2BRAS083186GATGTTGTTGGGGAGAATGAAAAAGTAGGCAAGTTCAAGC A3SR66880TCGGATTGAACTCATGTTCGTGG

29、AAACTCGGAAATCAAGG A3BRMS07122.84CAAAGCGAGAAAGTGCAGTTGAGAGTCCACGAAACTACTGCAGATTGAAA A3NIAB12044.98AAGAAAACTTATTTGATGGTACGCTAAATCCAAACCAGAATTGA A3CNU48259.21TCAGAGATCCTTGACAAAACCAAGATGAAGCCAAAGCCACAA A3CNU40982.17TTCCGGTCACTTCTAGCTTCATTTTGGTGGTTAGTATGTCGCTAT A3BRMS17698.31ATGTCTACAGATGTGGAACCTATGGAGGA

30、AGACTGATTAACTCGTTTTGA A3Ol10B08121AAGCTGTTCGATGAAATGCCACTTGTTTGCATCCATTGCC A3SN1919137.1CTCCGGTCATCTTTCTGCATAAAAATCCTGATCACAGCCG A3Ol13D02A152.5TTCTCCACACCAAGCAACACTACAGGCTTGGTCGTTTTCC A3Na12C07184ACTCAACCCCACAAACCTGAGTTCCCCGGATCCGATTAG A4FITO0660AGCCCATTTACCTGCTGAGAAAGACGATGCTTAGGGT A4SN1303418.41A

31、GCATGTGCAGAGTGCAGACAAAGGAAGGCCGATGAGATT A4sNRD7137.3AAGACATGCACAGCAACAGCCCTCATCCACAACGTCATCTT 说 明 书 CN 102154277 A CN 102154278 A6/10 页 9 A4ENA353ATCCCTTCTCACAGGTTTACTGTCAAGTTTCTCTCCACACC A4Ol13D02A71.6TTCTCCACACCAAGCAACACTACAGGCTTGGTCGTTTTCC A4CNU25489.92AAGCTTGAGCTTCCAGCCTTCATCAGTGCCGGCCTTGAATA A4

32、BRAS003116TCTCATTCGATCATCACTCATGAACTATCGTCCACAATCTGA A4CB10196129TTGTAGGCAATGATGAGGAGAGAGAAGGGCTCCTTTG A4CB10335151AGACAAGTTGAAGATAGGCTCGATCGGAGACGGAGAGTT A4CB10493170TGACGTGTGAGCAACAGACTGAGTCACAAGCCGAGT A5sNRD030GAAGATTCGAGCTCTTTCGGCGTTTCAGAATCATATTGTATTTTGCT A5BRMS03412.08GATCAAATAACGAACGGAGAGAGAG

33、CCAAGAAAGGACCTAAGAT A5FITO13025GTTTGCTATGGGCTTCAGTATTTCATTCGGTTTATTTCGG A5BRAS06338.2GACGCTCATTTCACTTCTCCTAACTAACATCATTTTGC A5NIAB08245.12CATTTCCCCGTGACTATCTGCGTCTTCATCTCAATCTCGC A5SR922260.97CACCGAACAAAACTGAGGGTCGTTTCACTGCGTTCTACCA A5ENA1071.6ATCGTCTCCTCTCATCTCAAATTACATCCTCCACCTTCTTC A5CB1008086.8G

34、CCCTCAACCTGTAAAGTTTGTTGGTGTGTGAATCATA A5SR947795.18CAGCTGGTTATCCTCGGTTTCCTCAGGTGGACAGAGAAGC A5CB10487115.64ATCCGAGGTTAGGTTTGGTCCTTGCTCACCCTTGTA A6CB103300AGGCGAGTTTACGAGGATACCTGCACCAGTCATTTG A6CB1014326.6CATGGGAGGCTGTCTAAATTGCACCCATACGTTTTC A6BRAS01431.3CCCATTGACAACTCTTCTCTTCTGTGTTCGCCCATTATG A6BRMS

35、22746.1ACCATCTCGCTATTTATTTATGAAGGACGATTTGATAGAGGAAAGGAAT A6BRMS22160.33AAAGTCCTTGACGTTTGAGGAAGAACAGGTTCTTATGAAGGACCATGCAT A6CB1006567.03CGGCAATAATGGACCACTGGCGGCTTTCACGCAGACTTCG A6BRMS22696TAAATATGGTGCAAAAGATGACACACAACCACTCATCTTGTTCCATTATC A6BRMS261105.8CACCTGTCATGTCTTCTTCTGGTTGTCTTTGTTTTCTTCTCATTCG

36、A6CNU400115.03CGAGTTTTTGTGTGTACGTATAGTAATCCAAAGTGCGTAAAGGAAGG A6EJU5133.9GGCACGTACATGGAGGATTCTGTTGGTCGAGCTGTTTCAG A7Ra2G080ATGTCCGGATAACCGAATCCGAAGCTTTTCAATTTTTAAGTTCTCTC A7SR0282R19.8AGGAAGCCCAACAGGACTTTAATTCGATTCTCCATCGTGC A7FITO06634AGCCCATTTACCTGCTGAGAAAGACGATGCTTAGGGT A7NIAB08245.1CATTTCCCCGTGA

37、CTATCTGCGTCTTCATCTCAATCTCGC A7BRMS29852.84CCACTGTTTTATGACTCCAGTGCTTTGACCTGGTGAAGTAGTTGTCTCGT A7NIAB03067.34GATCATAAGCCGAAAAAGGTTGTGCTCTCCTCAAGTGAATCAAA A7Ol12E0379.1CTTGAAGAGCTTCCGACACCGACGGCTAACAGTGGTGGAC 说 明 书 CN 102154277 A CN 102154278 A7/10 页 10 A7Ra2A0592.9GCTAGTTTACGCGGCGGAAACGACATCGGCAAAGAAG

38、 A7CB10211111.76CAGCAGAGATCGATGGAGATAGAAGGCTGCCCCTC A7CB10278139.8TGAAGAAGCTGGGACAAGCAATGCAATACAGCACCA A8CNU0900GCAAAGATCGGCGAAGAAGATGCAGACACATTCGAACAAACA A8BRMS34214.13CAACCAAAACGGGCCAATATAGTTATGTTTTCAAATAATCTCCCGTCTAA A8BRMS24626.21ACATGTGCTTTATGAGAGAGAGAGATCTTTGTCACATTAATCCTTCCACT A8BRMS17639.36A

39、TGTCTACAGATGTGGAACCTATGGAGGAAGACTGATTAACTCGTTTTGA A8BRMS18558.58ATCAAACCAGCAGTTCTATACCAATTCTCTTTCTGACCCGAAGAAGAC A8EJU463.9CACCTTATCATCTCTCTATCCCCCTCTGTTTCTCTCCTTGTG A8KBRH143D2275GATGTGATACTTTGGCGACGGTGAAGGATAATATGGTCTTGGCC A8Ra2E1286TGTCAGTGTGTCCACTTCGCAAGAGAAACCCAATAAAGTAGAACC A8EJU391.3CCTCTTTTA

40、ATTCAAACAAGAAATCATTCGGACAATGGCAGTGATA A8CB10193134.7ATGCCACTTGAACCATTCCCTGAAGCGCATTTGTTA A9EJU20TTCACATCTTCTTCATCTTCCTTGCTATTCGTTCTCAGTCTC A9CB1034719.9ATCTGAACACTTTCGGCAGGAAGCACCATGTCAGC A9BRMS32440.95AACTTAACCGAAACCGAGATAGGTGAATCTCGAAATTCATCGACTTCCTC A9FITO10062GATGAGAGAAGGAAACCCTAAACAGCAGGAGAAGAG

41、AGAGAA A9Ol12F0284GGCCCATTGATATGGAGATGCATTTCTCAATGATGAATAGT A9CB10255100CTGCGCTGCATCTTAGTCTGAAGAGCAATGCAATCTT A9Ol10D08118TCCGAACACTCTAAGTTAGCTCCGAGCTGTATGTCTCCCGTGC A9CB10103160GACGGATGCCTAATAATGATTCCTCAAAACTGCCTGTAAG A9BRAS055170GCACTCTCCTTGGTCTCTTCTTCTCTCATCCACTTCTA A9MR013A182CGCTACTTCCGCTGATACT

42、TTTCAGAATCGCGACTGTAGTCT A10Ol10A020.8ATGAAAACCAATCCAGTGCCGATAGCAGATGGAAGAGCCG A10NIAB01511.66GCTGGTTCCAGCTAATGGTTACTGAATTTATGAGATTCGGATTGG A10BRMS18620ACAAGACACATGGAACTCTTATGCATATTACCAATGACCCCACTATTCA A10SN850228.47CTTACCGATGGATCACCCACTCCGCAAGAAATCAACAACA A10SN847444.86CTCCTGGGGAGGATCCTAAGGAAGGGAAAG

43、GTGCAATCAA A10NIAB10350.5GCCGTTCTGACCAATAAAAATTCAATGATACGGTGACGTG A10ENA1865.7TTAAAATGAAACCCACCCGATGTTGGGCAACATCCATTTA A10BRMS01972.85CCCAAACGCTTTTGACACATGGCACAATCCACTCAGCTTT A10CB10109101.5GTGTAGCCAGCTTGATCCTCTTCTTCTGATGCAGCAGTG A10CB10124109TATGGGAAGGTTTGTGGTTGCCACTCCTCGATTACTCTCACT C1CB105870TTGT

44、GTTTTGCCTTCTGATTTGCGCACAAACAATAA 说 明 书 CN 102154277 A CN 102154278 A8/10 页 11 C1CB1036916.4CATTCACAGGACCAGAGCCAAAGCCAAGACAACCAT C1CB1027727.75ACAAATGCTTGAGTGATATCTTCGTAAACTTGTTCTTGA C1FITO09440TTTATTTCTTTGGACTTGGGCTACCGCATCATACATTCATT C1NIAB09155TGGTTCTGCTATTGCTGTCAGAAGTTTGTGAGCCAGGAAA C1CB1020662.5

45、TACAACGCAAACGTTCCTTTGATGTTCTTGGTGCCT C1Na10H0673.3AGAATGAGACCCAGAAACCGGCCACACTCTCTCTTACTAGGGC C1Ol10F11100.7TTTGGAACGTCCGTAGAAGGCAGCTGACTTCGAAAGGTCC C1Ni4B10115.6GTCCTTGAGAAACTCCACCGCCGATCCCATTTCTAATCCC C1Na10H03128.9GAGCTGGCTCATTCAACTCCCACAATTTCTCAGACAAAACGG C2Ol11H090CCCTTTTCCCCTTCTATTGGGTGCGACTTG

46、GAATTTCTCC C2CB103168.6TGGTGTATATGGGATCGGGTTTGCAGACCATTCTCG C2SR629331.78CCAAACGCTTTTCTTTCTGCCCAATGACGCTCCAAGATTT C2CB1002644TCGTTCTGACCTGTCGTTATGGAAATGGCTGCTCATGTT C2CB1053054.64TCCTCGTCCTTTATTCCTTTTATGGTGATGGGGTGA C2FITO08167AACTAACTCGGGAAACAACCGAATGTCCGTCAGAATACC C2Ol09A0670TGTGTGAAAGCTTGAAACAGTA

47、GGATTTTTTTGTTCACCG C2Ol09A0381.1CTGGTTTTCTCCTTCATCAGCTGTGTAGCTTTTAGTCTTT C2Ol12B0395.49CGACGAGGACAGAAGACAAGAGAGAGCCATGAGAAGCACC C2Na12C03124.35ATCGTTGCCATTAGGAGTGGACCAAATTAACCCTCTTTGC C3Ra2E110GGAGCCAGGAGAGAAGAAGGCCCAAAACTTCCAAGAAAAGC C3BN12A28.53GCCGTTCTAGGGTTTGTGGGAGAGGAAGTGAGAGCGGGAAATCA C3CB1003655.8ATTCATCTCCTGCTCGCTTAGAAACCCAAACCAAAGTAAGAA C3BRAS12089.2AAAAATAAATACAGCGAACCACCTTTAGCAGCTAATCATC C3MR049117.46AATGGGAAGCTCGTCGAAAATTATGCCAACATCCTACGG C3Na10C01137.1TTTTGTCCCACTGGGTTTTCGGAAACTAGGGTTTTCCCTTC C3BRAS065177AGCAATCCCGCCTAAATGGTAGATGCGAGGTCACTGTTGTCC C3MR061B22